CN107698687A - 一种具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖及其制备方法和应用 - Google Patents

一种具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖及其制备方法和应用，包含以下步骤：1)将茯苓残渣干燥粉碎成粉末；2)将茯苓残渣粉末，高温灭菌后，加入蒸馏水溶解，同时加入啤酒酵母，于32℃下连续发酵5d，发酵结束后，取出样品，38℃烘干，过20目筛，得发酵茯苓残渣粉末；3)将发酵茯苓残渣粉末加入60℃水中浸提3～4h，过滤；将滤液4000‑5000r/min速度下离心，取上清液，减压浓缩，得浓缩液；将浓缩液加入沉淀剂进行沉淀，置于3～5℃下过夜后离心，沉淀用有机洗涤剂反复洗涤，真空冷冻干燥，得茯苓粗多糖；4)将茯苓粗多糖，脱蛋白，透析，浓缩，冻干，即得。本发明能有效清除自由基，同时具有锁水保湿，滋润肌肤的功效。

Description

一种具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及化妆品领域，具体涉及一种具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖及其制备方法和应用。
背景技术
茯苓为多孔科卧孔菌属真菌茯苓的干燥菌核，是常用中药。茯苓主要成分有茯苓多糖、茯苓素等。现代药理学研究茯苓具有利尿、免疫调节、保肝、抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗病毒等多种药理作用。
茯苓含茯苓糖、木糖等多糖，脂肪酸、蛋白质、卵磷脂、多种无机元素及微量蛋白酶等。茯苓多糖体具有较好的抗肿瘤作用，能够增强机体的免疫能力，在化妆品中具有滋润肌肤，延年驻颜作用。茯苓多糖还具有一定抗病毒抗炎作用；茯苓多糖还具有较强的抗氧化能力，在清除DPPH·的体系中和还原能力体系中，其清除能力均超过VC，在羟基自由基·OH和超氧阴离子O2 -·体系中，其清除能力较低于对VC。
目前对茯苓的研究主要集中在成分功效上，对茯苓残渣的提取方法或专利申请均没有检索到相应的记载。
发明内容
基于此，本发明的目的在于提供一种具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖及其制备方法和应用。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖的制备方法，包含以下步骤：
1)将茯苓残渣置于50℃恒温箱中，干燥，粉碎，得茯苓残渣粉末；
2)将茯苓残渣粉末，高温灭菌后，加入蒸馏水溶解，同时加入啤酒酵母，于32℃下连续发酵5d，发酵结束后，取出样品，38℃烘干，过20目筛，得发酵茯苓残渣粉末；
3)将发酵茯苓残渣粉末加入60℃水中浸提3～4h，过滤，滤渣风干后提取重复3次，合并滤液；将滤液4000-5000r/min速度下离心，取上清液，减压浓缩，得浓缩液；将浓缩液加入沉淀剂进行沉淀，置于3～5℃下过夜后离心，沉淀用有机洗涤剂反复洗涤，真空冷冻干燥，得茯苓粗多糖；
4)将上述所得茯苓粗多糖，脱蛋白，透析，浓缩，冻干，得茯苓多糖。
在其中一些实施例中，所述茯苓残渣为茯苓经过水提取后的剩余残渣。
在其中一些实施例中，所述步骤2)中茯苓残渣粉末需过50～70目筛后使用4～5倍重量份蒸馏水溶解。
在其中一些实施例中，所述步骤3)中的沉淀剂为60～80％乙醇。
在其中一些实施例中，所述步骤3)中洗涤茯苓粗多糖使用的有机洗涤剂为无水乙醇和正丁烷。
本发明还提供了根据上述制备方法所制得的具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖。
本发明还提供了上述的具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖在制备化妆品中的应用。
在其中一些实施例中，所述化妆品剂型包括膏霜、乳液、水剂。
本发明还提供了一种化妆品，包括上述的具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖。
本发明还提供了一种抗氧化保湿面膜，包含如下质量百分比成分：上述的具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖0.01～5％、棕榈酸乙基己酯1～4％、山嵛醇聚醚-250.1～0.5％、甘油硬脂酸酯SE 2～3％、黄原胶0.1～0.5％、尿囊素0.2～0.6％、EDTA二钠0.01～0.04％、透明质酸钠0.01～0.05％、生育酚乙酸酯0.2～2％、木瓜蛋白酶1～5％、β-葡聚糖0.01～5％、双(羟甲基)咪唑烷基脲0.1～0.3％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.01～0.03％、丙二醇3～8％、羟苯甲酯0.1～0.3％、去离子水余量。
本发明具有的有益效果如下：本发明通过发明人大量的实验以及经验优选了制备方法的各种条件，得到了优化的制备方法，充分利用茯苓残渣进行二次加工，有效避免资源的浪费；采用本发明制备方法所获得的茯苓多糖，含量高，产品性能稳定，可添加在多种护肤产品中，如膏霜、乳液、水剂等。本发明能有效清除自由基，减少脂质过氧化物的生成，保护细胞免受自由基的损伤，同时具有锁水保湿，滋润肌肤的功效。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步阐述：
文中所出现的所有成分均为INCI(International Nomenclature CosmeticIngredient)，即国际化妆品原料明明说对其规定的名称。
实施例1
一种具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖的制备方法，包含以下步骤：
1)将水提后剩余的将茯苓残渣置于50℃恒温箱中，干燥，粉碎成60目，得茯苓残渣粉末；
2)将茯苓残渣粉末，高温灭菌后，加入4.5倍重量份的蒸馏水溶解，同时加入啤酒酵母，于32℃下连续发酵5d，发酵结束后，取出样品，38℃烘干，过20目筛，得发酵茯苓残渣粉末；
3)将发酵茯苓残渣粉末加入60℃水中浸提3.5h，过滤，滤渣风干后提取重复3次，合并滤液；将滤液4500r/min速度下离心，取上清液，减压浓缩，得浓缩液；将浓缩液加入70％乙醇中进行沉淀，置于3.5℃下过夜后离心，沉淀用无水乙醇和正丁烷反复洗涤，真空冷冻干燥，得茯苓粗多糖；
4)将上述所得茯苓粗多糖，脱蛋白，透析，浓缩，冻干，得茯苓多糖。
将实施例1制备得到的具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖应用在制备面膜中，具体如下表1。
表1
选择50名年龄在20-35的女性试用上述的面膜，要求试验者无肌肤过敏史，身体健康。试验者每天晚上21-24点之间使用面膜，在使用面膜第4周，试验者对面膜效果进行自评。结果有48名试验者认为面膜有优异的补水效果，有45名试验者认为面膜能改善因氧化而导致的肌肤暗黄、色斑等肌肤问题，能令肌肤更加白皙，有弹性，达到保湿抗氧化的目的。
实施例2
一种具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖的制备方法，包含以下步骤：
1)将水提后剩余的将茯苓残渣置于50℃恒温箱中，干燥，粉碎成50目，得茯苓残渣粉末；
2)将茯苓残渣粉末，高温灭菌后，加入5倍重量份的蒸馏水溶解，同时加入啤酒酵母，于32℃下连续发酵5d，发酵结束后，取出样品，38℃烘干，过20目筛，得发酵茯苓残渣粉末；
3)将发酵茯苓残渣粉末加入60℃水中浸提4h，过滤，滤渣风干后提取重复3次，合并滤液；将滤液4000r/min速度下离心，取上清液，减压浓缩，得浓缩液；将浓缩液加入60％乙醇中进行沉淀，置于3℃下过夜后离心，沉淀用无水乙醇和正丁烷反复洗涤，真空冷冻干燥，得茯苓粗多糖；
实施例3
一种具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖的制备方法，包含以下步骤：
1)将水提后剩余的将茯苓残渣置于50℃恒温箱中，干燥，粉碎成70目，得茯苓残渣粉末；
2)将茯苓残渣粉末，高温灭菌后，加入5倍重量份的蒸馏水溶解，同时加入啤酒酵母，于32℃下连续发酵5d，发酵结束后，取出样品，38℃烘干，过20目筛，得发酵茯苓残渣粉末；
3)将发酵茯苓残渣粉末加入60℃水中浸提4h，过滤，滤渣风干后提取重复3次，合并滤液；将滤液5000r/min速度下离心，取上清液，减压浓缩，得浓缩液；将浓缩液加入80％乙醇中进行沉淀，置于5℃下过夜后离心，沉淀用无水乙醇和正丁烷反复洗涤，真空冷冻干燥，得茯苓粗多糖；
对比例1
一种具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖的制备方法，包含以下步骤：
1)将水提后剩余的将茯苓残渣置于45℃恒温箱中，干燥，粉碎成40目，得茯苓残渣粉末；
2)将茯苓残渣粉末，高温灭菌后，加入3倍重量份的蒸馏水溶解，同时加入啤酒酵母，于35℃下连续发酵3d，发酵结束后，取出样品，35℃烘干，过25目筛，得发酵茯苓残渣粉末；
3)将发酵茯苓残渣粉末加入75℃水中浸提5h，过滤，滤渣风干后提取重复3次，合并滤液；将滤液3500r/min速度下离心，取上清液，减压浓缩，得浓缩液；将浓缩液加入85％乙醇中进行沉淀，置于8℃下过夜后离心，沉淀用无水乙醇和正丁烷反复洗涤，真空冷冻干燥，得茯苓粗多糖；
对比例2
一种具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖的制备方法，包含以下步骤：
1)将水提后剩余的将茯苓残渣置于50℃恒温箱中，干燥，粉碎成60目，得茯苓残渣粉末；
2)将茯苓残渣粉末，高温灭菌后，加入4.5倍重量份的蒸馏水溶解，于32℃下连续发酵5d，发酵结束后，取出样品，38℃烘干，过20目筛，得发酵茯苓残渣粉末；
3)将发酵茯苓残渣粉末加入60℃水中浸提3.5h，过滤，滤渣风干后提取重复3次，合并滤液；将滤液4500r/min速度下离心，取上清液，减压浓缩，得浓缩液；将浓缩液加入70％乙醇中进行沉淀，置于3.5℃下过夜后离心，沉淀用无水乙醇和正丁烷反复洗涤，真空冷冻干燥，得茯苓粗多糖；
结果分析：实施例1-3和对比例1-2的制备条件得到具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖的含量如下表2。
由表2数据分析可知：实施例1-3的制备条件下得到的茯苓多糖的含量明显比对比例1-2的制备条件下得到的茯苓多糖的含量明显要高；对比例1改变了制备工艺的参数，结果对比例1得到茯苓多糖的含量明显低于实施例1；对比例2中除了没有加入啤酒酵母外，其它制备条件和实施例1相同，但是实施例2的茯苓多糖的提取量比实施例1明显少，说明啤酒酵母起到了增加茯苓多糖提取量的作用。
为了进一步说明抗氧化和保湿功效，还做了如下实验：
抗氧化测定：
配制浓度为1×10-4mol/L的DPPH·无水乙醇溶液。将实施例1得到的茯苓多糖用80％的乙醇稀释到浓度为0.25％和制备应用得到的面膜液作为待测样品溶液。市面上宣称有抗氧化保湿作用的面膜作为对照组；分别取5mL样品溶液、对照组溶液和DPPH·溶液，并混合均匀，避光放置30min，以80％乙醇调零，在517BITI处测定吸光度Ai；同样方法，分别取5mL80％乙醇溶剂与样品溶液相互混合均匀，避光放置30min后测定吸光度Aj；5mL80％乙醇溶剂加5mLDPPH·溶液混匀，避光放置30min，测定吸光度Ac。最后按照以下公式计算自由基清除率：IP％＝[1一(Ai—Aj)/Ac]×100，式中Ai为样品与DPPH·作用后的吸光度数值；Aj为样品自身对吸光度的贡献；Ac为DPPH·自身的吸收。
清除DPPH·的能力测定结果见下表3。
表3
组别 茯苓多糖 本发明的面膜 市售面膜
清除率％ 94 89 75
由表3可知，茯苓多糖具有显著的抗氧化作用，将其应用在面膜中，能赋予面膜优异的抗氧化功效。
保湿功效验证：
实验材料：7.5×7.5cm干净玻璃板若干块，3M胶布，50～500μl移液枪，分析天平，醋酸钾[KC2H3O2]饱和溶液相对湿度约60％，万分之一天平。
实验方法和测试步骤：
(1)称量6块贴有3M胶布的玻璃板重量(M0)，分别记录，3块为空白对照，3块为样品试验。
(2)用移液枪取200μl样品滴加于贴有3M胶布的玻璃板上，用分析天平称量该重量M1(精确到0.0001g)，将样品涂匀，将玻璃板放入要求的恒定湿度的干燥器，重复3次。将其余3块空白对照玻璃板一起放入恒定湿度的干燥器中。
(3)在放置4h后，取出玻璃板，称量该玻璃板重量(M2)，测试其保湿率及相对湿度率，称量后马上放入恒定湿度的干燥器中。
(4)本试验的注意事项：涂抹样品时要尽量均匀，不能有样品遗留在涂抹器上。将样品取出称量及放入，一个干燥器控制在用15min之内，平均1块玻璃板用1min。控制时间是由于样品暴露于外环境其水分散失非常快，会严重影响测试结果。玻璃板取出后立即倒置在预先准备好的空白玻璃板上，称量时也倒置在天平内的容器中。
(5)保湿率计算公式：
保湿率＝(M2–M0)/(M1–M0)×100％
式中：M0：空板质量/g
M1：加样后玻璃板质量/g
M2：干燥器中放置若干小时后质量/g
试验结果见表4。
表4
组别 茯苓多糖 本发明面膜 市售面膜
保湿率％ 52.1 43.5 27.2
从上表4数据可知，将具有保湿功效的茯苓多糖应用到面膜中，赋予面膜优异的保湿功效。
以上实施例仅表明本发明的几种实施例，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利的限制范围。应当指出的是：任何从事本专业的技术人员，都有能力利用已揭示的技术内容，对其作出一些更动或修饰，成为等同变化的等效实施例。根据本发明技术实质，对本发明进行简单修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。

Claims (10)

1.一种具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：
1)将茯苓残渣置于50℃恒温箱中，干燥，粉碎，得茯苓残渣粉末；
2)将茯苓残渣粉末，高温灭菌后，加入蒸馏水溶解，同时加入啤酒酵母，于32℃下连续发酵5d，发酵结束后，取出样品，38℃烘干，过20目筛，得发酵茯苓残渣粉末；
3)将发酵茯苓残渣粉末加入60℃水中浸提3～4h，过滤，滤渣风干后提取重复3次，合并滤液；将滤液4000-5000r/min速度下离心，取上清液，减压浓缩，得浓缩液；将浓缩液加入沉淀剂进行沉淀，置于3～5℃下过夜后离心，沉淀用有机洗涤剂反复洗涤，真空冷冻干燥，得茯苓粗多糖；
4)将上述所得茯苓粗多糖，脱蛋白，透析，浓缩，冻干，得茯苓多糖。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述茯苓残渣为，茯苓经过水提取后的剩余残渣。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，茯苓残渣粉末需过50～70目筛后使用4～5倍重量份蒸馏水溶解。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述沉淀剂为60～80％乙醇。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3)中，洗涤茯苓粗多糖使用的有机洗涤剂为无水乙醇和正丁烷。
6.根据权利要求1～5任一项所述制备方法所制得的具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖。
7.根据权利要求6所述的具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖在制备化妆品中的应用。
8.根据权利要求7所述的具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖在制备化妆品中的应用，其特征在于，所述化妆品剂型包括膏霜、乳液、水剂。
9.一种化妆品，其特征在于，包括有权利要求6所述的抗氧化保湿活性的茯苓多糖。
10.一种抗氧化保湿面膜，其特征在于，所述抗氧化保湿面膜包含如下质量百分比成分：权利要求6所述的具有抗氧化保湿活性的茯苓多糖0.01～5％、棕榈酸乙基己酯1～4％、山嵛醇聚醚-250.1～0.5％、甘油硬脂酸酯SE 2～3％、黄原胶0.1～0.5％、尿囊素0.2～0.6％、EDTA二钠0.01～0.04％、透明质酸钠0.01～0.05％、生育酚乙酸酯0.2～2％、木瓜蛋白酶1～5％、β-葡聚糖0.01～5％、双(羟甲基)咪唑烷基脲0.1～0.3％、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯0.01～0.03％、丙二醇3～8％、羟苯甲酯0.1～0.3％、去离子水余量。
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