CN113278548A - 卷曲乳杆菌及在生产改善人体阴道环境的产品中的应用 - Google Patents

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Abstract

本申请公开一种菌株，为卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus，Lc17217)的菌株，保藏号为CGMCC N0.21221。本申请的菌株相较于与其他的同种卷曲乳杆菌，有更强的产酸能力，产过氧化氢能力和增值能力，本申请的菌株能够抑制多种引导致病菌的生长，能抑制阴道加德纳菌、黄色微球菌、普雷沃氏菌，有广阔的市场前景。

Description

卷曲乳杆菌及在生产改善人体阴道环境的产品中的应用
技术领域
本申请涉及一种医药微生物技术领域，尤其涉及一种卷曲乳杆菌及在生产改善人体阴道环境的产品中的应用。
背景技术
人体女性阴道内环境是指女性阴道腔内所有寄居的微生物群所构成的微生态环境。正常情况下，女性阴道腔内寄居着大量的微生物，这些微生物在局部微环境发挥着重要的作用，维持女性阴道健康状态。已有研究证明，不同年龄阶段的女性其阴道微生物存在显著差异，表现为在青春期前，女性阴道菌群的典型特征是低丰度的乳酸杆菌、阴道加德纳菌和二路普氏杆菌。随着青春期的开始，在雌激素的刺激下，阴道上皮再次增厚，这有利于发酵葡萄糖的细菌在阴道的定植。青春期女孩的微生物群与成年女性的阴道微生物组相似，主要由卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、惰性乳杆菌和詹氏乳杆菌组成。育龄期女性阴道微生物群以乳酸杆菌为主要优势菌，同时存在少量的其他厌氧菌，乳杆菌能通过产酸、过氧化氢(H2O2)维持阴道弱酸性环境从而抑制病原菌的生长，维持阴道正常内环境。当阴道内的乳杆菌丰度下降或者乳杆菌功能下降时，阴道中其他厌氧菌过度增殖，使阴道微生态失衡，导致内环境紊乱，可促进女性生殖道外来病原体的定植从而导致局部炎症，甚至癌症的发生；同时，阴道局部病原体感染可增加盆腔炎、早产，流产等风险。
然而，目前在临床上，虽然局部使用抗生素可杀灭部分病原体，但是，随之而来的细菌耐药情况日趋严重，同时，由于抗生素在杀灭病原体的同时，也清除了阴道中的乳杆菌，阴道内环境处于失衡状态。在停止使用抗生素后，局部细菌群落在重塑过程中仍旧恢复为治疗前的紊乱生态状态，病人病情出现反复，进而出现难治性症状。近年来，有研究通过给予病人阴道局部乳杆菌栓剂，以达到改善和重塑阴道内环境的目的。然而，由于不同菌株之间存在功能差异和定植能力强弱差异，出现了改善效果不佳的情况。
发明内容
本申请的目的是，至少部分克服现有技术的不足，提供一种菌株，以及该菌株在生产改善人体阴道环境的产品中的应用。
为达到以上技术目的，本申请采用的技术方案如下：
第一方面，一种菌株，该菌株为卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus，Lc17217)的菌株，该菌株的保藏号为CGMCC N0.21221。
该菌株具有如SEQ ID N0.1所示的16S rDNA序列。
第二方面，如前所述的菌株在生产改善人体阴道环境的外用产品和口服产品中的应用。
具体地，所述外用产品包括洗消剂、化妆品、一次性使用卫生用品、外用药物和外用医疗器械中的至少一种。
进一步地，所述外用产品和口服产品包含菌剂。
更进一步地，所述菌剂包含菌株的代谢物、培养液、悬浮液、发酵液或提取液中的至少一种，所述菌剂还包含药学上可接受的载体。
优选地，所述外用产品和口服产品适用于改善由阴道致病菌引起的人体阴道环境的变化。
所述阴道致病菌包括阴道加德纳菌、黄色微球菌、普雷沃氏菌、白色念珠菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌中的至少一种。
进一步优选地，所述外用产品适用于维持人体阴道环境的酸碱度值在4.5以下。
生物保藏信息：
本申请的卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus，Lc17217)菌株，于2020年11月23日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC N0.21221。
与现有技术相比较，本申请具有如下优势：
(1)本申请的菌株相较于与其他的同种卷曲乳杆菌，有更强的产酸能力，产过氧化氢能力和增值能力，有利于更好地实现产业化的应用。
(2)本申请的菌株能够抑制多种引导致病菌的生长，除了能够抑制常见的白色念珠菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌，还能抑制阴道加德纳菌、黄色微球菌、普雷沃氏菌。
(3)本申请的菌株制备成菌剂之后可以添加到各种外用产品和口服产品中进行产业化应用，有广阔的市场前景。
附图说明
图1为本申请的菌株在透射电镜下的形态示意图，其中，标尺显示为2.0μm。
图2为本申请的菌株在透射电镜下的形态示意图，其中，标尺显示为500nm。
图3为本申请的菌株的理化特性验证结果图。
图4为本申请的菌株的产过氧化氢能力验证结果图。
图5本申请的菌株对阴道加德纳菌(Gardnerella vaginalis)在双层抑制实验中的结果。
图6本申请的菌株对黄色微球菌(Micrococcus luteus)在双层抑制实验中的结果。
图7本申请的菌株对普雷沃氏菌(Prevotella bivia)在双层抑制实验中的结果。
图8本申请的菌株对普雷沃氏菌(Prevotella timonensis)在双层抑制实验中的结果。
图9本申请的菌株对普雷沃氏菌(Prevotella corpri)在双层抑制实验中的结果。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施方式对本申请作进一步详细描述。
菌株的制备
本申请的卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus，Lc17217)通过分离法获得，具体步骤如下：
将健康人的阴道分泌物采用一次性无菌拭子采集，采用直接涂布法接种于MRS培养基，37℃厌氧培养18-27小时，得到多个菌落；
分别提取多个所述单菌落的DNA，并扩增、测定所述单菌落的16S rDNA序列，将测定结果与乳杆菌的16S rDNA序列进行比对，经一系列功能实验筛选得到本申请的菌株，该菌株为能够改善人体阴道内环境的卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus，Lc17217)，其16S rDNA的序列如SEQ ID N0.1所示。
参考图1和图2，本申请的卷曲乳杆菌在透射电镜下显示出杆菌的典型形态：菌体微弯，可成链出现，无鞭毛，无芽孢。
菌株的理化特性
如图3所示，经一系列菌株的功能性鉴定实验，确认本申请的卷曲乳杆菌具有以下理化特性：
本申请的卷曲乳杆菌不产脲素酶(URE)，不分解脲素；
本申请的卷曲乳杆菌产精氨酸双水解酶(ADH)，可分解L-精氨酸；
本申请的卷曲乳杆菌不产α半乳糖苷酶(αGAL)，不分解4-邻硝基苯-αD-吡喃半乳糖；
本申请的卷曲乳杆菌不产β半乳糖苷酶(βGAL)，不分解4-邻硝基苯-β-吡喃半乳糖；
本申请的卷曲乳杆菌不产β半乳糖苷酶-6-磷酸(βGP)，不分解4-邻硝基苯-βD-吡喃半乳糖苷-6-磷酸-2-环己胺(CHA)；
本申请的卷曲乳杆菌不产α葡萄糖苷酶(αGLU)，不分解4-邻硝基苯-α；
本申请的卷曲乳杆菌不产β葡萄糖苷酶(βGLU)，不分解4-邻硝基苯-βD-吡喃葡萄糖苷酶；
本申请的卷曲乳杆菌不产α阿拉伯糖苷酶(αARA)，不分解4-邻硝基苯-αL-吡喃阿拉伯呋喃糖苷；
本申请的卷曲乳杆菌不产β葡萄糖苷酸酶(βGUR)，不分解4-邻硝基苯-βD-萄糖醛酸苷；
本申请的卷曲乳杆菌不产β-N-乙酰基-βD-氨基葡萄糖苷酶(βNAG)，不分解4-邻硝基苯-N-乙酰基-βD-氨基葡萄糖苷；
本申请的卷曲乳杆菌能进行甘露糖发酵(MNE)，可分解D-甘露糖；
本申请的卷曲乳杆菌能进行甘露糖发酵(RAF)，可分解D-棉子糖；
本申请的卷曲乳杆菌产谷氨酸脱羧酶(GDC)，可分解谷氨酸；
本申请的卷曲乳杆菌不产α岩藻糖苷酶(αFUC)，不分解4-邻硝基苯-αL-吡喃岩藻糖苷；
本申请的卷曲乳杆菌不产硝酸盐还原酶(NIT)，不分解硝酸钾；
本申请的卷曲乳杆菌微产吲哚(IND)，可分解L-色氨酸；
本申请的卷曲乳杆菌不产碱性磷酸酶(PAL)，不分解2-萘酚-磷酸；
本申请的卷曲乳杆菌产精氨酸芳香基酶(ArgA)，可分解L-精氨酸-β-萘酚胺；
本申请的卷曲乳杆菌微产脯氨酸芳香基酶(ProA)，可分解L-脯氨酸-β-萘酚胺；
本申请的卷曲乳杆菌不产亮氨酰甘氨酸芳香基酶(LGA)，不分解L-亮氨酰-L-甘氨酸-β-萘酚胺；
本申请的卷曲乳杆菌产苯丙氨酸芳香基酶(PheA)，可分解L-苯丙氨酸-β-萘酚胺；
本申请的卷曲乳杆菌产亮氨酸芳香基酶(LeuA)，可分解L-亮氨酸-β-萘酚胺；
本申请的卷曲乳杆菌不产焦谷氨酸芳香基酶(PyrA)，不分解焦谷氨酸-β-萘酚胺；
本申请的卷曲乳杆菌产酪氨酸芳香基酶(TyrA)，不分解L-酪氨酸-β-萘酚胺；
本申请的卷曲乳杆菌产丙氨酸芳香基酶(AlaA)，可分解L-丙氨酰-L-丙氨酸-4-硝基苯；
本申请的卷曲乳杆菌微产甘氨酸芳香基酶(GlyA)，可分解L-甘氨酸-β-萘酚胺；
本申请的卷曲乳杆菌产组氨酸芳香基酶(HisA)，可分解L-组氨酸-β-萘酚胺；
本申请的卷曲乳杆菌不产谷氨酰谷氨酸芳香基酶(GGA)，不分解L-谷氨酰-L-谷氨酸-β-萘酚胺；
本申请的卷曲乳杆菌产丝氨酸芳香基酶(SerA)，可分解L-丝氨酸-β-萘酚胺。
进一步地，本申请的卷曲乳杆菌进行体外厌氧培养18个小时，其增殖能力和产酸能力如下表所示。其中增殖能力的测定通过MRS液体培养基在波长570nm下的吸光度反映，具体地，使用无菌接种环从MRS固体培养基中刮取本申请的菌株的菌苔，转移到MRS液体培养基中制成菌悬液；轻柔混匀，使用酶标仪在波长为570nm测定测量菌悬液的吸光度，记为培养0小时的吸光度；将离心管拧紧盖子，放入厌氧培养箱的条件下培养18个小时；将培养18个小时的细菌培养物吸取200μl于96孔板中使用酶标仪于波长570nm测定其吸光度并记录。产酸能力的测定方法如下：使用无菌接种环从MRS固体培养基中刮取本申请的菌株的菌苔，转移到MRS液体培养基中制成菌悬液，调整菌悬液的浓度，使其菌液OD(570nm)＝1.0，将1ml菌悬液加入装有19ml MRS液体培养基的50ml离心管中，在培养箱中厌氧培养18个小时，离心取上清，分别测定上清中的pH，H2O2浓度和D-乳酸浓度。
Figure BDA0003069496110000061
进一步地，以两个其他品种的卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)为对照，在相同的培养条件下，本申请的菌株在培养18个小时之后菌液浓度达到了约108/L，是对照菌的2倍左右，表现出了较强的增殖能力。实验组和对照组菌液的OD值(570nm)测定结果如下表所示。
Figure BDA0003069496110000062
Figure BDA0003069496110000071
与对照组相比较，本申请的菌株具有显著的产过氧化氢的能力，如图4所示，本申请的菌株在同样的培养条件下有显著的产过氧化氢的能力，特定的培养条件下，本申请的菌株的过氧化氢的产量达到25mg/L，而对照组的过氧化氢产量较低而未被检测到。
参考下表，在乳酸的产量的验证实验中发现，与两个对照菌相比较，本申请的菌株在同样的培养条件下产出的D-乳酸浓度达到了5.60mg/L，高于两个对照菌的D-乳酸的产量，同时也产生了10mg/L的过氧化氢，区别于两个对照菌没有产出过氧化氢的情况。在D-乳酸和过氧化氢的综合影响下，本申请的菌株的体外培养物的pH值达到了3.7，具备使得阴道环境维持在pH4.5以下的特性。
Figure BDA0003069496110000072
菌株的抗菌特性
为了更真实地反映本申请的菌株的抗菌特性，获取患有阴道疾病的病人的阴道分泌物，并从中分离几种致病菌，通过双层抑制实验验证本申请的菌株的抗菌效果，具体如下：
如图5所示，从病人的阴道分泌物中分离得到阴道加德纳菌(Gardnerellavaginalis)，在长满阴道加德纳菌的培养皿中接种本申请的菌株，经过培养，在接种位置形成直径为24mm的抑菌圈。
如图6所示，从病人的阴道分泌物中分离得到黄色微球菌(Micrococcus luteus)，在长满黄色微球菌的培养皿中接种本申请的菌株，经过培养，在接种位置形成直径为23mm的抑菌圈。
如图7所示，从病人的阴道分泌物中分离得到普雷沃氏菌(Prevotella bivia)，在长满普雷沃氏菌的培养皿中接种本申请的菌株，经过培养，在接种位置形成直径为20mm的抑菌圈。
如图8所示，从病人的阴道分泌物中分离得到普雷沃氏菌(Prevotellatimonensis)，在长满普雷沃氏菌的培养皿中接种本申请的菌株，经过培养，在接种位置形成直径为24mm的抑菌圈。
如图9所示，从病人的阴道分泌物中分离得到普雷沃氏菌(Prevotella corpri)，在长满普雷沃氏菌的培养皿中接种本申请的菌株，经过培养，在接种位置形成直径为22mm的抑菌圈。
上述的阴道加德纳菌属于阴道致病菌，黄色微球菌和三种普雷沃氏菌属于条件致病菌，本申请的菌株对这些从病患阴道分泌物中分离的致病菌有显著的抑菌效果。在其他实验中，本申请的菌株对能引起阴道疾病(如阴道炎)的其他致病菌也同样具有较好的抑菌效果，所述其他致病菌包括但不限于白色念珠菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。
进一步地，利用三代测序技术对细菌耐药基因测序分析，以确认本申请的卷曲乳杆菌的耐药性情况。本申请的卷曲乳杆菌利用MRS培养基，在37℃的厌氧条件下培养18-27个小时，得到多个菌落；刮取菌落之后使用核酸提取试剂盒对细菌进行裂解和DNA提取。对细菌全基因组DNA进行PacBio Sequel进行测序。使用SPAdes3.15.2软件，将测序数据(fastq文件)组装为contigs。使用ResFinder4.1软件，以其自带的耐药基因数据库为参考，并以默认参数(90％的序列相似度和60％最小长度)检索contigs中的耐药基因并注释，结果如下表所示，本申请的卷曲乳杆菌未发现耐药基因。
Figure BDA0003069496110000081
Figure BDA0003069496110000091
Figure BDA0003069496110000101
Figure BDA0003069496110000111
Figure BDA0003069496110000121
菌株的应用
本申请的菌株能够在生产改善人体阴道环境的外用产品和口服产品中应用。
所述外用产品含有本申请的菌株，所述外用产品包括但不限于洗消剂、化妆品、一次性使用卫生用品、外用药物和外用医疗器械中的至少一种。
所述洗消剂主要指能够与动植物表面直接接触的洗消剂，并且含有本申请的菌株的消洗剂中的其他成分不破坏本申请的菌株的活性，使得该消洗剂具备一般的消洗功能，还具有改善人体阴道环境的生物活性。
化妆品是指以涂抹、喷洒或者其他类似方法，散布于人体表面的任何部位，以达到清洁、保养、美容、修饰和改变外观，或者修正人体气味，保持良好状态为目的的化学工业品或精细化工产品，本申请的所述化妆品主要指护理液、护理霜、护理膏、护理膜和沐浴露等具备清洁和保养功能的日用化工产品，这些化妆品主要作用于阴道外部，实现对阴道环境(包括外部环境和内部环境)的改善。
一次性使用卫生用品主要指使用一次后即丢弃的、与人体直接或间接接触的、并为达到人体生理卫生或卫生保健(抗菌或抑菌)目的而使用的各种日常生活用品，常见的有，一次性使用手套或指套(不包括医用手套或指套)、纸巾、湿巾、卫生湿巾、口罩、内裤、妇女经期卫生用品(包括卫生护垫、卫生巾和卫生栓)、尿布等排泄物卫生用品(包括尿裤、尿布垫、尿布纸、隔尿垫)、避孕套等。这些一次性使用卫生用品使用过程中会与阴道直接接触，通过载体将本申请的菌株加载之后能对阴道环境(包括外部环境和内部环境)起到一定的改善效果。
所述外用药物主要指能直接接触患处的、具有清洁消毒、缓解症状、保护创面等的功能的药剂，所述外用药物根据应用场景的不同通过添加不同的辅料可以制成不同的剂型，如溶液剂、散剂、洗剂、酊剂、乳剂、软膏、糊剂或硬膏。上述的外用药物可以制备成作用于阴道外部的皮肤和黏膜表面的药剂，也可以制备成作用于阴道内部的黏膜表面的药剂。
所述外用医疗器械主要指会与阴道直接接触的检查用或治疗用的器材，如阴道镜、宫腔镜，这些器材与阴道直接接触的零部件表面可以通过覆膜的方式加载本申请的菌株，使得所述外用医疗器械兼备预防或治疗阴道疾病的功能。
为了对人体阴道环境有更优的改善效果，将所述菌株制备成菌剂，所述菌剂含有所述菌株的代谢物、培养液、悬浮液、发酵液或提取液中的至少一种，这些菌株的产物应以一定的浓度进行配比，以达到预防或治疗效果的剂量，所述菌剂还含有药学上可接受的载体，所述载体选用微载体、微囊、水凝胶或纳米级的材料中的其中一种，或多种组合。所述载体的使用有利于外用产品在使用前保持菌株本身或菌株产物的生物活性，延长外用产品的保质期，也有利于外用产品在使用时菌株本身或菌株产物本身能够更持久地发挥作用，保证外用产品的使用效果。
所述口服产品以本申请的菌株为活性组分，通过口服的方式进入人体之后发挥其改善阴道环境的效果。所述口服产品按照剂型分类包括但不限于液体饮料、浸膏、散剂、丸剂、颗粒/粉末剂、胶囊、片剂、丸剂等。为使上述剂型得以实现，需在制备过程中加入食品和药物制剂中可以使用的辅料：如填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂等。填充剂包括：淀粉、乳糖、甘露醇、微晶纤维素、蔗糖、木糖醇等；崩解剂包括：淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素钠等；润滑剂包括：滑石粉、二氧化硅、十二烷基硫酸钠、硬脂酸镁等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、琼脂、羟甲基纤维素等；粘合剂包括：淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿司帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、苯扎溴铵、醋酸氯已定、桉叶油、山梨酸剂其盐类等。所述辅料不仅用于为各种剂型赋形，还用于保护口服产品的活性组分，避免外部环境的影响导致失活。
综上所述，本申请的菌株为卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus，Lc17217)的菌株，保藏号为CGMCC N0.21221。本申请的菌株相较于与其他的同种卷曲乳杆菌，有更强的产酸能力，产过氧化氢能力和增值能力，本申请的菌株能够抑制多种引导致病菌的生长，能抑制阴道加德纳菌、黄色微球菌、普雷沃氏菌，有广阔的市场前景。
上述实施例为本申请较佳的实施方式，但并不仅仅受上述实施例的限制，其他的任何未背离本申请的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，均包含在本申请的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110>南方医科大学珠江医院，广东澳源微生态科技有限公司
<120>卷曲乳杆菌及在生产改善人体阴道环境的产品中的应用
<160>1
<210>1
<211>1466
<212>DNA
<213>卷曲乳杆菌（Lactobacillus crispatus,Lc17217）
<220>
<221>16S rDNA
<223>天然序列
<400>1
acgtcgtgtg ctatacatgc aagtcgagcg agcggaacta acagatttac ttcggtaatg 60
acgttaggaa agcgagcggc ggatgggtga gtaacacgtg gggaacctgc cccatagtct 120
gggataccac ttggaaacag gtgctaatac cggataagaa agcagatcgc atgatcagct 180
tttaaaaggc ggcgtaagct gtcgctatgg gatggccccg cggtgcatta gctagttggt 240
aaggtaaagg cttaccaagg cgatgatgca tagccgagtt gagagactga tcggccacat 300
tgggactgag acacggccca aactcctacg ggaggcagca gtagggaatc ttccacaatg 360
gacgcaagtc tgatggagca acgccgcgtg agtgaagaag gttttcggat cgtaaagctc 420
tgttgttggt gaagaaggat agaggtagta actggccttt atttgacggt aatcaaccag 480
aaagtcacgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtaggtggca agcgttgtcc 540
ggatttattg ggcgtaaagc gagcgcaggc ggaagaataa gtctgatgtg aaagccctcg 600
gcttaaccga ggaactgcat cggaaactgt ttttcttgag tgcagaagag gagagtggaa 660
ctccatgtgt agcggtggaa tgcgtagata tatggaagaa caccagtggc gaaggcggct 720
ctctggtctg caactgacgc tgaggctcga aagcatgggt agcgaacagg attagatacc 780
ctggtagtcc atgccgtaaa cgatgagtgc taagtgttgg gaggtttccg cctctcagtg 840
ctgcagctaa cgcattaagc actccgcctg gggagtacga ccgcaaggtt gaaactcaaa 900
ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa 960
gaaccttacc aggtcttgac atctagtgcc atttgtagag atacaaagtt cccttcgggg 1020
acgctaagac aggtggtgca tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt 1080
cccgcaacga gcgcaaccct tgttattagt tgccagcatt aagttgggca ctctaatgag 1140
actgccggtg acaaaccgga ggaaggtggg gatgacgtca agtcatcatg ccccttatga 1200
cctgggctac acacgtgcta caatgggcag tacaacgaga agcgagcctg cgaagacaag 1260
cgaatctctg aaagctgttc tcagttcgga ctgcagtctg caactcgact gcacgaagct 1320
ggaatcgcta gtaatcgcgg atcagcacgc cgcggtgaat acgttcccgg gccttgtaca 1380
caccgcccgt cacaccatgg gagtctgcaa tgcccaaagc cggtggccta accttcggga 1440
aggagccgtc taagcagtca gatgcc 1466

Claims (9)

1.一种菌株，该菌株为卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus，Lc17217)的菌株，其特征在于，该菌株的保藏号为CGMCC N0.21221。
2.如权利要求1所述的菌株，其特征在于，该菌株具有如SEQ ID N0.1所示的16S rDNA序列。
3.如权利要求1或2所述的菌株在生产改善人体阴道环境的外用产品和口服产品中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，所述外用产品包括洗消剂、化妆品、一次性使用卫生用品、外用药物和外用医疗器械中的至少一种。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述外用产品和口服产品分别包含菌剂。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述菌剂包含菌株的代谢物、培养液、悬浮液、发酵液或提取液中的至少一种，所述菌剂还包含药学上可接受的载体。
7.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述外用产品和口服产品适用于改善由阴道致病菌引起的人体阴道环境的变化。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述阴道致病菌包括阴道加德纳菌、黄色微球菌、普雷沃氏菌、白色念珠菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌中的至少一种。
9.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述外用产品适用于维持人体阴道环境的酸碱度值在4.5以下。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114891692A (zh) * 2022-06-08 2022-08-12 南方医科大学珠江医院 一种改善人体阴道环境的菌株及其应用
CN117535208A (zh) * 2024-01-04 2024-02-09 四川厌氧生物科技有限责任公司 一种卷曲乳杆菌及其在女性生殖道健康中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103074270A (zh) * 2012-11-15 2013-05-01 上海交大昂立股份有限公司 一种卷曲乳杆菌及其应用
CN104178437A (zh) * 2013-11-08 2014-12-03 苏州欧赛微科生物医药科技有限公司 一种卷曲乳杆菌及其在妇科疾病中的应用
CN107794236A (zh) * 2017-10-10 2018-03-13 内蒙古双奇药业股份有限公司 一种卷曲乳杆菌及其应用
CN110982726A (zh) * 2019-08-09 2020-04-10 四川厌氧生物科技有限责任公司 一种卷曲乳杆菌及其应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103074270A (zh) * 2012-11-15 2013-05-01 上海交大昂立股份有限公司 一种卷曲乳杆菌及其应用
CN104178437A (zh) * 2013-11-08 2014-12-03 苏州欧赛微科生物医药科技有限公司 一种卷曲乳杆菌及其在妇科疾病中的应用
CN107794236A (zh) * 2017-10-10 2018-03-13 内蒙古双奇药业股份有限公司 一种卷曲乳杆菌及其应用
CN110982726A (zh) * 2019-08-09 2020-04-10 四川厌氧生物科技有限责任公司 一种卷曲乳杆菌及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LAURA M. BRESHEARS等: "Lactobacillus crispatus inhibits growth of Gardnerella vaginalis and Neisseria gonorrhoeae on a porcine vaginal mucosa model", 《BMC MICROBIOLOGY》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114891692A (zh) * 2022-06-08 2022-08-12 南方医科大学珠江医院 一种改善人体阴道环境的菌株及其应用
CN117535208A (zh) * 2024-01-04 2024-02-09 四川厌氧生物科技有限责任公司 一种卷曲乳杆菌及其在女性生殖道健康中的应用
CN117535208B (zh) * 2024-01-04 2024-03-29 四川厌氧生物科技有限责任公司 一种卷曲乳杆菌及其在女性生殖道健康中的应用

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