CN101543514A

CN101543514A - 预防或治疗阴道炎的复合乳酸菌洁阴护理液及工艺

Info

Publication number: CN101543514A
Application number: CN200910011471A
Authority: CN
Inventors: 袁杰力; 左振军
Original assignee: Dalian Sinian Microecology Research Institute; DALIAN RUNSHENGTANG BIO-TECH ENGINEERING Co Ltd
Current assignee: Dalian Sinian Microecology Research Institute; DALIAN RUNSHENGTANG BIO-TECH ENGINEERING Co Ltd
Priority date: 2009-05-06
Filing date: 2009-05-06
Publication date: 2009-09-30

Abstract

预防或治疗细菌性阴道炎的复合乳酸菌洁阴护理液及工艺，将德氏乳杆菌菌株种子液接入含有重量1－3％葡萄糖、0.5－1.5％大豆蛋白胨、0.5－1％酵母浸膏、0.5－1％鱼蛋白胨、0.3－0.5％柠檬酸三铵的培养基中，经36－39℃厌氧发酵后，按重量取离心分离液20－40％，还可取赤藓糖醇1－3％、乳酸1－3％、过氧化氢1－3％、冰片0.2－0.5％、薄荷油1－3％，其余为去离子水，充分混合。利用乳杆菌代谢产物如乳酸、醋酸、过氧化氢、细菌素及其他挥发性脂肪酸、有用的酶、多肽等活性物质调节阴道菌群失调，有效抑制外袭菌和过盛繁殖的阴道菌群中的少数种群，恢复其自然的抵抗外来菌侵扰的能力，促进其本身的生物自净作用来预防和治疗细菌性阴道炎。

Description

预防或治疗阴道炎的复合乳酸菌洁阴护理液及工艺

技术领域：

本发明涉及一种预防或治疗阴道炎的复合乳酸菌洁阴护理液剂，种用于妇女阴道保健及调整阴道菌群失调的阴道微生态调节剂(消毒剂)，并涉及制备这种制剂的工艺。

背景技术：

健康妇女，阴道由于解剖组织的特点对病原体的侵入有自然防御功能。如阴道口的闭合，阴道前后壁紧贴，阴道上皮细胞在雌激素的影响下的增生，和表层细胞角化，阴道pH值保持在pH4-5，使适应碱性的病原体的繁殖受到抑制，而宫颈管粘液呈碱性，使适应酸性环境的病原体的繁殖受到抑制等，当阴道的自然防御功能受到破坏时，病原体易于侵入，导致发生阴道感染性疾病。幼女及绝经后妇女由于阴道上皮非常薄更易受到感染。寄生于健康妇女阴道中的细菌包括革兰氏阳性需氧菌，如乳酸杆菌、棒状杆菌、非溶血性链球菌、肠球菌、表皮葡萄糖球菌，革兰氏阴性需氧菌有大肠杆菌、加德纳菌。厌氧菌包括梭状芽胞杆菌、消化链球菌、类杆菌及梭形杆菌等，此外尚有Mobiluncns菌、支原体及念珠菌等。在这些正常阴道菌群中，以乳酸杆菌占优势，阴道乳酸杆菌对维持阴道正常菌群起着关键作用。阴道上皮的糖原经乳酸杆菌的作用分解成乳酸，使阴道局部呈弱酸环境，抑制其他寄生菌过度生长。此外部分乳酸杆菌尚能合成过氧化氢，这些过氧化氢阳性乳酸杆菌通过与其他氧化物联合作用可抑制其他细菌。另一方面乳酸杆菌造成的酸性环境又有利于减少细胞表面负电荷和去除覆盖于受体表面的糖基，暴露受体而有助于细菌粘附。因此乳酸杆菌是通过正反两方面调节正常阴道的菌群。但正如前述，当应用某些药物如广谱抗菌素、抗癌药物及免疫抑制剂，或受到某些感染如淋病、梅毒、艾滋病，或性激素等影响，都会导致阴道生态系统的平衡破坏。从微生态学的角度出发，通过生态制剂调整疗法，扶正和调节阴道内的正常菌群的组成和比例，恢复其自然的抵抗外来菌侵扰的能力，促进其本身的生物自净作用是治疗此类疾病的一种必然趋势。本发明在已调查大量健康妇女和患病妇女阴道菌群变化以及与妇女阴道保健的关系的基础上、开发出一种用于妇女阴道保健及调整阴道菌群失调的阴道微生态调节剂(消毒剂)

目前国内只有一种乳杆菌活菌阴道制剂应用于临床，对治疗各种阴道菌群失调性阴道炎、阴道霉菌感染及阴道滴虫病，均有较好的疗效，而且复发率低，无抗生素固有的耐药性、引起菌群失调及毒性反应等副作用。但作为活菌制剂本身存在许多缺点，如细菌存活期短，难于长时间保存，作为固体胶囊制剂，把本来应发挥自用的乳杆菌代谢产物如乳酸、醋酸、过氧化氢、细菌素及其他挥发性脂肪酸、一些有用的酶、多肽等活性物质全部扔掉。缺少乳杆菌代谢产物的微生态制剂是不完善的。

发明内容：

本发明的目的就是为了解决已有技术中实用，活菌制剂细菌存活期短，难于长时间保存，固体胶囊制剂把本来应发挥自用的乳杆菌代谢产物全部扔掉的许多缺点，提供一种通过生态制剂调整疗法，扶正和调节阴道内的正常菌群的组成和比例，恢复其自然的抵抗外来菌侵扰的能力，促进其本身的生物自净作用的阴道保健或预防细菌炎的复合乳酸菌洁阴护理液及工艺。

本发明的阴道保健或预防细菌炎的复合乳酸菌洁阴护理液，含有德氏乳杆菌乳酸亚种DM8909(Lactobacillus debrueckii subsp.lactis)(本菌种由中科院微生物研究所鉴定)发酵离心液20-40％；赤藓糖醇1-3％；乳酸1-3％；过氧化氢1-3％；冰片0.2-0.5％；薄荷油1-3％；其余为去离子水。充分混合后分装。

本发明涉及对德氏乳杆菌的微生物学实验、微生态学实验及生产工艺研究实验。微生物实验包括菌种分离、鉴定、生物特性、代谢产物、耐药性、代谢物、H202产生及质粒检测等。生态效应试验包括正常值调查、粘附、定植、生物拮抗、模型试验、安全试验、稳定试验和刺激试验等。生产工艺研究包括种子、发酵和制剂产品稳定性及工艺稳定性等方面的研究。基础研究还包括作用机制的研究。

本发明涉及的的德氏乳杆菌制备工艺如下：德氏乳杆菌上清液的制备：将德氏乳杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量1-3％葡萄糖、0.5-1.5％大豆蛋白胨、0.5-1％酵母浸膏、0.2-0.5％乙酸钠、0.2-0.5％柠檬酸三铵的培养基中，经36℃-39℃厌氧发酵24-48小时后，离心分离，获得上清液，即发酵离心液。还可以加入0.2-0.5％乙酸钠。

本发明涉及的一种用于调整菌群预防或治疗细菌性阴道炎的复合乳酸菌洁阴护理液制备工艺：将德氏乳杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量1-3％葡萄糖、0.5-1.5％大豆蛋白胨、0.5-1％酵母浸膏、0.5-1％鱼蛋白胨、0.2-0.5％柠檬酸三铵的培养基中，经36-39℃厌氧发酵后，离心分离获得离心上清液；将前面所述离心上清液按重量配比20-40％，赤藓糖醇1-3％，乳酸1-3％，过氧化氢1-3％，冰片0.2-0.5％，薄荷油1-3％，其余为去离子水进行混合。

其中，德氏乳杆菌制备的最佳过程如下：

德氏乳杆菌上清液的制备：将德氏乳杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量2％葡萄糖、1％大豆蛋白胨、0.5％酵母浸膏、0.2％乙酸钠、0.2％柠檬酸三铵的培养基中，经37℃厌氧发酵48小时后，离心分离，获得上清液。

本发明相关研究如下：

(1)本复合乳酸菌洁阴护理液的微生物杀灭试验

依据《消毒与灭菌效果的评价方法与标准》(GB15981-19950，参照《消毒技术规范》。检验本复合乳酸菌洁阴护理液对大肠埃希菌(ATCC25922)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、白色念珠菌(ATCC10231)、德氏乳杆菌(DM8909)、干酪乳杆菌(DM8121)杀灭效果。结果表明，本复合乳酸菌洁阴护理液对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的杀灭率大于99.9％，对德氏乳杆菌杀灭率为54.4％、对干酪乳杆菌杀灭率为67.4％。

在37℃90天保藏后，对大肠杆菌的杀灭率大于99.9％。

(2)皮肤刺激试验

依据《消毒技术规范》第三版第一分册3.6皮肤刺激试验方法进行试验，结果表明，本复合乳酸菌洁阴护理液对受试动物大白兔皮肤刺激试验按刺激轻度分级属轻刺激性。

(3)阴道黏膜刺激试验

依据《消毒技术规范》第三版第一分册刺激试验方法进行试验结果表明，本复合乳酸菌洁阴护理液对受试动物大白鼠阴道黏膜刺激试验按皮肤刺激强度评分标准和分级标准判定为无刺激性。

(4)对细菌性阴道炎的临床疗效观察

对患有细菌性阴道炎的24例患者采用复合乳酸菌洁阴护理液进行治疗，每晚睡前取本品10ml加5～10倍量温水稀释后清洗阴道或外阴。炎症传染期，可将本品加量到20ml清洗，一个疗程10天，用药后3天返回门诊，了解病情变化情况，停药后3d复查临床症状、实验室检查等，与自身对照比较疗效及安全性。对照组12例患者在冲洗外阴及阴道后，置阴道后穹窿部甲硝唑栓一枚，每晚一次，同时口服甲硝唑片0.2g Tid，共7～10天。治疗效果如下表1。对照组及治疗组治疗前后均出现好转现象，两组之间有效率比较，无显著差异(P>0.05)。治疗前后阴道分泌物情况见表2。

表1对24例BV患者治疗结果(例数)

表2使用本制剂对BV患者阴道分泌物的治疗效果比较：

具体实施方式：

实施例1将德氏乳杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量比为3％葡萄糖、1％大豆蛋白胨、0.8酵母浸膏、0.8％鱼蛋白胨、0.4％柠檬酸三铵的培养基中，经36-39℃厌氧发酵后，离心分离，获得离心上清液，即发酵离心液。取400g发酵离心液，用去离子水加至1000ml，形成复合乳酸菌洁阴护理液。

实施例2德氏乳杆菌发酵离心液300g；赤藓糖醇20g；乳酸20g；过氧化氢30g；冰片3g；薄荷油2g；去离子水加至670ml。充分混合后分装，制得复合乳酸菌洁阴护理液。其中德氏乳杆菌发酵理性也制备方法如下：将德氏乳杆菌菌株种子液按重量3％接种量接入已经灭菌后的含有重量3％葡萄糖、0.5％大豆蛋白胨，0.5％鱼蛋白胨、0.8％酵母浸膏、0.35％柠檬酸三铵培养基中，经37℃厌氧发酵后，离心分离出菌体获得发酵离心液。

实施例3一种本发明的阴道保健或预防细菌炎的复合乳酸菌洁阴护理液及制备工艺如下：

将德氏乳杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量2％葡萄糖、1％大豆蛋白胨、0.5％酵母浸膏、0.2％乙酸钠、0.2％柠檬酸三铵的培养基中，经37℃厌氧发酵48小时后，离心分离，获得的上清液即为发酵离心液。取发酵离心液400g；赤藓糖醇20g；乳酸20g；甘油50g；冰片2g；薄荷油3g；去离子水加至1000ml。充分混合后分装。对患有细菌性阴道炎的患者采用实施例2方法制得的复合乳酸菌洁阴护理液进行治疗，每晚睡前取本品10ml加5～10倍量温水稀释后清洗阴道或外阴。炎症传染期，可将本品加量到20ml清洗，一个疗程10天。

实施例4按重量比取实施例1的发酵离心液250g；赤藓糖醇10g；乳酸10g；甘油50g；冰片1g；薄荷油1.2g；；去离子水加至1000ml。充分混合后分装，制得复合乳酸菌洁阴护理液。

患者李某某，42岁，患有细菌性阴道炎。阴道分泌物呈灰色均质，粘度低，粘附于阴道壁偶成泡沫状，鱼腥样臭味；阴道pH值5.0～5.5；阴道分泌物湿涂片检出线索细胞。该患者采用实施例2方法制得的复合乳酸菌洁阴护理液进行治疗，每晚睡前取本品10ml加5～10倍量温水稀释后清洗阴道或外阴。使用一个疗程10天后，患者阴道骚痒、白带多症状消失；阴道线索细胞转为阴性，pH<4.5，10％KOH实验阴性。患者痊愈。

实施例5按重量比取实施例1的发酵离心液350g；赤藓糖醇30g；乳酸26g；甘油20g；冰片1.6g；薄荷油3.2g；；去离子水加至1000ml。充分混合后分装，制得复合乳酸菌洁阴护理液。患者张某某，37岁，患有霉菌性阴道炎，主要症状外阴瘙痒并伴有灼痛，白带增多，可见阴道粘膜上有一层白色粘稠或豆腐渣样分泌物覆盖，粘膜充血红肿，表浅溃疡。阴道镜检发现霉菌。该患者采用实施例2方法制得的复合乳酸菌洁阴护理液进行治疗，每晚睡前取本品10ml加5～10倍量温水稀释后清洗阴道或外阴。使用2个疗程20天后，患者阴道骚痒、白带多症状消失；阴道分泌物镜检未见念珠菌孢子和菌丝。患者痊愈。

Claims

1、一种用于调整菌群预防或治疗细菌性阴道炎的复合乳酸菌洁阴护理液，其特征在于：按重量比含有德氏乳杆菌乳酸亚种发酵离心液20-40％。

2、如权利要求1所说的复合乳酸菌洁阴护理液，其特征在于：按重量比还含有赤藓糖醇1-3％；乳酸1-3％；过氧化氢1-3％；冰片0.2-0.5％；薄荷油1-3％；其余为去离子水。

3、一种用于调整菌群预防或治疗细菌性阴道炎的复合乳酸菌洁阴护理液制备工艺：将德氏乳杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量1-3％葡萄糖、0.5-1.5％大豆蛋白胨、0.5-1％酵母浸膏、0.5-1％鱼蛋白胨、0.3-0.5％柠檬酸三铵的培养基中，经36-39℃厌氧发酵后，离心分离获得离心上清液；将前面所述离心上清液按重量配比20-40％，赤藓糖醇1-3％，乳酸1-3％，过氧化氢1-3％，冰片0.2-0.5％，薄荷油1-3％，其余为去离子水进行混合。

4、如权利要求3所说的复合乳酸菌洁阴护理液制备工艺，加入0.2-0.5％乙酸钠。

5、如权利要求3所说的复合乳酸菌洁阴护理液制备工艺，将德氏乳杆菌菌株种子液接入已经灭菌后的含有重量2％葡萄糖、1％大豆蛋白胨、0.5％酵母浸膏、0.2％乙酸钠、0.2％柠檬酸三铵的培养基中，经37℃厌氧发酵48小时。