CN113252745B - 一种生物传感器及其制备方法、应用、应用方法 - Google Patents

一种生物传感器及其制备方法、应用、应用方法 Download PDF

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Abstract

本发明适用于电化学技术领域，提供了一种生物传感器及其制备方法、应用、应用方法，其中，所述生物传感器是通过在玻碳电极上固定多肽以及适配体DNA而得；所述玻碳电极是通过在裸玻碳电极上依次修饰聚苯乙烯磺酸钠掺杂的3,4‑乙烯二氧噻吩以及金纳米颗粒而得。本发明可有效地防止生物的不良粘附，在应用于检测肿瘤标志物CA125时，通过多肽抵抗待测样本溶液中的非特异性吸附，利用适配体DNA与靶标结合前后的电流信号变化实现对目标CA125的高灵敏检测，具有简单、灵敏度高、超低污染以及选择性好的优势，且经证实其在实际临床中具有高可靠性和准确性。

Description

一种生物传感器及其制备方法、应用、应用方法
技术领域
本发明属于电化学技术领域，尤其涉及一种生物传感器及其制备方法、应用、应用方法。
背景技术
电化学生物传感器中一直存在的生物污染问题，严重限制了生物传感器在复杂生物液体(如血液、血清、汗液或尿液)中的临床应用和进一步推广。这种表面非特异性吸附引起的污染问题严重影响了电化学生物传感器在复杂基质中直接检测的稳定性和可靠性。此外，在实际应用中，非特异性吸附往往会导致表面诊断设备性能变差，造成临床检测假阳性结果的出现，同时也会对生物医学领域植入生物材料的愈合过程产生不利影响。
为了抑制生物分子(如蛋白质、核酸等)的非特异性吸附的影响，防污涂料的开发一直是人们研究的热点。构建生物传感器常用的防污涂料包括但不限于“金标准”的聚乙二醇(PEG)或寡聚乙二醇(OEG)基材料、两性离子材料、仿生材料等。然而，这些材料的一些缺点(如氧化损伤大、水溶性低、合成难度大等)阻碍了其向前推广。但多肽作为一种非常有前途的防污候选材料进入了公众的视野。它具有天然的生物相容性，易于合成和改性，环境友好，结构可调等优点，但不可否认，它也有蛋白水解稳定性差的缺点，其在生物体中容易被酶水解，这也是导致生物传感器的防污性能和稳定性较差的原因之一，限制了多肽的一些应用。
由此可见，现有的生物传感器存在防污性能和稳定性较差的问题。
发明内容
本发明实施例的目的在于提供一种生物传感器，旨在解决现有的生物传感器存在防污性能和稳定性较差的问题。
本发明实施例是这样实现的，一种生物传感器，所述生物传感器是通过在玻碳电极上固定多肽以及适配体DNA而得；所述玻碳电极是通过在裸玻碳电极上依次修饰聚苯乙烯磺酸钠掺杂的3，4-乙烯二氧噻吩以及金纳米颗粒而得。
本发明实施例的另一目的在于一种生物传感器的制备方法，包括：
将聚苯乙烯磺酸钠、3，4-乙烯二氧噻吩以及水进行超声分散处理后，通过i-t法在经预处理的裸玻碳电极上进行电沉积，得PEDOT-PSS修饰电极；
将所述PEDOT-PSS修饰电极在含有氯金酸以及硝酸钾的混合液中进行CV法电沉积还原金纳米颗粒，得AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极；
将所述AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极浸泡在含有多肽和适配体DNA的混合液中进行常温过夜反应，即得。
本发明实施例的另一目的在于一种所述的生物传感器在检测肿瘤标志物中的应用。
本发明实施例的另一目的在于一种生物传感器在检测肿瘤标志物的应用方法，包括：
将所述的生物传感器插入含有目标蛋白CA125的溶液中，常温孵育不少于1h，以使适配体DNA与目标蛋白CA125特异性结合，得CA125/生物传感器；
将裸玻碳电极、AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极、所述生物传感器以及CA125/生物传感器插入[Fe(CN)6]3-/4-的溶液中，采用电化学方法作为检测手段，设置电压范围-0.2V～0.6V，根据差分脉冲伏安法电化学信号的大小检测目标蛋白CA125。
本发明实施例通过在在裸玻碳电极上依次修饰聚苯乙烯磺酸钠掺杂的3，4-乙烯二氧噻吩以及金纳米颗粒，进而固定多肽以及适配体DNA，构建出了一种稳定的防污电化学生物传感器，可有效地防止生物的不良粘附，在应用于检测肿瘤标志物CA125时，通过多肽抵抗待测样本溶液中的非特异性吸附，利用适配体DNA与靶标结合前后的电流信号变化实现对目标CA125的高灵敏检测，具有简单、灵敏度高、超低污染以及选择性好的优势，且经证实其在实际临床中具有高可靠性和准确性。
附图说明
图1是本发明实施例提供的生物传感器的构建过程以及目标蛋白CA125检测过程的示意图；
图2是本发明实施例提供的多肽的分子动力学模拟图；
图3是本发明实施例提供的不同工作电极的DPV电流信号图；
图4是本发明实施例提供的不同电极抵抗非特异性吸附的柱状图；
图5是本发明实施例提供的防污多肽修饰电极酶解前后抵抗非特异性吸附的柱状图；
图6是本发明实施例提供的目标蛋白CA125浓度与DPV电流信号关系图；
图7是本发明实施例提供的生物传感器特异性测试结果图；
图8是本发明实施例提供的生物传感器重现性测试结果图；
图9是本发明实施例提供的生物传感器稳定性测试结果图；
图10是本发明实施例提供的临床样品分析示意图；
图11是本发明实施例提供的不同多肽浓度对信号抑制率的分析曲线图；
图12是本发明实施例提供的不同适配体DNA浓度对信号抑制率的分析曲线图；
图13是本发明实施例提供的不同适配体DNA和目标CA125孵育时间对信号抑制率的分析曲线图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明实施例为了解决现有的生物传感器存在防污性能和长期稳定性较差的问题，基于自组装闭环肽设计了一种稳定的防污电化学生物传感器，通过在在裸玻碳电极上依次修饰聚苯乙烯磺酸钠掺杂的3，4-乙烯二氧噻吩以及金纳米颗粒，进而固定多肽以及适配体DNA而得，可有效地防止生物的不良粘附，在应用于检测肿瘤标志物CA125时，通过多肽抵抗待测样本溶液中的非特异性吸附，利用适配体DNA与靶标结合前后的电流信号变化实现对目标CA125的高灵敏检测，具有简单、灵敏度高、超低污染以及选择性好的优势，且经证实其在实际临床中具有高可靠性和准确性。
本发明实施例提供了一种生物传感器，所述生物传感器是通过在玻碳电极上固定多肽以及适配体DNA而得；所述玻碳电极是通过在裸玻碳电极上依次修饰聚苯乙烯磺酸钠掺杂的3，4-乙烯二氧噻吩以及金纳米颗粒而得。
在本发明实施例中，在经处理的裸玻碳电极(GCE)上依次修饰聚苯乙烯磺酸钠掺杂的3，4-乙烯二氧噻吩(PEDOT-PSS)和金纳米颗粒(AuNPs)，得到AuNPs@PEDOT-PSS/GCE；进而将多肽(pep)和适配体DNA(apt)混合并同时滴加到AuNPs@PEDOT-PSS/GCE界面上反应，制得pep+apt/AuNPs@PEDOT-PSS/GCE，即防污电化学生物传感器。
在本发明实施例中，所述多肽的序列为Cys Glu Glu Glu Glu Lys Lys Lys LysGlu Glu Glu Glu Lys Lys Lys Lys Cys。
在本发明实施例中，所述的多肽能自组装为稳定的闭环肽，能抵抗非特异性吸附和酶水解。
在本发明实施例中，所述适配体DNA的序列为5’-SH-(CH2)6-ACC ACC ACC ACG ACGCAC GAG TAC CCC GCG-3’。
本发明实施例还提供了一种生物传感器的制备方法，包括以下步骤：
步骤S1：将聚苯乙烯磺酸钠、3，4-乙烯二氧噻吩以及水进行超声分散处理后，通过i-t法在经预处理的裸玻碳电极上进行电沉积，得PEDOT-PSS修饰电极。
在本发明实施例中，所述步骤S1包括：
将0.001g聚苯乙烯磺酸钠、4～10μL 3，4-乙烯二氧噻吩以及5mL水进行超声15～20min，通过i-t法进行电沉积，得PEDOT-PSS修饰电极。
步骤S2：将所述PEDOT-PSS修饰电极在含有氯金酸以及硝酸钾的混合液中进行CV法电沉积还原金纳米颗粒，得AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极。
在本发明实施例中，所述步骤S2包括：
将所述PEDOT-PSS修饰电极在含有氯金酸以及硝酸钾的溶液中进行CV法电沉积还原金纳米颗粒，得AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极。
其中，含有氯金酸以及硝酸钾的溶液优选为含有0.5mM氯金酸以及0.5M硝酸钾的4mL溶液，该配比为成金纳米颗粒的最优配比。
步骤S3：将所述AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极浸泡在含有多肽和适配体DNA的混合液中进行常温过夜反应，即得。
在本发明实施例中，所述步骤S3包括：
将所述AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极浸泡在含有不小于0.2mg/mL多肽和不小于5μM适配体DNA的混合液中进行常温过夜反应，反应结束后，用超纯水冲洗电极，除去未固定的多肽和适配体，即得。
本发明实施例还提供了一种上述的生物传感器在检测肿瘤标志物中的应用。
本发明实施例还提供了一种生物传感器在检测肿瘤标志物的应用方法，包括：
将上述的生物传感器插入含有目标蛋白CA125的溶液中，常温孵育不少于1h，以使适配体DNA与目标蛋白CA125特异性结合，得CA125/生物传感器；
将裸玻碳电极、AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极、所述生物传感器以及CA125/生物传感器插入[Fe(CN)6]3-/4-的溶液中，采用电化学方法作为检测手段，设置电压范围-0.2V～0.6V，根据差分脉冲伏安法电化学信号的大小检测目标蛋白CA125。
其中，对于含有目标蛋白CA125的溶液体积的确定：采用浸泡的方式时，在2ml PE管中最小体积60μL才能覆盖电极表面，体积可以更大，节省成本选择60μL体积。也可以滴加的方式，最小体积是10μL。
在本发明实施例中，所述检测目标蛋白CA125中，线性范围为0.1～1000U/mL，检测限为0.027U/mL。
在本发明实施例中，将pep+apt/AuNPs@PEDOT-PSS/GCE插入含有目标蛋白CA125的溶液中室温孵育后，将电极插入[Fe(CN)6]3-/4-的溶液中检测电化学信号；通过多肽抵抗待测样本溶液中的非特异性吸附，利用适配体DNA与靶标结合前后的电流信号变化实现对目标CA125的高灵敏检测。
以下给出本发明某些实施方式的实施例，其目的不在于对本发明的范围进行限定。
实施例1
仪器设备：电化学工作站CHI-660E(上海辰华仪器有限公司)用于电化学检测和电沉积；采用三电极系统，饱和甘汞电极(SCE)为参比电极，铂丝电极为辅助电极，玻碳电极(直径3.0mm)为工作电极；扫描电子显微镜JEOL JSM-7500(日立集团，日本)表征修饰界面的微观形貌。
试剂：3，4-乙烯二氧噻吩(EDOT)、聚苯乙烯磺酸钠(PSS)、氯金酸(HAuCl4)、α-甲胎蛋白(AFP)购买于上海阿拉丁生物科技有限公司(上海，中国)；CA125购买于由上海生工生物工程有限公司(上海，中国)；CA15-3、CA19-9购买自Abcam(剑桥，英国)；临床血清样本来自于青岛第八人民医院；实验中所使用的试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。
所用到的多肽由合肥国肽有限公司(合肥，中国)合成，序列为：Cys Glu Glu GluGlu Lys Lys Lys Lys Glu Glu Glu Glu Lys Lys Lys Lys Cys；
所用到的DNA由上海生工生物工程有限公司(上海，中国)合成，序列为：5’-SH-(CH2)6-ACC ACC ACC ACG ACG CAC GAG TAC CCC GCG-3’。
生物传感器的制备(构建过程如图1所示)：
a.电极预处理：裸玻碳电极(GCE)依次用0.3μm和0.05μm的α-Al2O3抛光粉抛光后，在超纯水、乙醇、超纯水中各超声2min，N2吹干备用；
b.AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极的制备：称量0.001g PSS，移取4μL EDOT与5mL超纯水中超声15～20min，通过i-t法(参数设置为：电位1.0V，运行时间20s)进行电沉积，得到PEDOT-PSS修饰电极，然后在含有0.5mM HAuCl4和0.5M KNO3的4mL溶液中进行CV法(参数设置为：电压范围为-1.5～0.5V，扫描速率为0.05V/s，扫描段为6)电沉积还原金纳米颗粒，得到AuNPs@PEDOT-PSS/GCE(AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极)；
c.传感器制备：将AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极浸泡在含有0.2mg/mL的多肽和5μM的适配体DNA混合液中，室温过夜反应，通过Au-S键将多肽和适配体固定在AuNPs@PEDOT-PSS/GCE上，反应结束后，用超纯水冲洗电极，除去未固定的多肽和适配体，从而实现防污多肽和适配体DNA在AuNPs/PEDOT-PSS/GCE上的固定，即得防污电化学生物传感器，标记为pep+apt/AuNPs@PEDOT-PSS/GCE。
电化学检测(检测过程如图1所示)：
a.将pep+apt/AuNPs@PEDOT-PSS/GCE插入60μL含有目标CA125的溶液中，室温孵育1h，适配体DNA与目标蛋白CA125特异性结合，得CA125/生物传感器(CA125/pep+apt/AuNPs@PEDOT-PSS/GCE)；
b.打开电化学工作站，选择差分脉冲伏安法(DPV)，设置电压范围-0.2V～0.6V(vsSCE)，将GCE、AuNPs@PEDOT-PSS/GCE、pep+apt/AuNPs@PEDOT-PSS/GCE以及CA125/pep+apt/AuNPs@PEDOT-PSS/GCE电极插入[Fe(CN)6]3-/4-的溶液中，采用电化学方法作为检测手段，根据DPV电化学信号的大小实现对目标CA125蛋白的检测。
实施例2分子动力学模拟(MD)
将设计的多肽序列，进行了分子动力学模拟(MD)，如图2所示，表明其在金纳米粒子修饰界面上能自组装为稳定的环状结构，为后续构建稳定的防污传感器的提供了条件。
实施例3不同电极的电化学信号
将裸GCE、PEDOT-PSS/GCE、AuNPs@PEDOT-PSS/GCE、pep+apt/AuNPs@PEDOT-PSS/GCE以及CA125/pep+apt/AuNPs@PEDOT-PSS/GCE电极插入[Fe(CN)6]3-/4-的溶液中，记录电化学信号。结果如图3所示(其中，a为裸GCE，b为PEDOT-PSS，c为AuNPs@EDOT-PSS/GCE，d为pep+apt/AuNPs@EDOT-PSS/GCE，e为CA125/pep+apt/AuNPs@EDOT-PSS/GCE)，导电聚合物PEDOT-PSS的修饰，增大了电极表面的比表面积，电流信号增大，电沉积金纳米颗粒之后，金的优异导电性会进一步增大电流信号。当连接上多肽和适配体DNA，以及目标蛋白后，因其阻碍了电极表面的电子传递，使得电流信号依次降低，从而说明传感器的成功构建。
实施例4本发明的生物传感器抵抗非特异性吸附性能
将不同电极分别浸泡在1％，10％，25％，50％以及100％的人血清溶液中半小时，记录浸泡前后DPV电流值。信号抑制率(％)＝I0-I/I0，其中，I0和I分别代表浸泡溶液前后的DPV电流信号值。信号抑制率越大，说明电极非特异性吸附越严重。结果如图4所示，本发明的生物传感器具有最低的抵抗非特异性吸附的能力，即防污性能好。
实施例5本发明的生物传感器抵抗酶解性能
将防污多肽修饰的电极浸泡在0.02mg/mL羧肽酶Y溶液中4h，然后对酶处理前后的电极分别浸泡在人血清溶液中半小时，并记录浸泡前后的DPV电流值。结果如图5所示，本发明的传感器在酶解前后抵抗非特异性吸附的能力相当，即说明本发明传感器能抵抗酶水解作用。
实施例6本发明的生物传感器分析性能
将目标蛋白CA125配置成一系列0.1U/mL，1U/mL，10U/mL，100U/mL，1000U/mL的溶液按实施例1中电化学检测方法进行实验，根据电化学DPV信号得标准曲线。本发明研究了不同浓度CA125与电化学DPV信号强度之间的关系，如图6所示(其中，A图为电化学信号曲线图；B图为电化学信号与浓度线性关系。从a到f以此为pep+apt/AuNPs@EDOT-PSS/GCE空白信号，当目标蛋白CA125浓度为0.1，1，10，100，1000U/mL时传感器的响应信号)，得到了检测目标物CA125的标准曲线，线性范围及线性方程。
当CA125的浓度在0.1-1000U/mL时，随着CA125浓度的变化，其电化学信号与浓度的对数成良好的线性关系，ΔI(μA)＝5.98Log C(U/mL)+13.90，ΔI＝I0-I，I0是pep+apt/AuNPs@PEDOT-PSS/GCE工作电极的电流信号，I是CA125/pep+apt/AuNPs@PEDOT-PSS/GCE工作电极的电流信号。其中相关系数R2＝0.996，检测限是0.027U/mL。
实施例7本发明的生物传感器特异性能
将pep+apt/AuNPs@PEDOT-PSS/GCE分别插入10U/mL CA125，10kU/mL CA15-3，10kU/mL CA19-9，10kU/mLAFP，1μg/mL IgG，1μg/mL CEA，1μg/mL HSA以及他们的混合溶液中，记录DPV信号变化。结果如图7所示，目标蛋白CA125存在时，传感器会产生很高的特异性响应，而其他蛋白在人为很高浓度下，引起的响应信号却很小，基本可以忽略，这表明本发明的防污电化学传感器具有很好的特异性。
实施例8本发明的传感器稳定性能
将制备的pep+apt/AuNPs@PEDOT-PSS/GCE电极在[Fe(CN)6]3-/4-中连续扫描7次，并将其储存于PBS缓冲液(10mM，pH7.4)中10天，进行电化学信号检测结果如图8所示(其中，A图是制备的pep+apt/AuNPs@EDOT-PSS/GCE电极连续扫描7次信号值；B图是制备的pep+apt/AuNPs@EDOT-PSS/GCE电极储存在PBS(10mM，pH7.4)10天内的信号比值)，本发明的传感器连续扫描7次，和储存10天，可以看到电流信号基本不变。说明本发明的防污传感器单次检测和保存的一个稳定性。
实施例9本发明的生物传感器重现性能
在相同条件下，将制备的7支独立pep+apt/AuNPs@PEDOT-PSS/GCE电极进行电化学信号检测，并将其用于10U/mL目标蛋白CA125的电化学信号检测。结果如图9所示，相同条件下制备的7支独立pep+apt/AuNPs@PEDOT-PSS/GCE电极，重复制备三次，得到的相对标准偏差(RSD)为2.31％，对用电极进行目标蛋白CA125检测，RSD为1.88％，这表明本发明的防污电化学生物传感器具有很好的重现性。
实施例10临床样本分析
从医院获取了临床血清样本10份，样本1-5为健康人血清，样本6-10为卵巢癌患者血清。将不同的血清样本按照实施例1中电化学检测方法直接进行检测，根据DPV电流信号和实施例4所得的标准曲线可以获取待测血清样本中CA125的含量。
根据本发明的方法对血清中目标蛋白CA125含量进行了测定，并与医院化学发光法检测的数据进行了对比，测定结果图10所示，本发明的方法检测的数据与医院方法测试的数据高度一致，证明了所提出的防污传感器在实际临床中的可靠性和准确性。
另外，本发明还对生物传感器构建过程中参数进行相关优化实验，具体见如下实施例11，以下仅以部分关键参数改变进行说明。
实施例11本发明的生物传感器构建过程中参数优化
对本发明生物传感器构建过程中的一些参数(如多肽浓度，适配体DNA浓度，适配体和目标CA125孵育时间)进行了优化，信号抑制率(％)＝I0-I/I0，其中，I0和I分别代表孵育不同浓度多肽前后的DPV电流信号值。信号抑制率越大，说明接上的多肽越多。结果如图11所示，多肽浓度为0.2mg/mL时，电极表面达到饱和，为构建传感器的最优浓度。同理，如图12所示，适配体DNA浓度为5μM时，为构建传感器的最优浓度；如图13所示，适配体DNA和目标CA125最优孵育时间为1h。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Figure BDA0003074993450000131
Figure BDA0003074993450000141
序列表
<110> 青岛科技大学
<120> 一种生物传感器及其制备方法、应用、应用方法
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Cys Glu Glu Glu Glu Lys Lys Lys Lys Glu Glu Glu Glu Lys Lys Lys
1 5 10 15
Lys Cys
<210> 2
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
accaccacca cgacgcacga gtaccccgcg 30

Claims (9)

1.一种生物传感器，其特征在于，所述生物传感器是通过在玻碳电极上固定多肽以及适配体DNA而得；所述玻碳电极是通过在裸玻碳电极上依次修饰聚苯乙烯磺酸钠掺杂的3,4-乙烯二氧噻吩以及金纳米颗粒而得；
所述多肽的序列为Cys Glu Glu Glu Glu Lys Lys Lys Lys Glu Glu Glu Glu LysLys Lys Lys Cys。
2.根据权利要求1所述生物传感器，其特征在于，所述适配体DNA的序列为5’-SH-(CH2)6-ACC ACC ACC ACG ACG CAC GAG TAC CCC GCG-3’。
3.一种生物传感器的制备方法，其特征在于，包括：
将聚苯乙烯磺酸钠、3,4-乙烯二氧噻吩以及水进行超声分散处理后，通过i-t法在经预处理的裸玻碳电极上进行电沉积，得PEDOT-PSS修饰电极；
将所述PEDOT-PSS修饰电极在含有氯金酸以及硝酸钾的混合液中进行CV法电沉积还原金纳米颗粒，得AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极；
将所述AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极浸泡在含有多肽和适配体DNA的混合液中进行常温过夜反应，即得；所述多肽的序列为Cys Glu Glu Glu Glu Lys Lys Lys Lys Glu Glu GluGlu Lys Lys Lys Lys Cys。
4.根据权利要求3所述的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述将聚苯乙烯磺酸钠、3,4-乙烯二氧噻吩以及水进行超声分散处理后，通过i-t法在经预处理的裸玻碳电极上进行电沉积，得PEDOT-PSS修饰电极的步骤，包括：
将0.001g 聚苯乙烯磺酸钠、4 ~10μL 3,4-乙烯二氧噻吩以及5mL水进行超声15~20min, 通过i-t法进行电沉积，得PEDOT-PSS修饰电极。
5.根据权利要求3所述的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述将所述PEDOT-PSS修饰电极在含有氯金酸以及硝酸钾的混合液中进行CV法电沉积还原金纳米颗粒，得AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极的步骤，包括：
将所述PEDOT-PSS修饰电极在含有氯金酸以及硝酸钾的溶液中进行CV法电沉积还原金纳米颗粒，得AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极。
6.根据权利要求3所述的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述将所述AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极浸泡在含有多肽和适配体DNA的混合液中进行常温过夜反应，即得的步骤，包括：
将所述AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极浸泡在含有不小于0.2 mg/mL多肽和不小于5μM适配体DNA的混合液中进行常温过夜反应，反应结束后，用超纯水冲洗电极，除去未固定的多肽和适配体，即得。
7.一种根据权利要求1-2任一权利要求所述的生物传感器在检测肿瘤标志物中的应用。
8.一种生物传感器在检测肿瘤标志物的应用方法，其特征在于，包括：
将权利要求1-2任一权利要求所述的生物传感器插入含有目标蛋白CA125的溶液中，常温孵育不少于1h，以使适配体DNA与目标蛋白CA125特异性结合，得CA125/生物传感器；
将裸玻碳电极、AuNPs@PEDOT-PSS修饰电极、所述生物传感器以及CA125/生物传感器插入[Fe(CN)6]3-/4-的溶液中，采用电化学方法作为检测手段，设置电压范围-0.2V~0.6V，根据差分脉冲伏安法电化学信号的大小检测目标蛋白CA125。
9.根据权利要求8所述的生物传感器在检测肿瘤标志物的应用方法，其特征在于，所述检测目标蛋白CA125中，线性范围为0.1 ~1000 U/mL，检测限为0.027 U/mL。
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