CN113249326A - 一种筛选肿瘤抗原特异性tcr序列的方法 - Google Patents

一种筛选肿瘤抗原特异性tcr序列的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113249326A
CN113249326A CN202110416319.2A CN202110416319A CN113249326A CN 113249326 A CN113249326 A CN 113249326A CN 202110416319 A CN202110416319 A CN 202110416319A CN 113249326 A CN113249326 A CN 113249326A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
cells
tumor
sequencing
tcr
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110416319.2A
Other languages
English (en)
Inventor
罗微
毛晓帆
余思菲
林凯容
张贝莹
张楚凌
官展文
金亚彬
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Foshan First Peoples Hospital Foshan Hospital Sun Yat Sen University
Original Assignee
Foshan First Peoples Hospital Foshan Hospital Sun Yat Sen University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Foshan First Peoples Hospital Foshan Hospital Sun Yat Sen University filed Critical Foshan First Peoples Hospital Foshan Hospital Sun Yat Sen University
Priority to CN202110416319.2A priority Critical patent/CN113249326A/zh
Publication of CN113249326A publication Critical patent/CN113249326A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0693—Tumour cells; Cancer cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
    • G16B25/00—ICT specially adapted for hybridisation; ICT specially adapted for gene or protein expression
    • G16B25/10—Gene or protein expression profiling; Expression-ratio estimation or normalisation
    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16B—BIOINFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR GENETIC OR PROTEIN-RELATED DATA PROCESSING IN COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY
    • G16B30/00—ICT specially adapted for sequence analysis involving nucleotides or amino acids
    • G16B30/10—Sequence alignment; Homology search
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
    • C12N2509/10—Mechanical dissociation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Theoretical Computer Science (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Evolutionary Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种筛选肿瘤抗原特异性TCR序列的方法，包括步骤：1)处理肿瘤组织，获取细胞悬液；2)单细胞转录组测序；3)测序所得数据转换成细胞‑基因的表达矩阵；4)标准化整合表达矩阵的数据并进行细胞分群，筛选同时高表达肿瘤标签基因与T细胞标签基因的目标细胞；5)获取步骤4)所得目标细胞的TCR基因序列。单细胞转录组测序技术过程中会出现两个或以上细胞进入一个反应体系的情况，这时测序结果会显示只有一个细胞，而实质是两个或多个细胞，这种情况被称作双/多胞体。当肿瘤细胞与T细胞特异性结合时，也会产生双/多胞体。利用该现象可筛选出同时表达了肿瘤标签基因与T细胞标签基因的目标细胞，进而提取TCR序列。

Description

一种筛选肿瘤抗原特异性TCR序列的方法
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，特别涉及一种筛选肿瘤抗原特异性TCR序列的方法。
背景技术
近年来，肿瘤的免疫治疗取得了巨大进展，免疫治疗成为继传统手术、放疗和化疗之后的第四种肿瘤治疗方式。其旨在激活人体免疫系统，依靠自身免疫机能杀灭癌细胞和肿瘤组织。过继性免疫细胞治疗(Adoptive cellular therapy,ACT)属于肿瘤免疫治疗的重要组成部分，主要是通过向患者回输在体外扩增的自身或同种(特异性或非特异性)免疫细胞，从而达到抗肿瘤目的，体外筛查肿瘤抗原特异性TCR序列成为该治疗手段的关键点。
肿瘤免疫治疗发展迅速，靶向PD-1/PD-L1或CTLA-4药物的使用，已被证明对多种恶性肿瘤有明显疗效，但是部分癌种中的部分患者能够获得持续的疗效，大多数患者对免疫抑制剂治疗反应性不好，更有甚者在治疗一段时间后出现耐药性或者肿瘤超进展。因此，亟需开发新的个体化精准免疫治疗策略，提高肿瘤患者的存活率和存活时间。
T细胞受体(T cell receptor,TCR)是T细胞特异性识别和结合抗原肽-MHC分子的分子结构，通常与CD3分子呈复合物形式存在于T细胞表面。大多数T细胞的TCR由α和β肽链组成，少数T细胞的TCR由γ和δ肽链组成。TCR特异性识别抗原提呈细胞上的抗原肽-MHC复合物，进而触发T细胞免疫应答。由于TCR分子决定着T细胞的抗原识别特异性，基于此将肿瘤抗原特异性的TCR基因转入普通T细胞中，赋予该T细胞肿瘤抗原的识别能力，经体外活化增殖后再转输入患者体内，可以发挥抗肿瘤功效，TCR基因修饰的T细胞被称为TCR-T细胞。近年来TCR-T已经成为肿瘤免疫治疗中的研究热点，在临床实验中显示了良好的治疗效果。TCR-T细胞对表达目的抗原的靶细胞具有强大攻击能力，且受MHC限制，寻找肿瘤特异性新抗原成为制备TCR-T细胞的关键点。
TCR分子主要由α和β两条链组成，其编码基因V、(D)J、C在T细胞发育过程中经胚系重排，在胸腺中经过阳性选择和阴性选择成为具有MHC识别限制性。机体成熟T细胞所产生的TCRαβ组成了一个能与成千万种抗原结合的抗原识别受体库(Repertoire)，从理论上估计，TCRαβ受体库的容量在1015以上。成功获得肿瘤抗原特异性的TCR是肿瘤TCR-T细胞治疗的重要前提，目前肿瘤特异性TCR基因的筛选主要通过获得肿瘤抗原特异性识别的T细胞，然后克隆其TCR基因。
大量研究证实肿瘤的进展与T细胞免疫关系密切，癌组织浸润T细胞的表型、功能和数量与预后密切相关。T细胞介导肿瘤清除需满足三个条件：识别肿瘤并活化，解除免疫抑制，能归巢到肿瘤组织。为了让T细胞识别肿瘤，Eshhar、Carl June和Rosenberg等科学家们开发了T细胞受体重定向技术(T cell receptor redirection)，通过基因工程手段，制备嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)或T细胞受体基因修饰T细胞(TCR-T)，提高对肿瘤的识别和杀伤。CAR-T和TCR-T作为免疫细胞过继回输治疗前沿技术，使得基于合成生物学、免疫学、遗传改造技术获得功能加强型T细胞成为可能。但现有的技术，需首先获取肿瘤抗原，再获取肿瘤特异T细胞，技术步骤繁琐易出错，且无法获得表达该TCR的细胞属于何种状态、何种亚群以及表达何种效应因子，其肿瘤反应性也无法得知，故不利于对TCR序列应用于TCR-T的有效性的评估。
发明内容
本发明目的在于提供一种筛选肿瘤抗原特异性TCR序列的方法，以解决现有技术中所存在的一个或多个技术问题，至少提供一种有益的选择或创造条件。
本发明提供的筛选肿瘤抗原特异性TCR序列的方法，包括以下步骤：
1)处理肿瘤组织，获取细胞悬液(single-cell suspension)；
2)分离所述细胞悬液中的单个细胞，再以单细胞转录组测序技术(single-cellRNA-seq，scRNA-seq)进行测序；
3)测序所得数据转换成细胞-基因的表达矩阵；
4)标准化整合表达矩阵的数据并进行细胞分群，筛选同时高表达肿瘤标签基因与T细胞标签基因的目标细胞；
5)获取步骤4)所得目标细胞的TCR基因序列。
以单细胞转录组测序技术法进行的测序步骤中，会出现两个或以上细胞进入一个反应体系的情况，这时测序结果会显示只有一个细胞，而实质是两个或多个细胞，这种情况被称作双/多胞体。当肿瘤细胞与T细胞特异性结合时，也会产生双/多胞体，且数量较多。利用该现象可筛选出同时表达了肿瘤标签基因与T细胞标签基因的目标细胞，进而提取该肿瘤特异的TCR序列。
在本发明的一些应用实施方式中，步骤1)所述处理的具体过程为：
1-1)将肿瘤组织冲洗后去除四周结缔组织和脂肪组织，剪碎成1～2mm3大小的小块；
1-2)加入组织消化液混匀，摇床中消化1～2小时后终止消化，经孔径70μm的筛网过滤，然后离心；
1-3)弃去上清液，用平衡盐溶液离心洗涤两次；
1-4)弃去上清液，加入RPMI-1640完全培养基；
1-5)去除死亡细胞，细胞重悬。
在本发明的一些应用实施方式中，步骤1-2)所述组织消化液包括I型胶原酶15～25mg、10mg/mL的DNA酶8～12μL、RPMI-1640不完全培养基8～12mL。
在本发明的一些应用实施方式中，步骤1-2)所述离心具体是在常温环境下转速1800rpm，离心8min，离心机离心上升速率设置为7，下降速率设置为4。
在本发明的一些应用实施方式中，步骤1-3)所述用平衡盐溶液离心洗涤前还包括加入4～5mL红细胞裂解液，轻轻吹散细胞团块，RT静置5～10min，待液体颜色变成清亮透明的状态终止裂解。
在本发明的一些应用实施方式中，步骤1-3)所述平衡盐溶液选自Hank’s液。
在本发明的一些应用实施方式中，步骤1-5)所述去除的方法是使用细胞分选磁珠去除死亡细胞，优选使用美天旎磁珠去死细胞磁珠(MiltenyiBiotec,Dead Cell RemovalKit,130-090-101)。
在本发明的一些应用实施方式中，步骤2)所述分离是通过口吸管技术(Micropipetting micromanipulation)、激光捕获显微切割技术(Laser capturemicrodissection)、流式细胞仪技术(Fluorescence activated Cell Sorting，FACS)、微滴技术(Microdroplets)或微流体技术(Microfluidics)实现细胞悬液中单个细胞的分离。
在本发明的一些应用实施方式中，步骤4)所述标准化是利用Seurat(BrodyH.Colorectal cancer.Nature.2015May 14；521(7551):S1.doi:10.1038/521S1a)中提供的SCTransform方法标准化并整合各样本的数据。
本方法所能够获得的是能够特异性识别肿瘤细胞上的抗原肽-MHC复合物的TCR序列。该TCR序列的应用包括转入普通T细胞中成为TCR-T细胞，赋予该T细胞肿瘤抗原的识别能力，经体外活化增殖后再转输入患者体内，可以发挥抗肿瘤功效。
附图说明
图1是实施例1中UMAP可视化细胞分群图；
图2是实施例1的肿瘤细胞与T细胞双/多胞体图；
图3是实施例2的UMAP可视化细胞分群图；
图4是实施例2的肿瘤细胞与T细胞双/多胞体图。
具体实施方式
下面将结合具体实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
1.样本：乳腺癌病人组织样本，包括正常组织、肿瘤组织、外周血及淋巴结。经处理后制成肿瘤组织的细胞悬液。
2.使用10x Genomics微流控设备单细胞建库及Illumina Nova双端150测序。
3.细胞第一步分群，使用R编程语言中的Seurat软件包，其中SCTransform可标准化各样本数据，基于SCTransform的标准化整合数据后，对细胞进行无监督聚类并分群，所有步骤均可用Seurat软件包完成，结果如图1。
4.选取肿瘤细胞与T细胞的多胞体。共表达肿瘤标签基因及T细胞标签基因的为肿瘤细胞与T细胞的多胞体。如图2所示，多胞体(同时高表达肿瘤标签基因与T细胞标签基因的目标样本)在图中以椭圆圈出。
5.多胞体中的TCR筛选结果(由基因序列直接翻译为氨基酸序列)：
Figure BDA0003026014370000041
实施例2
1.样本：胃间质瘤(GIST)肿瘤组织样本。经处理后制成肿瘤组织的细胞悬液。
2.使用10x Genomics微流控设备单细胞建库及Illumina Nova双端150测序。
3.细胞第一步分群使用R编程语言中的Seurat软件包，其中SCTransform可标准化各样本数据，基于SCTransform的标准化整合数据后，对细胞进行无监督聚类并分群，所有步骤均可用Seurat软件包完成，结果如图3。
4.选取肿瘤细胞与T细胞的多胞体，共表达肿瘤标签基因及T细胞标签基因的为肿瘤细胞与T细胞的多胞体，如图4所示，多胞体(同时高表达肿瘤标签基因与T细胞标签基因的目标样本)在图中以椭圆圈出。
5.多胞体中的TCR筛选结果(由基因序列直接翻译为氨基酸序列)：
Figure BDA0003026014370000051
获得的TCR基因可以转入普通T细胞中成为TCR-T细胞，赋予该T细胞肿瘤抗原的识别能力，经体外活化增殖后再转输入患者体内，可以发挥抗肿瘤功效。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

Claims (9)

1.一种筛选肿瘤抗原特异性TCR序列的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)处理肿瘤组织，获取细胞悬液；
2)分离所述细胞悬液中的单个细胞，再以单细胞转录组测序技术进行测序；
3)测序所得数据转换成细胞-基因的表达矩阵；
4)标准化整合表达矩阵的数据并进行细胞分群，筛选同时高表达肿瘤标签基因与T细胞标签基因的目标细胞；
5)获取步骤4)所得目标细胞的TCR基因序列。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述处理的具体过程为：
1-1)将肿瘤组织冲洗后去除四周结缔组织和脂肪组织，剪碎成1～2mm3大小的小块；
1-2)加入组织消化液混匀，摇床中消化1～2小时后终止消化，经孔径70μm的筛网过滤，然后离心；
1-3)弃去上清液，用平衡盐溶液离心洗涤两次；
1-4)弃去上清液，加入RPMI-1640完全培养基；
1-5)去除死亡细胞，细胞重悬。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1-2)所述组织消化液包括I型胶原酶15～25mg、10mg/mL的DNA酶8～12μL、RPMI-1640不完全培养基8～12mL。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1-2)所述离心具体是在常温环境下转速1800rpm，离心8min。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1-3)所述用平衡盐溶液离心洗涤前还包括加入4～5mL红细胞裂解液，轻轻吹散细胞团块，RT静置5～10min，待液体颜色变成清亮透明的状态终止裂解。
6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1-3)所述平衡盐溶液选自Hank’s液。
7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1-5)所述去除的方法是使用细胞分选磁珠去除死亡细胞。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)所述分离是通过口吸管技术、激光捕获显微切割技术、流式细胞仪技术、微滴技术或微流体技术实现细胞悬液中单个细胞的分离。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)所述标准化是使用SCTransform方法进行。
CN202110416319.2A 2021-04-19 2021-04-19 一种筛选肿瘤抗原特异性tcr序列的方法 Pending CN113249326A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110416319.2A CN113249326A (zh) 2021-04-19 2021-04-19 一种筛选肿瘤抗原特异性tcr序列的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110416319.2A CN113249326A (zh) 2021-04-19 2021-04-19 一种筛选肿瘤抗原特异性tcr序列的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113249326A true CN113249326A (zh) 2021-08-13

Family

ID=77221001

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110416319.2A Pending CN113249326A (zh) 2021-04-19 2021-04-19 一种筛选肿瘤抗原特异性tcr序列的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113249326A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113980899A (zh) * 2021-11-29 2022-01-28 杭州艾沐蒽生物科技有限公司 一种高通量筛选抗原特异性tcr的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108348547A (zh) * 2015-08-28 2018-07-31 纽约市哥伦比亚大学信托人 用于匹配肿瘤学特征的系统和方法
CN110675914A (zh) * 2019-09-17 2020-01-10 佛山市第一人民医院（中山大学附属佛山医院） 一种筛选肿瘤特异性t细胞及tcr的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108348547A (zh) * 2015-08-28 2018-07-31 纽约市哥伦比亚大学信托人 用于匹配肿瘤学特征的系统和方法
CN110675914A (zh) * 2019-09-17 2020-01-10 佛山市第一人民医院（中山大学附属佛山医院） 一种筛选肿瘤特异性t细胞及tcr的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SIMONI Y RT AL.: "Bystander CD8(+) T cells are abundant and phenotypically distinct in human tumour infiltrates", 《NATURE》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113980899A (zh) * 2021-11-29 2022-01-28 杭州艾沐蒽生物科技有限公司 一种高通量筛选抗原特异性tcr的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110675914B (zh) 一种筛选肿瘤特异性t细胞及tcr的方法
Kurd et al. Early precursors and molecular determinants of tissue-resident memory CD8+ T lymphocytes revealed by single-cell RNA sequencing
US20240158812A1 (en) Systems and Methods for Point/Center-Of-Care Immunotherapy
Garaud et al. A simple and rapid protocol to non-enzymatically dissociate fresh human tissues for the analysis of infiltrating lymphocytes
CN107002038A (zh) 用于识别、富集和/或扩增抗原特异性t细胞的试剂和方法
US20200368336A1 (en) Method for preparing personalized cancer vaccine
Miyara et al. Combination of IL-2, rapamycin, DNA methyltransferase and histone deacetylase inhibitors for the expansion of human regulatory T cells
Gholamin et al. Induction of cytotoxic T lymphocytes primed with tumor RNA-loaded dendritic cells in esophageal squamous cell carcinoma: preliminary step for DC vaccine design
CN111440773A (zh) 一种t细胞体外嵌合抗原受体改造及扩增的优化培养方法
CN113249326A (zh) 一种筛选肿瘤抗原特异性tcr序列的方法
CN111733244A (zh) 膀胱癌耗竭型nkt细胞亚群、其特征基因及其应用
CN117230012A (zh) 一种人结肠癌类器官培养方法及其应用
CN114787381A (zh) 获得用于测序的核酸的方法
CN113801844A (zh) 一种全封闭一体化免疫细胞制备方法
KR20180114209A (ko) 세포 증식법을 이용한 순환종양세포의 검출·분리취득방법
CN112521484A (zh) 结肠癌肿瘤特异tcr序列及其应用
Kuwabara et al. Microfluidics sorting enables the isolation of an intact cellular pair complex of CD8+ T cells and antigen-presenting cells in a cognate antigen recognition-dependent manner
WO2023179795A1 (zh) 一种快速且简便地获得正确配对tcr的方法以及获得的tcr
Li Clinical Genomic Analysis and Diagnosis--Genomic Analysis Ex Vivo, in Vitro and in Silico
CN112774645B (zh) 一种作为人工抗原呈递细胞的磷脂微珠及其制备方法及其用途
CN115725710A (zh) 一种快速克隆肿瘤反应性tcr的方法及其应用
WO2022143783A1 (en) Methods of identifying t-cell modulating genes
CN116813744B (zh) 一种识别mage-a3抗原短肽的t细胞受体及其应用
Rhoo et al. Adoptive transfer of fluorescently labeled immune cells in Xenopus
CN116240271A (zh) 利用双胞体筛选肿瘤抗原特异性tcr序列的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination