CN113248590A - 一种NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽及其应用 - Google Patents
一种NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113248590A CN113248590A CN202110701116.8A CN202110701116A CN113248590A CN 113248590 A CN113248590 A CN 113248590A CN 202110701116 A CN202110701116 A CN 202110701116A CN 113248590 A CN113248590 A CN 113248590A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- probnp
- protein
- antibody
- probnp protein
- prepared
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 43
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 41
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 41
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 title claims abstract description 40
- 108010008064 pro-brain natriuretic peptide (1-76) Proteins 0.000 title claims abstract 20
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 29
- 238000002331 protein detection Methods 0.000 claims abstract description 14
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims abstract description 5
- 102400001263 NT-proBNP Human genes 0.000 claims abstract 5
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 11
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 11
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 claims description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 26
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 14
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 54
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 54
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 23
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 12
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 8
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 8
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 101800000407 Brain natriuretic peptide 32 Proteins 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 102100036836 Natriuretic peptides B Human genes 0.000 description 5
- 101710187802 Natriuretic peptides B Proteins 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 101500026734 Homo sapiens NT-proBNP Proteins 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020001621 Natriuretic Peptide Proteins 0.000 description 4
- 102000004571 Natriuretic peptide Human genes 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 4
- 239000000692 natriuretic peptide Substances 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HJBUBXIDMQBSQW-UHFFFAOYSA-N 4-(4-diazoniophenyl)benzenediazonium Chemical compound C1=CC([N+]#N)=CC=C1C1=CC=C([N+]#N)C=C1 HJBUBXIDMQBSQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010007556 Cardiac failure acute Diseases 0.000 description 3
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 3
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 3
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 2
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanedithiol Chemical compound SCCS VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 9-fluorenylmethoxycarbonyl Chemical group 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OTYYBJNSLLBAGE-UHFFFAOYSA-N CN1C(CCC1)=O.[N] Chemical compound CN1C(CCC1)=O.[N] OTYYBJNSLLBAGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021555 Chromium Chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 206010015719 Exsanguination Diseases 0.000 description 1
- DNPCBMNFQVTHMA-DCAQKATOSA-N Glu-Leu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O DNPCBMNFQVTHMA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- DPWGZWUMUUJQDT-IUCAKERBSA-N Leu-Gln-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O DPWGZWUMUUJQDT-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- WRODMZBHNNPRLN-SRVKXCTJSA-N Lys-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WRODMZBHNNPRLN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- GURGCNUWVSDYTP-SRVKXCTJSA-N Pro-Leu-Gln Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O GURGCNUWVSDYTP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N Ser-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZIFYDQAFEMIZII-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VLDMQVZZWDOKQF-AUTRQRHGSA-N Val-Glu-Gln Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N VLDMQVZZWDOKQF-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 1
- 239000003875 Wang resin Substances 0.000 description 1
- NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N [4-[(4-methylphenyl)methoxy]phenyl]methanol Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1COC1=CC=C(CO)C=C1 NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- XSBJUSIOTXTIPN-UHFFFAOYSA-N aluminum platinum Chemical compound [Al].[Pt] XSBJUSIOTXTIPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000006793 arrhythmia Effects 0.000 description 1
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 229940078916 carbamide peroxide Drugs 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- QSWDMMVNRMROPK-UHFFFAOYSA-K chromium(3+) trichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cr+3] QSWDMMVNRMROPK-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 108010087810 leucyl-seryl-glutamyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 238000011587 new zealand white rabbit Methods 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 229920013716 polyethylene resin Polymers 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 description 1
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N urea hydrogen peroxide Chemical compound OO.NC(N)=O AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/58—Atrial natriuretic factor complex; Atriopeptin; Atrial natriuretic peptide [ANP]; Cardionatrin; Cardiodilatin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/575—Hormones
- G01N2333/58—Atrial natriuretic factor complex; Atriopeptin; Atrial natriuretic peptide [ANP]; Brain natriuretic peptide [BNP, proBNP]; Cardionatrin; Cardiodilatin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/32—Cardiovascular disorders
- G01N2800/325—Heart failure or cardiac arrest, e.g. cardiomyopathy, congestive heart failure
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明提供一种NT‑proBNP蛋白抗原决定簇多肽及其应用。其中所述NT‑proBNP蛋白抗原决定簇多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示序列。本发明所述的NT‑proBNP蛋白抗原是通过使用所述的抗原决定簇多肽与载体蛋白偶联制备的,所述的NT‑proBNP蛋白抗体是由所述抗原制备成的单克隆抗体或多克隆抗体,所述的单克隆抗体和多克隆抗体用于制备NT‑proBNP蛋白检测试剂盒。本发明所述的NT‑proBNP蛋白抗原决定簇多肽具有良好的抗原性,用其制备的抗原免疫动物能够产生特异性抗体,制备的NT‑proBNP蛋白抗体可以特异性地结合人血清中的NT‑proBNP,制备的NT‑proBNP检测试剂盒可有效检测人血清中的NT‑proBNP蛋白水平。
Description
技术领域
本发明涉及多肽化学领域,具体为一种NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽及其应用。
背景技术
急性心肌梗死是冠状动脉急性、持续性缺血硬气的心肌坏死,患者多发生在冠状动脉粥样硬化狭窄基础上,由于某些诱因致使冠状动脉粥样斑块破裂,血中的血小板在破裂的斑块表面聚集,形成血块(血栓),突然阻塞冠状动脉管腔,导致心肌缺血坏死。急性心肌梗死常引发心律失常、休克或心力衰竭等严重临床后果。中国的急性心肌梗死的发病率呈明显上升趋势,每年新发至少50万,现存患者超过200万。
急性心肌梗死具有发病急、预后差和死亡率高的特点,其预后更是降低疾病死亡率的重要环节。因此临床上多使用各种方式进行疾病诊断、病情监测和预后评估,氨基末端脑利钠肽前体(N-terminal pro B type natriuretic peptide,NT-proBNP)的水平正是心衰诊断、监测病情、反应预后情况的标志物之一。2018版《中国心力衰竭诊断和治疗指南》中指出,诊断急性心衰时NT-proBNP水平应根据年龄和肾功能进行分层。
BNP是利钠肽家族的成员之一,来源于心脏,是一种心脏激素。BNP于1988首次在猪脑中发现,后来在人的心脏中分离纯化出且发现心脏的分泌量高于脑部。当心肌细胞受到压力或牵拉刺激后,首先形成B型利钠肽原前体(pre-proBNP),pre-proBNP是由134个氨基酸组成的分子,并在心肌细胞内储存,当pre-proBNP在由心肌细胞中向外分泌时或分泌后会被蛋白酶分解为N端的26个氨基酸组成的信号肽和由108个氨基酸组成的B型利钠肽原(proBNP),后者在内切酶的作用下进一步裂解含有32个氨基酸组成的活性B型利钠肽(BNP)和一个由N端76个氨基酸构成的无活性的B型利钠肽前体(NT-proBNP)。二者均由心肌细胞分泌到血液中,可作为心血管疾病的标志物。相较而言,BNP的半衰期仅20分钟,而NT-proBNP虽无生物学活性,但半衰期长达60-120分钟,且血液中NT-proBNP含量约为BNP的16-20倍。同时,NT-proBNP在个体内变异小,几乎无昼夜变化;而且在血清与血浆中稳定性良好,室温下可稳定3天以上,采血体位对样本结果无明显影响,且其检测结果不受重组BNP等药物干扰。因此,NT-proBNP更易于检测、更灵敏,是临床上更为理想的心衰标志物。
因此,NT-proBNP的浓度测定对于心血管疾病患者的临床诊断、危险分层和预后管理有重要的临床意义与价值。常规的NT-proBNP的检测方法通常是免疫检测,即使用NT-proBNP抗体检测其水平,所以,合适的NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽的发现和制备也成为了NT-proBNP检测的重点。
随着医学检验领域的发展,临床上需要一种兼具高度特异性和抗原性的NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽,以适用于高度特异性抗体的制备与生产。因此,提出一种NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽及其应用,具有良好的应用前景和现实意义。
发明内容
针对上述背景技术中的不足,本发明提供一种NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽及其应用,本发明的抗原决定簇多肽抗原性高,特异性强,可用于制备对应的NT-proBNP特异性抗原和抗体,及NT-proBNP检测试剂盒和应用。
为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:
第一方面,本发明提供一种NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽,所述抗原决定簇多肽(1)和(2)的氨基酸序列为如SEQ ID NO.1所示的序列和SEQ ID NO.2所示的序列,具体为:
(1)Leu-Gln-Gly-Lys-Leu-Ser-Glu-Leu-Gln-Val-Glu-Gln-Tyr;和
(2)Ser-Leu-Gln-Pro-Leu-Gln-Glu-Tyr。
第二方面,本发明提供一种NT-proBNP蛋白抗原,所述的NT-proBNP蛋白抗原是通过使用如第一方面所述的抗原决定簇(1)或(2)多肽与载体蛋白偶联制备的。
第三方面,本发明提供一种NT-proBNP蛋白抗体,所述的NT-proBNP蛋白抗体是有如第二方面所述抗原制备成的单克隆抗体或多克隆抗体。
第四方面,本发明提供一种如第三方面所述NT-proBNP蛋白抗体在制备NT-proBNP检测试剂盒中的应用。
第五方面,本发明提供一种NT-proBNP蛋白检测试剂盒,所述NT-proBNP检测试剂盒包含如第三方面所述抗体作为包被抗体,优选为单克隆抗体。
优选地,所述NT-proBNP蛋白检测试剂盒用于定量检测人血清中的NT-proBNP蛋白水平。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
1. 本发明提供的一种NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽具有良好的抗原性,使用其制备的抗原免疫动物能够产生特异性抗体;
2. 本发明提供的一种NT-proBNP蛋白抗原具有良好的免疫原性,可刺激抗体免疫动物发生免疫应答;
3. 本发明提供的一种NT-proBNP蛋白抗体可以特异型地结合人血清中的NT-proBNP;
4. 本发明提供的一种NT-proBNP检测试剂盒可有效检测人血清中的NT-proBNP蛋白水平。
附图说明
图1为NT-proBNP蛋白检测试剂盒中NT-proBNP蛋白校准品浓度与吸光度标准曲线。
具体实施方式
为了能够更清楚地理解本发明专利的技术内容,特通过以下具体实施方式的描述进一步说明。
本发明所用数据具有相关领域普通技术人员通常理解的含义。然而,为了更好地理解本发明,对一些定义和相关术语的解释如下:
如本发明所使用的数据“抗原决定簇”,指决定抗原性的化学基团,多位于抗原物质表面,可以由连续的氨基酸序列或不连续的蛋白质三维结构组成。本文所使用的“抗原决定簇”特指人NT-proBNP蛋白的抗原决定簇(1)和(2)多肽。
一. NT-proBNP蛋白抗原决定簇。
本发明中所述的NT-proBNP蛋白是本领域已知的,其氨基酸序列是已知的,可以在专业数据库中查询到。
本发明提供一种NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽,所述抗原决定簇多肽(1)和(2)的氨基酸序列为如SEQ ID NO.1所示的序列和SEQ ID NO.2所示的序列,具体为:
(1)Leu-Gln-Gly-Lys-Leu-Ser-Glu-Leu-Gln-Val-Glu-Gln-Tyr;和
(2)Ser-Leu-Gln-Pro-Leu-Gln-Glu-Tyr。
经过理论研究和实验探索,筛选出的两个NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽具有良好的抗原性,可以特异性结合对应抗体。
所述抗原决定簇(1)是人NT-proBNP蛋白(Swiss-Prot登录号:P16860.1)N端第23位至第34位的多肽段,并且在C末端加上氨基酸Y得到,总计含有13个氨基酸。
所述抗原决定簇(2)是人NT-proBNP蛋白(Swiss-Prot登录号:P16860.1)N端第36位至第42位的多肽段,并且在C末端加上氨基酸Y得到,总计含有8个氨基酸。
C末端添加氨基酸Y是为了使抗原决定簇通过双偶氮联苯胺(Bis-diazotizedbenzidine,BDB)交联到载体蛋白上,从而可以作为抗原制备对应抗体。所述抗原决定簇具有亲水性高、抗原性强、易于合成的特点。
上述NT-proBNP抗原决定簇多肽片段可使用固相法合成,合成方法参见实施例1。
本发明提供的抗原决定簇具有如下特点:
1. 抗原性强,可特异性结合对应抗体;
2. 使用该抗原决定簇与载体蛋白结合后,可刺激抗原免疫动物制备单克隆抗体;
3. 使用该抗原决定簇制备的抗体可以特异性结合人血NT-proBNP。
本发明提供的抗原决定簇(1)分子量为1750.71,抗原决定簇(2)分子量为1154.11,可用质谱确定分子量。
二. NT-proBNP蛋白抗原。
本发明提供的NT-proBNP蛋白抗原是通过使用本发明提供的NT-proBNP蛋白抗原决定簇(1)或(2)多肽与载体蛋白偶联制备出的。
可用的载体蛋白包括血蓝蛋白(Keyhole limpet hemacyanin,KLH)、牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)和卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)等,其中优选的载体蛋白是KLH,KLH免疫原性强,免疫效果好,且不易引起交叉反应。制备方法采用现有成熟技术,参见实施例2。
三. NT-proBNP蛋白抗体。
本发明提供的NT-proBNP蛋白抗体是利用本发明提供的NT-proBNP蛋白抗原结合载体蛋白偶联制备的单克隆抗体和多克隆抗体,制备方法为本领域的常规技术,可用于制备NT-proBNP蛋白检测试剂盒,试剂盒可以基于免疫方法对人血液样本中的NT-proBNP蛋白进行检测。制备方法采用现有成熟技术,参见实施例2。
四. NT-proBNP蛋白检测试剂盒。
本发明提供的NT-proBNP蛋白检测试剂盒优选采用ELISA双抗夹心法测定人NT-proBNP蛋白,所述试剂盒包含包被抗体、结合抗体、酶标记的第二抗体等必要试剂。
其中,当所述包被抗体为所述NT-proBNP蛋白单克隆抗体(1)时,结合抗体应为NT-proBNP蛋白多克隆抗体(2);当所述包被抗体为所述NT-proBNP蛋白单克隆抗体(2)时,结合抗体应为NT-proBNP蛋白多克隆抗体(1)。
此外,所述NT-proBNP蛋白检测试剂盒还可以包含测定所需的任何试剂或工具,如预包被板、洗涤液、终止液等。试剂盒的制备参见实施例3。
本发明还提供了所述NT-proBNP蛋白检测试剂盒在定量测定人血清NT-proBNP蛋白中的应用。试剂盒的应用参见实施例3。
为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果,以下结合实施例对本发明做进一步的说明,但本发明的保护范围不受具体的实施方式所限制,以权利要求书为准,显然,所描述的实施例仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例都属于本发明保护的范围。实施例中未注明具体技术或条件者,按照本领域内的文献所描述的技术或条件,或者按照产品说明书进行。所用的试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
实施例1. NT-proBNP蛋白抗原决定簇(1)和(2)的制备。
本发明所述的NT-proBNP蛋白抗原决定簇(1)和(2)的制备方法采用化学固相法合成抗原决定簇,原理是将氨基酸的C末端固定在不溶性树脂上,然后依次进行缩合反应并延长肽链,直至多肽制备完成。
本发明的NT-proBNP蛋白抗原决定簇(1)和(2)的制备步骤如下。
1. 试剂与原料:
HMP resin(P-羟甲基苯氧甲基多聚乙烯树脂,Wang树脂);
Fmoc-AA(9-芴基甲氧羰酰基保护的氨基酸);
NMP(氮甲基吡咯烷酮);
DCM(二氯甲烷);
MeoH(甲醇);
Piperidine(哌啶);
DMAP(二甲基氨基吡啶);
HOBT(羟基苯并三唑);
DCC(二环已基碳二亚胺);
TFA(三氟乙酸);
EDT(1,2-乙二硫醇);
硫代苯甲醚;
结晶苯酚;
乙腈。
2. 使用仪器:
多肽自动合成仪;
高效液相色谱仪。
3. 合成方法与过程:
步骤1. Fmoc-AA的活化。
所述Fmoc-AA的结构式如下所示:
可简写为:
所述Fmoc-AA通过与DCC和HOBT反应活化,反应式如下所示:
步骤2. 将活化的氨基酸连接到树脂上。
将所述活化氨基酸与HMP resin在DMAP条件下反应,得到连接上氨基酸的树脂,反应式如下所示:
步骤3. 脱除连接上氨基酸的树脂的Fmoc基团。
在Piperidine的催化作用下,脱除连接上氨基酸的树脂的Fmoc基团,反应式如下所示:
步骤4. 重复步骤1、步骤2,得到另一个活化氨基酸后,将得到的活化氨基酸与步骤3所得的树脂偶联,并脱去偶联后氨基组分中的氨基,反应式如下所示:
步骤5. 重复步骤3、步骤4,至合成结束,得到连接了所有氨基酸的多肽树脂。
步骤6. 使用步骤5中得到的连接了所有氨基酸的多肽树脂,对其进行分离纯化,即可得到具有免疫活性的NT-proBNP蛋白抗原决定簇(1)和(2)。关于两种抗原决定簇分析和纯化的步骤如下:
步骤6-1. 使用TFA结合EDT、硫代苯甲醚和水混合的清除剂与步骤5得到的连接了所有氨基酸的多肽树脂反应,将所述具有免疫活性的NT-proBNP蛋白抗原决定簇(1)和(2)从多肽树脂上分离,反应时间为3小时;
步骤6-2. 除去清除剂,使用乙醚进行萃取,得到具有免疫活性的NT-proBNP蛋白抗原决定簇(1)和(2)粗品;
步骤6-3. 将具有免疫活性的NT-proBNP蛋白抗原决定簇(1)和(2)粗品进行纯化,得到具有免疫活性的NT-proBNP蛋白抗原决定簇(1)和(2)。
其中,所述纯化采用高效液相色谱分离纯化,条件如下表所示:
实施例2 . 使用实施例1所得抗原决定簇(1)和(2)分别制备单克隆抗体和多克隆抗体。
分别将实施例1所得的NT-proBNP蛋白抗原决定簇(1)和(2)分别与载体蛋白连接,并制备NT-proBNP蛋白抗原(1)和(2),使用所述抗原(1)和(2)分别免疫动物,制备特异性的单克隆抗体与多克隆抗体。
本发明的NT-proBNP蛋白抗体的制备步骤如下:
1. NT-proBNP蛋白抗原的制备。
步骤1 . 取实施例1中得到的NT-proBNP蛋白抗原决定簇(1)或(2)10mg,用1mL 0.1M的PBS缓冲液(pH值为7 .4)溶解。
步骤2 . 取载体蛋白(KLH)10mg,用20mL 0 .2M的硼酸盐缓冲液(pH为8 .6)溶解。
步骤3 . 混合步骤1和步骤2中所得溶液,冷却至0℃,取BDB偶联剂氯化铬110μL,室温下反应1 .5小时,透析过夜后分装,即得到NT-proBNP蛋白抗原(1)或(2),并置于-20℃保存。
2. 使用免疫动物制备单克隆抗体。
步骤1 . 动物免疫。取1中制备的NT-proBNP蛋白抗原(1)或(2)作为免疫原,Balb/c小鼠作为免疫动物,使用弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂来增加NT-proBNP蛋白抗原的免疫原性。将等量的所述抗原与弗氏完全佐剂充分混匀后,以50μg/只的剂量皮下多点注射免疫小鼠,完成初次免疫;间隔四周后,将等量的所述抗原与弗氏不完全佐剂充分混匀后,以50μg/只的剂量皮下多点注射免疫小鼠,完成二次免疫;间隔四周后,使用所述抗原以50μg/只的剂量皮下多点注射免疫小鼠,完成三次免疫,七天后采血检测效价,获得免疫小鼠。
步骤2 . 细胞融合。对步骤1中所得免疫小鼠,开腹取脾,洗涤后剥去周围结缔组织,制成细胞悬液后使用不完全培养基培养,制得单细胞悬液;使用所述单细胞悬液与准备好的骨髓瘤细胞SP2/0在50%PEG的介导下进行融合,获得融合细胞。
步骤3 . 杂交瘤细胞的筛选与克隆培养。将步骤2中所得融合细胞置于培养箱中37℃培养7-9天后,出现较大的细胞克隆,筛选出阳性孔进行克隆化培养,获得杂交瘤细胞,并冻存。
步骤4 . 单克隆抗体的生产。使用成年Balb/c小鼠空腹接种降植烷或液体石蜡,每只小鼠0 .3-0 .5mL,7-10天后接种杂交瘤细胞0 .5mL,间隔五天后采集腹部明显膨大小鼠收集腹水,离心收集上清并分装冻存,即获得所述NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽(1)或(2)制备的单克隆抗体(1)或(2)。
步骤5 . 测定抗体效价。所述利用NT-proBNP蛋白抗原决定簇(1)或(2)多肽制备的单克隆抗体(1)或(2)的效价,经ELISA方法测定,均达到1:32000以上。
3. 使用免疫动物制备多克隆抗体。
步骤1 . 动物免疫。取1中制备的NT-proBNP蛋白抗原(1)或(2)作为免疫原,新西兰大白兔作为免疫动物,使用弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂来增加NT-proBNP蛋白抗原的免疫原性。将等量的所述抗原与弗氏完全佐剂充分混匀后,以100μg/只的剂量皮下多点注射免疫兔子,完成初次免疫;间隔四周后,将等量的所述抗原与弗氏不完全佐剂充分混匀后,以100μg/只的剂量皮下多点注射免疫兔子,完成二次免疫;间隔四周后,使用所述抗原以100μg/只的剂量皮下多点注射免疫兔子,完成三次免疫;四次免疫后,间隔十天采血检测效价,获得免疫兔子,颈动脉放血分离血清后,即获得所述NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽(1)或(2)制备的多克隆抗体(1)或(2)。
步骤2 . 测定抗体效价。所述利用NT-proBNP蛋白抗原决定簇(1)或(2)多肽制备的多克隆抗体(1)或(2)的效价,经ELISA方法测定,均达到1:16000以上。
实施例3 . 使用实施例2所得单克隆抗体和多克隆抗体制备NT-proBNP蛋白检测试剂盒。
在本实施例中,使用实施例2中使用NT-proBNP蛋白抗原决定簇(1)多肽制备的单克隆抗体(1)作为NT-proBNP蛋白检测试剂盒中的包被抗体,使用NT-proBNP蛋白抗原决定簇(2)多肽制备的多克隆抗体(2)作为NT-proBNP蛋白检测试剂盒中的结合抗体。
1. 试剂和缓冲液。
包被缓冲液:0 .050M、pH9 .6的碳酸盐缓冲液;
样品/洗涤缓冲液:pH7 .2的10×PBS-Tween20;
酶标志物稀释液:10×PBS-Tween20(10mL)、FCS(小牛血清)(20mL)、蒸馏水稀释至1000mL,酶稳定剂(1g)、生物防腐剂(1mL);
显色剂A:柠檬酸(35 .5g)、过氧化脲(10g),蒸馏水稀释至1000mL,Tween20(10mL);
显色剂B:柠檬酸(120g)、EDTA-2Na(1g)、TMB-2HCl(2g),蒸馏水稀释至1000mL;
终止液:2M H2SO4。
2. 预包被板制备。
将NT-proBNP蛋白单克隆抗体(1)溶于pH为9 .6的0 .05M的碳酸盐缓冲液中,制成预包被液,在酶标板上每孔按0 .1μg/孔加入100μL,置4℃温度放置18-24小时,甩掉包被液后洗涤,经BSA封闭16小时、过夜干燥后装入铝铂袋中抽真空密封,并置于4℃保存。
3. 试剂盒的组成。
预包被板:48/96孔;
NT-proBNP校准品:6个,6×1 .0mL,浓度分别为25pg/mL、50pg/mL、100pg/mL、200pg/mL、400pg/mL、800pg/mL;
NT-proBNP结合抗体:1×10mL;
酶联物:1×10mL;
浓缩洗涤液(25×PBS-Tween20): 1×20mL;
显色剂A:1×6 .0mL;
显色剂B:1×6 .0mL;
终止液:1×6 .0Ml。
4. 试剂盒使用步骤。
在预包被板的各孔中分别加入待检血样以及标准品100μL/孔,均为双孔,37℃孵育60分钟,用1×洗涤缓冲液洗涤5次,拍干;在各孔内加入NT-proBNP结合抗体100μL/孔,37℃孵育30分钟,用1×洗涤缓冲液洗涤5次,拍干;再在各孔内加入酶联物100μL/孔,37℃孵育30分钟,用1×洗涤缓冲液洗涤5次,拍干。加入显色剂A、B液,每孔各50μL,混匀,37℃孵育15分钟;加终止液50μL/孔终止反应,用酶联检测仪,双波长(450nm、620nm)检测吸光度。
5. 试剂盒检测结果判定。
根据试剂盒中NT-proBNP校准品的浓度和吸光度绘制标准曲线,样品检测后通过标准曲线计算待测样本的NT-proBNP浓度。下表为NT-proBNP校准品浓度和对应的平均吸光度值(OD),该平均吸光度值为若干批次的平均吸光度值,仅作为参考使用,实际使用时应当以NT-proBNP校准品的实际吸光度值为准。
表1 . 可溶性NT-proBNP校准品浓度和对应的平均吸光度(OD)
如图1所示,为根据上表中NT-proBNP校准品浓度和对应的平均吸光度绘制的标准曲线,标准曲线的拟合优度R2=0 .965。
根据4.试剂盒使用步骤和5 .试剂盒检验结果判定对98名急性心衰患者和136名健康个体进行血清NT-proBNP蛋白检测,检测结果显示如表2所示,心衰患者的血清NT-proBNP蛋白含量显著高于健康组(1198.02 V.S. 217.75),且差异具有统计学意义(P=0.01772)。
表2 . 急性心衰患者组与健康组中血清NT-proBNP含量比较
由上述结果可知,本发明的NT-proBNP蛋白检测试剂盒能够特异性地检测出血清中NT-proBNP含量。
需要说明的是,在本文中,诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来,而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且,术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
以上所述仅为本发明的优选实例而已,并不用于限制本发明,对于本领域的技术人员来说,本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 天津奇云诺德生物医学有限公司
<120> 一种NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽及其应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Leu Gln Gly Lys Leu Ser Glu Leu Gln Val Glu Gln Tyr
1 5 10
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Ser Leu Glu Pro Leu Gln Glu Tyr
1 5
Claims (5)
1.一种NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽,所述的NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽的氨基酸序列为如SEQ ID NO.2所示的序列,具体为:Ser-Leu-Gln-Pro-Leu-Gln-Glu-Tyr。
2.一种NT-proBNP蛋白抗原,所述的NT-proBNP蛋白抗原是通过使用权利要求1所述NT-proBNP蛋白决定簇多肽与载体蛋白偶联制备的。
3.一种NT-proBNP蛋白抗体,所述的NT-proBNP蛋白抗体是由权利要求2所述的NT-proBNP蛋白抗原制备成的多克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的NT-proBNP蛋白抗体在制备NT-proBNP蛋白检测试剂盒上的应用。
5.一种NT-proBNP蛋白检测试剂盒,所述的NT-proBNP蛋白检测试剂盒包括权利要求3所述抗体作为包被抗体。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110701116.8A CN113248590B (zh) | 2021-06-24 | 2021-06-24 | 一种NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110701116.8A CN113248590B (zh) | 2021-06-24 | 2021-06-24 | 一种NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113248590A true CN113248590A (zh) | 2021-08-13 |
CN113248590B CN113248590B (zh) | 2021-09-10 |
Family
ID=77189401
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202110701116.8A Active CN113248590B (zh) | 2021-06-24 | 2021-06-24 | 一种NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113248590B (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114316042A (zh) * | 2022-01-19 | 2022-04-12 | 天津奇云诺德生物医学有限公司 | 一种cTnI蛋白抗原决定簇多肽及其应用 |
CN115261333A (zh) * | 2022-09-26 | 2022-11-01 | 玛特瑞尔(吉林)生物技术有限公司 | NT-proBNP杂交瘤细胞株及单克隆抗体、试纸条及检测试剂盒 |
CN116120448A (zh) * | 2021-08-26 | 2023-05-16 | 东莞市朋志生物科技有限公司 | 一种抗NT-proBNP的结合蛋白 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010049179A1 (en) * | 2008-10-31 | 2010-05-06 | B.R.A.H.M.S. Ag | Arginine vasopressin pro-hormone as predictive biomarker for diabetes |
CN102565423A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-07-11 | 深圳康美生物科技股份有限公司 | 一种定量检测氮末端脑钠肽的荧光免疫层析方法及其试剂盒 |
CN103087191A (zh) * | 2012-12-26 | 2013-05-08 | 天健生物制药(天津)有限公司 | 一种抗人NT-proBNP多肽的单克隆抗体及其应用 |
CN107478848A (zh) * | 2017-08-23 | 2017-12-15 | 广州瑞博奥生物科技有限公司 | 定量检测人NT‑proBNP的试剂盒及其制备方法 |
CN109942707A (zh) * | 2019-04-17 | 2019-06-28 | 蕲泰和瑞生物科技(武汉)有限公司 | 一种抗人NT-proBNP多肽的单克隆抗体 |
CN110770347A (zh) * | 2017-05-11 | 2020-02-07 | 龟甲万株式会社 | 类异戊二烯的制造方法以及用于该制造方法的蛋白质、基因和转化体 |
-
2021
- 2021-06-24 CN CN202110701116.8A patent/CN113248590B/zh active Active
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010049179A1 (en) * | 2008-10-31 | 2010-05-06 | B.R.A.H.M.S. Ag | Arginine vasopressin pro-hormone as predictive biomarker for diabetes |
CN102565423A (zh) * | 2011-12-29 | 2012-07-11 | 深圳康美生物科技股份有限公司 | 一种定量检测氮末端脑钠肽的荧光免疫层析方法及其试剂盒 |
CN103087191A (zh) * | 2012-12-26 | 2013-05-08 | 天健生物制药(天津)有限公司 | 一种抗人NT-proBNP多肽的单克隆抗体及其应用 |
CN110770347A (zh) * | 2017-05-11 | 2020-02-07 | 龟甲万株式会社 | 类异戊二烯的制造方法以及用于该制造方法的蛋白质、基因和转化体 |
CN107478848A (zh) * | 2017-08-23 | 2017-12-15 | 广州瑞博奥生物科技有限公司 | 定量检测人NT‑proBNP的试剂盒及其制备方法 |
CN109942707A (zh) * | 2019-04-17 | 2019-06-28 | 蕲泰和瑞生物科技(武汉)有限公司 | 一种抗人NT-proBNP多肽的单克隆抗体 |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN116120448A (zh) * | 2021-08-26 | 2023-05-16 | 东莞市朋志生物科技有限公司 | 一种抗NT-proBNP的结合蛋白 |
CN116120448B (zh) * | 2021-08-26 | 2024-03-12 | 东莞市朋志生物科技有限公司 | 一种抗NT-proBNP的结合蛋白 |
CN114316042A (zh) * | 2022-01-19 | 2022-04-12 | 天津奇云诺德生物医学有限公司 | 一种cTnI蛋白抗原决定簇多肽及其应用 |
CN115261333A (zh) * | 2022-09-26 | 2022-11-01 | 玛特瑞尔(吉林)生物技术有限公司 | NT-proBNP杂交瘤细胞株及单克隆抗体、试纸条及检测试剂盒 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN113248590B (zh) | 2021-09-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN113248590B (zh) | 一种NT-proBNP蛋白抗原决定簇多肽及其应用 | |
US7264939B2 (en) | Method of detecting native proBNP | |
CN112457392B (zh) | 一种可溶性st2蛋白抗原决定簇多肽及其应用 | |
WO1997032900A9 (en) | ASSAY AND REAGENTS FOR QUANTIFYING hBNP | |
JPH09501152A (ja) | ヒト前立腺腺性カリクレインに特異的な抗体 | |
CN103087191A (zh) | 一种抗人NT-proBNP多肽的单克隆抗体及其应用 | |
JP4374316B2 (ja) | β−アミロイドまたはその誘導体に対する抗体およびその用途 | |
EP0410303A1 (en) | Monoclonal antibody to endothelin-3 or precursor thereof and use thereof | |
JPH06500001A (ja) | Pacapに対する抗体およびその用途 | |
JP2729159B2 (ja) | ヒトグリセンチンのモノクローナル抗体、この抗体を産生するハイブリドーマおよびそれを用いるヒトグリセンチンの定量法 | |
JP2735233B2 (ja) | 合成ペプチドおよびそれに対する抗体 | |
CN104231052B (zh) | 人Lp‑PLA2抗原表位肽、抗原、抗体、用途及试剂盒 | |
US5407833A (en) | Peptides of the SM-D antigen and their use for diagnosis of systemic lupus erythematosus | |
CN107446040B (zh) | 人st2抗原表位肽、抗原、抗体、试剂盒及应用 | |
CN112592398B (zh) | 一种bnp抗原决定簇多肽及其应用 | |
CN109705221B (zh) | C肽免疫原及其单克隆抗体对及该抗体对在c肽磁微粒化学发光免疫试剂中的应用 | |
CN114316042A (zh) | 一种cTnI蛋白抗原决定簇多肽及其应用 | |
US5254672A (en) | Synthetic peptides which contain sequences from factor VIIa, and the use thereof | |
JP3353133B2 (ja) | 抗体およびこれを使用した測定法 | |
CN114836407B (zh) | 壳多糖酶3样蛋白1抗原及载体蛋白修饰多肽的方法 | |
CN114774395B (zh) | 肝病检测的高纯度壳多糖酶3样蛋白1抗原表位肽及制法 | |
JP4028925B2 (ja) | モノクローナル抗体 | |
RU2356576C1 (ru) | СИНТЕТИЧЕСКИЙ АНТИГЕН, ОБЛАДАЮЩИЙ СПОСОБНОСТЬЮ СВЯЗЫВАТЬ АУТОАНТИТЕЛА К β1-АДРЕНОРЕЦЕПТОРУ | |
JPH11140098A (ja) | 抗ペプチド抗体の製造法 | |
Chersi et al. | Specificity of rabbit antibodies elicited by related synthetic peptides |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
PP01 | Preservation of patent right |
Effective date of registration: 20231206 Granted publication date: 20210910 |
|
PP01 | Preservation of patent right |