CN113244370A - 一种预防和/或治疗神经母细胞瘤的多肽药物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种多肽、含有多肽的组合物及其在制备用于预防和/或治疗神经母细胞瘤的药物中的用途。

Description

一种预防和/或治疗神经母细胞瘤的多肽药物及其用途
技术领域
本发明涉及医药生物领域，特别涉及一种多肽在制备预防和/或治疗神经母细胞瘤的药物中的用途以及含有该多肽的组合物。
背景技术
神经母细胞瘤(Neuroblastoma，NB)是小于5岁儿童最常见的颅外实体瘤，发病率约占儿童肿瘤的6％～10％，占儿童肿瘤死亡率的15％，是临床上1岁以内儿童中最常见的恶性肿瘤。其是起源于神经嵴的胚胎性肿瘤，由未分化的交感神经细胞组成。神经母细胞瘤起病隐匿，早期不易发现，就诊时约有70％患儿已发生转移，常见转移部位有肾和骨髓。该肿瘤恶性度高、进展快，易发生转移，危及生命，手术治疗效果十分有限，传统的化疗方案是高危性神经母细胞瘤的一线化疗方案，尽管近年来对神经母细胞瘤的诊断方法和治疗手段更新改进，神经母细胞瘤患者的整体生存率有较大提高，但5年生存率仍低于40％，高危患儿的生存率与生活质量仍无显著改善。神经母细胞瘤是胚胎性肿瘤的一种，类似于其他的实体肿瘤，大部分患者对化疗敏感。近几年来，对不能进行手术切除肿瘤的神经母细胞瘤患者予以术前新辅助化疗，待肿瘤体积缩小后再延期或进行二次手术，已是当前广泛被认可的治疗原则。术后追加化疗、放疗、免疫治疗等综合治疗，可获得较好的最终疗效。常用的化疗药物有：环磷酰胺(Cyclophosphamide，CTX)、异环磷酰胺(Isfosfamne，IFO)、长春新碱(Vincristine，VCR)、顺铂(Cisplatin，DDP)、依托泊苷、替尼泊苷、阿霉素(Adiramycin，ADR)。化疗药物主要是杀伤分裂活跃的细胞，而分裂活跃的细胞除了癌细胞以外，还包括毛囊细胞和血液细胞等，导致化疗后出现脱发和骨髓抑制等，导致化疗后出现脱发和骨髓移植等，并容易引发感染等毒副作用。同时，使用化疗药对神经母细胞瘤的治疗效果及患者的耐受程度已经接近最大限度，易产生耐药。
因此，寻找有效的治疗神经母细胞瘤的物质或药物仍是非常迫切和必要的。
发明内容
本申请发明人在研究中发现由30个氨基酸组成的下述多肽HYD-PEP06，其氨基酸序列为：Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Met-His-Ser-His-Arg-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met，显示出抑制神经母细胞瘤的作用。
因此，本发明的第一方面涉及一种多肽在制备用于治疗神经母细胞瘤的药物中的用途，所述多肽的氨基酸序列为：Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Met-His-Ser-His-Arg-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met。
本发明的第二方面涉及一种多肽，所述多肽用于治疗神经母细胞瘤，所述多肽的氨基酸序列为：Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Met-His-Ser-His-Arg-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met。
本发明的第三方面涉及一种治疗神经母细胞瘤的方法，所述方法包括对有此需要的受试者施用治疗有效量的多肽，所述多肽的氨基酸序列为：Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Met-His-Ser-His-Arg-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met。
本发明的第四方面涉及一种含有多肽和其它辅料的组合物，所述多肽的氨基酸序列为：Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Met-His-Ser-His-Arg-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met，所述组合物用于治疗神经母细胞瘤。
发明详述
在本文中使用的术语“HYD-PEP06”是指具有下述氨基酸序列的多肽：Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Met-His-Ser-His-Arg-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met(请参见SEQ ID No.1)。申请号为201410658306.6的中国专利申请通过全文引用的方式并入本文作为参考。
在本文使用的术语“预防”是指当用于疾病或病症(例如肿瘤)时，与未施用化合物或药物的受试者相比，所述化合物或药物能降低受试者体内的医学病症症状的频率或推迟其发病。
在本文中使用的术语“治疗”是指减轻、缓解或改善疾病或病症的症状(例如肿瘤)，改善潜在的代谢引起的症状，抑制疾病或症状，例如阻止疾病或病症的房展、缓解疾病或病症、引起疾病或病症的消退、缓解疾病或病症引起的病况、或阻止疾病或病症的症状。
在本文中使用的术语“转移的神经母细胞瘤”包括由除神经母细胞瘤以外的肿瘤转移导致的神经母细胞瘤，以及由神经母细胞瘤转移至身体其它器官和/或组织(例如，骨、骨髓、淋巴结、肝脏、皮肤、肺(肺转移是预后不良的标志)和脑实质)导致的肿瘤。由神经母细胞瘤转移至身体其它器官和/或组织导致的肿瘤包括但不限于：神经母细胞瘤的肝转移瘤、神经母细胞瘤的肺转移瘤、神经母细胞瘤的脑转移瘤、神经母细胞瘤的骨骼转移瘤、神经母细胞瘤的淋巴转移瘤、神经母细胞瘤的骨髓转移瘤。
在本文中使用的术语“肿瘤”是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物，因为这种新生物多呈占位性块状突起，也称赘生物。肿瘤可分为良性肿瘤或恶性肿瘤。恶性肿瘤还可以分为癌症或肉瘤。
在本文中使用的术语“受试者”是指包括人类(例如，人类患者)和动物(例如，小鼠、大鼠、犬、猫、兔、鸡或猴等)。当受试者是人类患者时(体重通常按60kg来计算)，除非另有说明，本发明所述的剂量可采用与实验动物的转换因子(例如，人用剂量＝小鼠剂量/12.3)进行换算得到(请参考Kin Tam.“Estimating the“First in human”dose-a revisitwith particular emphasis on oncology drugs,ADMET&DMPK1(4)(2013)63-75)。本领域的普通技术人员能够根据一般常识，根据受试者的具体体重、疾病的种类和严重程度以及其它因素对所述剂量进行合理调整，这些调整的技术方案均落入本发明要求保护的技术方案的范围之内。
如本文使用的术语“室温”是指25℃±1℃。同时，若没有具体指明实验温度，均为室温。
如本文使用的术语“约”是指该术语所修饰的数值的±10％，更优选为±5％，最优选为±2％，因此本领域的普通技术人员能够清楚地根据所修饰的数值确定术语“约”的范围。
本发明的第一方面涉及一种多肽在制备用于预防和/或治疗神经母细胞瘤的药物中的用途，所述多肽的氨基酸序列为：Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Met-His-Ser-His-Arg-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met。
在一些实施方案中，所述药物呈白色或类白色疏松块状物或粉末形式。进一步地，所述药物应使用5％葡萄糖溶液(例如，葡萄糖注射液)稀释，不得使用氯化钠注射液稀释。
在一些实施方案中，所述药物可以通过静脉注射施用。
在一些实施方案中，所述神经母细胞瘤是原位神经母细胞瘤或转移的神经母细胞瘤。进一步地，神经母细胞瘤的肝转移瘤、神经母细胞瘤的肺转移瘤、神经母细胞瘤的脑转移瘤、神经母细胞瘤的骨骼转移瘤、神经母细胞瘤的淋巴转移瘤、神经母细胞瘤的骨髓转移瘤。
在一些实施方案中，所述药物呈单位剂量的形式。进一步地，所述单位剂量含有下述量的所述多肽：约0.6mg、约3mg、约6mg、约15mg、约24mg、约48mg、约96mg、约120mg、约150mg、约300mg、约600mg或所述各量之间范围内的所述多肽，例如，0.6mg-600mg、0.6mg-300mg、0.6mg-150mg、0.6mg-120mg、0.6mg-96mg、0.6mg-48mg、0.6mg-24mg、0.6mg-15mg、0.6mg-6mg、0.6mg-3mg、3mg-600mg、3mg-300mg、3mg-150mg、3mg-120mg、3mg-96mg、3mg-48mg、3mg-24mg、3mg-15mg、3mg-6mg、6mg-600mg、6mg-300mg、6mg-150mg、6mg-120mg、6mg-96mg、6mg-48mg、6mg-24mg、6mg-15mg、15mg-600mg、15mg-300mg、15mg-150mg、15mg-120mg、15mg-96mg、15mg-48mg、15mg-24mg、24mg-600mg、24mg-300mg、24mg-150mg、24mg-120mg、24mg-96mg、24mg-48mg、48mg-600mg、48mg-300mg、48mg-150mg、48mg-120mg、48mg-96mg、96mg-600mg、96mg-300mg、96mg-150mg、96mg-120mg、120mg-600mg、120mg-300mg、120mg-150mg、150mg-600mg、150mg-300mg或300mg-600mg。
本发明的第二方面涉及一种用于预防和/或治疗神经母细胞瘤的多肽，所述多肽的氨基酸序列为：Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Met-His-Ser-His-Arg-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met。
在一些实施方案中，所述多肽呈白色或类白色疏松块状物或粉末形式。进一步地，所述多肽应使用5％葡萄糖溶液(例如，葡萄糖注射液)稀释，不得使用氯化钠注射液稀释。
在一些实施方案中，所述药物可以通过静脉注射施用。
在一些实施方案中，所述神经母细胞瘤是原位神经母细胞瘤或转移的神经母细胞瘤。进一步地，神经母细胞瘤的肝转移瘤、神经母细胞瘤的肺转移瘤、神经母细胞瘤的脑转移瘤、神经母细胞瘤的骨骼转移瘤、神经母细胞瘤的淋巴转移瘤、神经母细胞瘤的骨髓转移瘤。
在一些实施方案中，所述多肽呈单位剂量的形式。进一步地，所述单位剂量含有下述量的所述多肽：约0.6mg、约3mg、约6mg、约15mg、约24mg、约48mg、约96mg、约120mg、约150mg、约300mg、约600mg或所述各量之间范围内的所述多肽，例如，0.6mg-600mg、0.6mg-300mg、0.6mg-150mg、0.6mg-120mg、0.6mg-96mg、0.6mg-48mg、0.6mg-24mg、0.6mg-15mg、0.6mg-6mg、0.6mg-3mg、3mg-600mg、3mg-300mg、3mg-150mg、3mg-120mg、3mg-96mg、3mg-48mg、3mg-24mg、3mg-15mg、3mg-6mg、6mg-600mg、6mg-300mg、6mg-150mg、6mg-120mg、6mg-96mg、6mg-48mg、6mg-24mg、6mg-15mg、15mg-600mg、15mg-300mg、15mg-150mg、15mg-120mg、15mg-96mg、15mg-48mg、15mg-24mg、24mg-600mg、24mg-300mg、24mg-150mg、24mg-120mg、24mg-96mg、24mg-48mg、48mg-600mg、48mg-300mg、48mg-150mg、48mg-120mg、48mg-96mg、96mg-600mg、96mg-300mg、96mg-150mg、96mg-120mg、120mg-600mg、120mg-300mg、120mg-150mg、150mg-600mg、150mg-300mg或300mg-600mg。
本发明的第三方面涉及一种预防和/或治疗神经母细胞瘤的方法，所述方法包括对有此需要的受试者施用治疗有效量的多肽，所述多肽的氨基酸序列为：Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Met-His-Ser-His-Arg-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met。
在一些实施方案中，所述多肽呈白色或类白色疏松块状物或粉末形式。进一步地，所述多肽应使用5％葡萄糖溶液(例如，葡萄糖注射液)稀释本品，不得使用氯化钠注射液稀释。
在一些实施方案中，所述药物可以通过静脉注射施用。
在一些实施方案中，在一些实施方案中，所述神经母细胞瘤是原位神经母细胞瘤或转移的神经母细胞瘤。进一步地，神经母细胞瘤的肝转移瘤、神经母细胞瘤的肺转移瘤、神经母细胞瘤的脑转移瘤、神经母细胞瘤的骨骼转移瘤、神经母细胞瘤的淋巴转移瘤、神经母细胞瘤的骨髓转移瘤。
在一些实施方案中，所述受试者是人类患者。进一步地，所述人类患者的年龄为1个月至18岁。进一步地，人类患者的年龄为1个月至14岁、1个月至12岁、1个月至10岁、1个月至8岁、1个月至6岁、1个月至3岁、1个月至1岁。
在一些实施方案中，所述多肽的每天施用量为约0.01mg/kg、约0.05mg/kg、约0.1mg/kg、约0.25mg/kg、约0.4mg/kg、约0.8mg/kg、约1.6mg/kg、约2mg/kg、约2.5mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg或所述各量之间范围内的所述多肽，例如，0.01mg/kg-10mg/kg、0.01mg/kg-5mg/kg、0.01mg/kg-2.5mg/kg、0.01mg/kg-2mg/kg、0.01mg/kg-1.6mg/kg、0.01mg/kg-0.8mg/kg、0.01mg/kg-0.4mg/kg、0.01mg/kg-0.25mg/kg、0.01mg/kg-0.1mg/kg、0.01mg/kg-0.05mg/kg、0.05mg/kg-10mg/kg、0.05mg/kg-5mg/kg、0.05mg/kg-2.5mg/kg、0.05mg/kg-2mg/kg、0.05mg/kg-1.6mg/kg、0.05mg/kg-0.8mg/kg、0.05mg/kg-0.4mg/kg、0.05mg/kg-0.25mg/kg、0.05mg/kg-0.1mg/kg、0.1mg/kg-10mg/kg、0.1mg/kg-5mg/kg、0.1mg/kg-2.5mg/kg、0.1mg/kg-2mg/kg、0.1mg/kg-1.6mg/kg、0.1mg/kg-0.8mg/kg、0.1mg/kg-0.4mg/kg、0.1mg/kg-0.25mg/kg、0.25mg/kg-10mg/kg、0.25mg/kg-5mg/kg、0.25mg/kg-2.5mg/kg、0.25mg/kg-2mg/kg、0.25mg/kg-1.6mg/kg、0.25mg/kg-0.8mg/kg、0.25mg/kg-0.4mg/kg、0.4mg/kg-10mg/kg、0.4mg/kg-5mg/kg、0.4mg/kg-2.5mg/kg、0.4mg/kg-2mg/kg、0.4mg/kg-1.6mg/kg、0.4mg/kg-0.8mg/kg、0.8mg/kg-10mg/kg、0.8mg/kg-5mg/kg、0.8mg/kg-2.5mg/kg、0.8mg/kg-2mg/kg、0.8mg/kg-1.6mg/kg、1.6mg/kg-10mg/kg、1.6mg/kg-5mg/kg、1.6mg/kg-2.5mg/kg、1.6mg/kg-2mg/kg、2mg/kg-10mg/kg、2mg/kg-5mg/kg、2mg/kg-2.5mg/kg、2.5mg/kg-10mg/kg、2.5mg/kg-5mg/kg或5mg/kg-10mg/kg。
在一些实施方案中，将所述多肽每天施用1次。
在一些实施方案中，根据需要将所述多肽施用1周、2周或3周。
本发明的第四方面涉及含有多肽和辅料的组合物，所述多肽的氨基酸序列为：Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Met-His-Ser-His-Arg-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met，所述组合物用于预防和/或治疗神经母细胞瘤。
在一些实施方案中，所述药物呈白色或类白色疏松块状物或粉末形式。进一步地，所述药物应使用5％葡萄糖溶液(例如，葡萄糖注射液)稀释，不得使用氯化钠注射液稀释。
在一些实施方案中，所述辅料是甘露醇。
在一些实施方案中，所述多肽可以通过静脉注射施用。
在一些实施方案中，所述神经母细胞瘤是原位神经母细胞瘤或转移的神经母细胞瘤。进一步地，神经母细胞瘤的肝转移瘤、神经母细胞瘤的肺转移瘤、神经母细胞瘤的脑转移瘤、神经母细胞瘤的骨骼转移瘤、神经母细胞瘤的淋巴转移瘤、神经母细胞瘤的骨髓转移瘤。
在一些实施方案中，所述组合物呈单位剂量的形式。进一步地，所述单位剂量含有下述量的所述多肽：约0.6mg、约3mg、约6mg、约15mg、约24mg、约48mg、约96mg、约120mg、约150mg、约300mg、约600mg或所述各量之间范围内的所述多肽，例如，0.6mg-600mg、0.6mg-300mg、0.6mg-150mg、0.6mg-120mg、0.6mg-96mg、0.6mg-48mg、0.6mg-24mg、0.6mg-15mg、0.6mg-6mg、0.6mg-3mg、3mg-600mg、3mg-300mg、3mg-150mg、3mg-120mg、3mg-96mg、3mg-48mg、3mg-24mg、3mg-15mg、3mg-6mg、6mg-600mg、6mg-300mg、6mg-150mg、6mg-120mg、6mg-96mg、6mg-48mg、6mg-24mg、6mg-15mg、15mg-600mg、15mg-300mg、15mg-150mg、15mg-120mg、15mg-96mg、15mg-48mg、15mg-24mg、24mg-600mg、24mg-300mg、24mg-150mg、24mg-120mg、24mg-96mg、24mg-48mg、48mg-600mg、48mg-300mg、48mg-150mg、48mg-120mg、48mg-96mg、96mg-600mg、96mg-300mg、96mg-150mg、96mg-120mg、120mg-600mg、120mg-300mg、120mg-150mg、150mg-600mg、150mg-300mg或300mg-600mg。
具体实施方式
下面通过实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，下述实施例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
实施例1HYD-PEP06对BALB/c/Nu/Nu无胸腺裸鼠的人源性神经母细胞瘤的肾转移瘤的影响
一、实验材料以及实验方法
(一)实验材料
1.实验试剂
HYD-PEP06，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示(哈尔滨医大药业有限公司)
氯化钠注射液(石家庄四药有限公司)
5％葡萄糖注射液(四川科伦药业股份有限公司)
氯胺酮(福建古田药业有限公司)
甲苯噻嗪(Sigma-Aldrich公司，美国)
萤火虫荧光素酶底物Luciferin(珀金埃尔默仪器有限公司)
胎牛血清(北京元亨圣马生物技术研究所)
DMEM(Gibco公司，美国)
抗生素puromycine(Invivogen公司，美国)
青霉素/链霉素原液(中国医学科学院生物医学工程研究所)
胰酶(中国医学科学院生物医学工程研究所)
2.肿瘤细胞株
人源性神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株，中国医学科学院协和药物研究所王爱平教授惠赠。
3.实验动物及饲养条件
成年BALB/c/Nu/Nu无胸腺裸鼠(小鼠)，18～22g，雌性，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，受试动物饲养于无菌的独立送风IVC笼中，每笼5只。垫料为60Co辐射消毒的玉米芯垫料，粒径4-6mm。饲以专门为裸鼠配制的消毒饲料，自由饮用纯净水。动物实验室内温度保持在25℃左右，相对湿度保持在40-70％，每日光照12小时。
4.实验仪器设备
PekinElmerIVIS Spectrum CT成像系统、配套麻醉机及Living image 4.5.1软件。
(二)实验模型的建立
1.稳定表达萤火虫荧光素酶(luc2)的SH-SY5Y细胞的建立
用包含pCDH-luc2-GFP质粒的慢病毒感染SH-SY5Y细胞。24小时后，换新鲜的含10％特级胎牛血清的DMEM细胞培养液，并加入抗生素puromycine(终浓度1ug/ml)，杀死没有表达pCDH-luc2-GFP质粒的SH-SY5Y细胞，经过7天的培养，在荧光显微镜下观察细胞GFP的表达，并用PekinElmer IVIS Spectrum CT成像系统检测细胞生物发光的检测。
2.细胞培养：
细胞培养于含10％特级胎牛血清的DMEM细胞培养液中,并补充青霉素/链霉素原液，置于37℃含5％CO2的细胞培养箱中，每1-2天更换培养液一次。用0.25％胰酶消化传代，1000r/min离心5分钟后，弃上清液，加入新鲜培养基传代培养。
3.人源性神经母细胞瘤的皮下移植瘤的建立：
将对数生长期的SH-SY5Y-luc2-GFP细胞用胰酶消化收集，并用PBS洗涤重悬，使细胞终浓度达到1×107个细胞/ml混悬液。在裸鼠背部皮下注射0.2ml细胞悬液，即2×106个细胞。
4.人源性神经母细胞瘤的肾转移瘤的建立：
SH-SY5Y-luc2-GFP皮下移植瘤生长至直径约1-2cm时，无菌条件下取出瘤块，将瘤块切成约1.0mm3大小的瘤块备用。将待手术造模的裸鼠用麻醉剂(10ml/kg)麻醉后，固定在手术台上，消毒背部皮肤，覆盖手术洞巾，在背部右侧肾部剪开约1cm切口，暴露右肾。将准备好的瘤块放入专用接种套管针内，用套管针将瘤块植入肾脏内，创口出血部位用消毒纱布进行止血处理。然后将肾脏放回裸鼠体内，用手术缝合针线依次缝合背部肌肉和皮肤。
5.BALB/c/Nu/Nu无胸腺裸鼠的人神经母细胞瘤的肾转移瘤生物发光的检测：
在各个检测时间点，使用IVIS Spectrum CT成像系统进行检测。具体步骤如下：在麻醉机内，用2％异氟烷对受试裸鼠进行预麻醉；将受试裸鼠放入IVIS Spectrum CT检测室内，并用0.5％异氟烷维持裸鼠的麻醉状态；选择生物发光成像模式，检测裸鼠体内发光信号；利用IVIS Spectrum CT系统配套的Living image 4.5.1软件对检测信号进行定量。
(三)实验分组及治疗方案
手术造模3天后，将荷瘤鼠进行IVIS Spectrum CT活体成像，根据软件分析结果中的发光强度对荷瘤鼠进行随机分组。分为模型对照组、HYD-PEP06的5mg/kg组、10mg/kg组、20mg/kg组，每组动物10只。受试药HYD-PEP06为静脉注射给药，1次/日，给药持续15天。
每天观察动物存活状况，隔天称体重一次。从实验分组的第1天(即手术造模3天后)、第6天、第12天以及第15天，进行四次活体成像发光检测；依据动物存活及身体状况，调整活体成像发光检测的时间。实验结束后(第16天)颈部脱臼处死动物，剥离取出肾脏组织和瘤块，并称重、拍照，瘤块保存于4％甲醛溶液中，以备常规病理学检测。
(四)数据处理
数据用平均值±SEM表示；肿瘤生长的发光强度抑制率＝(模型对照组发光强度－给药组发光强度)/模型对照组发光强度×100％；患侧肾抑瘤率＝(模型对照组患侧肾重-给药组患侧肾重)/模型对照组患侧肾重×100％；用GraphPad Prism 5软件进行统计检验，各组间统计分析为单因素ANOVA及两两比较的Tukey’s检验，结合不同时间点的各组间统计分析为双因素ANOVA及两两比较的Bonferroni检验。
二、实验结果
本研究利用人源性神经母细胞瘤的肾转移瘤来评价HYD-PEP06的药效学特点，采用肿瘤生物发光强度来计算肿瘤倍增速率和药物治疗效果。与实验分组时(第1天)肿瘤发光强度相比，15天后(第15天)，模型对照组裸鼠的肿瘤发光强度增长了493.7倍，而受试药HYD-PEP06的5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg治疗组的肿瘤发光强度显著低于模型对照组的肿瘤发光强度，分别仅增长了224.2倍、96.9倍和51.6倍，呈现出明显的剂量-效应关系(请参见表3)。在实验结束时，HYD-PEP06各治疗组的肿瘤倍增速率与模型对照组相比，均显著降低(P<0.001)。根据各组荷瘤裸鼠的生物发光强度计算抑瘤率，受试药HYD-PEP06的5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg治疗组的抑瘤率分别为58.4％、82.5％和91.1％，呈现出明显的剂量-效应关系(请参见表1和表2)。
在实验结束后，通过肾重及肾重指数辅助分析药物的抑瘤作用。模型对照组荷瘤裸鼠的患侧肾重的平均值是2.516g，而HYD-PEP06的5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg治疗组的荷瘤裸小鼠的平均患侧肾重分别为1.537g、1.130g、0.664g，各治疗组与模型对照组相比均具有显著差异(分别为P<0.05，P<0.001，P<0.001)。模型对照组荷瘤裸鼠平均患侧肾重/体重指数为12.25％，受试药HYD-PEP06 5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg治疗组的该指数分别是：7.35％、5.42％、3.12％，均显著低于模型对照组(分别为P<0.05，P<0.001，P<0.001)，并呈现出明显的剂量-效应关系(请参见表1)。正常未荷瘤BALB/c/Nu/Nu无胸腺裸鼠(10只)的左侧和右侧肾重/体重指数平均值均为0.78％。虽然各治疗组未能将荷瘤裸鼠的肾重和肾重/体重指数恢复到正常值，但是已经显示出显著降低肿瘤负荷的作用，明显延缓荷瘤裸鼠的疾病进展。与模型对照组相比，各组荷瘤裸鼠的正常侧(左侧)肾重及肾重/体重指数(请参见表4)以及体重(请参见表5)未见明显差异。以上结果表明，HYD-PEP06在有效剂量下并未显示出明显毒副作用。
三、小结
总之，HYD-PEP06能够显著抑制人源性神经母细胞瘤的肾转移瘤SH-SY5Y裸鼠模型中的肿瘤生长，呈明显的剂量效应-关系，且在有效剂量下并未显示出明显毒副作用。因此，HYD-PEP06可以用于与神经母细胞瘤相关的肿瘤的预防和治疗。
Figure BDA0002383279100000131
Figure BDA0002383279100000141
表4各组荷瘤裸鼠正常侧(左侧)肾重及肾指数统计表
Figure BDA0002383279100000151
表5各组荷瘤裸鼠体重随时间变化统计表
Figure BDA0002383279100000152
序列表
<110> 珠海市藤栢医药有限公司
<120> 一种预防和/或治疗神经母细胞瘤的多肽药物及其用途
<130> IDC190475
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Arg Gly Asp Arg Gly Asp Met His Ser His Arg Asp Phe Gln Pro Val
1 5 10 15
Leu His Leu Val Ala Leu Asn Ser Pro Leu Ser Gly Gly Met
20 25 30

Claims (9)

1.一种多肽在制备用于预防和/或治疗神经母细胞瘤的药物中的用途，所述多肽的氨基酸序列为：Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Met-His-Ser-His-Arg-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met。
2.根据权利要求1的用途，所述药物呈白色或类白色疏松块状物或粉末形式。
3.根据权利要求1-2中任一项的用途，其中所述神经母细胞瘤是原位神经母细胞瘤或转移的神经母细胞瘤。
4.一种用于预防和/或治疗神经母细胞瘤的多肽，所述多肽的氨基酸序列为：Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Met-His-Ser-His-Arg-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met。
5.一种预防和/或治疗神经母细胞瘤的方法，所述方法包括对有此需要的受试者施用治疗有效量的多肽，所述多肽的氨基酸序列为：Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Met-His-Ser-His-Arg-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met。
6.根据权利要求5的所述方法，其中所述多肽的每天施用量为0.1mg/kg-10mg/kg。
7.一种含有多肽和辅料的组合物，所述多肽的氨基酸序列为：Arg-Gly-Asp-Arg-Gly-Asp-Met-His-Ser-His-Arg-Asp-Phe-Gln-Pro-Val-Leu-His-Leu-Val-Ala-Leu-Asn-Ser-Pro-Leu-Ser-Gly-Gly-Met，所述组合物用于预防和/或治疗神经母细胞瘤。
8.根据权利要求7的组合物，所述组合物呈白色或类白色疏松块状物或粉末形式。
9.根据权利要求7-8中任一项的组合物，所述辅料是甘露醇。
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