CN113226318A - 用于癌症疗法的生物标记物 - Google Patents
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Abstract
本发明提供的是使用MYC基因作为生物标记物,用于预测存活素抑制剂例如YM155一溴化物在癌症疗法中的治疗功效的方法,以及用于诊断和治疗有此需要的受试者中的癌症的有关试剂盒、组合物和方法。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求于2018年8月13日提交的PCT/CN2018/100206;以及于2018年11月16日提交的PCT/CN2018/115826的优先权,所述专利各自以引用的方式整体并入。
背景
技术领域
本公开内容的实施例涉及MYC基因作为生物标记物,用于预测存活素抑制剂例如YM155一溴化物在癌症疗法中的治疗功效的用途,以及用于诊断和治疗有此需要的受试者中的癌症的有关试剂盒、组合物和方法。
背景技术
YM155一溴化物是小分子存活素抑制剂,其诱导存活素的下调,并且显示出有力的抗肿瘤活性(参见例如,Minematsu等人,Drug Metabolism and Disposition,37:619-628,2008)。YM-155在各种体内癌症模型包括前列腺癌、胰腺癌和肺癌中发挥抗肿瘤效应(参见例如,Nakahara等人,Cancer Research 67:8014-8021,2007;以及Na等人,PLoS One 7(6),2012)。
然而,本领域需要更好地预测YM155一溴化物的抗癌治疗功效,且从而鉴定将从用这种化学治疗剂及其它的治疗中受益最大的患者。
发明内容
本公开内容的实施例包括用于治疗有此需要的受试者中的癌症的方法,其包括:
(a)确定来自受试者的癌组织样品中的MYC基因拷贝数或MYC基因染色体定位位点;和
(b)如果癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考有增加,或者如果癌组织中的MYC基因染色体定位位点相对于MYC基因染色体定位位点参考有易位,则向受试者施用YM155一溴化物[1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(吡嗪-2-基甲基)-4,9-二氢-1H-萘并[2,3-d]溴化咪唑鎓]、或者其类似物或衍生物,
从而治疗有此需要的受试者中的癌症。
一些实施例包括如果癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考基本上不增加,或者如果癌组织中的MYC基因染色体定位位点相对于MYC基因染色体定位位点参考不易位,则向受试者施用排除YM155一溴化物(或除其之外)的化学治疗试剂。
还包括的是用于预测患有癌症的受试者中,对YM155一溴化物[1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(吡嗪-2-基甲基)-4,9-二氢-1H-萘并[2,3-d]溴化咪唑鎓]、或者其类似物或衍生物的治疗应答的方法,其包括
(a)确定来自受试者的癌组织样品中的MYC基因拷贝数或MYC基因染色体定位位点;和
(b)(i)如果癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考有增加,或者如果癌组织中的MYC基因染色体定位位点相对于MYC基因染色体定位位点参考有易位,则受试者表征为响应YM155一溴化物疗法;或
(ii)如果癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考基本上不增加,或者如果癌组织中的MYC基因染色体定位位点相对于MYC基因染色体定位位点参考不易位,则受试者表征为不响应YM155一溴化物疗法,
从而预测患有癌症的受试者中对YM155一溴化物的治疗应答。
一些实施例包括如果受试者表征为响应YM155一溴化物疗法,则向受试者施用YM155一溴化物。一些实施例包括如果受试者表征为不响应YM155一溴化物疗法,则向受试者施用排除YM155一溴化物的化学治疗试剂。
在一些实施例中,癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考增加到约或至少约1.5、2、3、4、5、6、7、8、9或10倍。
一些实施例包括通过阵列比较基因组杂交(aCGH)、单核苷酸多态性(SNP)阵列、拷贝数变异(CNV)测序、或多重连接依赖性探针扩增(MLPA),来确定癌组织中的MYC基因拷贝数。一些实施例包括通过原位杂交(ISH)、荧光原位杂交(FISH)、下一代测序(NGS)、或比较基因组杂交(CGH),来确定癌组织中的MYC基因染色体定位位点。一些实施例包括从数据库获得MYC基因拷贝数参考,或者任选地通过aCGH、SNP阵列、CNV测序或MLPA,从来自对照的非癌性组织确定MYC基因拷贝数参考。一些实施例包括从数据库获得MYC基因染色体定位位点参考,或者任选地通过ISH、FISH、NGS或CGH,从来自对照的非癌性组织确定MYC基因染色体定位位点参考。
一些实施例包括从受试者获得癌组织样品。在某些实施例中,癌组织样品是从受试者获得的手术样品、活组织检查样品、胸腔积液样品或腹水液样品,其任选地选自肺、血液、乳腺、胃肠道(胃、结肠、直肠)、卵巢、胰腺、肝脏、膀胱、宫颈、神经元、子宫、唾液腺、肾脏、前列腺、甲状腺或肌肉组织中的一种或多种。
在某些实施例中,受试者是人受试者。
在某些实施例中,癌症选自以下的一种或多种:癌,肉瘤例如横纹肌肉瘤,例如腺泡状横纹肌肉瘤(包括在骨骼、肌腱、软骨、肌肉、脂肪、纤维、血管、脂肪和/或结缔组织中起源的肉瘤)、神经母细胞瘤、髓母细胞瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、骨髓瘤、白血病、淋巴瘤(包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤)、腺鳞状癌、癌肉瘤、混合性中胚叶瘤、畸胎瘤、肺癌(包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌、腺癌和肺鳞状癌)、乳腺癌(包括转移性乳腺癌)、胃肠道癌、胃癌、结肠直肠癌、结肠癌、直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、膀胱癌、宫颈癌、胶质母细胞瘤、子宫癌、唾液腺癌、肾脏癌或肾癌(例如肾母细胞瘤)、前列腺癌、甲状腺癌和头颈癌。
在某些实施例中,MYC基因选自MYCC和MYCN。在具体实施例中,MYC基因是MYCC,并且癌症选自肺癌和血液癌,任选地白血病和淋巴瘤。在具体实施例中,MYC基因是MYCN,并且癌症选自神经母细胞瘤、小细胞肺癌、前列腺癌、腺泡状横纹肌肉瘤、髓母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、视网膜母细胞瘤和乳腺癌。
还包括的是诊断试剂盒用于确定患有癌症的受试者中,对YM155一溴化物[1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(吡嗪-2-基甲基)-4,9-二氢-1H-萘并[2,3-d]溴化咪唑鎓]、或者其类似物或衍生物疗法的治疗应答的用途,所述诊断试剂盒包括用于测量来自受试者的组织(包括癌组织和非癌性组织)样品中的MYC基因拷贝数、或MYC基因染色体定位位点的手段。
在某些实施例中,用于测量MYC基因拷贝数的手段包括用于对人MYC基因执行选自以下的一种或多种的诊断测定的试剂:阵列比较基因组杂交(aCGH)、单核苷酸多态性(SNP)阵列、拷贝数变异(CNV)测序和多重连接依赖探针扩增(MLPA)。
在某些实施例中,用于测量MYC基因染色体定位位点的手段包括用于对人MYC基因执行选自以下的一种或多种的诊断测定的试剂:原位杂交(ISH)、荧光原位杂交(FISH)、下一代测序(NGS)和比较基因组杂交(CGH)。一些实施例包含从数据库获得、或从来自对照的非癌性组织确定的MYC基因拷贝数参考值。一些实施例包含从数据库获得、或从来自对照的非癌性组织确定的MYC基因染色体定位位点参考。
还包括的是患者护理试剂盒,其包括:
(a)用于测量来自受试者的组织(包括癌组织和非癌性组织)样品中的MYC基因拷贝数、或MYC基因染色体定位位点的手段;和
(b)YM155一溴化物[1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(吡嗪-2-基甲基)-4,9-二氢-1H-萘并[2,3-d]溴化咪唑鎓]、或者其类似物或衍生物。
在某些实施例中,用于测量MYC基因拷贝数的手段包括用于对人MYC基因执行选自以下的一种或多种的诊断测定的试剂:阵列比较基因组杂交(aCGH)、单核苷酸多态性(SNP)阵列、拷贝数变异(CNV)测序和多重连接依赖探针扩增(MLPA)。在某些实施例中,用于测量MYC基因染色体定位位点的手段包括用于对人MYC基因执行选自以下的一种或多种的诊断测定的试剂:原位杂交(ISH)、荧光原位杂交(FISH)、下一代测序(NGS)和比较基因组杂交(CGH)。
一些实施例包含从数据库获得、或从来自对照的非癌性组织确定的MYC基因拷贝数参考值。一些实施例包含从数据库获得、或从来自对照的非癌性组织确定的MYC基因染色体定位位点参考。
在某些用途或试剂盒中,癌症选自以下的一种或多种:癌,肉瘤例如横纹肌肉瘤,例如腺泡状横纹肌肉瘤(包括在骨骼、肌腱、软骨、肌肉、脂肪、纤维、血管、脂肪和/或结缔组织中起源的肉瘤)、神经母细胞瘤、髓母细胞瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、骨髓瘤、白血病、淋巴瘤(包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤)、腺鳞状癌、癌肉瘤、混合性中胚叶瘤、畸胎瘤)、肺癌(包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌、腺癌和肺鳞状癌)、乳腺癌(包括转移性乳腺癌)、胃肠道癌、胃癌、结肠直肠癌、结肠癌、直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、膀胱癌、宫颈癌、胶质母细胞瘤、子宫癌、唾液腺癌、肾脏癌或肾癌(例如肾母细胞瘤)、前列腺癌、甲状腺癌和头颈癌。
在某些用途或试剂盒中,MYC基因选自MYCC和MYCN。在具体情况下,MYC基因是MYCC,并且癌症选自肺癌和血液癌,任选地白血病和淋巴瘤。在特定情况下,MYC基因是MYCN,并且癌症选自神经母细胞瘤、小细胞肺癌、前列腺癌、腺泡状横纹肌肉瘤、髓母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、视网膜母细胞瘤和乳腺癌。
附图说明
图1显示了YM155一溴化物(CAS 781661-94-7)的化学结构。
图2显示了YM155抑制人肺癌细胞系的细胞增殖。NCI-H1975、HCC827、NCI-H226和HCC4006细胞在96孔板中进行培养,并且用YM155以指示剂量(nM)进行处理。通过EdU增殖测定来检测细胞增殖。呈现的数据是平均值±SEM。
图3显示了YM155抑制人急性髓样白血病(AML)细胞系的细胞增殖。U937和HL-60细胞在96孔板中进行培养,并且用YM155以指示剂量(nM)进行处理。通过XTT细胞生存力测定来检测细胞增殖。呈现的数据是平均值±SEM。
图4显示了YM155抑制U937和RAMOS细胞系的细胞增殖。U937和RAMOS细胞在96孔板中进行培养,并且用YM155以指示剂量(nM)进行处理。通过XTT细胞生存力测定来检测细胞增殖。呈现的数据是平均值±SEM。
图5和图6提供了关于人MYC基因的基因组信息(请参见http://uswest.ensembl.org/Homo_sapiens/Location/View?db=core;g=EN SG00000136997;r=8:127735434-127742951)。
图7显示了YM155抑制人神经母细胞瘤细胞系,尤其是特征在于N-MYC的拷贝数增加的细胞系(还参见表E3)的细胞增殖。通过EdU测定来检测细胞增殖。呈现的数据是平均值±SD。
图8显示了MYCN基因在染色体2的短(p)臂上的位置24.3处的定位。
图9A-9B显示了YM155在小鼠的HCC827异种移植物中的抗肿瘤效应。图9A显示了肿瘤生长曲线,而图9B呈现了作为肿瘤体积的平均值±SD的数据(n=5)。**与媒介物组相比p<0.01。
图10A-10B显示了YM155在小鼠的HCC4006异种移植物中的抗肿瘤效应。图10A显示了肿瘤生长曲线,而图10B呈现了作为肿瘤体积的平均值±SD的数据(n=8)。
图11A-11B显示了YM155在小鼠的RAMOS异种移植物中的抗肿瘤效应。图11A显示了肿瘤生长曲线,而图11B呈现了作为肿瘤体积的平均值±SD的数据(n=3)。**与媒介物组相比p<0.01。
图12A-12B显示了YM155在小鼠的U937异种移植物中的抗肿瘤效应。图12A显示了肿瘤生长曲线,而图12B呈现了作为肿瘤体积的平均值±SD的数据(n=3)。
图13A-13B显示了YM155在小鼠的IMR-32异种移植物中的抗肿瘤效应。图13A显示了肿瘤生长曲线,而图13B呈现了作为肿瘤体积的平均值±SD的数据(n=3)。
图14A-14B显示了YM155在小鼠的SH-SY5Y异种移植物中的抗肿瘤效应。图14A显示了肿瘤生长曲线,而图14B呈现了作为肿瘤体积的平均值±SD的数据(在媒介物中n=2;在YM155治疗的中n=3)。
具体实施方式
本公开内容的实施例涉及令人惊奇的发现:人恶性肿瘤中的MYC基因扩增和/或易位与存活素抑制剂(例如YM155一溴化物)的抗癌功效增加相关,并且因此可以用作生物标记物,以优化通过这些试剂及其它的癌症疗法。不希望受任何一种理论的束缚,认为在MYC扩增或MYC易位的癌细胞中的MYC癌基因表达在其它方面是促细胞凋亡的,除了其促细胞凋亡信号传导由存活素负调控之外,所述存活素是抑制半胱天冬酶并阻断细胞死亡的细胞凋亡抑制剂(IAP)蛋白家族的成员。因此,预计在MYC扩增和/或易位的背景下,存活素抑制剂如YM155一溴化物可以用于阻断存活素的细胞凋亡抑制活性,有利于MYC的促细胞凋亡信号传导以增加癌细胞死亡,且从而提供在这个背景下最佳的治疗功效。
除非另有定义,否则本文中使用的所有技术和科学术语都具有与本公开内容所属领域的普通技术人员通常理解相同的含义。尽管描述了优选的方法和材料,但与本文描述的那些相似或等价的任何方法、材料、组合物、试剂、细胞都可以用于本公开内容的主题的实践或测试中。本说明书中引用的所有出版物和参考文献,包括但不限于专利和专利申请,都以引用的方式整体并入本文,如同每个个别出版物或参考文献特别且个别地指示如完全阐述一样以引用的方式并入本文。本申请要求其优先权的任何专利申请也以上文对于出版物和参考文献描述的方式,以引用的方式整体并入本文。
为了本公开内容的目的,下述术语定义如下。
冠词“一个”和“一种”在本文中用于指冠词的语法对象中的一个/种或多于一个/种(即,至少一个/种)。例如“元件”意指一个元件或多于一个元件。
“拮抗剂”或“抑制剂”指干扰或以其它方式降低另一种分子,例如蛋白质(例如,存活素)的生理作用的生物结构或化学试剂。在一些情况下,拮抗剂或抑制剂特异性结合另一种分子和/或另一种分子的功能性配体。在一些情况下,拮抗剂或抑制剂下调另一种分子(例如,存活素)的表达。包括的是完全拮抗剂和部分拮抗剂。
“激动剂”或“活化剂”指增加或增强另一种试剂或分子的生理作用的生物结构或化学试剂。在一些情况下,激动剂特异性结合另一种试剂或分子。包括的是完全激动剂和部分激动剂。
“约”意指数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度相对于参考数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度改变多达30、25、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1%。
在本公开内容自始至终,除非上下文另有要求,否则词语“包含(comprise)”、“包含(comprises)”和“包含(comprising)”应理解为暗示包括陈述的步骤或元件或者步骤或元件组,但不排除任何其它步骤或元件或者步骤或元件组。
“由……组成”意欲包括且限于在短语“由……组成”之后的任何内容。因此,短语“由……组成”指示所列出的元件是必需的或强制性的,并且可能不存在其它元件。“基本上由……组成”意欲包括在短语之后列出的任何元件,并且限于并不干扰或促成本公开内容中对于所列出的元件指定的活性或作用的其它元件。因此,短语“基本上由……组成”指示所列出的元件是必需的或强制性的,但其它元件是任选的,并且可能存在或可能不存在,取决于它们是否实质上影响所列出的元件的活性或作用。
“半数最大抑制浓度”(或“IC50”)是试剂抑制特异性生物学或生物化学功能的效力的量度。这种定量量度指示需要多少特定试剂(抑制剂),以将给定的生物过程(或过程的组分,即酶、细胞、细胞受体或微生物)抑制一半。该值通常表示为摩尔浓度。浓度通常用作药理学研究中的拮抗剂药物效力的量度。在一些情况下,IC50表示对于在体外的50%抑制所需的试剂浓度。可以通过构建剂量应答曲线,并且检查不同浓度的试剂对所需活性(例如肿瘤细胞增殖的抑制、肿瘤细胞杀死)的作用,来确定试剂的IC50。
“增加的”或“增强的”量通常是“统计学显著的”量,并且可能包括相对于参考或对照,约或至少约1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、7、8、9、10、15、20、30、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500或1000倍,或者约或至少约5%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、200%、300%、400%、500%、600%、700%、800%、900%、1000%(包括两者之间的所有整数和范围)的增加。“减少的”或“降低的”量通常是“统计学显著的”量,并且可能包括相对于参考或对照,约或至少约1.2、1.4、1.6、1.8、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、1000倍,或者约或至少约5%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、200%、300%、400%、500%、600%、700%、800%、900%、1000%(包括两者之间的所有整数和范围)的减少。
术语“多核苷酸”和“核酸”包括mRNA、RNA、cRNA、cDNA和DNA包括基因组DNA。该术语通常指长度至少10个碱基的核苷酸的聚合形式,或核糖核苷酸或脱氧核苷酸、或任一类型核苷酸的修饰形式。该术语包括DNA的单链和双链形式。
“基因”指由DNA序列组成的遗传单位,所述DNA序列在染色体上占据特异性位置,并且编码功能性分子或蛋白质。基因的结构由许多元件组成,其中实际的蛋白质编码序列经常只是一小部分。这些元件包括未转录的DNA区域以及RNA的非翻译区。另外,基因可以具有改变表达的调控区,其位于编码序列的上游或下游许多千碱基。基因中的信息也可以由RNA或编码的蛋白质序列表示(或在其中发现)。
“受试者”或“有此需要的受试者”包括哺乳动物受试者,例如人受试者。
“统计学显著的”意指结果不太可能是偶然发生的。统计学显著性可以通过本领域已知的任何方法来确定。常用的显著性量度包括p值,其为如果零假设为真,则观察到的事件将发生的频率或概率。如果获得的p值小于显著性水平,则拒绝零假设。在简单情况下,显著性水平定义为0.05或更小的p值。
“基本上”或“基本地”意指几乎全部或完全,例如,某一给定数量的95%或更大。
“治疗应答”指基于治疗应答的施用的症状改善(无论是否持续)。
如本文使用的,术语“治疗有效量”、“治疗剂量”、“预防有效量”或“诊断有效量”是在施用之后引起所需生物应答所需的试剂的量。
如本文使用的,受试者(例如哺乳动物,例如人)或细胞的“治疗”是在改变受试者或细胞的自然进程的尝试中使用的任何类型的干预。治疗包括但不限于药物组合物的施用,并且可以预防地或者在病理事件开始或与致病因子接触之后执行。还包括的是“预防”治疗,其可以涉及降低待治疗疾病或状况的进展率,延迟该疾病或状况的发作,或降低其发作的严重性。“治疗”或“预防”不一定指示疾病或状况或其相关症状的完全根除、治愈或预防。
术语“野生型”指在群体中最频繁地观察到的基因或基因产物(例如,多肽),并且因此被任意地设计为该基因的“正常”或“野生型”形式。
除非另有明确说明,否则本说明书中的每个实施例都应用于每一个其它实施例。
本公开内容部分涉及令人惊讶的发现:人恶性肿瘤中的MYC基因扩增和/或易位与化学治疗试剂YM155一溴化物的抗癌功效增加相关,并且因此可以用作生物标记物,以优化通过该试剂及其它的癌症疗法。
因此,本公开内容的实施例包括用于治疗有此需要的受试者中的癌症的方法,其包括(a)确定来自受试者的癌组织样品中的MYC基因拷贝数或MYC基因染色体定位位点;并且(b)如果癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考有增加,或者如果癌组织中的MYC基因染色体定位位点相对于MYC基因染色体定位位点参考有易位,则向受试者施用YM155一溴化物[1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(吡嗪-2-基甲基)-4,9-二氢-1H-萘并[2,3-d]溴化咪唑鎓],从而治疗有此需要的受试者中的癌症。某些实施例包括如果癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考基本上不增加(例如,相同或小于约1.1倍的增加),或者如果癌组织中的MYC基因染色体定位位点相对于MYC基因染色体定位位点参考不易位,则向受试者施用排除YM155一溴化物(或除其之外)的化学治疗试剂。
还包括的是用于预测患有癌症的受试者中,对YM155一溴化物[1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(吡嗪-2-基甲基)-4,9-二氢-1H-萘并[2,3-d]溴化咪唑鎓]的治疗应答的方法,其包括(a)确定来自受试者的癌组织样品中的MYC基因拷贝数或MYC基因染色体定位位点;并且(b)(i)如果癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考有增加,或者如果癌组织中的MYC基因染色体定位位点相对于MYC基因染色体定位位点参考有易位,则受试者表征为响应YM155一溴化物疗法;或(ii)如果癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考基本上不增加(例如,相同或小于约1.1倍的增加),或者如果癌组织中的MYC基因染色体定位位点相对于MYC基因染色体定位位点参考不易位,则受试者表征为不响应YM155一溴化物疗法,从而预测患有癌症的受试者中对YM155一溴化物的治疗应答。某些实施例包括如果受试者表征为响应YM155一溴化物疗法,则向受试者施用YM155一溴化物。一些实施例包括如果受试者表征为不响应YM155一溴化物疗法,则向受试者施用排除YM155一溴化物(或除其之外)的化学治疗试剂。
“MYC基因”或“MYC癌基因”指编码转录因子的原癌基因家族,其例子包括c-Myc(也为MYCC)和N-myc(也为MYCN)。
MYCC基因编码核磷蛋白,其在细胞周期进程、细胞凋亡和细胞转化中起作用。编码的蛋白质与有关的转录因子MAX形成异源二聚体。该复合物与E框DNA共有序列结合,并且调控特异性靶基因的转录。有证据显示,翻译从上游、框内非AUG(CUG)和下游AUG起始位点两者开始,导致具有不同N末端的两种同种型的产生。在人基因组中,MYCC基因位于染色体8:127、735、434-127、741、434,正链上(参见例如,图5和图6;以及基因:MYCENSG00000136997)。
MYCN基因编码具有基本螺旋-环-螺旋(bHLH)结构域的蛋白质。它位于细胞核中,并且与另一个bHLH蛋白二聚化,以结合DNA。MYCN在多种不同类型的癌症中过表达,所述癌症包括例如神经母细胞瘤、横纹肌肉瘤、髓母细胞瘤、星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、前列腺癌、乳腺癌、肾母细胞瘤和小细胞肺癌(参见例如,Beltran,Mol CancerRes.12:815-822,2014)。实际上,MYCN扩增是神经母细胞瘤中的不良预后因素。扩增子(与MYCN共扩增的材料)在受试者中不同,并且在某些情况下包括例如DDX1基因。在一些情况下,MYCN扩增与1p36缺失和染色体17q的获得相关联。在人基因组中,MYCN基因位于染色体2的短臂(p)上的位置24.3处(细胞遗传学定位在2p24.3处;分子定位在染色体2上的碱基对15,940,438至15,947,007处;还参见图8)。
因此,在某些实施例中,MYC基因选自MYCC和MYCN。
“YM155一溴化物”指小分子[1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(吡嗪-2-基甲基)-4,9-二氢-1H-萘并[2,3-d]溴化咪唑鎓],具有分子式C20H19N4O3·Br和CAS编号781661-94-7,并且包括其药学上可接受的盐和酸。还包括的是YM155一溴化物的生物活性或等价类似物和/或衍生物。
如上文指出的,在一些情况下,癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考有增加。在特定实施例中,癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考增加统计学显著的量。在一些实施例中,癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考增加到约或至少约1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、6、7、8、9或10倍(或更多倍)。
癌组织中的MYC基因拷贝数可以通过任何种类的方法来确定。例如,在一些实施例中,MYC基因拷贝数通过阵列比较基因组杂交(aCGH)、单核苷酸多态性(SNP)阵列、拷贝数变异(CNV)测序、或多重连接依赖性探针扩增(MLPA),来确定。因此,某些实施例包括确定或检测来自有此需要的受试者的癌组织样品中的MYC基因拷贝数的步骤。还包括的是相对于MYC基因拷贝数参考,比较癌组织样品中的MYC基因拷贝数的步骤。
癌组织中的MYC基因染色体定位位点可以通过任何种类的方法来确定。例如,在一些实施例中,癌组织中的MYC基因染色体定位位点通过原位杂交(ISH)、荧光原位杂交(FISH)、下一代测序(NGS)、或比较基因组杂交(CGH),来确定。因此,某些实施例包括确定或检测来自有此需要的受试者的癌组织样品中的MYC基因染色体定位位点的步骤。还包括的是相对于MYC基因染色体位点参考,比较癌组织中的MYC基因染色体定位位点的步骤。
CGH指分子细胞遗传学方法,用于分析与参考样品相比,相对于测试样品的DNA中的倍性水平的拷贝数变异(CNV),而无需培养细胞。这种技术允许起于最常密切相关的两个来源的两个基因组DNA样品之间的快速高效比较,因为怀疑它们含有就整个染色体或亚染色体区域(整个染色体的一部分)的获得或丧失而言的差异。该技术最初开发用于评估实体瘤和正常组织的染色体互补体之间的差异(参见例如,Kallioniemi等人,Science.258(5083):818–821,1992)。与CGH技术结合的DNA微阵列的使用已导致更特殊形式的阵列CGH(aCGH)的开发,允许CNV的逐个基因座测量,伴随低至100个千碱基的分辨率增加(参见例如,Pinkel,Annu Rev Genom Hum Genet.6:331–354,2005)。CNV是关键遗传变异的普遍形式,其导致细胞中的大基因组区域的异常拷贝数,并且高分辨率序列数据可以通过鉴定其的下一代测序(NGS)进行分析(参见例如,Zhao等人,BMC Bioinformatics.14Suppl 11:S1,2013)。MLPA指多重聚合酶链反应的变体,其允许仅用单个引物对扩增多重靶(参见例如,Schouten等人,Nucleic Acids Res.30(12):e57,2002)。原位杂交(ISH)和荧光原位杂交(FISH)指这样的一类杂交,其使用标记的互补DNA、RNA或修饰的核酸链(即,探针),以定位组织的一部分或切片(原位)中的特异性DNA或RNA序列(参见例如,Parra&Windle,NatureGenetics.5:17-21,1993;以及Gall&Pardue,PNAS USA.63:378–383,1969)。因此,在一些情况下,本文所述的方法和试剂盒采用前述技术中的任何一种或多种、和/或包含用于执行其的试剂。
“参考”(例如,MYC基因拷贝数“参考”、MYC基因染色体位点“参考”)的例子包括从数据库获得的值或量或定位,例如“野生型”MYC基因拷贝数或“野生型”MYC基因染色体定位位点的值或量(关于人MYCC基因染色体位点参考,参见例如图5和图6;并且关于人MYCN基因染色体位点参考,参见图8)。“参考”还包括从来自一个或多个对照,例如一个或多个健康或非癌性对照受试者(例如,健康或非癌性对照受试者的群体)的非癌性组织,或者来自待测试受试者的一种或多种相应的非癌性对照组织获得的值或量或定位。通常,“相应”的非癌性对照组织得自与待测试的癌组织相同类型的组织。与癌组织一样,可以通过任何种类的方法来确定来自非癌性对照的MYC基因拷贝数参考,所述方法包括例如通过aCGH、SNP阵列、CNV测序和/或MLPA(同上)。类似地,可以通过任何种类的方法来确定来自非癌性对照的MYC基因染色体定位位点参考,所述方法包括例如ISH、FISH、NGS和/或CGH(同上)。
在一些实施例中,癌组织(或非癌性对照组织)样品是来自受试者的手术样品、活组织检查样品、胸腔积液样品或腹水液样品。癌组织(或非癌性对照组织)样品的特定例子包括肺、血液、乳腺、胃肠道(胃、结肠、直肠)、卵巢、胰腺、肝脏、膀胱、宫颈、神经元、子宫、唾液腺、肾脏、前列腺、甲状腺或肌肉组织。某些实施例包括例如在确定MYC基因拷贝水平或MYC基因染色体定位位点之前,从受试者获得癌组织(或非癌性对照组织)样品的步骤。
在一些实施例中,受试者是人受试者。
如上文指出的,某些实施例包括如果受试者表征为不响应YM155一溴化物疗法,例如,如果癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考基本上不增加,或者如果癌组织中的MYC基因染色体定位位点相对于MYC基因染色体定位位点参考不易位,则向受试者施用排除YM155一溴化物(或除其之外)的抗癌剂。用于施用于表征为不响应YM155一溴化物疗法的受试者的示例性抗癌剂(除YM155一溴化物外)包括小分子,例如细胞毒素剂、化学治疗试剂和抗血管生成剂,例如已被视为可用于各种癌症的治疗中的那些。抗癌剂的一般类别包括但不限于烷化剂、抗代谢药、蒽环、抗肿瘤抗生素、铂、I型拓扑异构酶抑制剂、II型拓扑异构酶抑制剂、长春花生物碱和紫杉烷。
用于施用于表征为不响应YM155一溴化物疗法的受试者的抗癌剂的具体例子包括苯丁酸氮芥、环磷酰胺、西仑吉肽、洛莫司汀(CCNU)、美法仑、丙卡巴肼、噻替哌、卡莫司汀(BCNU)、恩扎妥林、白消安、柔红霉素、多柔比星、吉非替尼、厄洛替尼、伊达比星、替莫唑胺、表柔比星、米托蒽醌、博来霉素、顺铂、卡铂、奥沙利铂、喜树碱、伊立替康、拓扑替康、安吖啶、依托泊苷、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、替西罗莫司、依维莫司、长春新碱、长春碱、长春瑞滨、长春地辛、CT52923和紫杉醇,以及上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。抗癌剂的另外例子包括伊马替尼、克唑替尼、达沙替尼、索拉非尼、帕唑帕尼、舒尼替尼、瓦他拉尼、吉非替尼、厄洛替尼、AEE-788、二氯乙酸盐、他莫昔芬、法舒地尔、SB-681323和司马沙尼(SU5416)(参见Chico等人,Nat Rev Drug Discov.8:829-909,2009)。
用于施用于表征为不响应YM155一溴化物疗法的受试者的抗癌剂的进一步例子包括烷化剂,例如噻替哌、环磷酰胺(CYTOXANTM);烷基磺酸盐,例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡;氮丙啶,例如苯并多巴、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替哌;乙烯亚胺和甲基三聚氰胺,包括六甲蜜胺、三乙撑三聚氰胺、三乙撑磷酰胺、三乙撑硫代磷酰胺和三甲基三聚氰胺;氮芥,例如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、甲基二(氯乙基)胺、盐酸氧氮芥、美法仑、新氮芥、胆甾醇对苯乙酸氮芥、泼尼氮芥、曲磷胺、尿嘧啶氮芥;亚硝基脲,例如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫斯汀、尼莫斯汀、雷莫司汀;抗生素,例如阿克拉霉素(aclacinomysins)、放线菌素D、氨茴霉素(authramycin)、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、卡利奇霉素、卡柔比星、洋红霉素、嗜癌菌素、色霉素、更生霉素、柔红霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素、霉酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星;抗代谢药,例如氨甲蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU);叶酸类似物,例如二甲叶酸、氨甲蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙;嘌呤类似物,例如氟达拉滨、6-巯嘌呤、硝咪硫鸟嘌呤、硫鸟嘌呤;嘧啶类似物,例如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷、5-FU;雄激素,例如卡普睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯;抗肾上腺素,例如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦;叶酸补充剂,例如叶酸;乙酰葡醛酯;醛磷酰胺糖苷;氨基酮戊酸;安吖啶;阿莫司汀;比生群;依达曲沙;地磷酰胺;秋水仙碱;地吖醌;艾福米辛(elformithine);依利醋铵;依托格鲁;硝酸镓;羟基脲;香菇多糖;氯尼达明;米托胍腙;米托蒽醌;莫哌达醇;硝氨吖啶;喷司他丁;蛋氨氮芥;吡柔比星;鬼臼酸;2-乙肼;丙卡巴肼;PSK;雷佐生;西佐喃;锗螺胺;替奴佐酸;三亚胺醌;2,2’,2”-三氯三乙胺;乌拉坦;长春地辛;达卡巴嗪;甘露莫司汀;二溴甘露醇;二溴卫矛醇;哌泊溴烷;镓阿糖胞苷(gacytosine);阿拉伯糖苷(“Ara-C”);环磷酰胺;噻替派;紫杉烷,例如紫杉醇(Bristol-MyersSquibb Oncology,Princeton,N.J.)和多西他赛(Rhne-Poulenc Rorer,Antony,法国);苯丁酸氮芥;吉西他滨;6-硫鸟嘌呤;巯嘌呤;氨甲蝶呤;铂类似物,例如顺铂和卡铂;长春碱;铂;依托泊苷(VP-16);异环磷酰胺;丝裂霉素C;米托蒽醌;长春新碱;长春瑞滨;诺维本;诺消灵;替尼泊苷;道诺霉素;氨基蝶呤;希罗达;伊班膦酸盐;CPT-11;拓扑异构酶抑制剂RFS 2000;二氟甲基鸟氨酸(DMFO);视黄酸衍生物,例如TargretinTM(贝沙罗汀)、PanretinTM(阿利维A酸);ONTAKTM(地尼白介素);埃斯波霉素(esperamicins);卡培他滨;以及上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
用于施用于表征为不响应YM155一溴化物疗法的受试者的抗癌剂的另外例子,包括作用于调控或抑制对肿瘤的激素作用的抗激素剂,例如抗雌激素,包括例如他莫昔芬、雷洛昔芬、芳香酶抑制4(5)-咪唑、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬、LY117018、奥那司酮和托瑞米芬(Fareston);和抗雄激素,例如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林;以及上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
用于施用于表征为不响应YM155一溴化物疗法的受试者的抗癌剂的进一步例子包括抗癌抗体,例如3F8、8H9、阿巴伏单抗、阿德木单抗、阿托珠单抗、阿仑珠单抗、阿来珠单抗(pegol)、阿莫昔单抗、阿泊珠单抗、巴维昔单抗、贝妥莫单抗、贝利木单抗、贝伐珠单抗、比伐珠单抗(美登素)、本妥昔单抗、坎妥珠单抗(美登素)、坎妥珠单抗(ravtansine)、卡罗单抗(喷地肽)、卡妥索单抗、西妥昔单抗、西他妥珠单抗(bogatox)、西妥木单抗、克利伐珠单抗(tetraxetan)、可那木单抗、达西珠单抗、达洛珠单抗、地莫单抗、drozitumab、依美昔单抗、依决洛单抗、依洛珠单抗、依那妥组单抗、恩妥昔单抗、依帕珠单抗、厄马索单抗、埃达珠单抗、法利珠单抗、FBTA05、芬妥木单抗、法拉维单抗、加利昔单抗、吉妥珠单抗、甘尼单抗、吉妥珠单抗(奥佐米星)、吉瑞昔单抗、格巴妥木单抗(vedotin)、替伊莫单抗、icrucumab、伊戈伏单抗、拉英达西单抗(indatuximab ravtansine)、英妥木单抗、伊珠单抗奥佐米星、伊匹木单抗(MDX-101)、伊妥木单抗、拉贝珠单抗、来沙木单抗、林妥珠单抗、洛沃妥珠单抗(美登素)、鲁卡木单抗、鲁昔单抗、马帕木单抗、马妥珠单抗、米拉珠单抗、米妥莫单抗、莫加木珠单抗、莫妥昔单抗(pasudotox)、他那可单抗(他那托)、他那莫单抗(estafenatox)、纳那妥单抗、奈昔木单抗、尼妥珠单抗、纳武单抗、(含或不含放射性碘)、NR-LU-10、奥法木单抗、奥拉单抗、奥纳妥珠单抗、莫奥珠单抗(monatox)、奥戈伏单抗、帕尼单抗、帕特鲁单抗、培妥莫单抗、培妥珠单抗、普立木单抗、雷妥莫单抗、radretumab、雷莫芦单抗、利妥木单抗、利妥昔单抗、罗妥木单抗、沙马组单抗、西罗珠单抗、司妥昔单抗、他贝芦单抗、帕他莫单抗(paptox)、替妥莫单抗、替妥木单抗、TGN1412、替西木单抗、曲美木单抗、替加珠单抗、TNX-650、托西莫单抗、TRBS07、曲妥珠单抗、西莫白介素单抗(西莫白介素)、乌妥昔单抗、乌瑞鲁单抗、维妥珠单抗、伏洛昔单抗、伏妥莫单抗和扎芦木单抗。还包括的是这些抗体的片段、变体和衍生物。
本文描述的方法可以用于治疗和/或诊断任何种类的癌症或肿瘤。在一些实施例中,癌症是原发性癌,即,在其中肿瘤进展开始并产生癌性团块的解剖部位处生长的癌症。在一些实施例中,癌症是继发性或转移性癌,即已从起源的原发部位或组织扩散到一个或多个不同部位或组织内的癌症。在一些情况下,癌症选自以下的一种或多种:癌,肉瘤例如横纹肌肉瘤,例如腺泡状横纹肌肉瘤(包括在骨骼、肌腱、软骨、肌肉、脂肪、纤维、血管、脂肪和/或结缔组织中起源的肉瘤)、神经母细胞瘤、髓母细胞瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、骨髓瘤、白血病、淋巴瘤(包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤)、腺鳞状癌、癌肉瘤、混合性中胚叶瘤、畸胎瘤、肺癌(包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌、腺癌和肺鳞状癌)、乳腺癌(包括转移性乳腺癌)、胃肠道癌、胃癌、结肠直肠癌、结肠癌、直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、膀胱癌、宫颈癌、胶质母细胞瘤、子宫癌、唾液腺癌、肾脏癌或肾癌(例如肾母细胞瘤)、前列腺癌、甲状腺癌和头颈癌。
在具体实施例中,MYC基因是MYCC,并且癌症选自肺癌和血液癌,任选地白血病和淋巴瘤。在具体实施例中,MYC基因是MYCN,并且癌症选自神经母细胞瘤、小细胞肺癌、前列腺癌、腺泡状横纹肌肉瘤、髓母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、视网膜母细胞瘤和乳腺癌。
在一些实施例中,如上文指出的,癌症或肿瘤是转移性癌。除上述癌症以外,示例性转移性癌尤其包括但不限于已转移至骨骼、肝脏和/或肺的膀胱癌;已转移至骨骼、脑、肝脏和/或肺的乳腺癌;已转移至肝脏、肺和/或腹膜的结肠直肠癌;已转移至肾上腺、骨骼、脑、肝脏和/或肺的肾癌;已转移至肾上腺、骨骼、脑、肝脏和/或其它肺部位的肺癌;已转移至骨骼、脑、肝脏、肺和/或皮肤/肌肉的黑色素瘤;已转移至肝脏、肺和/或腹膜的卵巢癌;已转移至肝脏、肺和/或腹膜的胰腺癌;已转移至肾上腺、骨骼、肝脏和/或肺的前列腺癌;已转移至肝脏、肺和/或腹膜的胃癌;已转移至骨骼、肝脏和/或肺的甲状腺癌;以及已转移至骨骼、肝脏、肺、腹膜和/或阴道的子宫癌。
在某些实施例中,本文所述的方法足以导致肿瘤消退,如通过存活肿瘤的量中的统计学显著减少,例如肿瘤团块中的至少10%、20%、30%、40%、50%或更大的减少,或通过改变的(例如,具有统计学显著性减少的)扫描尺寸所指示的。在某些实施例中,所述方法足以导致稳定的疾病。在某些实施例中,本文所述的方法足以导致有经验的临床医生已知的特定疾病适应症的症状中的临床有关减轻。
用于治疗癌症的方法可以与其它治疗模式组合。例如,本文所述的组合疗法可以在其它治疗干预之前、期间或之后施用于受试者,所述其它治疗干预包括对症护理、放射疗法、手术、移植、激素疗法、光动力疗法、抗生素疗法或其任何组合。对症护理包括施用皮质类固醇以减轻脑水肿、头痛、认知功能障碍和呕吐,以及施用抗惊厥药以减轻癫痫发作。放射疗法包括全脑照射、分割放射疗法和放射外科手术例如立体定向性放射外科手术,其还可以与传统手术组合。
用于鉴定患有本文所述的一种或多种疾病或状况的受试者的方法是本领域已知的。
对于体内使用,例如用于治疗人疾病或测试,本文所述的试剂一般在施用之前掺入一种或多种治疗组合物或药物组合物内。
为了制备治疗组合物或药物组合物,通常将有效量或所需量的一种或多种试剂与任何药物载体或赋形剂混合,所述任何药物载体或赋形剂是本领域技术人员已知适合于特定试剂和/或施用模式的。药物载体可以是液体、半液体或固体。用于肠胃外、皮内、皮下或局部施加的溶液或悬浮液可以包括例如无菌稀释剂(例如水)、盐水溶液(例如磷酸盐缓冲盐水;PBS)、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂;抗微生物剂(例如苯甲醇和对羟基苯甲酸甲酯);抗氧化剂(例如抗坏血酸和亚硫酸氢钠)和螯合剂(例如乙二胺四乙酸(EDTA));缓冲剂(例如乙酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐)。如果静脉内施用(例如通过IV输注),则合适的载体包括生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS),以及含有增稠剂和增溶剂例如葡萄糖、聚乙二醇、聚丙二醇及其混合物的溶液。
以纯形式或者适当的治疗组合物或药物组合物形式的本文所述试剂的施用,可以经由用于发挥类似效用的试剂的任何可接受的施用模式来进行。治疗组合物或药物组合物可以通过将含试剂的组合物与适当的生理学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂组合来制备,并且可以配制成以固体、半固体、液体或气体形式的制剂,例如片剂、胶囊、粉末、颗粒、软膏、溶液、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶、微球体和气溶胶。另外,组合物内可以但不必存在其它药物活性成分(包括如本文其它地方所述的其它小分子),和/或合适的赋形剂例如盐、缓冲剂和稳定剂。
施用可以通过各种不同途径来实现,所述途径包括经口、肠胃外、经鼻、静脉内、皮内、肌内、皮下或局部。优选的施用模式取决于待治疗或预防的状况的性质。特定实施例包括通过IV输注的施用。
载体可以包括例如在所采用的剂量和浓度下,对暴露于其的细胞或哺乳动物无毒的药学或生理学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。生理学上可接受的载体经常是pH缓冲水溶液。生理学上可接受的载体的例子包括缓冲剂,例如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸;抗氧化剂,包括抗坏血酸;低分子量(少于约10个残基)多肽;蛋白质,例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白;亲水聚合物,例如聚乙烯吡咯烷酮;氨基酸,例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸;单糖、二糖和其它碳水化合物,包括葡萄糖、甘露糖或糊精;螯合剂,例如EDTA;糖醇,例如甘露醇或山梨糖醇;成盐抗衡离子,例如钠;和/或非离子型表面活性剂,例如聚山梨醇酯20(TWEENTM)聚乙二醇(PEG)和泊洛沙姆(PLURONICSTM)等等。
在一些实施例中,一种或多种试剂可以被包埋在胶体药物递送系统(例如,脂质体、白蛋白微球体、微乳状液、纳米颗粒和纳米胶囊)或粗乳状液中,例如通过凝聚技术或界面聚合制备的微胶囊(例如分别为羟甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)中。此类技术公开于Remington’s Pharmaceutical Sciences,第16版,Oslo,A.编辑(1980)中。颗粒或脂质体还可以包含其它治疗剂或诊断剂。
精确的治疗剂量和持续时间是待治疗疾病的函数,并且可以使用已知的测试方案凭经验确定,或通过在本领域已知的模型系统中测试组合物并由此外推来确定。也可以执行对照临床试验。剂量还可以随待减轻的状况的严重性而变。药物组合物一般配制且施用为发挥治疗上有用的效应,同时使不希望有的副作用降到最低。组合物可以施用一次,或者可以分成多个较小的剂量,以时间间隔施用。对于任何特定受试者,可以根据个体需要随着时间过去调整具体剂量方案。
因此,施用这些和相关的治疗组合物或药物组合物的典型途径包括但不限于经口、局部、经皮、吸入、肠胃外、舌下、颊、直肠、阴道和鼻内。如本文使用的,术语肠胃外包括皮下注射、静脉内、肌内、胸骨内注射或输注技术。根据本公开内容的某些实施例的治疗组合物或药物组合物这样进行配制,以便允许在组合物施用于受试者或患者后,其中所含的活性成分是生物可利用的。待施用于受试者或患者的组合物可以采取一个或多个剂量单位的形式,其中例如片剂可以是单个剂量单位,并且以气溶胶形式的本文所述试剂的容器可以容纳多个剂量单位。制备此类剂型的实际方法对本领域技术人员而言是已知的或显而易见的;例如,参见Remington:The Science and Practiceof Pharmacy,第20版(Philadelphia College of Pharmacy and Science,2000)。待施用的组合物通常含有治疗有效量的本文所述试剂,用于治疗目的疾病或状况。
治疗组合物或药物组合物可以为固体或液体的形式。在一个实施例中,载体是微粒,使得组合物为例如片剂或粉末形式。载体可以是液体,其中组合物是例如经口油、可注射液体或气溶胶,其可用于例如吸入施用。当预期用于经口施用时,药物组合物优选为固体或液体形式,其中半固体、半液体、悬浮液和凝胶形式包括在本文视为固体或液体的形式内。某些实施例包括无菌的可注射溶液。
作为用于经口施用的固体组合物,可以将药物组合物配制成粉末、颗粒、压制片剂、丸剂、胶囊、口香糖、糯米纸囊剂(wafer)等等。此类固体组合物通常含有一种或多种惰性稀释剂或可食用载体。另外,可以存在下述中的一种或多种:粘合剂,例如羧甲基纤维素、乙基纤维素、微晶纤维素、黄蓍树胶或明胶;赋形剂,例如淀粉、乳糖或糊精,崩解剂,例如海藻酸、海藻酸钠、Primogel、玉米淀粉等等;润滑剂,例如硬脂酸镁或Sterotex;助流剂,例如胶体二氧化硅;甜味剂,例如蔗糖或糖精;调味剂,例如薄荷、水杨酸甲酯或橙调味料;以及着色剂。当药物组合物为胶囊例如明胶胶囊的形式时,除上述类型的材料之外,它还可以含有液体载体,例如聚乙二醇或油。
治疗组合物或药物组合物可以为液体的形式,例如酏剂、糖浆、溶液、乳状液或悬浮液。作为两个例子,液体可以用于经口施用或通过注射递送。当预期用于经口施用时,除本化合物之外,优选组合物还含有甜味剂、防腐剂、染料/色素和增味剂中的一种或多种。在预期通过注射施用的组合物中,可以包括表面活性剂、防腐剂、湿润剂、分散剂、悬浮剂、缓冲剂、稳定剂和等渗剂中的一种或多种。
液体治疗组合物或药物组合物,无论它们是溶液、悬浮液还是其它类似形式,都可以包括下述佐剂中的一种或多种:无菌稀释剂,例如注射用水、盐水溶液优选生理盐水、林格氏溶液、等渗氯化钠、不挥发性油例如合成甘油单酯或甘油二酯(其可以充当溶剂或悬浮介质)、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它溶剂;抗菌剂,例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯;抗氧化剂,例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠;螯合剂,例如乙二胺四乙酸;缓冲剂,例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐,以及用于调整张力的试剂例如氯化钠或右旋糖。肠胃外制剂可以封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。生理盐水是优选佐剂。可注射的药物组合物优选是无菌的。
预期用于肠胃外或经口施用的液体治疗组合物或药物组合物应该含有一定量的试剂,使得获得合适的剂量。通常,这个量是组合物中的目的试剂的至少0.01%。当预期用于经口施用时,这个量可以在组合物重量的0.1%至约70%之间变化。某些经口治疗组合物或药物组合物含有约4%至约75%的目的试剂。在某些实施例中,根据本发明的治疗组合物或药物组合物和制剂这样进行制备,使得在稀释之前,肠胃外剂量单位含有按重量计0.01至10%的目的试剂。
治疗组合物或药物组合物可以包括各种材料,其修饰了固体或液体剂量单位的物理形式。例如,组合物可以包括在活性成分周围形成包衣壳的材料。形成包衣壳的材料通常是惰性的,并且可以选自例如糖、虫胶和其它肠溶包衣剂。可替代地,可以将活性成分包装在明胶胶囊中。以固体或液体形式的治疗组合物或药物组合物可以包括这样的组分,其与试剂结合,并且从而有助于化合物的递送。可以以这种能力起作用的合适组分包括单克隆抗体或多克隆抗体、一种或多种蛋白质或脂质体。
本文所述的组合物可以用载体进行制备,所述载体保护试剂免于从体内快速清除,例如定时释放制剂或包衣。此类载体包括控制释放制剂,例如但不限于植入物和微胶囊化递送系统,以及生物可降解的生物相容性聚合物,例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、聚原酸酯、聚乳酸和本领域普通技术人员已知的其它。
治疗组合物或药物组合物可以通过药学领域众所周知的方法来制备。例如,预期通过注射施用的治疗组合物或药物组合物可以包含盐、缓冲剂和/或稳定剂中的一种或多种,具有无菌的蒸馏水以便形成溶液。可以添加表面活性剂以促进均匀溶液或悬浮液的形成。表面活性剂是这样的化合物,其与试剂非共价相互作用,以便促进试剂在水性递送系统中的溶解或均匀悬浮。
某些实施例包括诊断试剂盒用于确定或预测患有癌症的受试者中,对YM155一溴化物[1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(吡嗪-2-基甲基)-4,9-二氢-1H-萘并[2,3-d]溴化咪唑鎓]疗法的治疗应答(或响应性)的用途,所述诊断试剂盒包括用于测量来自受试者的组织(包括癌组织和非癌性组织)样品中的MYC基因拷贝数、或MYC基因染色体定位位点的手段。还包括的是患者护理试剂盒,其包括:(a)用于测量来自受试者的组织(包括癌组织和非癌性组织)样品中的MYC基因拷贝数、或MYC基因染色体定位位点的手段;和(b)YM155一溴化物[1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(吡嗪-2-基甲基)-4,9-二氢-1H-萘并[2,3-d]溴化咪唑鎓]。
在一些实施例中,用于测量MYC基因拷贝数的手段包括用于对人MYC基因执行选自以下的一种或多种的诊断测定的试剂:阵列比较基因组杂交(aCGH)、单核苷酸多态性(SNP)阵列、拷贝数变异(CNV)测序和多重连接依赖探针扩增(MLPA)。在一些实施例中,用于测量MYC基因染色体定位位点的手段包括用于对人MYC基因执行选自以下的一种或多种的诊断测定的试剂:原位杂交(ISH)、荧光原位杂交(FISH)、下一代测序(NGS)和比较基因组杂交(CGH)。
某些诊断试剂盒或患者护理试剂盒包括从数据库获得、或从来自对照的非癌性组织确定的MYC基因拷贝数参考值。一些诊断试剂盒或患者护理试剂盒包括从数据库获得、或从来自对照的非癌性组织确定的MYC基因染色体定位位点参考。试剂盒还可以包括例如关于如何确定来自受试者的癌组织样品中、和/或来自非癌性对照的MYC基因拷贝数和/或MYC基因染色体定位位点的书面说明书。
在一些实施例中,诊断试剂盒或患者护理试剂盒含有用于组合物和信息材料的分开容器、分隔物或区室。例如,组合物或试剂可以包含在瓶、小瓶或注射器中,并且信息材料可以与容器结合包含。在一些实施例中,试剂盒的分开元件包含在单个未分开的容器中。例如,组合物或试剂包含在瓶、小瓶或注射器中,其具有以标签形式与其附着的信息材料。在一些实施例中,试剂盒包括多个(例如,一包)个别容器,每个容器含有YM155一溴化物的一种或多种组合物、试剂和/或单位剂型。例如,试剂盒包括多个注射器、安瓿、箔包装或泡罩包装,各自含有YM155一溴化物的试剂或单个单位剂量。试剂盒的容器可以是气密的、防水的(例如,对水分或蒸发中的变化不透性的)和/或不透光的。
患者护理试剂盒任选地包括适合于施用试剂的装置,例如注射器、吸入器、滴管(例如滴眼管)、拭子(例如棉签或木制拭子)或任何此类递送装置。在一些实施例中,装置是分配计量剂量的试剂的可植入装置。还包括的是例如通过组合本文所述的组分,提供试剂盒的方法。
在某些方面,本文所述的诊断或治疗应答测试或方法在诊断实验室执行,然后将结果提供给受试者、或者在受试者的医疗保健和癌症治疗中起作用的医生或其它医疗保健提供者。因此,特定的实施例包括用于向有此需要的受试者、或者医生或其它医疗保健提供者提供响应性测试的结果的方法。这些结果或数据可以为硬拷贝或纸质拷贝的形式,或者电子形式例如计算机可读介质。
本说明书中引用的所有出版物、专利申请和颁发的专利都以引用的方式并入本文,如同每个个别出版物、专利申请或颁发的专利具体地且个别地指出以引用的方式并入。
尽管前述发明已通过说明和例子的方式略微详细地进行描述用于清楚理解的目的,但对于普通技术人员显而易见的是,可以对其进行某些改变和修改,而不脱离说明书或所附权利要求的精神或范围。下述实例仅作为说明而不是限制提供。本领域技术人员将容易地认识到各种非关键参数,其可以改变或修改以产生基本相似的结果。
实例
实例1
YM155一溴化物在癌细胞系中的功效
执行研究以评估YM155一溴化物在各种癌细胞系中的功效,并且还将YM155一溴化物的功效与MYC基因拷贝数相关联。
肺细胞培养。人肺癌细胞NCI-H1975、HCC827、NCI-H226和HCC4006细胞在补充有10%胎牛血清(GEMINI,900-108)的RPMI 1640(HycloneTM,SH30809.01B)中进行培养。使培养物在37℃下在5%CO2中温育。NCI-H1975、HCC827和NCI-H226购自Cell Bank,ShanghaiInstitutes for Biological Sciences,Chinese Academy of Sciences。HCC4006购自CoBioer Biosciences Corporation(Nanjing,中国)。
细胞处理和增殖测定。NCI-H1975、HCC827、NCI-H226和HCC4006细胞分别以2000个细胞/孔在96孔板(Corning-Costar,3603)中的200μl培养基中接种24小时。然后用YM155(50、30、20、10、2、0.4、0.08、0.016和0.0032nM;APExBIO,A4221)或DMSO(0.1%;Amresco,67-68-5)处理细胞。在72小时温育后,在相同的培养条件下,将细胞用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU,最终浓度为1uM;Sigma,900584)标记另外4小时。
在与EdU一起温育后,将细胞在室温下用甲醛(最终浓度为4%;Thermo,28908)固定30分钟。将细胞用PBS(HycloneTM,SH30256.01)洗涤两次,然后在4℃下用0.5%Triton X-100(T8787-250ML)的PBS溶液渗透化处理过夜。在弃去上清液后,使细胞与Hoechst 33342(Invitrogen,H1399)一起在室温下温育1小时,然后再次用PBS洗涤两次。
使细胞与染色混合物(Beijing Percans Oncology Medical Research Co.,Ltd.,RUO-00401#150T)一起在室温下温育30分钟,然后用PBS洗涤三次。将细胞保持在PBS中,并且在实验自始至终避光。
高内涵成像分析。用配备用于Hoechst 33342(激发:386nm)和EdU(激发:560nm)的滤光片的CellInsightTM CX5 High-Content Screening(HSC)Platform(Thermo Fisher),扫描处理的细胞用于图像采集。通过测量核区域中的信号强度,来分析总细胞计数和EdU阳性细胞计数。
如图2中所示,YM155抑制人肺癌细胞系的细胞增殖。将NCI-H1975、HCC827、NCI-H226和HCC4006暴露于不同浓度的YM155共72小时。然而,YM155的增殖抑制效应在这些细胞系中是不同的,其中计算的IC50显示于下表E1中。与没有MYC基因扩增的NCI-H226和HCC4006相比,具有MYC基因扩增(相对于参考增加的MYC基因拷贝数)的NCI-H1975和HCC827对YM155明显更敏感。
血细胞培养。人急性髓样白血病细胞(U937和HL-60)和人伯基特氏淋巴瘤细胞(Ramos)在补充有10%胎牛血清的RPMI 1640中进行培养。使培养物在37℃下在5%CO2中温育。U937和HL-60细胞购自Cell Bank,Shanghai Institutes for Biological Sciences,Chinese Academy of Sciences。Ramos细胞购自CoBioer Biosciences Corporation(Nanjing,中国)。Ramos细胞携带IgH-c-MYC易位突变。
细胞处理和增殖测定。U937、HL-60和Ramos细胞以40000个细胞/孔在96孔板(Corning-Costar,3599)中的200μl培养基中接种,用YM155(200、100、50、25、12.5、2.5、1、0.5nM;APExBIO,A4221)或DMSO(0.1%;Amresco,67-68-5)进行处理。在72小时温育后,根据制造商的方案,通过XTT测定(Cell Proliferation Kit II XTT,Sigma,11465015001)测量细胞增殖。简言之,在YM155处理后,将50μl的XTT标记混合物加入每个孔中,随后使微板在增湿大气中温育4小时。通过SpectraMax 190分别测定在波长490nm(OD490)和650nm(OD650)处的吸光度。IC50通过OD490-OD650的值进行计算。
如图3和图4中所示,YM155抑制人急性髓样白血病细胞和人伯基特氏淋巴瘤细胞的细胞增殖。将U937、HL-60和Ramos暴露于不同浓度的YM155共72小时。然而,YM155的增殖抑制效应在这些细胞系中是不同的,其中计算的IC50显示于下表E2中。与没有MYC基因扩增或易位的U937细胞相比,具有MYC基因扩增(相对于参考增加的MYC基因拷贝数)的HL-60细胞和具有MYC基因易位的Ramos细胞对YM155更敏感。
神经母细胞瘤细胞培养。神经母细胞瘤细胞系IMR-32、NB-1、KP-N-YN、SK-N-BE、SK-N-SH和SH-SY5Y细胞在96孔板中进行培养,并且用YM155以指示剂量(nM)进行处理。人神经母细胞瘤细胞系IMR-32在补充有10%胎牛血清(GEMINI,900-108)的MEM(HycloneTM,SH30024.01)中进行培养;神经母细胞瘤细胞系NB-1和KP-N-YN在补充有10%胎牛血清的RPMI 1640(HycloneTM,SH30809.01B)中进行培养;神经母细胞瘤细胞系SK-N-BE在补充了10%胎牛血清的F12(Gibco,11765-054)/MEM(1:1)(HycloneTM,SH30024.01)中进行培养;神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y在补充有10%胎牛血清的MEM/F12(1:1)中进行培养;并且神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH在补充有10%胎牛血清的MEM中进行培养。使培养物在37℃下在5%CO2中温育。
IMR-32、SH-SY5Y和SK-N-SH购自Cell Bank,Shanghai Institutes forBiological Sciences,Chinese Academy of Sciences。NB-1、KP-N-YN和SK-N-BE细胞购自CoBioer Biosciences Corporation(Nanjing,中国)。
细胞处理和增殖测定。IMR-32、SH-SY5Y、SK-N-SH、NB-1、KP-N-YN和SK-N-BE细胞以2000个细胞/孔在96孔板(Corning-Costar,3603)中的200μl培养基中接种24小时。然后用YM155(200,100,50,25,12.5,6.25,3.125,1.5625和0.78125nM;APExBIO,A4221)或DMSO(0.1%;Amresco,67-68-5)处理细胞。在72小时温育后,在相同的培养条件下,将细胞用5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU,最终浓度为1uM;Sigma,900584)标记另外4小时。
在与EdU一起温育后,将细胞在室温下用甲醛(最终浓度为4%;Thermo,28908)固定30分钟。将细胞用PBS(HycloneTM,SH30256.01)洗涤两次,然后在4℃下用0.5%TritonX-100(T8787-250ML)的PBS溶液渗透化处理过夜。在弃去上清液后,使细胞与Hoechst33342(Invitrogen,H1399)一起在室温下温育1小时,然后再次用PBS洗涤两次。使细胞与染色混合物(Beijing Percans Oncology Medical Research Co.,Ltd.,RUO-00401#150T)一起在室温下温育30分钟,然后用PBS将细胞洗涤三次。将细胞保持在PBS中,并且在实验自始至终避光。
高内涵成像分析。用配备用于Hoechst33342(激发:386nm)和EdU(激发:560nm)的滤光片的CellInsightTM CX5 High-Content Screening(HSC)Platform(Thermo Fisher),扫描处理的细胞用于图像采集。通过测量核区域中的信号强度,来分析总细胞计数和EdU阳性细胞计数。
如图7和下表E3中所示,YM155抑制神经母细胞瘤细胞系的细胞增殖。它对抑制IMR-32、NB-1、KP-N-YN和SK-N-BE神经母细胞瘤细胞系的细胞增殖尤其有效,所述细胞系的特征在于NMYC拷贝数增加。
这些数据说明,MYC基因扩增(即,相对于参考增加的MYC基因拷贝数)和MYC基因易位,可以用于预测在癌症包括肺癌、血细胞癌、神经母细胞瘤及其它中,对YM155一溴化物疗法的响应性。
实例2
HCC827/HCC 4006异种移植实验
四至六周龄的雌性小鼠(Balb/C-nu)购自BEIJING HFK BIOSCIENCE Co.,Ltd。将细胞培养基的细胞悬浮液(HCC827(上皮性肺腺癌):5x106/0.1ml/小鼠;HCC4006:5x106/0.1ml/小鼠)皮下接种到小鼠的右胁腹内。当肿瘤大小达到100mm3-150mm3左右时,将小鼠随机分到治疗组和对照组内。经过三周,每天一次皮下施用以5mg/kg的YM155(Biochempartner,BCP01864)或媒介物(盐水,Shijiazhuang No.4Pharmaceutical),共五天/周。每周两次评价小鼠的体重,并且使用标准卡尺测量肿瘤直径(长直径和短直径)。肿瘤体积=1/2*长直径*(短直径)2。在两或三周观察后,处死小鼠用于分析。数据呈现于图9A-9B和图10A-10B中。
实例3
RAMOS/U937异种移植实验
四至六周龄的雌性小鼠(RAMOS:SCID;U937:NOD/SCID)购自BEIJING HFKBIOSCIENCE Co.,Ltd。将细胞培养基的细胞悬浮液(RAMOS:1x107/0.1ml/小鼠;U937:2x106/0.1ml+0.1ml基质胶/小鼠)皮下接种到小鼠的右胁腹内。当肿瘤大小达到100mm3-150mm3左右时,将小鼠随机分到治疗组和对照组内。每天一次皮下施用以5mg/kg的YM155(Biochempartner,BCP01864)或媒介物(盐水,Shijiazhuang No.4Pharmaceutical),共九天。每周两次评价小鼠的体重,并且使用标准卡尺测量肿瘤直径(长直径和短直径)。肿瘤体积=1/2*长直径*(短直径)2。在两或三周观察后,处死小鼠用于分析。数据呈现于图11A-11B和图12A-12B中。
实例6
IMR-3/SH-SY5Y异种移植实验
四至六周龄的雌性小鼠(IMR-32:NOD/SCID;SH-SY5Y:Balb/C-nu)购自BEIJINGHFK BIOSCIENCE Co.,Ltd。将细胞培养基的细胞悬浮液(IMR-32:5x106/0.1ml+0.1ml基质胶/小鼠;SH-SY5Y:2x106/0.1ml+0.1ml基质胶/小鼠)皮下接种到小鼠的右胁腹内。当肿瘤大小达到100mm3-150mm3左右时,将小鼠随机分到治疗组和对照组内。经过3周,每天一次皮下施用以5mg/kg的YM155(Biochem partner,BCP01864)或媒介物(盐水,ShijiazhuangNo.4Pharmaceutical),共五天/周。每周两次评价小鼠的体重,并且使用标准卡尺测量肿瘤直径(长直径和短直径)。肿瘤体积=1/2*长直径*(短直径)2。在两或三周观察后,处死小鼠用于分析。数据呈现于图13A-13B和图14A-14B中。
Claims (32)
1.一种用于治疗有此需要的受试者中的癌症的方法,其包括:
(a)确定来自所述受试者的癌组织样品中的MYC基因拷贝数或MYC基因染色体定位位点;和
(b)如果所述癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考有增加,或者如果所述癌组织中的MYC基因染色体定位位点相对于MYC基因染色体定位位点参考有易位,则向所述受试者施用YM155一溴化物[1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(吡嗪-2-基甲基)-4,9-二氢-1H-萘并[2,3-d]溴化咪唑鎓]、或者其类似物或衍生物,
从而治疗有此需要的受试者中的癌症。
2.根据权利要求1所述的方法,其包括如果所述癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考基本上不增加,或者如果所述癌组织中的MYC基因染色体定位位点相对于MYC基因染色体定位位点参考不易位,则向所述受试者施用排除YM155一溴化物(或除其之外)的化学治疗试剂。
3.一种用于预测患有癌症的受试者中,对YM155一溴化物[1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(吡嗪-2-基甲基)-4,9-二氢-1H-萘并[2,3-d]溴化咪唑鎓]、或者其类似物或衍生物的治疗应答的方法,其包括
(a)确定来自所述受试者的癌组织样品中的MYC基因拷贝数或MYC基因染色体定位位点;和
(b)(i)如果所述癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考有增加,或者如果所述癌组织中的MYC基因染色体定位位点相对于MYC基因染色体定位位点参考有易位,则所述受试者表征为响应YM155一溴化物疗法;或
(ii)如果所述癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考基本上不增加,或者如果所述癌组织中的MYC基因染色体定位位点相对于MYC基因染色体定位位点参考不易位,则所述受试者表征为不响应YM155一溴化物疗法,
从而预测患有癌症的受试者中对YM155一溴化物的治疗应答。
4.根据权利要求3所述的方法,其包括如果所述受试者表征为响应YM155一溴化物疗法,则向所述受试者施用YM155一溴化物。
5.根据权利要求3所述的方法,其包括如果所述受试者表征为不响应YM155一溴化物疗法,则向所述受试者施用排除YM155一溴化物的化学治疗试剂。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法,其中所述癌组织中的MYC基因拷贝数相对于MYC基因拷贝数参考增加到约或至少约1.5、2、3、4、5、6、7、8、9或10倍。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法,其包括通过阵列比较基因组杂交(aCGH)、单核苷酸多态性(SNP)阵列、拷贝数变异(CNV)测序、或多重连接依赖性探针扩增(MLPA),来确定所述癌组织中的MYC基因拷贝数。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法,其包括通过原位杂交(ISH)、荧光原位杂交(FISH)、下一代测序(NGS)、或比较基因组杂交(CGH),来确定所述癌组织中的MYC基因染色体定位位点。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法,其包括从数据库获得所述MYC基因拷贝数参考,或者任选地通过aCGH、SNP阵列、CNV测序或MLPA,从来自对照的非癌性组织确定所述MYC基因拷贝数参考。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法,其包括从数据库获得所述MYC基因染色体定位位点参考,或者任选地通过ISH、FISH、NGS或CGH,从来自对照的非癌性组织确定所述MYC基因染色体定位位点参考。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法,其包括从所述受试者获得癌组织样品。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法,其中所述癌组织样品是从所述受试者获得的手术样品、活组织检查样品、胸腔积液样品或腹水液样品,其任选地选自肺、血液、乳腺、胃肠道(胃、结肠、直肠)、卵巢、胰腺、肝脏、膀胱、宫颈、神经元、子宫、唾液腺、肾脏、前列腺、甲状腺或肌肉组织中的一种或多种。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法,其中所述受试者是人受试者。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法,其中所述癌症选自以下的一种或多种:癌,肉瘤例如横纹肌肉瘤,例如腺泡状横纹肌肉瘤(包括在骨骼、肌腱、软骨、肌肉、脂肪、纤维、血管、脂肪和/或结缔组织中起源的肉瘤)、神经母细胞瘤、髓母细胞瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、骨髓瘤、白血病、淋巴瘤(包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤)、腺鳞状癌、癌肉瘤、混合性中胚叶瘤、畸胎瘤、肺癌(包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌、腺癌和肺鳞状癌)、乳腺癌(包括转移性乳腺癌)、胃肠道癌、胃癌、结肠直肠癌、结肠癌、直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、膀胱癌、宫颈癌、胶质母细胞瘤、子宫癌、唾液腺癌、肾脏癌或肾癌(例如肾母细胞瘤)、前列腺癌、甲状腺癌和头颈癌。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法,其中所述MYC基因选自MYCC和MYCN。
16.根据权利要求15所述的方法,其中所述MYC基因是MYCC,并且所述癌症选自肺癌和血液癌,任选地白血病和淋巴瘤。
17.根据权利要求15所述的方法,其中所述MYC基因是MYCN,并且所述癌症选自神经母细胞瘤、小细胞肺癌、前列腺癌、腺泡状横纹肌肉瘤、髓母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、视网膜母细胞瘤和乳腺癌。
18.诊断试剂盒用于确定患有癌症的受试者中,对YM155一溴化物[1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(吡嗪-2-基甲基)-4,9-二氢-1H-萘并[2,3-d]溴化咪唑鎓]、或者其类似物或衍生物疗法的治疗应答的用途,所述诊断试剂盒包括用于测量来自所述受试者的组织(包括癌组织和非癌性组织)样品中的MYC基因拷贝数、或MYC基因染色体定位位点的手段。
19.根据权利要求18所述的用途,其中所述用于测量MYC基因拷贝数的手段包括用于对人MYC基因执行选自以下的一种或多种的诊断测定的试剂:阵列比较基因组杂交(aCGH)、单核苷酸多态性(SNP)阵列、拷贝数变异(CNV)测序和多重连接依赖探针扩增(MLPA)。
20.根据权利要求18或19所述的用途,其中所述用于测量MYC基因染色体定位位点的手段包括用于对人MYC基因执行选自以下的一种或多种的诊断测定的试剂:原位杂交(ISH)、荧光原位杂交(FISH)、下一代测序(NGS)和比较基因组杂交(CGH)。
21.根据权利要求18-20中任一项所述的用途,其包含从数据库获得、或从来自对照的非癌性组织确定的MYC基因拷贝数参考值。
22.根据权利要求18-20中任一项所述的用途,其包含从数据库获得、或从来自对照的非癌性组织确定的MYC基因染色体定位位点参考。
23.根据权利要求18-22中任一项所述的用途,其中所述癌症选自以下的一种或多种:癌,肉瘤例如横纹肌肉瘤,例如腺泡状横纹肌肉瘤(包括在骨骼、肌腱、软骨、肌肉、脂肪、纤维、血管、脂肪和/或结缔组织中起源的肉瘤)、神经母细胞瘤、髓母细胞瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、骨髓瘤、白血病、淋巴瘤(包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤)、腺鳞状癌、癌肉瘤、混合性中胚叶瘤、畸胎瘤、肺癌(包括非小细胞肺癌、小细胞肺癌、腺癌和肺鳞状癌)、乳腺癌(包括转移性乳腺癌)、胃肠道癌、胃癌、结肠直肠癌、结肠癌、直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、肝癌、膀胱癌、宫颈癌、胶质母细胞瘤、子宫癌、唾液腺癌、肾脏癌或肾癌(例如肾母细胞瘤)、前列腺癌、甲状腺癌和头颈癌。
24.根据权利要求18-23中任一项所述的用途,其中所述MYC基因选自MYCC和MYCN。
25.根据权利要求24所述的用途,其中所述MYC基因是MYCC,并且所述癌症选自肺癌和血液癌,任选地白血病和淋巴瘤。
26.根据权利要求24所述的用途,其中所述MYC基因是MYCN,并且所述癌症选自神经母细胞瘤、小细胞肺癌、前列腺癌、腺泡状横纹肌肉瘤、髓母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、视网膜母细胞瘤和乳腺癌。
27.一种患者护理试剂盒,其包括:
(a)用于测量来自受试者的组织(包括癌组织和非癌性组织)样品中的MYC基因拷贝数、或MYC基因染色体定位位点的手段;和
(b)YM155一溴化物[1-(2-甲氧基乙基)-2-甲基-4,9-二氧代-3-(吡嗪-2-基甲基)-4,9-二氢-1H-萘并[2,3-d]溴化咪唑鎓]、或者其类似物或衍生物。
28.根据权利要求27所述的患者护理试剂盒,其中用于测量MYC基因拷贝数的手段包括用于对人MYC基因执行选自以下的一种或多种的诊断测定的试剂:阵列比较基因组杂交(aCGH)、单核苷酸多态性(SNP)阵列、拷贝数变异(CNV)测序和多重连接依赖探针扩增(MLPA)。
29.根据权利要求27或28所述的患者护理试剂盒,其中用于测量MYC基因染色体定位位点的手段包括用于对人MYC基因执行选自以下的一种或多种的诊断测定的试剂:原位杂交(ISH)、荧光原位杂交(FISH)、下一代测序(NGS)和比较基因组杂交(CGH)。
30.根据权利要求27-29中任一项所述的患者护理试剂盒,其包含从数据库获得、或从来自对照的非癌性组织确定的MYC基因拷贝数参考值。
31.根据权利要求27-30中任一项所述的患者护理试剂盒,其包含从数据库获得、或从来自对照的非癌性组织确定的MYC基因染色体定位位点参考。
32.根据权利要求27-31中任一项所述的患者护理试剂盒,其中所述MYC基因选自MYCC和MYCN。
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