CN113226249B

CN113226249B - 包含生物聚合物的核-壳网络结构体及包含其的组合物

Info

Publication number: CN113226249B
Application number: CN201980072732.2A
Authority: CN
Inventors: 金恩美; 姜永圭; 高在濚; 金躾湊; 金敏基; 金容震; 白兴洙; 俞载元; 李龙喜; 李垠秀; 崔尤利
Original assignee: Amorepacific Corp
Current assignee: Amorepacific Corp
Priority date: 2018-10-31
Filing date: 2019-10-31
Publication date: 2023-11-28
Anticipated expiration: 2039-10-31
Also published as: CN113226249A; KR20200049662A

Abstract

本说明书涉及一种通过使用生物亲和性的生物聚合物而形成的核‑壳网络结构体及包含其的组合物。所述结构体可代替如聚乙二醇等的合成化学物质来将难溶性功效物质有效地分散在组合物中，因此可解决安全性问题，并且通过所述网络结构能够长时间稳定地保持剂型。此外，所述结构体和包含其的组合物能够对皮肤提供增强皮肤屏障、保湿皮肤或皮肤再生等有用的功效。

Description

包含生物聚合物的核-壳网络结构体及包含其的组合物

技术领域

本说明书涉及一种使用生物聚合物的结构体及包含其的组合物。

【相关申请】

本申请要求主张于2018年10月31日申请的、申请号为10-2018-0132495的韩国专利申请和2019年10月30日申请的、申请号为10-2019-0136397的韩国专利申请的优先权，将它们的全部内容通过引用结合在本申请中。

背景技术

当在化妆品等剂型中添加人参皂苷、大豆皂苷、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)等难溶性功效物质时的问题在于，由于剂型稳定性不好，会发生功效物质的分离或析出，导致无法发挥物质的功效，或者外观或使用感方面不令人满意。因此，为了将难溶性功效物质添加到化妆品或药物剂型中，在化妆品产业或制药产业中会使用通过用增溶物质收集并制成纳米乳剂剂型、或将功效物质分散在微胶囊内部的方法，通常作为用于上述难溶性功效物质的增溶及功效最大化的增溶剂，最广泛使用的是聚乙二醇(PEG)。

然而，数项研究结果表明了聚乙二醇的如人体内毒性和过敏性问题等的安全问题，因此近年来在化妆品产业和制药产业中试图避免使用聚乙二醇。在制药产业中，将PEG化(PEGylation)替换为利用脯氨酸-丙氨酸-丝氨酸氨基酸的PAS化(PASylation)的相关研究正在进行中。在化妆品产业中，随着近年来化学恐惧症(chemophobia)成为热点话题，对能够代替聚乙二醇的物质的需求在增加，因此需要开发一种能够稳定地增溶难溶性功效物质的同时，天然的、具有生物亲和性的增溶体系。

【现有技术文献】

【专利文献】

(专利文献1)韩国专利公开号第10-0648535号。

发明内容

技术问题

在一个方面，本发明要解决的问题在于提供一种结构体及包含其的组合物，所述结构体通过使用生物聚合物而具有生物亲和性且能够有效地增溶难溶性功效物质。

在一个方面，本发明要解决的问题在于提供一种组合物，所述组合物通过包含使用所述生物聚合物的结构体而对皮肤显示有用功效。

技术方案

在一个方面，本发明提供一种核-壳网络结构体或包含所述核-壳网络结构体的组合物，所述核-壳网络结构体包含，由包含醇溶蛋白(prolamin)的核(core)；以及包含普鲁兰多糖(pullulan)和果胶(pectin)的壳(shell)所组成的核-壳颗粒，

其中，所述普鲁兰多糖包围所述核，所述果胶位于所述壳的最外层并在所述核-壳颗粒之间形成互联网络。

在一个方面，本发明提供一种用于增溶难溶性功效物质的组合物，其包含所述核-壳网络结构体。

在一个方面，本发明提供一种用于选自增强皮肤屏障、皮肤保湿和皮肤再生中的一种或多种的组合物，其包含作为有效成分的所述核-壳网络结构体。

在一个方面，本发明提供一种包含核-壳网络结构体的组合物，所述核-壳网络结构体包含：包含难溶性功效物质和醇溶蛋白的核；以及包含普鲁兰多糖和果胶的壳，其中，所述普鲁兰多糖包围所述核，所述果胶位于所述壳的最外层并在所述核-壳颗粒之间形成互联网络。

在另一个方面，本发明提供一种结构体的制备方法，其包括：将醇溶蛋白加入到醇溶剂中并进行分散，以形成核的步骤；将普鲁兰多糖逐滴滴入到所述醇溶液中，以形成包围所述核的壳的步骤；通过将果胶加入到添加有所述普鲁兰多糖的醇溶液中来涂覆所述壳的最外层，并在所述壳之间形成网络的步骤；以及从添加有所述果胶的溶液中蒸发出醇，以获得形成有溶解于水相的核-壳网络(core-shell network)结构体的溶液的步骤。

有益效果

在一个方面，本发明可通过使用生物亲和性的生物聚合物而形成的核-壳网络结构体来增溶难溶性功效物质，从而能够解决现有技术中将合成化学物质如聚乙二醇(PEG)用作增溶剂的组合物中存在的安全性问题。由于包含核-壳纳米颗粒且具有所述核-壳颗粒的壳之间形成有网络的结构，因此所述网络结构起到支撑体的作用，从而使所述核-壳纳米颗粒均匀地分布在组合物中，并且能够长时间稳定地保持所述分散的剂型。此外，本发明可通过所述核-壳网络结构体提供增强皮肤屏障、皮肤保湿、皮肤再生的功效。

附图说明

图1示出了根据本发明一个实施例的组合物所包含的核-壳网络结构的模式图。

图2示出了未形成核-壳网络的本发明的比较例的电子显微镜图像。(左：未包含难溶性功效物质，右：包含难溶性功效物质)

图3示出了确认已形成根据本发明一个实施例的核-壳网络结构体的电子显微镜图像。(左：未包含难溶性功效物质，右：包含难溶性功效物质)

图4放大示出了确认已形成根据本发明一个实施例的核-壳网络结构体的电子显微镜图像。(左：未包含难溶性功效物质，右：包含难溶性功效物质)

图5示出了对本发明一个实施例和比较例的各个组合物内的核-壳颗粒大小进行测定的结果。

图6示出了确认到已形成根据本发明一个实施例的核-壳网络结构体，并且组合物的剂型(颗粒大小)长时间保持一定的图。

图7a示出了对根据本发明一个实施例的包含核-壳网络结构体的组合物在制备日期拍摄的照片。

图7b示出了对根据本发明一个实施例的包含核-壳网络结构体和功效物质的组合物在制备日期拍摄的照片。

图7c示出了确认根据本发明一个实施例的包含核-壳网络结构体的组合物的剂型长时间保持一定的照片。

图7d示出了确认根据本发明一个实施例的包含核-壳网络结构体和功效物质的组合物的剂型长时间保持一定的照片。

图8示出了用根据本发明一个实施例的核-壳网络结构体进行处理的细胞的细胞生长率的评估结果。

图9示出了作为皮肤保湿屏障标记物的丝聚蛋白的表达率的分析结果，以确认根据本发明一个实施例的核-壳网络结构体的保湿功效。

图10示出了作为皮肤保湿屏障标记物的KRT 1的表达促进程度的分析结果，以确认根据本发明一个实施例的核-壳网络结构体的保湿功效。

图11示出了作为皮肤保湿屏障标记物的KRT 10的表达促进程度的分析结果，以确认根据本发明一个实施例的核-壳网络结构体的保湿功效。

图12示出了作为皮肤保湿屏障标记物的CLDN 4的表达促进程度的分析结果，以确认根据本发明一个实施例的核-壳网络结构体的保湿功效。

图13示出了作为皮肤保湿屏障标记物的OCLN的表达促进程度的分析结果，以确认根据本发明一个实施例的核-壳网络结构体的保湿功效。

图14示出了根据本发明一个实施例的核-壳网络结构体在不同浓度下的皮肤再生程度的分析结果。

图15示出了作为本发明的阳性对照组的羟基积雪草苷(Madecassoside)的皮肤再生程度的分析结果。

图16示出了根据本发明一个实施例的核-壳网络结构体在相对于组合物总重量的浓度为0.25重量％时的皮肤再生程度的分析结果。

图17示出了将根据本发明一个实施例的核-壳网络结构体处理组的皮肤细胞图像与作为阴性对照组的未处理组及作为阳性对照组的羟基积雪草苷处理组进行比较的图。

具体实施方式

以下，将结合附图更详细地描述本申请的实施例。然而，本申请中公开的技术不限于本说明书所描述的实施例，并且可以以其他形式实施。应理解的是，本说明书描述的实施例是为了使本公开的内容更加透彻和完整、并且将本申请的构思充分传达给本领域技术人员而提供的。为了在附图中清楚地表示每个组成要素，因此放大示出了组成要素的宽度或厚度等尺寸。此外，尽管为了便于描述仅示出了组成要素的一部分，但是本领域技术人员将能够容易地理解其余的部分。此外，在不超出本申请的技术构思的前提下，本领域技术人员可以通过各种其他形式实现本申请的构思。

附图中的图1示出了本发明的示例性实施方式。参照图1进行说明时，本发明的一个实施例为通过使用生物聚合物而形成的核-壳网络结构体，所述核可以包含醇溶蛋白，所述壳可以包含普鲁兰多糖和果胶。此时，所述普鲁兰多糖包围所述核，所述果胶位于所述壳的最外层并可以在所述核-壳颗粒之间形成互联网络。

在本说明书中，将在所述核-壳颗粒之间形成互联网络的核-壳网络结构体命名为“ECOWEB”。

此外，在一个实施例中，本发明可以提供一种用于增溶难溶性功效物质的组合物，其包含所述核-壳网络结构体。在一个实施例中，所述难溶性功效物质可指疏水性且醇溶性(alcohol soluble)的物质。在另一个实施例中，本发明可以提供所述核-壳网络结构体在制备用于增溶难溶性功效物质的组合物中的用途。在另一个实施例中，本发明可以提供增溶难溶性功效物质的方法，其包括将有效剂量的所述核-壳网络结构体添加到包含难溶性功效物质的组合物中。在另一个实施例中，本发明可以提供作为用于增溶难溶性功效物质的有效成分的所述核-壳网络结构体。

在本说明书中，所述术语“生物聚合物”也可以称为“生物高分子”，对应于“合成高分子”。所述生物聚合物为构成生物体或由生物体产生的高分子物质，并且以广义使用，包括核酸、多糖类、蛋白质等。

在本说明书中，作为植物蛋白质的一种，所述醇溶蛋白为含有大量谷氨酰胺和脯氨酸的单纯蛋白质。所述醇溶蛋白具有在表面分布有亮氨酸(leucine)、异亮氨酸(isoleucine)等的疏水性氨基酸的自组装(self-assembly)疏水基(hydrophobicity)。因此，所述醇溶蛋白为类似纳米棒(nanorod)的形态，其以难溶性功效物质为中心进行包围来形成砖形(brick-like)叠层结构，从而可以有效地捕集难溶性功效物质。在一个实施例中，所述醇溶蛋白可以包含选自玉米醇溶蛋白(zein)、大麦醇溶蛋白(hordein)、黑麦醇溶蛋白(secalin)、高梁醇溶蛋白(kafirin)、小麦醇溶蛋白(gliadin)、大米醇溶蛋白以及燕麦醇溶蛋白(avenin)中的一种或多种，但不限于此，只要是属于醇溶蛋白的物质即可。具体地，所述玉米醇溶蛋白可以从玉米中分离或提取、大麦醇溶蛋白可以从大麦中分离或提取、黑麦醇溶蛋白可以从黑麦中分离或提取、高梁醇溶蛋白可以从高粱中分离或提取、小麦醇溶蛋白可以从小麦中分离或提取、大米醇溶蛋白可以从大米中分离或提取、燕麦醇溶蛋白可以从燕麦中分离或提取。

在一个实施例中，基于核-壳网络结构体的总重量，所述结构体可以包含0.025重量％至7.5重量％的所述醇溶蛋白。此外，在一个实施例中，基于所述组合物的总重量，所述醇溶蛋白的含量可以为0.01重量％至3重量％。所述醇溶蛋白与难溶性功效物质通过疏水相互作用(hydrophobic interaction)起到皮克林(Pickering)乳液的核的作用，而当所述醇溶蛋白的含量超出所述范围时的问题在于，所述难溶性功效物质和玉米醇溶蛋白会形成为一个凝结的大沉淀物形态，而不是在网络结构体内分散存在的多个核-壳颗粒，因此不能形成结构体，且剂型本身会分离为难溶性和水溶性。具体地，基于组合物的总重量，所述醇溶蛋白的含量可以为0.01重量％或以上、0.02重量％或以上、0.03重量％或以上、0.04重量％或以上、0.05重量％或以上、0.06重量％或以上、0.07重量％或以上、0.08重量％或以上、0.09重量％或以上、0.1重量％或以上、0.2重量％或以上、0.3重量％或以上、0.4重量％或以上、0.5重量％或以上、0.6重量％或以上、0.7重量％或以上、0.8重量％或以上、0.9重量％或以上、1重量％或以上、2重量％或以上、或3重量％或以上。在一个实施例中，基于组合物的总重量，所述醇溶蛋白的含量可以为3重量％或以下、2重量％或以下、1重量％或以下、0.9重量％或以下、0.8重量％或以下、0.7重量％或以下、0.6重量％或以下、0.5重量％或以下、0.4重量％或以下、0.3重量％或以下、0.2重量％或以下、0.1重量％或以下、0.09重量％或以下、0.08重量％或以下、0.07重量％或以下、0.06重量％或以下、0.05重量％或以下、0.04重量％或以下、0.03重量％或以下、0.02重量％或以下、或0.01重量％或以下。

在本说明书中，所述普鲁兰多糖为通过从黑酵母菌(fungus Aureobasidiumpullulans)中分离多糖并进行纯化而获得的物质，可以包含由三个葡萄糖分子经α-1,4糖苷键连接而成的三糖，即麦芽三糖(maltotriose)。因具有亲水性而易溶解于水，但不溶于醇类。由于具有成膜性和粘附性，因此可通过对包含所述醇溶蛋白的核进行涂覆，以形成核-壳结构。

在一个实施例中，基于核-壳网络结构体的总重量，所述结构体可以包含0.025重量％至12.5重量％的所述普鲁兰多糖。此外，在一个实施例中，基于组合物的总重量，所述普鲁兰多糖的含量可以为0.01重量％至5重量％。当所述普鲁兰多糖的含量在所述范围内时，可以有效地在核上形成膜，因此可以提供一级增溶稳定性。当普鲁兰多糖的含量低于0.01重量％时，在组合物内无法有效地形成核-壳结构，因此这些结构可能被分解，会导致难溶性功效物质的析出。具体地，基于组合物的总重量，所述普鲁兰多糖的含量可以为0.01重量％或以上、0.02重量％或以上、0.03重量％或以上、0.04重量％或以上、0.05重量％或以上、0.06重量％或以上、0.07重量％或以上、0.08重量％或以上、0.09重量％或以上、0.1重量％或以上、0.2重量％或以上、0.3重量％或以上、0.4重量％或以上、0.5重量％或以上、0.6重量％或以上、0.7重量％或以上、0.8重量％或以上、0.9重量％或以上、1重量％或以上、2重量％或以上、3重量％或以上、4重量％或以上、或5重量％。在一个实施例中，基于组合物的总重量，所述普鲁兰多糖的含量可以为5重量％或以下、4重量％或以下、3重量％或以下、2重量％或以下、1重量％或以下、0.9重量％或以下、0.8重量％或以下、0.7重量％或以下、0.6重量％或以下、0.5重量％或以下、0.4重量％或以下、0.3重量％或以下、0.2重量％或以下、0.1重量％或以下、0.09重量％或以下、0.08重量％或以下、0.07重量％或以下、0.06重量％或以下、0.05重量％或以下、0.04重量％或以下、0.03重量％或以下、0.02重量％或以下、或0.01重量％或以下。

在本说明书中，所述果胶为在植物中包围纤维素-半纤维素网络的水合凝胶，是一种以半乳糖的氧化物，即以半乳糖醛酸为主成分的多糖。当核-壳结构仅由醇溶蛋白和普鲁兰多糖组成时，如果在负载极少量或以上的难溶性功效物质时提高功效物质的含量，则因重量可能会出现核壳被沉淀的增溶状态。对此，在本发明的一个实施例中，通过在壳中包含所述果胶，使核-壳颗粒之间形成网络(interconnect)形态的结构，从而可以稳定地支撑所述核-壳颗粒并使沉淀程度最小化。因此，不仅能够长时间稳定地负载更高含量的难溶性功效物质，并且在组合物剂型中能够均匀地分散及增溶所述物质。

在一个实施例中，基于核-壳网络结构体的总重量，所述结构体可以包含0.05重量％至10重量％的所述果胶。此外，在一个实施例中，基于组合物的总重量，所述果胶的含量可以为0.01重量％至2重量％。当所述果胶的含量在所述范围内时，可以具有有效地形成于核-壳颗粒之间且物理上形成稳定的结构，从而可以提供二级增溶稳定性。当所述果胶的含量低于0.01重量％时，无法稳定形成用于支撑核-壳颗粒的网络，因此组合物的剂型会出现分离并析出难溶性功效物质。

具体地，基于组合物的总重量，所述果胶的含量可以为0.01重量％或以上、0.02重量％或以上、0.03重量％或以上、0.04重量％或以上、0.05重量％或以上、0.06重量％或以上、0.07重量％或以上、0.08重量％或以上、0.09重量％或以上、0.1重量％或以上、0.2重量％或以上、0.3重量％或以上、0.4重量％或以上、0.5重量％或以上、0.6重量％或以上、0.7重量％或以上、0.8重量％或以上、0.9重量％或以上、1重量％或以上、或2重量％。在一个实施例中，基于组合物的总重量，所述果胶的含量可以为2重量％或以下、1重量％或以下、0.9重量％或以下、0.8重量％或以下、0.7重量％或以下、0.6重量％或以下、0.5重量％或以下、0.4重量％或以下、0.3重量％或以下、0.2重量％或以下、0.1重量％或以下、0.09重量％或以下、0.08重量％或以下、0.07重量％或以下、0.06重量％或以下、0.05重量％或以下、0.04重量％或以下、0.03重量％或以下、0.02重量％或以下、或0.01重量％或以下。

在一个实施例中，所述核-壳颗粒的平均粒径可以大于100nm、且小于或等于600nm。所述平均粒径是指颗粒内最大直径的平均值，粒径的平均值是指分布于所述结构体或组合物中的至少90％或以上的核-壳颗粒的大小的平均值。具体地，所述粒径的平均值可以是指，分布于结构体或组合物中的至少90％或以上、91％或以上、92％或以上、93％或以上、94％或以上、95％或以上、96％或以上、97％或以上、98％或以上、或99％或以上的液滴的颗粒内最大直径的平均值。在本发明中，将包含普鲁兰多糖及果胶的亲水性多糖涂覆于如上所述的具有疏水性的核上，并且所述核-壳颗粒之间通过网络(interconnect)相互紧密连接，因此在包含所述核-壳网络结构体的组合物中，平均粒径大于100nm、且小于或等于600nm的颗粒均匀分布的结构可以长时间稳定保持，且不会发生沉淀。具体地，所述核-壳颗粒的平均粒径可以为101nm或以上、150nm或以上、200nm或以上、250nm或以上、300nm或以上、350nm或以上、400nm或以上、450nm或以上、500nm或以上、或550nm或以上。具体地，所述核-壳颗粒的平均粒径可以为600nm或以下、550nm或以下、500nm或以下、450nm或以下、400nm或以下、350nm或以下、300nm或以下、250nm或以下、200nm或以下、或150nm或以下。

此外，在一个实施例中，所述组合物包含如上所述的生物亲和性的生物聚合物，从而能够通过促进皮肤细胞的增殖来增强皮肤屏障。具体地，在一个实施例中，本发明可以提供一种用于增强皮肤屏障的组合物，其包含作为有效成分的所述核-壳网络结构体。在另一个实施例中，本发明可以提供所述核-壳网络结构体在制备用于增强皮肤屏障的组合物中的用途。在另一个实施例中，本发明可以提供增强皮肤屏障的方法，其包括将有效剂量的所述核-壳网络结构体给药于所需受试者。在另一个实施例中，所述方法可以包括向皮肤屏障恢复功能降低的受试者给药。在另一个实施例中，本发明可以提供作为用于增强皮肤屏障的组合物中的有效成分的所述核-壳网络结构体。此外，可以提供作为用于增强皮肤屏障的有效成分的所述核-壳网络结构体的非治疗性用途。

在一个实施例中，本发明可以提供一种用于皮肤保湿的组合物，其包含作为有效成分的所述核-壳网络结构体。在另一个实施例中，本发明可以提供所述核-壳网络结构体在制备用于皮肤保湿的组合物中的用途。在另一个实施例中，本发明可以提供皮肤保湿的方法，其包括将有效剂量的所述核-壳网络结构体给药于所需受试者。在另一个实施例中，本发明可以提供作为用于皮肤保湿的组合物中的有效成分的所述核-壳网络结构体。此外，可以提供作为用于皮肤保湿的有效成分的所述核-壳网络结构体的非治疗性用途。

在一个实施例中，本发明可以提供一种用于皮肤再生的组合物，其包含作为有效成分的所述核-壳网络结构体。在另一个实施例中，本发明可以提供所述核-壳网络结构体在制备用于皮肤再生的组合物中的用途。在另一个实施例中，本发明可以提供皮肤再生的方法，其包括将有效剂量的所述核-壳网络结构体给药于所需受试者。在另一个实施例中，所述方法可以包括向皮肤再生功能降低、或皮肤上有伤口的受试者给药。在另一个实施例中，本发明可以提供作为用于皮肤再生的组合物中的有效成分的所述核-壳网络结构体。此外，可以提供作为用于皮肤再生的有效成分的所述核-壳网络结构体的非治疗性用途。

在一个实施例中，基于组合物的总重量，所述用于增强皮肤屏障、皮肤保湿、或皮肤再生的组合物可包含0.005重量％或以上且小于1重量％的所述核-壳网络结构体。具体地，基于组合物的总重量，所述核-壳网络结构体在所述组合物中的含量可以为0.005重量％或以上、0.006重量％或以上、0.007重量％或以上、0.008重量％或以上、0.009重量％或以上、0.01重量％或以上、0.02重量％或以上、0.03重量％或以上、0.04重量％或以上、0.05重量％或以上、0.06重量％或以上、0.07重量％或以上、0.08重量％或以上、0.09重量％或以上、0.1重量％或以上、0.2重量％或以上、0.3重量％或以上、0.4重量％或以上、0.5重量％或以上、0.6重量％或以上、0.7重量％或以上、0.8重量％或以上、或0.9重量％或以上。此外，基于组合物的总重量，所述核-壳网络结构体在所述组合物中的含量可以为小于1.0重量％、0.9重量％或以下、0.8重量％或以下、0.7重量％或以下、0.6重量％或以下、0.5重量％或以下、0.4重量％或以下、0.3重量％或以下、0.2重量％或以下、0.1重量％或以下、0.09重量％或以下、0.8重量％或以下、0.7重量％或以下、0.6重量％或以下、0.5重量％或以下、0.4重量％或以下、0.3重量％或以下、0.2重量％或以下、0.1重量％或以下、0.09重量％或以下、0.08重量％或以下、0.07重量％或以下、0.06重量％或以下、0.05重量％或以下、0.04重量％或以下、0.03重量％或以下、0.02重量％或以下、0.01重量％或以下、0.009重量％或以下、0.008重量％或以下、0.007重量％或以下、或者0.006重量％或以下。

在一个实施例中，所述核-壳网络结构体的给药剂量可以为1mg/kg/天至1g/kg/天。在一个实施例中，所述核-壳网络结构体的给药剂量可以根据对受试者的年龄、性别、体重和受试者的具体疾病或病理、疾病或病理的严重程度、给药途径等的判断而变化，基于这些因素确定给药剂量属于本领域技术人员的知识范围内。例如，所述给药剂量可以为1mg/kg/日或以上、2mg/kg/日或以上、3mg/kg/日或以上、4mg/kg/日或以上、5mg/kg/日或以上、10mg/kg/日或以上、20mg/kg/日或以上、30mg/kg/日或以上、40mg/kg/日或以上、50mg/kg/日或以上、60mg/kg/日或以上、70mg/kg/日或以上、80mg/kg/日或以上、90mg/kg/日或以上、100mg/kg/日或以上、110mg/kg/日或以上、120mg/kg/日或以上、130mg/kg/日或以上、140mg/kg/日或以上、150mg/kg/日或以上、160mg/kg/日或以上、170mg/kg/日或以上、180mg/kg/日或以上、190mg/kg/日或以上、200mg/kg/日或以上、250mg/kg/日或以上、300mg/kg/日或以上、350mg/kg/日或以上、400mg/kg/日或以上、450mg/kg/日或以上、或500mg/kg/日或以上。此外，所述给药剂量例如可以为1g/kg/日或以下、500mg/kg/日或以下、450mg/kg/日或以下、400mg/kg/日或以下、350mg/kg/日或以下、300mg/kg/日或以下、250mg/kg/日或以下、200mg/kg/日或以下、190mg/kg/日或以下、180mg/kg/日或以下、170mg/kg/日或以下、160mg/kg/日或以下、150mg/kg/日或以下、140mg/kg/日或以下、130mg/kg/日或以下、120mg/kg/日或以下、110mg/kg/日或以下、或100mg/kg/日或以下，但所述给药剂量不以任何方式限定本说明书的范围。

在一个实施例中，本发明提供一种组合物，其包含如上所述的核-壳网络结构体，在所述结构体的核中还包含难溶性功效物质K，所述难溶性功效物质被捕集于所述核的醇溶蛋白中。

在本说明书中，所述难溶性功效物质是指在对皮肤或身体提供有用功效的物质中难以分散于水的疏水性物质，在一个实施例中，可以是疏水性且醇溶性的物质。例如，所述难溶性功效物质可包含选自三萜类化合物(triterpenoid)，其包含齐墩果酸(oleanolicacid)、乌索酸(ursolic cid)及阿江榄仁酸(arjunolic acid)中的一种或多种物质；多酚或多酚衍生物，其包含选自穗花杉双黄酮(amentoflavone)、鞣花酸(Ellagic acid)、芹菜素(Apigenin)、岩白菜素(Berginin)、香叶木素(Diosmetin)、超强抗氧化成分Univestin、白藜芦醇(Resveratrol)、异黄酮(Isoflavones)及儿茶酸(Catechin)中的一种或多种；油性脂肪酸，其包含选自水杨酸(Salicylic acid)、α硫辛酸(Alpha Lipoic Acid)、咖啡因(Caffeine)、生育酚(Tocopherol)、二十二碳六烯酸(DHA-Docosahexaenoic acid)、二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid-EPA)及共轭亚麻酸(conjugated linolenic acid-CLA)中的一种或多种；鞘脂类，其包含选自鞘磷脂(sphingomyelin)、神经节苷脂(Ganglioside)、脑苷脂(Cerebroside)、神经酰胺(ceramide)、糖基神经酰胺(glycosylceramide)、乳糖神经酰胺(lactosyl ceramide)、半乳糖神经酰胺(galactosyl ceramide)及木糖基神经酰胺(xylosyl ceramide)中的一种或多种；皂苷，其包含化合物K(20-O-β-D-吡喃葡萄糖-20(S)-原人参二醇，20-O-β-D-glucopyranosyl-20(S)-protopanaxadiol，Compound K)；胡萝卜素(Carotene)或胡萝卜素衍生物；以及天然提取物，其包含选自银杏叶提取物和红参提取物中的一种或多种中的一种或多种物质，但并不限于此，只要是疏水性且醇溶性的物质即可。

在一个实施例中，基于组合物的总重量，所述难溶性功效物质的含量可以为0.01重量％至5重量％。当所述难溶性功效物质的含量低于0.01重量％时，难溶性功效物质的所需功效可能无法充分发挥。当含量超过5重量％时，可能会抑制核-壳颗粒的形成，并且由于其重量，难溶性功效物质与醇溶蛋白会以形成疏水相互作用的状态发生沉淀，可能导致本发明的核-壳网络结构体发生解体。具体地，基于组合物的总重量，所述难溶性功效物质的含量可以为0.01重量％或以上、0.02重量％或以上、0.03重量％或以上、0.04重量％或以上、0.05重量％或以上、0.06重量％或以上、0.07重量％或以上、0.08重量％或以上、0.09重量％或以上、0.1重量％或以上、0.2重量％或以上、0.3重量％或以上、0.4重量％或以上、0.5重量％或以上、0.6重量％或以上、0.7重量％或以上、0.8重量％或以上、0.9重量％或以上、1重量％或以上、2重量％或以上、3重量％或以上、4重量％或以上、或5重量％或以上。在一个实施例中，基于组合物的总重量，所述难溶性功效物质的含量可以为5重量％或以下、4重量％或以下、3重量％或以下、2重量％或以下、1重量％或以下、0.9重量％或以下、0.8重量％或以下、0.7重量％或以下、0.6重量％或以下、0.5重量％或以下、0.4重量％或以下、0.3重量％或以下、0.2重量％或以下、0.1重量％或以下、0.09重量％或以下、0.08重量％或以下、0.07重量％或以下、0.06重量％或以下、0.05重量％或以下、0.04重量％或以下、0.03重量％或以下、0.02重量％或以下、或0.01重量％或以下。

在一个实施例中，所述组合物可具有选自增强皮肤屏障、皮肤保湿和皮肤再生中的至少一种用途。

在一个实施例中，本发明可以提供所述结构体或包含所述结构体的组合物的制备方法。在一个实施例中，所述方法可以包括：将醇溶蛋白加入到醇溶剂中并进行分散，以形成核的步骤；将普鲁兰多糖逐滴滴入到所述醇溶液中，以形成包围所述核的壳的步骤；通过将果胶加入到添加有所述普鲁兰多糖的醇溶液中来涂覆所述壳的最外层，并在所述壳之间形成网络的步骤；以及从添加有所述果胶的溶液中蒸发出醇，以获得形成有溶解于水相的核-壳网络结构体的溶液的步骤。

在一个实施例中，本发明可以提供一种组合物的制备方法，所述组合物包含负载有所述难溶性功效物质的所述核-壳网络结构体。在一个实施例中，所述方法可以包括：将醇溶蛋白和难溶性功效物质加入到醇溶剂中并进行分散，以形成核的步骤；将普鲁兰多糖逐滴滴入到所述醇溶液中，以形成包围所述核的壳的步骤；通过将果胶加入到添加有所述普鲁兰多糖的醇溶液中来涂覆所述壳的最外层，并在所述壳之间形成网络的步骤；以及从添加有所述果胶的溶液中蒸发出醇，以获得形成有溶解于水相的核-壳网络结构体的溶液的步骤。

在一个实施例中，所述将醇溶蛋白和难溶性功效物质加入到醇溶剂中并进行分散的步骤可包括：在醇溶剂中加入醇溶蛋白，再向其中加入难溶性功效物质并进行分散。

所述醇溶蛋白为可溶于60％至90％醇的单纯蛋白质，可溶于稀释的醇，但不溶于水、无水醇溶液。因此，在一个实施例中，加入到所述醇溶剂的所述醇溶蛋白可以为溶解于60％至90％醇的物质。此外，在一个实施例中，加入所述难溶性功效物质的醇溶剂可以为70％至95％醇。如上所述，当在醇中加入醇溶蛋白和难溶性功效物质时，通过难溶性功效物质和醇溶蛋白之间的疏水相互作用，可以形成由醇溶蛋白捕集难溶性功效物质的结构。

在一个实施例中，加入到所述醇溶液的普鲁兰多糖和果胶可以分别为水相普鲁兰多糖和水相果胶。具体地，所述水相普鲁兰多糖和水相果胶可以分别为普鲁兰多糖水溶液和果胶水溶液，更具体地，可以为1％至10％的普鲁兰多糖水溶液和果胶水溶液。

在一个实施例中，在水相中分别溶解所述普鲁兰多糖和果胶，并将其加入到分散有所述醇溶蛋白或醇溶蛋白和难溶性功效物质的醇溶液中时，会发生相分离现象(Phaseseparation)。由于相分离，包含分散于所述醇的醇溶蛋白或醇溶蛋白和难溶性功效物质的核会析出的同时，会形成醇溶蛋白的自组装叠层结构，从而形成疏水性核。以所述核为中心涂覆普鲁兰多糖，从而形成壳结构，然后形成最外层被果胶包围的核-壳颗粒，这些颗粒稳定地均匀分散于所述醇溶液中，以形成皮克林乳液(Pickering emulsion)。此时，如果将所述溶液的酸度调节为pH2.5至pH6.5，则通过残留的醇使果胶在核-壳颗粒之间形成网络结构。在根据本发明一实施例的所述组合物中，所述网络结构起到核-壳支撑体的作用，因此所述组合物可以负载高含量的难溶性功效物质，并可以长时间保持所述核-壳网络结构稳定分散的结构。

在一个实施例中，所述方法还可以包括：对通过将所述醇溶液的酸度调节为pH2.5至pH6.5而形成核-壳网络结构的溶液进行凝胶化(gelation)的步骤。果胶可以在酸或糖存在时凝胶化。糖的羟基之间会形成氢键或通过钙离子形成离子键。相反，在碱性条件或酸被稀释时，会发生解聚(depolymeration)。此外，当果胶的含量为基于组合物总重量的2重量％或以上且3重量％或以下时，所述溶液自身的黏度变高，从而可以制备凝胶化的溶液。当形成凝胶时的优点在于，可以通过渗透压原理防止微生物污染。

在一个实施例中，所述蒸发醇的步骤的温度不受限制，只要所述温度能够使醇蒸发以获得形成有溶解于水相的核-壳网络结构体的溶液即可，例如，所述温度范围可以为20℃至40℃。

根据本发明的一实施例的所述组合物可以为化妆品组合物。

在一个实施例中，所述根据本发明的化妆品组合物可被制备为包含化妆品学或皮肤病学可接受的介质或基质的剂型。其可以为适用于局部施用的所有剂型，例如，可以制备为溶液、凝胶、固体、糊状无水生成物、通过将油相分散在水相中获得的乳液、悬浮液、微乳液、微胶囊、微小颗粒球或离子型(脂质体)和非离子型的囊泡分散剂及薄膜的形式，或霜、爽肤水、乳液、粉末、软膏、喷雾剂或遮瑕棒的形式。还可以以泡沫的形式、或以进一步包含压缩推进剂的气溶胶组合物的形式使用。这些组合物可以通过本领域的常规方法制备。

在一个实施例中，所述根据本发明的化妆品组合物在包含所述功效成分的同时，还可以在不损害主要效果的范围内优选包含能够对主要效果产生协同效果的其他成分，本领域技术人员可根据其他化妆品组合物的剂型或使用目的毫无困难地适当选择和配制本发明的功效成分及其他成分。此外，在一个实施例中，本发明的化妆品组合物除了包含上述成分之外，还可以根据需要包含在常规化妆品组合物中配制的其他成分。例如为保湿剂、润肤剂、有机颜料和无机颜料、有机粉末、紫外线吸收剂、防腐剂、杀菌剂、抗氧化剂、植物提取物、pH调节剂、醇、色素、香料、血液循环促进剂、冷却剂、止汗剂、纯净水等。本发明的化妆品组合物可包含的其他配制成分不限于此，并可在不损害本发明的目的及效果的范围内选择上述成分的调配量。

根据本发明的一实施例的所述组合物可为食品组合物。

例如，可以加工成包含所述功效成分的发酵乳、奶酪、酸奶、果汁、益生菌和保健食品等的功能性食品，并且可以以各种食品添加剂的形式使用。在一个实施例中，组合物可以是用于保健食品的组合物。在一个实施例中，所述用于保健食品的组合物可以被制备成丸剂、胶囊剂、片剂、颗粒剂、焦糖剂或饮剂等。在另一个实施例中，还可以制备成液体、粉末、颗粒、片剂或茶叶袋等的形式。所述组合物可以通过如简单饮用、注射给药、喷雾给药或挤压给药等的多种方法进行给药。在不损害本发明的主要效果的范围内，所述组合物可以包含对主要效果产生协同效果的其他成分。例如，可以进一步包含香料、色素、杀菌剂、抗氧化剂、防腐剂、保湿剂、增稠剂、无机盐类、乳化剂和合成高分子物质等的添加剂，以改善物理性能。此外，可以进一步包含水溶性维生素、油溶性维生素、高分子肽、高分子多糖和海藻提取物等的辅助成分。本领域技术人员可根据剂型或使用目的适当地选择和配制上述成分，并可在不损害本发明的目的及效果的范围内选择其的添加量。例如，基于组合物的总重量，上述成分的添加量可为0.0001重量％至99.9重量％。

根据本发明的一实施例的所述组合物可为药物组合物。所述药物组合物可进一步包含防腐剂、稳定剂、可湿性粉剂或乳化剂、盐和/或缓冲剂等的用于调节渗透压的药物佐剂、及其他对治疗有用的物质。

在一个实施例中，所述药物组合物可为口服剂型，所述口服剂型例如可包括片剂、丸剂、硬胶囊和软胶囊、液体、悬浮液、乳剂、糖浆剂、粉剂、散剂、细粒剂，颗粒剂、微丸剂等。这些剂型除了包含有效成分以外，还可以包含表面活性剂、稀释剂(例：乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纤维素和甘氨酸)、润滑剂(例：二氧化硅、滑石、硬脂酸及其镁盐或钙盐、以及聚乙二醇)。此外，片剂还可包含如硅酸铝镁、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和聚乙烯吡咯烷酮的粘合剂，并根据具体情况还可包含如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐等的崩解剂、吸收剂、着色剂、调味剂、以及甜味剂等的药物添加剂。所述片剂可以通过常规的混合、制粒或包衣方法进行制备。

在一个实施例中，所述药物组合物可为肠胃外给药剂型，所述肠胃外给药剂型可为直肠、局部、皮下、经皮给药剂型。例如，可为注射剂、滴剂、软膏剂、洗剂、凝胶剂、霜剂、喷雾剂、混悬剂、乳剂、栓剂、贴剂等剂型，但不限于此。

在一个实施例中，所述药物组合物的给药剂量将根据需要治疗的受试者的年龄、性别、体重、需要治疗的具体疾病或病理状态、疾病或病理状态的严重程度、给药途径及处方者的判断而变化。基于这些因素确定给药剂量属于本领域技术人员的知识范围内。例如，所述给药剂量可为1mg/kg/日或以上、或500mg/kg/日或以上，且1g/kg/日或以下、500mg/kg/日或以下、或100mg/kg/日或以下，但所述给药剂量不以任何方式限制本说明书的范围。

【实施例】

以下，将结合实施例、比较例和实验实施例详细描述本发明。本领域技术人员应理解，这些仅作为示例提出，以便更具体地描述本发明，而本发明的范围不受这些实施例、比较例和实验实施例的限制。

【实施例1】

通过以下方法制备根据本发明一个实施例的包含核-壳网络结构体的组合物。

对粉末状的玉米醇溶蛋白进行称量，使其达到基于组合物总重量的0.5重量％，并加入到70％醇水溶液之后，通过搅拌来进行分散。接着，在室温下对溶解于pH7或以下的水相的普鲁兰多糖进行称量，使其达到基于组合物总重量的0.5重量％，并逐滴滴入到所述醇溶液中，通过搅拌来进行溶解。对水相果胶进行称量，使其达到基于组合物总重量的0.5重量％，并加入到所述溶液中。然后，利用蒸发器(Evaporator)蒸发掉所述溶液中的醇，从而获得溶解于水相的最终核-壳网络溶液(core-shell network solution)。

【实施例2】

通过以下方法制备作为本发明一个实施例的包含负载有难溶性功效物质的核-壳网络结构体的组合物。

对粉末状的玉米醇溶蛋白进行称量，使其达到基于组合物总重量的0.5重量％，并加入到70％醇水溶液之后，通过搅拌来进行溶解之后，在所述溶液中加入作为难溶性功效物质的红参皂苷(BioGF1K Complex^TM，爱茉莉太平洋株式会社)，并使其达到基于组合物总重量的1重量％，通过充分的搅拌来进行分散，以在所述玉米醇溶蛋白和功效物质之间形成疏水相互作用。接着，在室温下对溶解于pH7或以下的水相的普鲁兰多糖进行称量，使其达到基于组合物总重量的0.5重量％，加入到所述溶液中并进行搅拌溶解后，对水相果胶进行称量，使其达到基于组合物总重量的0.5重量％，并加入到所述溶液中。然后，利用蒸发器蒸发掉所述溶液中的醇，从而获得溶解于水相的最终核-壳网络溶液。

【比较例1】

通过以下方法制备作为本发明比较例的未包含网络结构的组合物。

对粉末状的玉米醇溶蛋白进行称量，使其达到基于组合物总重量的0.5重量％，并加入到70％醇水溶液之后，通过搅拌来进行分散。接着，在室温下对溶解于pH7或以下的水相的普鲁兰多糖进行称量，使其达到基于组合物总重量的0.5重量％，并逐滴滴入到所述醇溶液中，通过搅拌来进行溶解。然后，利用蒸发器蒸发掉所述溶液中的醇，从而获得溶解于水相的最终核-壳溶液。

【比较例2】

通过以下方法制备作为本发明比较例的未包含网络结构且负载有难溶性功效物质的组合物。

对粉末状的玉米醇溶蛋白进行称量，使其达到基于组合物总重量的0.5重量％，并加入到70％醇水溶液之后，通过搅拌来进行溶解之后，在所述溶液中加入作为难溶性功效物质的红参皂苷(BioGF1K Complex^TM，爱茉莉太平洋株式会社)，并使其达到基于组合物总重量的1重量％，通过充分的搅拌来进行分散，以在所述玉米醇溶蛋白和功效物质之间形成疏水相互作用。接着，在室温下对溶解于pH7或以下的水相的普鲁兰多糖进行称量，使其达到基于组合物总重量的0.5重量％，加入到所述溶液中并进行搅拌溶解。然后，利用蒸发器蒸发掉所述溶液中的醇，从而获得溶解于水相的最终的核-壳网络溶液。

【实验实施例1】粒径及分布的确认

通过利用扫描电子显微镜(Scanning Electrom Microscope，SEM)确认所述比较例1、比较例2、实施例1、实施例2的各组合物中形成的核-壳结构，并分别示于图2和图3。

其结果，在比较例1中，虽然形成了核-壳结构，但所述结构的颗粒之间分布距离较大。在负载有难溶性功效物质的比较例2中，所述分布的结构未能保持并发生解体，颗粒相互凝集。

相反地，在实施例1中，可以确认在核-壳结构之间形成有如网(web)的网络，其支撑着均匀分布于溶液中的颗粒。在负载有难溶性功效物质的实施例2中，也可以确认大小为200nm至500nm的颗粒之间被互联网络连接，并以一定的相隔距离均匀分散(图3)。

图4为所述图3的溶液内结构的放大图，确认到在本发明的实施例中，形成有大小为几百纳米的核-壳结构，并且颗粒被互联网络相互紧密连接并均匀分布。

图5示出了使用马文(Marven)公司的动态光散射(Dynamic light scattering)机器对所述比较例1、比较例2和实施例1、实施例2的溶液中分别形成的颗粒的水力学平均粒径进行测定的结果。在核-壳颗粒之间未形成互联网络的比较例2中负载难溶性功效物质时，其体积相比于比较例1增加了约四倍或以上。相反，在实施例2中负载难溶性功效物质时，大小与未负载难溶性功效物质的情况相比相差不大，粒径仍然约为500nm或以下。这意味着，在本发明中颗粒之间被互联网络紧密连接，能牢固地保持核-壳颗粒自身的结构。

【实验实施例2】剂型稳定性的评估

将所述实施例1、实施例2的各组合物在苛刻条件(室温，4℃，60℃，冷热循环)下进行4周的保管，并确认剂型稳定性。

图6示出了对所述各组合物中核-壳颗粒随时间流逝而变化的大小进行测定的结果，在根据本发明的组合物中可确认到，在未负载难溶性功效物质时(实施例1)和在负载有难溶性功效物质时(实施例2)，均保持500nm或以下的粒径分布。在将难溶性功效物质捕集在核中的实施例2中，与初期相比，尺寸保持在平均400nm或以下，在仅包含核-壳网络结构体而不包含难溶性功效物质的实施例1中，剂型的粒径保持在约500nm。图7a至图7d示出了在制备日期和4周后剂型内分散稳定性的确认结果，证实了即使在苛刻条件下保管4周后，实施例1和实施例2均保持分散稳定性且没有沉淀。

在实施例2中形成的核-壳颗粒相对更接近球形，互联的网络结构的形成结果也优于对照，该结果是由于疏水相互作用使醇溶蛋白和难溶性功效物质组成的核被相分离的同时，所述颗粒本身起着保持界面稳定性的表面活性剂的作用，并且果胶起着能形成链状结构网络的基底作用。即，该结果是由于包含核-壳颗粒的溶液成为皮克林乳液的同时，果胶通过醇形成链状结构的网络，使物理界面稳定性进一步提高。

【实验实施例3】皮肤细胞增殖功效的评估

确认所述实施例1和实施例2在皮肤角质形成细胞中的细胞毒性。基于96孔板，将10μl的CCK-8试剂添加至培养中的成纤维细胞(Normal human fibroblasts，购自Gibco)中，并在37℃下放置2小时后，在450nm下测定吸光度。此时，将所述实施例1和实施例2的溶液以每个培养基2ppm(0.0002重量％)的量处理至所述培养细胞的培养基中。即，所施用的核-壳网络结构体的剂量为2mg/kg。用每个样品相对于未处理样品的绝对光密度的百分比(％)来表示所述细胞存活力。

CCK8细胞毒性测试结果如图8所示，与未处理组(对照组)相比，实施例1和包含难溶性功效物质的实施例2均促进细胞生长。这意味着根据本发明的组合物能够提供增强皮肤屏障的功效。

【实施例3】

对粉末状的玉米醇溶蛋白进行称量，使其达到基于组合物总重量的0.025％重量％，并加入到70％醇水溶液之后，通过搅拌来进行分散。接着，在室温下对溶解于pH7或以下的水相的普鲁兰多糖进行称量，使其达到基于组合物总重量的0.05％重量％，并逐滴滴入到所述醇溶液中，通过搅拌来进行溶解。对水相果胶进行称量，使其达到基于组合物总重量的0.125％重量％，并加入到所述溶液中。然后，利用蒸发器蒸发掉所述溶液中的醇，从而获得溶解于水相的最终核-壳网络溶液。

【比较例3】

对粉末状的玉米醇溶蛋白进行称量，使其达到基于组合物总重量的0.025重量％，并加入到70％醇水溶液之后，通过搅拌来进行分散。接着，在室温下对溶解于pH7或以下的水相的普鲁兰多糖进行称量，使其达到基于组合物总重量的0.05重量％，并逐滴滴入到所述醇溶液中，通过搅拌来进行溶解。然后，利用蒸发器蒸发掉所述溶液中的醇，从而获得溶解于水相的最终核-壳溶液。

【实验实施例4】皮肤保湿功效的评估

通过以下方法确认根据本发明一个实施例的包含核-壳网络结构体的组合物的皮肤保湿功效。

将人毛囊角质形成细胞(Human hair follicular keratinocyte，购自全球生物资源中心(ATCC))以3×10⁵个细胞/孔的量接种(seeding)在6孔板，并培养24小时，然后用实施例3或比较例3进行处理，并进一步培养24小时。然后，使用英杰(Invitrogen)公司的TriZol试剂提取RNA，并使用英杰公司的superscript 合成cDNA。通过使用特异性引物和利用KGF(keratinocyte growth factor，角质形成细胞生长因子)及VEGF(Vascularendothelial growth factor，血管内皮生长因子)生长因子的Taqman基因表达分析工具，对已知为皮肤保湿因子的丝聚蛋白(智人丝聚蛋白mRNA的NCBI参考序列：NM_002016.2)、KRT 1(智人角蛋白1mRNA的NCBI参考序列：NM_006121.4)、KRT10(智人角蛋白10mRNA的NCBI参考序列：NM_000421.4)、CLDN 4(智人紧密连接蛋白(claudin)4mRNA的NCBI参考序列：NM_001305.4)及OCLN(智人闭合蛋白(occluding)的转录变体1mRNA的NCBI参考序列：NM_002538.4)进行qPCR(定量聚合酶链反应)，并分析各个mRNA基因的表达量。/>

其结果如图9至图13所示，可确认到，与未处理组(对照)相比，在用实施例3的核-壳网络组合物(ECOWEB)进行处理的组中，促进了皮肤保湿因子的基因表达量。其增加量显着高于不包含网络结构的比较例3。

【实验实施例5】皮肤再生功效的评估

通过以下方法确认根据本发明一个实施例的包含核-壳网络结构体的组合物的皮肤再生功效。

首先，将购自CLS公司(Cat no.300493)的人角质形成细胞株(Humankeratinocyte cell line，HaCaT)以2.0×10⁵个细胞/600μL的浓度接种到含有10％胎牛血清(Gibco，#16000-044)及抗生素(Lonza，#17-602E)的DMEM(Lonza，#12-604F)细胞培养液的24孔细胞培养板中。在37℃、5％ CO₂的培养箱中将其培养24小时，然后用含有1％胎牛血清的DMEM培养液进行替换，并进一步培养16小时。在确认培养板上充满细胞后，通过使用刮擦器(SPL公司，#SPL201925)划出线型划痕以损伤细胞，并将其洗涤2次。按照与所述实施例3相同的方法制备核-壳网络溶液，核-壳网络结构体基于溶液总重量的含量分别为0.005重量％、0.25重量％、0.5重量％和1重量％(实施例4至实施例7)。在含有所述受损细胞的DMEM培养液(含有1％胎牛血清)中用所述实施例4至实施例7的核-壳网络溶液进行处理，并使其浓度达到0.000001重量％、0.000005重量％、0.0001重量％和0.0002重量％。即，所施用的核-壳网络结构体的剂量分别为1mg/kg、5mg/kg、100mg/kg及200mg/kg。

为了确认本发明的效果，将未处理所述核-壳网结构体的未处理组作为阴性对照组，将与上述相同的方法处理有20μM的已知具有优异的皮肤再生功效的羟基积雪草苷(制造商：Sigma Aldrich，产品编号：M6949，产品名称：MadecassosidefromCentellaasiatica)的组作为阳性对照组。

将所述阴性对照组、阳性对照组及各浓度的核-壳网络结构体处理组放在置于CO₂培养箱内的时差显微镜(time-lapse microscopy；JuLI^TM Stage，NanoEnTek公司)的平台上，对每个孔在48小时内以1小时间隔反复拍摄相同位置。然后，通过利用显微镜自身的软件分析工具(Wound Healing tool)，从各个时间拍摄的图像中导出伤口愈合面积(woundhealing area，％)值。

其结果，如图14所示，在用0.25重量％的所述核-壳网络结构体进行处理的组中皮肤再生功效最为优异，当处理1重量％时，约24小时为止的再生功效稍高于作为未处理组的阴性对照组，但48小时后的皮肤再生程度与作为未处理组的阴性对照组近似。这是由于所述核-壳网络结构体中形成网络的果胶的强负电荷而引起的相互作用的影响。

从图14至图16可确认到，对于48小时后再生的细胞面积值，阴性对照组为30.06％，用20μM进行处理的阳性对照组(Madecassoside)为41.25％(阴性对照的137倍)，用0.25重量％的核-壳网络结构体进行处理时为41.88％，其皮肤再生程度比阴性对照组高139倍。图17示出了作为图15和图16中计算再生细胞面积值的依据的显微镜拍摄图像。用0.005重量％的核-壳网络结构体进行处理时为32.03％(阴性对照组的106倍)，用0.5重量％的核-壳网络结构体进行处理时为37.35％(阴性对照组的124倍)。这意味着根据本发明一个实施例的核-壳网络结构体具有优异的皮肤再生功效。

本发明可以提供以下实施方式作为实施例。

第1实施方式可提供一种核-壳网络结构体，其包含：由包含醇溶蛋白(prolamin)的核(core)；以及包含普鲁兰多糖(pullulan)和果胶(pectin)的壳(shell)所组成的核-壳颗粒，其中，所述普鲁兰多糖包围所述核，所述果胶位于所述壳的最外层并在所述核-壳颗粒之间形成互联网络。

第2实施方式可提供根据第1实施方式所述的核-壳网络结构体，所述醇溶蛋白包含选自玉米醇溶蛋白、大麦醇溶蛋白、黑麦醇溶蛋白、高梁醇溶蛋白、小麦醇溶蛋白、大米醇溶蛋白以及燕麦醇溶蛋白中的一种或多种物质。

第3实施方式可提供根据第1或第2实施方式所述的核-壳网络结构体，基于结构体的总重量，所述结构体包含：0.025重量％至7.5重量％的醇溶蛋白；0.025重量％至12.5重量％的普鲁兰多糖；以及0.05重量％至10重量％的果胶。

第4实施方式可提供根据第1至3实施方式中任意一个或以上所述的核-壳网络结构体，所述核-壳颗粒的平均粒径大于100nm、且小于或等于600nm。

第5实施方式可提供一种用于增溶难溶性功效物质的组合物，其包含根据第1至4实施方式中任意一个或以上所述的结构体。

第6实施方式可提供根据第1至5实施方式中任意一个或以上所述的用于增溶难溶性功效物质的组合物，所述难溶性功效物质为疏水性且醇溶性(alcohol soluble)的物质。

第7实施方式可提供一种用于选自增强皮肤屏障、皮肤保湿、及皮肤再生中的一种或多种的组合物，其包含作为有效成分的根据第1至4实施方式中任意一个或以上所述的结构体。

第8实施方式可提供根据第1至7实施方式中任意一个或以上所述的组合物，基于组合物的总重量，所述有效成分的含量为大于或等于0.005重量％、且小于1重量％。

第9实施方式可提供根据第1至8实施方式中任意一个或以上所述的组合物，所述有效成分的给药剂量为1mg/kg/日至500mg/kg/日。

第10实施方式可提供一种组合物，其包含根据第1至4实施方式中任意一个或以上所述的结构体，在所述结构体的核中还包含有难溶性功效物质，所述难溶性功效物质被捕集于所述核的醇溶蛋白中。

第11实施方式可提供根据第1至10实施方式中任意一个或以上所述的组合物，所述难溶性功效物质为疏水性且醇溶性的物质。

第12实施方式可提供根据第1至11实施方式中任意一个或以上所述的组合物，所述核的醇溶蛋白以难溶性功效物质为中心形成砖形(brick-like)叠层结构。

第13实施方式可提供根据第1至12实施方式中任意一个或以上所述的组合物，所述难溶性功效物质包含选自三萜类化合物，其包含齐墩果酸、乌索酸及阿江榄仁酸中的一种或多种物质；多酚或多酚衍生物，其包含选自穗花杉双黄酮、鞣花酸、芹菜素、岩白菜素、香叶木素、超强抗氧化成分Univestin、白藜芦醇、异黄酮及儿茶酸中的一种或多种；油性脂肪酸，其包含选自水杨酸、α硫辛酸、咖啡因、生育酚、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸及共轭亚麻酸中的一种或多种；鞘脂类，其包含选自鞘磷脂、神经节苷脂、脑苷脂、神经酰胺、糖基神经酰胺、乳糖神经酰胺、半乳糖神经酰胺及木糖基神经酰胺中的一种或多种；皂苷，其包含化合物K(20-O-β-D-吡喃葡萄糖-20(S)-原人参二醇，Compound K)；胡萝卜素或胡萝卜素衍生物；以及天然提取物，其包含选自银杏叶提取物和红参提取物中的一种或多种中的一种或多种物质。

第14实施方式可提供根据第1至13实施方式中任意一个或以上所述的组合物，基于组合物的总重量，所述组合物包含：0.01重量％至3重量％的醇溶蛋白；0.01重量％至5重量％的普鲁兰多糖；以及0.01重量％至2重量％的果胶。

第15实施方式可提供根据第1至14实施方式中任意一个或以上所述的组合物，基于组合物的总重量，所述难溶性功效物质的含量为0.01重量％至10重量％。

第16实施方式可提供根据第1至15实施方式中任意一个或以上所述的组合物，所述组合物具有选自增强皮肤屏障、皮肤保湿、及皮肤再生中的一种或多种用途。

第17实施方式可提供根据第1至16实施方式中任意一个或以上所述的组合物，所述组合物为化妆品组合物。

第18实施方式可提供根据第1至17实施方式中任意一个或以上所述的结构体的制备方法，其包括：将醇溶蛋白加入到醇溶剂中并进行分散，以形成核的步骤；将普鲁兰多糖逐滴(drop-by-drop)滴入到所述醇溶液中，以形成包围所述核的壳的步骤；通过将果胶加入到添加有所述普鲁兰多糖的醇溶液中来涂覆所述壳的最上层，并在所述壳之间形成网络的步骤；以及从添加有所述果胶的溶液中蒸发出醇，以获得形成有溶解于水相的核-壳网络(core-shell network)结构体的溶液的步骤。

第19实施方式可提供根据第1至18实施方式中任意一个或以上所述的组合物的制备方法，其包括：将醇溶蛋白和难溶性功效物质加入到醇溶剂中并进行分散，以形成核的步骤；将普鲁兰多糖逐滴滴入到所述醇溶液中，以形成包围所述核的壳的步骤；通过将果胶加入到添加有所述普鲁兰多糖的醇溶液中来涂覆所述壳的最外层，并在所述壳之间形成网络的步骤；以及从添加有所述果胶的溶液中蒸发出醇，以获得形成有溶解于水相的核-壳网络结构体的溶液的步骤。

第20实施方式可提供根据第1至19实施方式中任意一个或以上所述的制备方法，在所述壳之间形成网络的步骤还包括：对通过将所述醇溶液的酸度调节为pH2.5至pH6.5而形成核-壳网络结构的溶液进行凝胶化(gelation)的步骤。

第21实施方式可提供根据第1至20实施方式中任意一个或以上所述的制备方法，所述蒸发出醇的步骤的温度为20℃至40℃。

Claims

1.一种核-壳网络结构体在制备用于选自增强皮肤屏障、皮肤保湿及皮肤再生中的一种或多种的组合物中的用途，

所述核-壳网络结构体包含：由包含醇溶蛋白的核；以及包含普鲁兰多糖和果胶的壳所组成的核-壳颗粒，

其中，所述普鲁兰多糖包围所述核，所述果胶位于所述壳的最外层，并且通过在所述壳中包含所述果胶，使所述核-壳颗粒之间形成网络以相互紧密连接，

基于组合物的总重量，所述核-壳网络结构体的含量为大于或等于0.005重量％、且小于1重量％，

基于所述核-壳网络结构体的总重量，所述核-壳网络结构体包含：

0.025重量％至7.5重量％的醇溶蛋白；

0.025重量％至12.5重量％的普鲁兰多糖；以及

0.05重量％至10重量％的果胶，

其中所述核-壳颗粒的平均粒径大于100nm且小于等于600nm，

所述核-壳网络结构体的制备方法包括：

将醇溶蛋白加入到醇溶剂中并进行分散，以形成核的步骤；

将普鲁兰多糖加入到醇溶液中，以形成包围所述核的壳的步骤；

通过将果胶加入到添加有所述普鲁兰多糖的醇溶液中来涂覆所述壳的最外层，并在所述壳之间形成网络的步骤；以及

从添加有所述果胶的溶液中蒸发出醇，以获得形成有溶解于水相的核-壳网络结构体的溶液的步骤。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述醇溶蛋白包含选自玉米醇溶蛋白、大麦醇溶蛋白、黑麦醇溶蛋白、高梁醇溶蛋白、小麦醇溶蛋白、大米醇溶蛋白以及燕麦醇溶蛋白中的一种或多种物质。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物在所述结构体的核中还包含有难溶性功效物质，所述难溶性功效物质被捕集于所述核的醇溶蛋白中。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述难溶性功效物质为疏水性且醇溶性的物质。

5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述核的醇溶蛋白以难溶性功效物质为中心形成砖形叠层结构。

6.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述难溶性功效物质包含选自以下物质中的一种或多种：

齐墩果酸、乌索酸、阿江榄仁酸、穗花杉双黄酮、鞣花酸、芹菜素、岩白菜素、香叶木素、超强抗氧化成分Univestin、白藜芦醇、异黄酮、儿茶酸、水杨酸、α硫辛酸、咖啡因、生育酚、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、共轭亚麻酸、鞘磷脂、神经节苷脂、脑苷脂、神经酰胺、糖基神经酰胺、乳糖神经酰胺、半乳糖神经酰胺、木糖基神经酰胺、20-O-β-D-吡喃葡萄糖-20(S)-原人参二醇、胡萝卜素、银杏叶提取物和红参提取物。

7.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，基于组合物的总重量，所述组合物包含：

0.01重量％至3重量％的醇溶蛋白；

0.01重量％至5重量％的普鲁兰多糖；以及

0.01重量％至2重量％的果胶。

8.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，基于组合物的总重量，所述难溶性功效物质的含量为0.01重量％至10重量％。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的用途，其特征在于，所述组合物为化妆品组合物。

10.一种核-壳网络结构体在制备用于增溶难溶性功效物质的增溶剂中的用途，

基于增溶剂的总重量，所述核-壳网络结构体的含量为大于或等于0.005重量％、且小于1重量％，

0.025重量％至7.5重量％的醇溶蛋白；

0.025重量％至12.5重量％的普鲁兰多糖；以及

0.05重量％至10重量％的果胶，

其中所述核-壳颗粒的平均粒径大于100nm且小于等于600nm，

所述难溶性功效物质为醇溶性的物质，

所述核-壳网络结构体的制备方法包括：

将醇溶蛋白加入到醇溶剂中并进行分散，以形成核的步骤；

11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于，所述难溶性功效物质为疏水性的物质。

12.一种组合物，其包含核-壳网络结构体，

在所述结构体的核中还包含有难溶性功效物质，所述难溶性功效物质被捕集于所述核的醇溶蛋白中，

基于组合物的总重量，所述组合物包含：

0.01重量％至3重量％的醇溶蛋白；

0.01重量％至5重量％的普鲁兰多糖；以及

0.01重量％至2重量％的果胶，

所述核-壳颗粒的平均粒径大于100nm且小于或等于600nm，

所述难溶性功效物质为醇溶性的物质，

所述核-壳网络结构体的制备方法包括：

将醇溶蛋白和难溶性功效物质加入到醇溶剂中并进行分散，以形成核的步骤；

13.根据权利要求12所述的组合物，其特征在于，所述难溶性功效物质为疏水性的物质。

14.根据权利要求12所述的组合物，其特征在于，所述核的醇溶蛋白以难溶性功效物质为中心形成砖形叠层结构。

15.根据权利要求12所述的组合物，其特征在于，所述难溶性功效物质包含选自以下物质中的一种或多种：

16.根据权利要求12所述的组合物，其特征在于，基于组合物的总重量，所述难溶性功效物质的含量为0.01重量％至10重量％。

17.根据权利要求12所述的组合物，其特征在于，所述组合物具有选自增强皮肤屏障、皮肤保湿和皮肤再生中的一种或多种用途。

18.根据权利要求12所述的组合物，其特征在于，所述组合物为化妆品组合物。

19.一种根据权利要求12至18中任一项所述的组合物的制备方法，其包括：

将普鲁兰多糖逐滴滴入到醇溶液中，以形成包围所述核的壳的步骤；

20.根据权利要求19所述的制备方法，其特征在于，在所述壳之间形成网络的步骤还包括：对通过将所述醇溶液的酸度调节为pH2.5至pH6.5而形成核-壳网络结构的溶液进行凝胶化的步骤。

21.根据权利要求19所述的制备方法，其特征在于，所述蒸发出醇的步骤的温度为20℃至40℃。