CN113218723A - 一种用于显微镜观察的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种用于显微镜观察的组合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113218723A CN113218723A CN202110279620.3A CN202110279620A CN113218723A CN 113218723 A CN113218723 A CN 113218723A CN 202110279620 A CN202110279620 A CN 202110279620A CN 113218723 A CN113218723 A CN 113218723A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- composition
- parts
- solution
- weight
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 35
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 34
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 17
- VBIXEXWLHSRNKB-UHFFFAOYSA-N ammonium oxalate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)C([O-])=O VBIXEXWLHSRNKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L disodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC([O-])=O PXEDJBXQKAGXNJ-QTNFYWBSSA-L 0.000 claims abstract description 15
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 229940073490 sodium glutamate Drugs 0.000 claims abstract description 15
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 18
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 7
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 229960001701 chloroform Drugs 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012024 dehydrating agents Substances 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011503 in vivo imaging Methods 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/2813—Producing thin layers of samples on a substrate, e.g. smearing, spinning-on
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种用于显微镜观察的组合物及其制备方法和应用，该组合物按照重量份数计包括氯化钠80‑100份，草酸铵1‑5份，还可进一步包括谷氨酸钠0.01‑0.2份。本发明还提供了相应的溶液和组合物，将其用于制备显微镜下观察的细胞样品时，采用浓度梯度处理的方式，能够使大部分细胞、微生物样品保持原有形态，适宜更大范围的样品观察，并且具有成像清晰、成本低廉、易于操作等优点。
Description
技术领域
本发明涉及生物样本制备领域，具体涉及一种用于显微镜观察的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
在细胞和微生物学组织活体研究中，经常需要使用脱水剂和透明剂来制作生物标本，以便通过显微镜观察细胞和微生物的内部结构，研究和分析生物的组成和演化。目前常用的脱水剂和透明剂为无水乙醇、三氯甲烷等化合物，价格昂贵且部分具有一定毒性。此外，目前对细胞和微生物的标本制作，通常是给定配比，只制作一种最终状态，缺乏对整个过程的渐变研究和细致分析，由此对很多现象也就一知半解。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于显微镜观察的组合物及其制备方法和应用，将该组合物用于制备显微镜下观察的细胞样品时，采用浓度梯度处理的方式，能够使大部分细胞、微生物样品保持原有形态，适宜更大范围的样品观察。
为此，第一方面，本发明提供一种用于显微镜观察样品的组合物，按重量份数计包括：氯化钠80-100份，草酸铵1-5份。
进一步，所述组合物还包括谷氨酸钠；所述组合物按重量份数计包括：氯化钠80-100份，草酸铵1-5份，谷氨酸钠0.01-0.2份。
在某实施方式中，所述组合物按重量份数计由以下成分组成：氯化钠80-90份，草酸铵1-5份，谷氨酸钠0.01-0.2份。
进一步，所述组合物按重量份数计包括：氯化钠80-90份，草酸铵3-5份，谷氨酸钠0.05-0.2份。
进一步，所述组合物按重量份数计包括：氯化钠80-90份，草酸铵3-5份，谷氨酸钠0.05-0.1份。
在某实施方式中，所述组合物按重量份数计包括：氯化钠80份，草酸铵4份，谷氨酸钠0.05份。
在另一实施方式中，所述组合物按重量份数计包括：氯化钠85份，草酸铵5份，谷氨酸钠0.1份。
在又一实施方式中，所述组合物按重量份数计包括：氯化钠90份，草酸铵2份，谷氨酸钠0.2份。
第二方面，本发明提供一种用于显微镜观察样品的溶液，其通过将本发明所述的组合物溶于水中制备得到。
进一步，所述溶液中，所述组合物的浓度为1％-35％(m/V)，例如1％、2.5％、5％、7.5％、10％、12.5％、15％、17.5％、20％、22.5％、25％、25.5％、30％、32.5％、35％等。
第三方面，本发明提供一种用于显微镜观察样品的试剂盒，所述试剂盒包括梯度浓度的本发明所述的溶液；所述梯度浓度中，最高浓度与最低浓度的差值为15％-30％(例如15％、16％、17％、18％、18％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％)，相邻浓度的差值为2％-5％(例如2％、3％、4％、5％)。
在某实施方式中，所述试剂盒包括以下浓度的本发明所述的溶液：1％、5％、10％、15％、20％、25％。
在另一实施方式中，所述试剂盒包括以下浓度的本发明所述的溶液：10％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％。
在又一实施方式中，所述试剂盒包括以下浓度的本发明所述的溶液：5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％。
第四方面，本发明提供所述组合物、溶液或者试剂盒在细胞的显微镜成像中的应用。
进一步，所述细胞包括原核细胞和/或真核细胞。
进一步，所述显微镜为光学显微镜。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明提供的组合物不含有易挥发或者有毒物质，便于操作而且环境友好。
(2)本发明提供的组合物、溶液和试剂盒在应用于细胞或微生物学组织活体成像研究中，具有成像更清晰、鉴别诊断更精准的特点。
(3)本发明提供的试剂盒中，采用的具有梯度变化的不同浓度，从而可以实现可控、可逆地对生物标本进行透明化的过程，其中细胞和微生物上任何一个细微之处都可以被精准观察，有利于研究者对细胞内部动态过程进行更深刻的了解。
具体实施方式
下面将更详细地描述本公开的示例性实施方式。应当理解，可以以各种形式实现本公开而不应被这里阐述的实施方式所限制。相反，提供这些实施方式是为了能够更透彻地理解本公开，并且能够将本公开的范围完整的传达给本领域的技术人员。
在发明中，如无特殊说明，表示浓度的百分比指的是质量体积比，即质量体积比浓度＝[溶质的质量(g)/溶液的体积(mL)]×100％
实施例1
准确称取8g氯化钠，0.2g草酸铵，配制成以下浓度的溶液：1％、5％、10％、15％、20％、25％。
使用时，按照浓度由低到高的顺序依次处理待观察的酿酒酵母细胞样品，并将待观察样品制成玻片标本，使用光学显微镜进行观察，具有良好成像效果。
实施例2
准确称取8g氯化钠，0.2g草酸铵，0.005g谷氨酸钠，配制成以下浓度的溶液：1％、5％、10％、15％、20％、25％。
使用时，按照浓度由低到高的顺序依次处理待观察的酿酒酵母细胞样品，并将待观察样品制成玻片标本，使用光学显微镜进行观察，发现其成像效果优于实施例1。
实施例3
准确称取8.5g氯化钠，0.5g草酸铵，0.001g谷氨酸钠，配制成以下浓度的溶液：5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％。
使用时，按照浓度由低到高的顺序依次处理待观察的枯草芽孢杆菌细胞样品，并且，在每次用一个新浓度的溶液处理细胞样本后，都将待观察样品制成玻片标本，使用光学显微镜进行观察，由此，对于细胞样品受处理后的动态变化过程实现了精准观察，具有优良的成像效果。
实施例4
准确称取9g氯化钠，0.2g草酸铵，0.002g谷氨酸钠，配制成以下浓度的溶液：10％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％。
使用时，按照浓度由低到高的顺序依次处理待观察的人肾上皮细胞样品，并将待观察样品制成玻片标本，使用光学显微镜进行观察，具有优良的成像效果。
对比例
配制成以下浓度的氯化钠水溶液：1％、5％、10％、15％、20％、25％。
使用时，按照浓度由低到高的顺序依次处理待观察的酿酒酵母细胞样品，并将待观察样品制成玻片标本，使用光学显微镜进行观察，其成像效果显著差于实施例1。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。
Claims (10)
1.一种用于显微镜观察样品的组合物，其特征在于，其按重量份数计包括：氯化钠80-100份，草酸铵1-5份。
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，还包括谷氨酸钠；所述组合物按重量份数计包括：氯化钠80-100份，草酸铵1-5份，谷氨酸钠0.01-0.2份。
3.如权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物按重量份数计由以下成分组成：氯化钠80-90份，草酸铵1-5份，谷氨酸钠0.01-0.2份。
4.一种用于显微镜观察样品的溶液，其通过将权利要求1-3任一项所述的组合物溶于水中制备得到。
5.如权利要求4所述的溶液，其特征在于，所述组合物的浓度为1％-35％。
6.一种用于显微镜观察样品的试剂盒，其包括梯度浓度的权利要求4或5所述的溶液。
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述梯度浓度中，最高浓度与最低浓度的差值为15％-30％，相邻浓度的差值为2％-5％。
8.权利要求1-3任一项所述的组合物、权利要求4或5所述的溶液或者权利要求6或7所述的试剂盒在细胞的显微镜成像中的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述细胞包括原核细胞和/或真核细胞。
10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述显微镜为光学显微镜。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110279620.3A CN113218723A (zh) | 2021-03-16 | 2021-03-16 | 一种用于显微镜观察的组合物及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110279620.3A CN113218723A (zh) | 2021-03-16 | 2021-03-16 | 一种用于显微镜观察的组合物及其制备方法和应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113218723A true CN113218723A (zh) | 2021-08-06 |
Family
ID=77084911
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110279620.3A Pending CN113218723A (zh) | 2021-03-16 | 2021-03-16 | 一种用于显微镜观察的组合物及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113218723A (zh) |
Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1217212A (zh) * | 1998-11-12 | 1999-05-26 | 卫生部长春生物制品研究所 | 甲肝－麻疹二联疫苗及其生产方法 |
| WO2000029018A1 (fr) * | 1998-11-12 | 2000-05-25 | Changchun Institute Of Biological Products Ministry Of Public Health | Vaccin combine contre l'hepatite a et la rougeole et son procede de preparation |
| US20050170327A1 (en) * | 2002-08-02 | 2005-08-04 | Emi Sumida | Method for preparing platelet-rich plasma |
| US20090143572A1 (en) * | 2005-08-30 | 2009-06-04 | Hiroko Inomata | Method for seperating and purifying rna |
| US20140093922A1 (en) * | 2012-09-28 | 2014-04-03 | Enn Science And Technology Development Co., Ltd. | Microbial culture medium and cultural method |
| CN104749010A (zh) * | 2015-03-31 | 2015-07-01 | 东华大学 | 一种聚磷菌透射电镜超薄切片样品的制备方法 |
| CN105392363A (zh) * | 2013-03-01 | 2016-03-09 | A·S·戈尔兹伯勒 | 样品的固定和稳定化 |
| CN105940291A (zh) * | 2014-01-29 | 2016-09-14 | 国立研究开发法人科学技术振兴机构 | 含水状态的生物试样的电子显微镜观察用保护剂、电子显微镜观察用试剂盒、利用电子显微镜进行观察、诊断、评价、定量的方法以及试样台 |
| CN107447007A (zh) * | 2017-08-21 | 2017-12-08 | 山东大学 | 一种dna类组织样品保存液及应用 |
| US20180044628A1 (en) * | 2015-03-13 | 2018-02-15 | The Regents Of The University Of California | Method for Biofilm Control and Treatment |
| JP2020034410A (ja) * | 2018-08-30 | 2020-03-05 | 国立大学法人浜松医科大学 | 病理組織標本または細胞診標本の走査型電子顕微鏡による観察方法 |
-
2021
- 2021-03-16 CN CN202110279620.3A patent/CN113218723A/zh active Pending
Patent Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1217212A (zh) * | 1998-11-12 | 1999-05-26 | 卫生部长春生物制品研究所 | 甲肝－麻疹二联疫苗及其生产方法 |
| WO2000029018A1 (fr) * | 1998-11-12 | 2000-05-25 | Changchun Institute Of Biological Products Ministry Of Public Health | Vaccin combine contre l'hepatite a et la rougeole et son procede de preparation |
| US20050170327A1 (en) * | 2002-08-02 | 2005-08-04 | Emi Sumida | Method for preparing platelet-rich plasma |
| US20090143572A1 (en) * | 2005-08-30 | 2009-06-04 | Hiroko Inomata | Method for seperating and purifying rna |
| US20140093922A1 (en) * | 2012-09-28 | 2014-04-03 | Enn Science And Technology Development Co., Ltd. | Microbial culture medium and cultural method |
| CN105392363A (zh) * | 2013-03-01 | 2016-03-09 | A·S·戈尔兹伯勒 | 样品的固定和稳定化 |
| CN105940291A (zh) * | 2014-01-29 | 2016-09-14 | 国立研究开发法人科学技术振兴机构 | 含水状态的生物试样的电子显微镜观察用保护剂、电子显微镜观察用试剂盒、利用电子显微镜进行观察、诊断、评价、定量的方法以及试样台 |
| US20160343539A1 (en) * | 2014-01-29 | 2016-11-24 | Japan Science And Technology Agency | Protective agent for electron microscopic observation of biological sample in water-containing state, kit for electron microscopic observation, methods for observation, diagnosis, evaluation, and quantification by electron microscope, and sample stage |
| US20180044628A1 (en) * | 2015-03-13 | 2018-02-15 | The Regents Of The University Of California | Method for Biofilm Control and Treatment |
| CN104749010A (zh) * | 2015-03-31 | 2015-07-01 | 东华大学 | 一种聚磷菌透射电镜超薄切片样品的制备方法 |
| CN107447007A (zh) * | 2017-08-21 | 2017-12-08 | 山东大学 | 一种dna类组织样品保存液及应用 |
| JP2020034410A (ja) * | 2018-08-30 | 2020-03-05 | 国立大学法人浜松医科大学 | 病理組織標本または細胞診標本の走査型電子顕微鏡による観察方法 |
Non-Patent Citations (8)
| Title |
|---|
| 孟纯阳: "纳米羟基磷灰石/聚酰胺66的生物学性能及修复骨缺损的实验研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库 (博士)》 * |
| 孟纯阳: "纳米羟基磷灰石/聚酰胺66的生物学性能及修复骨缺损的实验研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库 (博士)》, no. 05, 1 May 2005 (2005-05-01) * |
| 崔丽;聂毓秀;尹昕;陈玉兰;: "体外培养大鼠腺垂体细胞三氯化钐作用下的电镜观察", no. 01 * |
| 朱平，姜叙诚，金连弘，张亚坤，宋雁南，吴振铎，李学钧: "人胚胎肾小体和肾小管的发育", no. 04 * |
| 赵遵田 等: "植物学实验教程", 《科学出版社》 * |
| 赵遵田 等: "植物学实验教程", 《科学出版社》, 31 May 2005 (2005-05-31), pages 13 - 15 * |
| 路杨;师忠芳;袁芳;韩明;: "谷氨酸引起培养大鼠星形胶质细胞水通道蛋白4表达动态变化", no. 01 * |
| 魏佑震,申姜颖,洪岸,郭玉臣,庞龙滨: "碱性成纤维细胞生长因子对豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞谷氨酸钠毒性损伤的保护作用", no. 02 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Metscher | Biological applications of X-ray microtomography: imaging micro-anatomy, molecular expression and organismal diversity | |
| Kerstens et al. | A flow cytometric approach to quantify biofilms | |
| CN110982870A (zh) | 一种微生物多重荧光染色液及其应用 | |
| WO2013117967A1 (en) | Compositions and methods for sputum samples preparation, and kit | |
| Zou et al. | Determination of live and dead Komagataeibacter xylinus cells and first attempt at precise control of inoculation in nanocellulose production | |
| CN113218723A (zh) | 一种用于显微镜观察的组合物及其制备方法和应用 | |
| CN106093091B (zh) | 一种破膜制备原生动物单细胞扫描电镜样品的方法 | |
| DeLeo et al. | Use of confocal laser scanning microscopy on soil thin-sections for improved characterization of microbial growth in unconsolidated soils and aquifer materials | |
| JP4370118B2 (ja) | 微生物の染色剤およびその利用 | |
| US20180128717A1 (en) | Methods for cell count and viability measurements | |
| Kippert et al. | The aniline blue fluorochrome specifically stains the septum of both live and fixed Schizosaccharomyces pombe cells | |
| Wilson et al. | Customizable 3D printed diffusion chambers for studies of bacterial pathogen phenotypes in complex environments | |
| Klena et al. | Isolation and fluorescence imaging for single-particle reconstruction of Chlamydomonas centrioles | |
| US7871791B2 (en) | Biofilm preparation using potassium permanganate | |
| Leppard et al. | The ultrastructural indicators of aquatic ecosystem health | |
| Liu et al. | Non-invasive quantification of cell wall porosity by fluorescence quenching microscopy | |
| CN104390834A (zh) | 树脂切片的番红与甲基紫混合染色法及其染色液 | |
| Yin et al. | DNA and RNA stable isotope probing of methylotrophic methanogenic archaea | |
| CN104655857B (zh) | 一种微生物细胞内多聚磷酸盐的定量检测方法 | |
| Yawata et al. | Visualizing the effects of biofilm structures on the influx of fluorescent material using combined confocal reflection and fluorescent microscopy | |
| CN110823785A (zh) | 一种真菌检测方法 | |
| CN110455601A (zh) | 一种含有异噻唑啉酮的组合物的用途 | |
| JP4162750B2 (ja) | 薬剤感受性試験用マイクロプレート及びその試験方法 | |
| Fayolle et al. | Data report: Miocene planktonic foraminifers Dentoglobigerina and Globoquadrina from IODP Sites U1489 and U1490, Expedition 363 | |
| Baum et al. | Experimental approaches to investigating the vaginal biofilm microbiome |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210806 |