CN110455601A - 一种含有异噻唑啉酮的组合物的用途 - Google Patents
一种含有异噻唑啉酮的组合物的用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及生物样品固定液制备领域,公开了一种含有异噻唑啉酮的组合物的用途,该组合物用于固定生物样品,异噻唑啉酮为5‑氯‑2‑甲基‑4‑异噻唑啉‑3‑酮和/或2‑甲基‑4‑异噻唑啉‑3‑酮,本发明的组合物不包含会对生物和环境产生巨大的危害的物质,作为生物样品固定液用途时,生物样品可得到最佳的保存和固定效果且该组合物配制简单、固定效果好、成本低廉。
Description
技术领域
本发明涉及生物样品固定液制备领域,特别是一种含有异噻唑啉酮的组合物的用途。
背景技术
随着精准医学的发展,观察和了解生物样品例如生物组织、细胞、细胞簇、病毒、细菌、寄生虫、酵母、排泄物和其它物质,在生理和病理状态下的形态结构,对基础医学研究和临床病理诊断具有重要意义。目前对动物细胞的结构观察中,光学显微镜和电子显微镜是必不可少的工具,光镜观察显示的结构图像,受限于其放大倍数,结构信息十分有限;透射电镜可观察细胞超微结构。使用的显微镜的观察生物样品,要求生物样品采集后相对长期地维持在稳定状态,在生物样品采集后应使用固定液将样品固定,保持生物样品的形态学结构不发生变化。
现有的最为熟知的固定溶液包括:绍丁固定液(Schaudinn's Fixative)(其含有汞盐),SAF(其含有甲醛),MIF(其含有甲醛和汞盐),锇酸(其为致癌的、毒性的、腐蚀性的),铬酸(致癌的、毒性的、腐蚀性的),FA(甲醛和醇)。
这些固定溶液中几乎所有都含有危害物质并对生物和环境产生巨大的潜在危害,或者在生物保存一定的时间后,固定的生物材料的结构可能发生了形态学变化,例如蛋白质会凝结,所以亟待制备一种对生物材料有良好的保存作用的固定液。
发明内容
本发明的目的在于提供一种含有异噻唑啉酮的组合物的用途,以解决现有固定液毒性巨大、样品保存时间不长等问题。
为实现上述技术目的,达到上述技术效果,本发明公开了一种含有异噻唑啉酮的组合物的用途,用于固定生物样品,所述的异噻唑啉酮为5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和/或2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮。
进一步,所述的组合物还包括有十二烷基二甲基苄基氯化铵、二氯异氰脲酸钠、三氯异氰脲酸钠、硫酸铜中的一种或多种。
进一步,所述的组合物包含以下组分含量:0.2~0.6wt.%2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.001~0.003wt.%5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.5wt.%十二烷基二甲基苄基氯化铵、2~5wt.%二氯异氰脲酸钠、2~5wt.%三氯异氰脲酸钠、1~2wt.%硫酸铜。
进一步,所述的组合物还包括有消泡剂、表面活性剂、保湿剂、香料剂、染色试剂中的一种或多种。
进一步,所述的消泡剂为异丙醇,所述的表面活性剂为AEO-9和/或CO-40,所述的保湿剂为丙三醇和/或丙二醇,所述的染色试剂为氯化镍和/或氯化铜和/或碱性品绿。
进一步,所述的组合物还包括有pH值调节剂,所述的pH值调节剂为柠檬酸、草酸、柠檬酸对应的缓冲溶液、草酸对应的缓冲溶液中的一种或多种。
进一步,所述的组合物包含以下组分含量:5~10wt.%异丙醇、0.1~0.9wt.%AEO-9、0.2~0.3wt.%CO-40、0.01~0.05wt.%香料剂、5~8wt.%丙三醇、3~5wt.%丙二醇、0.1~0.3wt.%柠檬酸、0.2~0.7wt.%草酸、0.2~0.7wt.%氯化镍、0.3~0.9wt.%氯化铜。
进一步,所述的组合物的pH值为4~6.5。
进一步,所述的组合物还包括有溶剂,所述的溶剂为乙醇、水、乙醇和水的混合物中的一种。
进一步,所述的组合物包含以下组分含量:14wt.%异噻唑啉酮,5~8wt.%丙三醇、0.3~0.9wt.%碱性品绿、1~2wt.%硫酸铜。
本发明具有以下有益效果:
1.异噻唑啉酮主要由5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CIT)和2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MIT)组成。异噻唑啉酮是通过断开细菌和藻类蛋白质的键而起杀生作用的,异噻唑啉酮与微生物接触后,能迅速地不可逆地抑制其生长,从而导致微生物细胞的死亡,故对常见细菌、真菌、藻类等具有很强的抑制和杀灭作用。异噻唑啉酮具有杀生效率高、降解性好、不产生残留、操作安全、配伍性好、稳定性强、使用成本低等优点,且能与氯及大多数阴、阳离子及非离子表面活性剂相混溶。高剂量时,异噻唑啉酮对生物粘泥剥离有显著效果。
2.本发明的组合物作为固定液用途时不包含会对生物和环境产生巨大的危害的物质,生物样品可使用该组合物的水溶液或乙醇溶液得到最佳地保存和固定效果,生物样品中的蛋白质或其它成分的形态结构不会被该组合物较强地改变,从而使的生物样品中会被传统固定溶液破坏的生化结构能被观察到。
3.本发明的组合物作为生物样品固定液用途时,配制简单、固定效果好、成本低廉。
附图说明
图1为实施例1组合物用于固定寄生虫卵后在显微镜下观察到的视图。
图2为实施例2组合物用于固定寄生虫卵后在显微镜下观察到的视图。
图3为实施例3组合物用于固定淋巴组织后在显微镜下观察到的视图。
图4为实施例4组合物用于固定肠组织后在显微镜下观察到的视图。
图5为实施例5组合物用于固定肠组织后在显微镜下观察到的视图。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
本发明公开了一种含有异噻唑啉酮的组合物的用途,用于固定生物样品,所述的异噻唑啉酮为5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和/或2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮。
进一步,所述的组合物还包括有十二烷基二甲基苄基氯化铵、二氯异氰脲酸钠、三氯异氰脲酸钠、硫酸铜中的一种或多种。
上述的各个组分用于生物样品的固定灭菌并能够使得生物样品中的蛋白质发生变性形成固定的结构形态,便于观察;上述组分与样品中的蛋白质以温和方式发生反应,不会对样品的形态学结构造成压力并且使其保持完整,使得生物样品相比使用传统固定溶液具有更多的生物结构和生化参数,使用该组合物后不会显著干扰样品在固定后的其他处理。
进一步,所述的组合物包含以下组分含量:0.2~0.6wt.%2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.001~0.003wt.%5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.5wt.%十二烷基二甲基苄基氯化铵、2~5wt.%二氯异氰脲酸钠、2~5wt.%三氯异氰脲酸钠、1~2wt.%硫酸铜。
进一步,所述的组合物还包括有消泡剂、表面活性剂、保湿剂、香料剂、染色试剂中的一种或多种。
消泡剂用于组合物的增融消泡,表面活性剂能够降低组合物溶液的表面张力,改进分散特性,保湿剂用于防止组合物的水分蒸发,染色试剂用于增加生物样品的背景颜色,便于显微镜观察。
进一步,所述的消泡剂为异丙醇,所述的表面活性剂为AEO-9和/或CO-40,所述的保湿剂为丙三醇和/或丙二醇,所述的染色试剂为氯化镍和/或氯化铜和/或碱性品绿。
进一步,所述的组合物还包括有pH值调节剂,所述的pH值调节剂为柠檬酸、草酸、柠檬酸对应的缓冲溶液、草酸对应的缓冲溶液中的一种或多种。
进一步,所述的组合物包含以下组分含量:5~10wt.%异丙醇、0.1~0.9wt.%AEO-9、0.2~0.3wt.%CO-40、0.01~0.05wt.%香料剂、5~8wt.%丙三醇、3~5wt.%丙二醇、0.1~0.3wt.%柠檬酸、0.2~0.7wt.%草酸、0.2~0.7wt.%氯化镍、0.3~0.9wt.%氯化铜。
进一步,所述的组合物的pH值为4~6.5。
组合物作为固定液固定生物样品时,在酸性pH或中性点左右发生最佳反应,使用pH值调节剂,可以将pH调至4~6.5的范围内。
进一步,所述的组合物还包括有溶剂,所述的溶剂为乙醇、水、乙醇和水的混合物中的一种。
进一步,所述的组合物包含以下组分含量:14wt.%异噻唑啉酮,5~8wt.%丙三醇、0.3~0.9wt.%碱性品绿、1~2wt.%硫酸铜。
从寄生虫角度用人和动物排泄物样品测试该组合物的溶液,主要检测寄生虫卵,显示极佳的固定效果和保存质量且在30天的观察期内,没有观察到分析样品发生变化;人体排泄物中的原生动物极易降解并且能在几小时内发生退化,使用本发明的组合物溶液作为固定溶液,保存和固定时间可超过7天。
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外,应理解,在阅读了本发明所记载的内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本发明所限定的范围。
实施例1
组合物包含以下组分含量:0.2wt.%2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.001wt.%5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.5wt.%十二烷基二甲基苄基氯化铵、2wt.%二氯异氰脲酸钠、1wt.%硫酸铜、5wt.%异丙醇、0.1wt.%AEO-9、0.01wt.%香料剂、5wt.%丙三醇、0.1wt.%柠檬酸、0.2wt.%氯化镍,溶剂为水,该组合物应用于生物样品的固定,使用改良加藤法检测并观察人体排泄物中的寄生虫卵,观察结果如图1。
实施例2
组合物包含以下组分含量:0.6wt.%2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.003wt.%5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.5wt.%十二烷基二甲基苄基氯化铵、5wt.%三氯异氰脲酸钠、2wt.%硫酸铜、10wt.%异丙醇、0.3wt.%CO-40、、5wt.%丙二醇、0.7wt.%草酸、0.9wt.%氯化铜,溶剂为乙醇,该组合物应用于生物样品的固定,使用改良加藤法检测并观察人体排泄物中的寄生虫卵,观察结果如图2。
实施例3
组合物包含以下组分含量:0.6wt.%2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.003wt.%5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.5wt.%十二烷基二甲基苄基氯化铵、5wt.%二氯异氰脲酸钠、5wt.%三氯异氰脲酸钠、2wt.%硫酸铜、10wt.%异丙醇、0.9wt.%AEO-9、0.3wt.%CO-40、0.05wt.%香料剂、5wt.%丙三醇、3wt.%丙二醇、0.3wt.%柠檬酸、0.2wt.%草酸、0.2wt.%氯化镍、0.3wt.%氯化铜,溶剂为乙醇,该组合物应用于淋巴组织的固定,并使用显微镜观察,观察结果如图3。
实施例4
组合物包含以下组分含量:0.2wt.%2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.003wt.%5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.5wt.%十二烷基二甲基苄基氯化铵、5wt.%二氯异氰脲酸钠、5wt.%三氯异氰脲酸钠、2wt.%硫酸铜、10wt.%异丙醇、0.1wt.%AEO-9、0.2wt.%CO-40、0.05wt.%香料剂、8wt.%丙三醇、5wt.%丙二醇、0.3wt.%柠檬酸、0.7wt.%草酸、0.7wt.%氯化镍、0.9wt.%氯化铜,溶剂为水,该组合物应用于肠组织的固定,并使用显微镜观察,观察结果如图4。
实施例5
组合物包含以下组分含量:14wt.%异噻唑啉酮,异噻唑啉酮中5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮质量比为1:1,5wt.%丙三醇、0.9wt.%碱性品绿、2wt.%硫酸铜,溶剂为水,该组合物应用于肠组织的固定,并使用显微镜观察,观察结果如图5。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,可轻易想到的变化或替换,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种含有异噻唑啉酮的组合物的用途,其特征在于,用于固定生物样品,所述的异噻唑啉酮为5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和/或2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮。
2.如权利要求1所述的用途,其特征在于:所述的组合物还包括有十二烷基二甲基苄基氯化铵、二氯异氰脲酸钠、三氯异氰脲酸钠、硫酸铜中的一种或多种。
3.如权利要求2所述的用途,其特征在于:所述的组合物包含以下组分含量:0.2~0.6wt.%2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.001~0.003wt.%5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、0.5wt.%十二烷基二甲基苄基氯化铵、2~5wt.%二氯异氰脲酸钠、2~5wt.%三氯异氰脲酸钠、1~2wt.%硫酸铜。
4.如权利要求1所述的用途,其特征在于:所述的组合物还包括有消泡剂、表面活性剂、保湿剂、香料剂、染色试剂中的一种或多种。
5.如权利要求4所述的用途,其特征在于:所述的消泡剂为异丙醇,所述的表面活性剂为AEO-9和/或CO-40,所述的保湿剂为丙三醇和/或丙二醇,所述的染色试剂为氯化镍和/或氯化铜和/或碱性品绿。
6.如权利要求5所述的用途,其特征在于:所述的组合物还包括有pH值调节剂,所述的pH值调节剂为柠檬酸、草酸、柠檬酸对应的缓冲溶液、草酸对应的缓冲溶液中的一种或多种。
7.如权利要求6所述的用途,其特征在于:所述的组合物包含以下组分含量:5~10wt.%异丙醇、0.1~0.9wt.%AEO-9、0.2~0.3wt.%CO-40、0.01~0.05wt.%香料剂、5~8wt.%丙三醇、3~5wt.%丙二醇、0.1~0.3wt.%柠檬酸、0.2~0.7wt.%草酸、0.2~0.7wt.%氯化镍、0.3~0.9wt.%氯化铜。
8.如权利要求1所述的用途,其特征在于:所述的组合物的pH值为4~6.5。
9.如权利要求1所述的用途,其特征在于:所述的组合物还包括有溶剂,所述的溶剂为乙醇、水、乙醇和水的混合物中的一种。
10.如权利要求1所述的用途,其特征在于:所述的组合物包含以下组分含量:14wt.%异噻唑啉酮,5~8wt.%丙三醇、0.3~0.9wt.%碱性品绿、1~2wt.%硫酸铜。
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