CN113189341A - 一种人肝素结合蛋白免疫比浊检测试剂及其用途 - Google Patents
一种人肝素结合蛋白免疫比浊检测试剂及其用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113189341A CN113189341A CN202110217641.2A CN202110217641A CN113189341A CN 113189341 A CN113189341 A CN 113189341A CN 202110217641 A CN202110217641 A CN 202110217641A CN 113189341 A CN113189341 A CN 113189341A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- concentration
- reagent
- buffer
- sample
- kit
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 154
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 101000793686 Homo sapiens Azurocidin Proteins 0.000 title description 6
- 101710154607 Azurocidin Proteins 0.000 claims abstract description 160
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 48
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 48
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical group [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 30
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 claims abstract description 23
- 239000003219 hemolytic agent Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 15
- 102100030009 Azurocidin Human genes 0.000 claims abstract 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 78
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 44
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 23
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 20
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 19
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 19
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 claims description 18
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 17
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 17
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 16
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims description 16
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims description 16
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 12
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 9
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 9
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229940093429 polyethylene glycol 6000 Drugs 0.000 claims description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 5
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- CBMPTFJVXNIWHP-UHFFFAOYSA-L disodium;hydrogen phosphate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O CBMPTFJVXNIWHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 claims description 2
- 102000022382 heparin binding proteins Human genes 0.000 claims 1
- 108091012216 heparin binding proteins Proteins 0.000 claims 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 14
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 5
- 102000043635 human AZU1 Human genes 0.000 description 151
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 72
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 24
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 20
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 13
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 12
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 8
- NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 3-(n-morpholino)-2-hydroxypropanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CN1CCOCC1 NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 6
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 6
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N ethylparaben Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 5
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 5
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 4
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 3-[[1,3-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)propan-2-yl]azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound OCC(CO)(CO)NCC(O)CS(O)(=O)=O RZQXOGQSPBYUKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 4
- OWXMKDGYPWMGEB-UHFFFAOYSA-N HEPPS Chemical compound OCCN1CCN(CCCS(O)(=O)=O)CC1 OWXMKDGYPWMGEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methyl-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound OCC(CO)(CO)NCCS(O)(=O)=O JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 4
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 4
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 4
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 4
- QZTKDVCDBIDYMD-UHFFFAOYSA-N 2,2'-[(2-amino-2-oxoethyl)imino]diacetic acid Chemical compound NC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O QZTKDVCDBIDYMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LVQFQZZGTZFUNF-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3-[4-(2-hydroxy-3-sulfonatopropyl)piperazine-1,4-diium-1-yl]propane-1-sulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CN1CCN(CC(O)CS(O)(=O)=O)CC1 LVQFQZZGTZFUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XCBLFURAFHFFJF-UHFFFAOYSA-N 3-[bis(2-hydroxyethyl)azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)CS(O)(=O)=O XCBLFURAFHFFJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940090248 4-hydroxybenzoic acid Drugs 0.000 description 3
- 239000007991 ACES buffer Substances 0.000 description 3
- 239000007988 ADA buffer Substances 0.000 description 3
- 108700016232 Arg(2)-Sar(4)- dermorphin (1-4) Proteins 0.000 description 3
- 239000007992 BES buffer Substances 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 239000007996 HEPPS buffer Substances 0.000 description 3
- FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine Chemical compound OCCN(CCO)CC(O)=O FSVCELGFZIQNCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 239000007994 TES buffer Substances 0.000 description 3
- 239000007998 bicine buffer Substances 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-N ethanesulfonic acid Chemical compound CCS(O)(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000010228 ethyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 3
- 239000004403 ethyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 3
- -1 octyl phenyl Chemical group 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 3
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CCMKPCBRNXKTKV-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-5-sulfanylidenepyrrolidin-2-one Chemical compound ON1C(=O)CCC1=S CCMKPCBRNXKTKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HSXUNHYXJWDLDK-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1-sulfonic acid Chemical compound CC(O)CS(O)(=O)=O HSXUNHYXJWDLDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007989 BIS-Tris Propane buffer Substances 0.000 description 2
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 208000032376 Lung infection Diseases 0.000 description 2
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 2
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 2
- 208000034953 Twin anemia-polycythemia sequence Diseases 0.000 description 2
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 description 2
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 239000007973 glycine-HCl buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007986 glycine-NaOH buffer Substances 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011147 magnesium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- ZPIRTVJRHUMMOI-UHFFFAOYSA-N octoxybenzene Chemical compound CCCCCCCCOC1=CC=CC=C1 ZPIRTVJRHUMMOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 description 2
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 description 2
- 229940051841 polyoxyethylene ether Drugs 0.000 description 2
- 229920000056 polyoxyethylene ether Polymers 0.000 description 2
- GKKCIDNWFBPDBW-UHFFFAOYSA-M potassium cyanate Chemical compound [K]OC#N GKKCIDNWFBPDBW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- RPENMORRBUTCPR-UHFFFAOYSA-M sodium;1-hydroxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].ON1C(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C1=O RPENMORRBUTCPR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000008362 succinate buffer Substances 0.000 description 2
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 description 2
- LEVVMZZBTOYKSC-UHFFFAOYSA-N 1-amino-4-hydroxybutane-2-sulfonic acid Chemical compound NCC(S(O)(=O)=O)CCO LEVVMZZBTOYKSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FOUZISDNESEYLX-UHFFFAOYSA-N 2-(2-hydroxyethylazaniumyl)acetate Chemical compound OCCNCC(O)=O FOUZISDNESEYLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000979 2-amino-2-oxoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 1
- QDSRPZLVNAXMTL-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-1-[4-(4-nitrophenyl)piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1CCN(C(=O)CCl)CC1 QDSRPZLVNAXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZYVIIEFODRWQGD-UHFFFAOYSA-N 2-piperazin-1-ylethanol;propane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCS(O)(=O)=O.OCCN1CCNCC1 ZYVIIEFODRWQGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 108010007337 Azurin Proteins 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- 208000032163 Emerging Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- GIZQLVPDAOBAFN-UHFFFAOYSA-N HEPPSO Chemical compound OCCN1CCN(CC(O)CS(O)(=O)=O)CC1 GIZQLVPDAOBAFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- WLLGXSLBOPFWQV-UHFFFAOYSA-N MGK 264 Chemical compound C1=CC2CC1C1C2C(=O)N(CC(CC)CCCC)C1=O WLLGXSLBOPFWQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 1
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004353 Polyethylene glycol 8000 Substances 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 238000000429 assembly Methods 0.000 description 1
- 230000000712 assembly Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- HHKZCCWKTZRCCL-UHFFFAOYSA-N bis-tris propane Chemical compound OCC(CO)(CO)NCCCNC(CO)(CO)CO HHKZCCWKTZRCCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 230000009460 calcium influx Effects 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 230000003436 cytoskeletal effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000006667 mitochondrial pathway Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 229940057838 polyethylene glycol 4000 Drugs 0.000 description 1
- 229940085678 polyethylene glycol 8000 Drugs 0.000 description 1
- 235000019446 polyethylene glycol 8000 Nutrition 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N propane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCS(O)(=O)=O KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012113 quantitative test Methods 0.000 description 1
- 230000036632 reaction speed Effects 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000025915 regulation of apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000009711 regulatory function Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000004739 secretory vesicle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
- G01N33/537—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody
- G01N33/539—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody involving precipitating reagent, e.g. ammonium sulfate
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/26—Infectious diseases, e.g. generalised sepsis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本申请的实施例公开了一种用于检测样品中肝素结合蛋白的试剂盒。所述试剂盒包括：用于预处理样品的预处理试剂和用于识别肝素结合蛋白的识别试剂，所述预处理试剂包括溶血剂和电解质，其中，所述溶血剂是浓度为1‑3mg/mL的TritonX‑100，所述电解质是浓度为30‑60mg/mL的氯化钠，并且所述预处理试剂的pH值为5.5‑6.5。所述试剂盒可使用全血样品检测肝素结合蛋白浓度，检测所需的采血量少，检测时间短。本申请的实施例还公开了此类试剂盒在定量检测肝素结合蛋白中的用途以及方法。
Description
技术领域
本说明书涉及免疫测定领域，特别涉及一种人肝素结合蛋白免疫比浊检测试剂及其用途。
背景技术
肝素结合蛋白(heparin-binding protein，HBP)又被称为CAP37或天青杀素,是中性粒细胞受到外界刺激释放产生的功能多样的颗粒蛋白。HBP可激活单核细胞和巨噬细胞，具有显著的抗菌活性、趋化特性、促使血管渗漏,使其成为新兴的感染性疾病相关生物标志物。一旦出现细菌性感染时，感染相关M蛋白与纤维蛋白原相结合，致使多行核白细胞被激活，引起大量HBP分泌。HBP广泛用于临床感染性疾病的诊断和鉴别诊断中在脓毒症患者的早期诊断和疗效监测中优势尤为明显,在尿路感染、细菌性脑膜炎、肺部感染等其他感染性疾病中也有一定应用。
目前，国内外已有的肝素结合蛋白免疫比浊法测定试剂盒多适用于体外定量测定血清样本和血浆样本中肝素结合蛋白含量。为获得血清或血浆样本，需要采集的静脉血量较大，且采血后需要检验人员对全血样本进行预处理，不能直接进行检测，这使得分析仪器无法依托现有试剂盒进行全自动的分析测定，且整套检测流程耗时较长。
发明内容
根据本申请的一方面，提供一种用于检测样品中肝素结合蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括：用于预处理样品的预处理试剂和用于识别肝素结合蛋白的识别试剂，所述预处理试剂包括溶血剂和电解质，其中，所述溶血剂是浓度为1-3mg/mL的TritonX-100，所述电解质是浓度为30-60mg/mL的氯化钠，并且所述预处理试剂的pH值为5.5-6.5。
在一些实施例中，所述TritonX-100的浓度为2mg/mL。
在一些实施例中，所述氯化钠的浓度为40mg/mL。
在一些实施例中，所述样品为全血。
在一些实施例中，所述样品为血清或血浆。
在一些实施例中，所述预处理试剂还含有缓冲试剂，所述缓冲试剂选自磷酸、2-(N-吗啉代)乙磺酸、磷酸氢二钠-柠檬酸、哌嗪-1,4-二乙磺酸中的一种或几种的组合。
在一些实施例中，所述缓冲试剂的浓度为5-100mmol/L。
在一些实施例中，所述预处理试剂还包括加速剂聚乙二醇6000，其中聚乙二醇6000的浓度为10-50mg/mL。
在一些实施例中，所述预处理试剂还包括防腐剂Proclin300，其中Proclin300的浓度为0.2-0.4mg/mL。
在一些实施例中，所述用于识别肝素结合蛋白的识别试剂包括偶联有肝素结合蛋白抗体或其抗原结合片段的乳胶微球。
在一些实施例中，所述人肝素结合蛋白抗体或其抗原结合片段在交联缓冲液中通过化学交联剂偶联至乳胶微球表面；其中，所述化学交联剂选自1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺、碳化亚胺、酰肼、异氰酸钾中的一种或多种的组合；所述交联缓冲液为不含氨基的缓冲液。
在一些实施例中，所述交联缓冲液选自2-(N-吗啉代)乙磺酸、磷酸、N-(2-羟乙基)哌嚓-N/-(2-乙磺酸)、3-(N-吗啉代)-2-羟基丙磺酸中的一种或多种的组合。
在一些实施例中，所述交联缓冲液的pH值范围为6.0-8.0。
在一些实施例中，所述识别试剂还包括：
电解质，所述电解质选自氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁中的一种或多种的组合，所述电解质浓度为10-40mg/mL；
稳定剂，所述稳定剂选自酪蛋白、甘露醇、壳聚糖、牛血清白蛋白中的一种或多种的组合，所述稳定剂浓度为1-5mg/mL；
表面活性剂，所述表面活性剂选自吐温、脂肪醇聚乙二醇醚、辛基苯基聚氧乙烯醚中的一种或多种的组合，所述表面活性剂浓度为0.5-3mg/mL；及
防腐剂，所述防腐剂选自叠氮钠、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、Proclin系列中的一种或多种的组合，所述防腐剂浓度为0.5-4mg/mL。
在一些实施例中，所述试剂盒还包括浓度已知的肝素结合蛋白校准品。
根据本申请的另一方面，提供如上所述用于检测样品中肝素结合蛋白的试剂盒在定量检测肝素结合蛋白中的用途或方法，所述用途(方法)包括：
i)将所述预处理试剂和所述样品混合后，在预设温度下孵育第一时长，得到孵育后的第一混合液；
ii)将所述孵育后的第一混合液与所述识别试剂混合，持续第二时长的反应，得到第二混合液；
iii)检测所述第二混合液的吸光度；以及
iiii)基于所述步骤iii)检测到的所述吸光度，确定所述样品中肝素结合蛋白的浓度。
在一些实施例中，所述步骤i)中所述样品与所述预处理试剂的体积比为0.1:100-20:100。
在一些实施例中，所述步骤i)中的所述预处理试剂和所述步骤ii)中所述识别试剂的体积比为1:10-100:10。
在一些实施例中，所述步骤iii)中预设测试主波长为500-700nm。优选的，预设测试主波长为650nm。
在一些实施例中，所述第一时长为3-8分钟。
在一些实施例中，所述第二时长为2-6分钟。
附图说明
本说明书将以示例性实施例的方式进一步说明，这些示例性实施例将通过附图进行详细描述。这些实施例并非限制性的，在这些实施例中，相同的编号表示相同的结构，其中：
图1是根据本说明书一些实施例所示的试剂盒在在定量检测肝素结合蛋白中的用途或方法示意图；
图2是根据本说明书实施例2所示的HBP反应标准曲线图；
图3是根据本说明书实施例5所示的HBP全血/血浆同源样品HBP测定浓度回归分析散点图；
图4是根据本说明书实施例5所示的HBP全血/血清同源样品HBP测定浓度回归分析散点图。
具体实施方式
为了更清楚地说明本说明书实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本说明书的一些示例或实施例，对于本领域的普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图将本说明书应用于其它类似情景。除非从语言环境中显而易见或另做说明，图中相同标号代表相同结构或操作。
应当理解，本文使用的“系统”、“装置”、“单元”和/或“模块”是用于区分不同级别的不同组件、元件、部件、部分或装配的一种方法。然而，如果其他词语可实现相同的目的，则可通过其他表达来替换所述词语。
如本说明书和权利要求书中所示，除非上下文明确提示例外情形，“一”、“一个”、“一种”和/或“该”等词并非特指单数，也可包括复数。一般说来，术语“包括”与“包含”仅提示包括已明确标识的步骤和元素，而这些步骤和元素不构成一个排它性的罗列，方法或者设备也可能包含其它的步骤或元素。
本说明书中使用了流程图用来说明根据本说明书的实施例的系统所执行的操作。应当理解的是，前面或后面操作不一定按照顺序来精确地执行。相反，可以按照倒序或同时处理各个步骤。同时，也可以将其他操作添加到这些过程中，或从这些过程移除某一步或数步操作。
本文使用下述缩写：
TritonX-100，聚乙二醇辛基苯基醚；PB，磷酸缓冲液；PBS，磷酸盐缓冲生理盐水；MES，2-(N-吗啉代)乙磺酸；BIS-TRIS，二(2-羟乙基)亚氨基Tris(羟甲基)甲烷；ADA，N(2-乙酰氨基)-2-亚氨基双乙酸；ACES，2[(2-氨基-2氧代乙基)氨基]乙磺酸；PIPES，哌嚓-N,N-二(2-乙磺酸)；MOPSO，3-(N-吗啉代)-2-羟基丙磺酸；BIS-TRIS PROPANE，1,3-二[Tri(羟甲基)甲基氨基]丙烷；BES，N,N-二(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸；MOPS，3-(N-吗啉代)丙磺酸；HEPES，N-(2-羟乙基)哌嚓-N/-(2-乙磺酸)；TES，N-tris(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸；DIPSO，3-[N,N-二(羟乙基)氨基]-2-羟基丙磺酸；TAPSO，3-[N-tris(羟甲基)甲基氨基]-2-羟基丙磺酸；TRIZAMA，Tris(羟甲基)氨基甲烷；HEPPSO，N-(2-羟乙基)哌嗪-N/-(2-羟基丙磺酸)；HEPPS，4-羟乙基哌嗪丙磺酸；POPSO，哌嚓-N,N/-二(2-羟基丙磺酸)；EPPS，N-(2-羟乙基)哌嚓-N/-(3-丙磺酸)；TEA，三乙醇胺；BICINE，N,N-二(2-羟乙基)甘氨酸；EDC-HCL，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；NHS，N-羟基琥珀酰亚胺；sulfo-NHS，N-羟基硫代琥珀酰亚胺；EDC，碳化亚胺；MIC，异氰酸钾。
肝素结合蛋白(heparin-binding protein,HBP)是中性粒细胞来源的颗粒蛋白。HBP在细胞成熟过程中已经被合成并且储存于相应的位置，主要储存于嗜天青颗粒和分泌囊泡中，其能诱导内皮细胞骨架重排，改变细胞形态，使Ca2+内流，影响内皮细胞通透性，导致细胞功能障碍、血浆渗漏和组织水肿，从而引起炎症。HBP作为一种趋化物质，可激活单核/巨噬细胞，释放肿瘤坏死因子-α、γ-干扰素等炎性介质。HBP进人细胞后会聚集在线粒体区域，通过线粒体途径参与调节细胞凋亡。HBP对于单核细胞的趋化及激活作用，对于增强机体对感染或损伤的免疫反应具有重要的作用。中性粒细胞成熟后较易合成或释放HBP，中性粒细胞促分泌囊泡释放HBP的能力在HBP促炎症作用中是至关重要的。HPB在临床中的应用场景较为广泛，尤其是在感染性疾病中的应用，例如脓毒症、细菌性性脑膜炎、尿路感染、肺部感染等。同时，HPB在创伤性疾病、阿尔茨海默症、动脉粥样硬化、角膜愈合中也显示了其预测价值和调节功能。
本申请提供了用于检测样品中肝素结合蛋白的试剂盒以及该试剂盒在定量检测肝素结合蛋白中的用途或使用方法。本申请提供的试剂盒可同时适用全血、血浆和血浆样品的处理。其中，试剂盒的预处理试剂包括适宜浓度的溶血剂和电解质，配合缓冲试剂提供的弱酸性反应环境，可快速实现对全血样品中血液细胞等成分的溶解，且试剂盒的识别试剂与预处理试剂混合形成的反应体系具有较好的稳定性，满足检测需求。同时，该预处理试剂具备的溶血作用不影响血清、血浆样品的后续检测，适用性较好。
本申请的第一方面公开了一种用于检测样品中肝素结合蛋白的试剂盒，包括用于预处理样品的预处理试剂和用于识别肝素结合蛋白的识别试剂。在一些实施例中，所述预处理试剂包括溶血剂和电解质。预处理试剂可直接对样品进行溶血等预处理，以简化检测流程和缩短检测时间。在一些实施例中，所述样品可为全血样品或血浆样品或血清样品。优选的，所述样品可为全血样品。
溶血剂可以使血液细胞发生裂解，从而对样品进行快速溶血处理，降低使用试剂盒检测HBP含量时对样品预处理的要求。在一些实施例中，预处理试剂的溶血剂选自聚氧乙烯型非离子表面活性剂。例如，预处理试剂的溶血剂选自TritonX-100或吐温。优选的，预处理试剂的溶血剂为TritonX-100。溶血剂的浓度可同时影响溶血反应速度及后续抗原抗体结合反应的反应体系的稳定性，溶血剂浓度过低会导致溶血速度过慢或溶血不彻底，溶血剂浓度过高会导致后续结合反应的反应体系稳定性变差，使检测结果异常。在一些实施例中，预处理试剂中溶血剂的浓度约为1.0mg/mL、1.1mg/mL、1.2mg/mL、1.3mg/mL、1.4mg/mL、1.5mg/mL、1.6mg/mL、1.7mg/mL、1.8mg/mL、1.9mg/mL、2.0mg/mL、2.1mg/mL、2.2mg/mL、2.3mg/mL、2.4mg/mL、2.5mg/mL、2.6mg/mL、2.7mg/mL、2.8mg/mL、2.9mg/mL或3.0mg/mL。还包括上述端值的组合为特征的任一范围，包括但不限于约1.0mg/mL至约3.0mg/mL、约1.5mg/mL至约3mg/mL、约2.0mg/mL至约3mg/mL、2.5mg/mL至约3.0mg/mL、约1.0mg/mL至约2.5mg/mL、约1.0mg/mL至约2.0mg/mL或约1.0mg/mL至约1.5mg/mL。优选的，预处理试剂中溶血剂的浓度约为2mg/mL。
具体的，全血样本成分复杂，含有红细胞、白细胞、血小板等有形成分，这些有形成分直接干扰测定结果，因此，未经处理的全血样本无法进行后续的肝素结合蛋白的免疫比浊法含量检测。预处理试剂通过加入适宜浓度及种类的溶血剂，快速破坏血液细胞，溶解血液细胞细胞壁上的脂类等成分，使全血样品经快速处理即可满足检测要求。
电解质可以影响抗原与抗体特异性结合后形成的复合物的分子表面所带电荷，使复合物间的排斥力下降，促使抗原抗体复合物从溶液中析出，形成可见的沉淀物或凝集物。在一些实施例中，预处理试剂的电解质选自无机盐类。例如，预处理试剂的电解质选自氯化钠、氯化钾、氯化镁和硫酸镁中的一种或多种的组合。较优选的，预处理试剂的电解质为氯化钠。在一些实施例中，预处理试剂中溶血剂的浓度约为30mg/ml、31mg/ml、32mg/ml、33mg/ml、34mg/ml、35mg/ml、36mg/ml、37mg/ml、38mg/ml、39mg/ml、40mg/ml、41mg/ml、42mg/ml、43mg/ml、44mg/ml、45mg/ml、46mg/ml、47mg/ml、48mg/ml、49mg/ml、50mg/ml、51mg/ml、52mg/ml、53mg/ml、54mg/ml、55mg/ml、56mg/ml、57mg/ml、58mg/ml、59mg/ml或60mg/ml。还包括上述端值的组合为特征的任一范围，包括但不限于30mg/mL至约60mg/mL、约40mg/mL至约60mg/mL、约50mg/mL至约60mg/mL、30mg/mL至约50mg/mL、约30mg/mL至约40mg/mL。优选的，预处理试剂中电解质的浓度约为40mg/mL。
预处理试剂的pH值可以影响溶血剂的溶血能力和电解质提供的离子强度。在一些实施例中，预处理试剂的pH值约为5.5、5.6、.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4或6.5。还包括上述端值的组合为特征的任一范围，包括但不限于约5.5至约6.5、约5.8至约6.5、约6.0至约6.5、约5.5至约6.2、约5.5至约6.2或约5.5至约6.0。优选的，预处理试剂的pH值约为6.0。具体的，适宜浓度的溶血剂结合缓冲试剂提供的弱酸性反应环境，可使预处理试剂实现快速。
在一些实施例中，所述预处理试剂还含有缓冲试剂。缓冲试剂可以是指由溶度较大的弱碱(或弱酸)及其共轭酸(或共轭碱)组成，可通过弱酸解离平衡的移动达到消耗掉外来少量强酸、强碱，或对抗稍加稀释的作用，使溶液pH值不发生明显的变化。在一些实施例中，预处理试剂的缓冲试剂可以为磷酸盐缓冲液。例如，缓冲试剂可以选自PB缓冲液和PBS缓冲液。在一些实施例中，预处理试剂的缓冲试剂可以为Tris缓冲液。例如，缓冲试剂可以选自Tris-HCl缓冲液、Tris缓冲生理盐水和Tris-TBS缓冲液。在一些实施例中，预处理试剂的缓冲试剂可以为两性离子缓冲液。例如，缓冲试剂可以选自MES缓冲液、BIS-TRIS缓冲液、ADA缓冲液、ACES缓冲液、PIPES缓冲液、MOPSO缓冲液、BIS-TRIS PROPANE缓冲液、BES缓冲液、MOPS缓冲液、HEPES缓冲液、TES缓冲液、DIPSO缓冲液、TAPSO缓冲液、TRIZAMA缓冲液、HEPPSO缓冲液、HEPPS缓冲液、POPSO缓冲液、EPPS缓冲液、TEA缓冲液、BICINE缓冲液和TAPS缓冲液。在一些实施例中，预处理试剂的缓冲试剂可以为有机酸缓冲液。例如，缓冲试剂可以选自甲酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液。在一些实施例中，预处理试剂的缓冲试剂可以为硼酸盐缓冲液。在一些实施例中，预处理试剂的缓冲试剂可以为氨基酸缓冲液。例如，缓冲试剂可以选自甘氨酸-HCL缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、甘氨酸-Tris缓冲液和组氨酸缓冲液。较优的，预处理试剂的缓冲试剂可以选自PB缓冲液、MES缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、PIPES缓冲液中的一种或多种的组合。更优的，预处理试剂的缓冲试剂可以为PB缓冲液。
缓冲试剂的浓度可以影响肝素结合蛋白识别的反应环境。在一些实施例中，预处理试剂中缓冲试剂的浓度约为5mmol/L、6mmol/L、7mmol/L、8mmol/L、9mmol/L、10mmol/L、11mmol/L、12mmol/L、13mmol/L、14mmol/L、15mmol/L、16mmol/L、17mmol/L、18mmol/L、19mmol/L、20mmol/L、21mmol/L、22mmol/L、23mmol/L、24mmol/L、25mmol/L、26mmol/L、27mmol/L、28mmol/L、29mmol/L、30mmol/L、31mmol/L、32mmol/L、33mmol/L、34mmol/L、35mmol/L、36mmol/L、37mmol/L、38mmol/L、39mmol/L、40mmol/L、41mmol/L、42mmol/L、43mmol/L、44mmol/L、45mmol/L、46mmol/L、47mmol/L、48mmol/L、49mmol/L、50mmol/L、51mmol/L、52mmol/L、53mmol/L、54mmol/L、55mmol/L、56mmol/L、57mmol/L、58mmol/L、59mmol/L、60mmol/L、61mmol/L、62mmol/L、63mmol/L、64mmol/L、65mmol/L、66mmol/L、67mmol/L、68mmol/L、69mmol/L、70mmol/L、71mmol/L、72mmol/L、73mmol/L、74mmol/L、75mmol/L、76mmol/L、77mmol/L、78mmol/L、79mmol/L、80mmol/L、81mmol/L、82mmol/L、83mmol/L、84mmol/L、85mmol/L、86mmol/L、87mmol/L、88mmol/L、89mmol/L、90mmol/L、91mmol/L、92mmol/L、93mmol/L、94mmol/L、95mmol/L、96mmol/L、97mmol/L、98mmol/L、99mmol/L或100mmol/L。还包括上述端值的组合为特征的任一范围，包括但不限于约5mmol/L至约100mmol/L、约5mmol/L至约80mmol/L、约5mmol/L至约60mmol/L、5mmol/L至约40mmol/L、约25mmol/L至约100mmol/L、约45mmol/L至约100mmol/L、约65mmol/L至约100mmol/L或约85mmol/L至约100mmol/L。较优的，预处理试剂中缓冲试剂的浓度约为10-50mmol/L。更优的，预处理试剂中缓冲试剂的浓度约为25mmol/L。
在一些实施例中预处理试剂还包括加速剂。加速剂可加快抗原抗体形成复合物的速度，促使反应体系中快速出现沉淀。在一些实施例中，预处理试剂的加速剂选自聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和聚乙二醇8000中的一种或多种的组合。优选的，预处理试剂的加速剂为聚乙二醇6000。在一些实施例中，预处理试剂中加速剂的浓度约为10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、40mg/ml、45mg/ml或50mg/ml。还包括上述端值的组合为特征的任一范围，包括但不限于约10mg/mL至50mg/mL、20mg/mL至50mg/mL、30mg/mL至50mg/mL、40mg/mL至50mg/mL、10mg/mL至40mg/mL、10mg/mL至30mg/mL或10mg/mL至20mg/mL。优选的，预处理试剂中加速剂的浓度约为20mg/mL。
在一些实施例中，预处理试剂还包括防腐剂。防腐剂可以控制预处理试剂中微生物含量，具有防腐杀菌的功能。在一些实施例中，预处理试剂的防腐剂选自选自叠氮钠、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、Proclin系列中的一种或多种的组合。优选的，预处理试剂的防腐剂为proclin300。在一些实施例中，预处理试剂中防腐剂的浓度约为0.2mg/mL、0.22mg/mL、0.24mg/mL、0.26mg/mL、0.28mg/mL、0.3mg/mL、0.32mg/mL、0.34mg/mL、0.36mg/mL、0.38mg/mL或0.4mg/mL。还包括上述端值的组合为特征的任一范围，包括但不限于约0.2mg/mL至约0.4mg/mL、约0.24mg/mL至约0.4mg/mL、约0.28mg/mL至约0.4mg/mL、约0.32mg/mL至约0.4mg/mL、约0.2mg/mL至约0.36mg/mL、约0.2mg/mL至约0.32mg/mL或约0.2mg/mL至约0.28mg/mL。优选的，预处理试剂中防腐剂的浓度约为0.3mg/mL。
识别试剂可用于结合并识别样品中的肝素结合蛋白。在一些实施例中，识别试剂可包括偶联有肝素结合蛋白抗体或其抗原结合片段的乳胶微球。在一些实施例中，乳胶微球偶联有肝素结合蛋白单克隆抗体和/或肝素结合蛋白多克隆抗体。优选的，乳胶微球偶联有肝素结合蛋白单克隆抗体。在一些实施例中，乳胶微球可为羧基化聚苯乙烯微球。具体的，羧基化聚苯乙烯微球为含有聚苯乙烯的多聚物，多聚物表面存在羧基等活性基团，易于与酶蛋白质等结合。在一些实施例中，乳胶微球的粒径范围可在70-200nm之间。
肝素结合蛋白抗体或其抗原结合片段可在交联缓冲液中通过化学交联剂偶联至乳胶微球表面。在一些实施例中，化学交联剂可选自EDC-HCL、NHS、sulfo-NHS、EDC、酰肼、MIC中的一种或多种的组合。优选的，化学交联剂可为EDC。在一些实施例中，交联缓冲液可以为磷酸盐缓冲液。例如，交联缓冲液可以选自PB缓冲液和PBS缓冲液。在一些实施例中，交联缓冲液可以为Tris缓冲液。例如，交联缓冲液可以选自Tris-HCl缓冲液、Tris缓冲生理盐水和Tris-TBS缓冲液。在一些实施例中，交联缓冲液可以为两性离子缓冲液。例如，交联缓冲液可以选自MES缓冲液、BIS-TRIS缓冲液、ADA缓冲液、ACES缓冲液、PIPES缓冲液、MOPSO缓冲液、BIS-TRIS PROPANE缓冲液、BES缓冲液、MOPS缓冲液、HEPES缓冲液、TES缓冲液、DIPSO缓冲液、TAPSO缓冲液、TRIZAMA缓冲液、HEPPSO缓冲液、HEPPS缓冲液、POPSO缓冲液、EPPS缓冲液、TEA缓冲液、BICINE缓冲液和TAPS缓冲液。在一些实施例中，交联缓冲液可以为有机酸缓冲液。例如，交联缓冲液可以选自甲酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、琥珀酸盐缓冲液。在一些实施例中，交联缓冲液可以为硼酸盐缓冲液。在一些实施例中，交联缓冲液可以为氨基酸缓冲液。例如，交联缓冲液可以选自甘氨酸-HCL缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、甘氨酸-Tris缓冲液和组氨酸缓冲液。较优地，交联缓冲液可为不含氨基的缓冲液。更优地，在一些实施例中，交联缓冲液可选自MES、PB、HEPES、MOPSO中的一种或多种的组合。
在一些实施例中，所述识别试剂还包括电解质。在一些实施例中，所述电解质选自氯化钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁中的一种或多种的组合。优选的，识别试剂的电解质可为氯化钠。在一些实施例中，识别试剂中电解质的浓度可约为5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml、30mg/ml、35mg/ml、40mg/ml、45mg/ml或50mg/ml。还包括以上述端值的组合为特征的任一范围，包括但不限于约5mg/mL至50mg/mL、5mg/mL至40mg/mL、5mg/mL至30mg/mL、5mg/mL至20mg/mL、5mg/mL至10mg/mL、10mg/mL至50mg/mL、20mg/mL至50mg/mL、30mg/mL至50mg/mL或40mg/mL至50mg/mL。较优的，识别试剂中电解质的浓度可约为10-40mg/mL。更优的，识别试剂中电解质的浓度可约为10mg/mL。
在一些实施例中，所述识别试剂还包括稳定剂。在一些实施例中，稳定剂可以选自酪蛋白、甘露醇、壳聚糖、牛血清白蛋白中的一种或多种的组合。优选的，识别试剂的稳定剂可为牛血清白蛋白。在一些实施例中，识别试剂中稳定剂的浓度可约为1mg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL或5mg/mL。还包括以上述端值的组合为特征的任一范围，包括但不限于约1mg/mL至5mg/mL、约2mg/mL至5mg/mL、约3mg/mL至5mg/mL、约1mg/mL至4mg/mL或约1mg/mL至3mg/mL。较优的，识别试剂中稳定剂的浓度可约为1-3mg/mL。更优的，识别试剂中稳定剂的浓度可约为3mg/mL。
在一些实施例中，所述识别试剂还包括表面活性剂。在一些实施例中，识别试剂的表面活性剂可选自吐温、脂肪醇聚乙二醇醚、辛基苯基聚氧乙烯醚中的一种或多种的组合。较优的，识别试剂的表面活性剂可为吐温。例如，吐温20、吐温60或吐温80。更优的，识别试剂的表面活性剂可为吐温20。在一些实施例中，识别试剂中表面活性剂的浓度可约为0.5mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.0mg/mL、2.5mg/mL或3.0mg/mL。还包括以上述端值的组合为特征的任一范围，包括但不限于约0.5mg/mL至3.0mg/mL、约1.0mg/mL至3.0mg/mL、约2.0mg/mL至3.0mg/mL、约0.5mg/mL至2.0mg/mL或约0.5mg/mL至1.0mg/mL。较优的，识别试剂中表面活性剂的浓度可约为0.5-1.5mg/mL。更优的，识别试剂中表面活性剂的浓度可约为1.0mg/mL。
在一些实施例中，所述识别试剂还包括防腐剂。在一些实施例中，识别试剂的防腐剂选自叠氮钠、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯、Proclin系列中的一种或多种的组合。较优的，识别试剂的防腐剂可选自Proclin系列。例如，Proclin150、Proclin200、Proclin300或Proclin5000。更优的，识别试剂的防腐剂可为Proclin200。在一些实施例中，识别试剂中防腐剂的浓度可约为0.5mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.5mg/mL、3.0mg/mL、3.5mg/mL或4.0mg/mL。还包括以上述端值的组合为特征的任一范围，包括但不限于约0.5mg/mL至4.0mg/mL、约1.0mg/mL至4.0mg/mL、约2.0mg/mL至4.0mg/mL、约3.0mg/mL至4.0mg/mL、约0.5mg/mL至3.0mg/mL、约0.5mg/mL至2.0mg/mL或约0.5mg/mL至1.0mg/mL。较优的，识别试剂中防腐剂的浓度可约为0.5-2.0mg/mL。更优的，识别试剂中防腐剂的浓度可约为1.0mg/mL。
在一些实施例中，识别试剂的pH值约为6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.8或8。还包括上述端值的组合为特征的任一范围，包括但不限于约6至约8、约6.5至约8、约7至约8、约6至约7.5或约6至约7。较优的，交联缓冲液的pH值可约为7-8。更优的，交联缓冲液的pH值可约为7.2。
在一些实施例中，所述试剂盒还可包括浓度已知的肝素结合蛋白校准品。具体的，使用一系列浓度已知的HBP校准品分别各自与预处理试剂、识别试剂混合反应，并测量吸光度，可根据该一系列HBP校准品的吸光度值及HBP浓度值拟合出标准曲线。通过将待测样品的吸光度值结合标准曲线，可取得待测样品的HBP浓度。
本申请的另一方面公开了如上任意一个实施例所述的试剂盒在定量检测肝素结合蛋白中的用途；或称使用试剂盒定量检测肝素结合蛋白的方法。如图1所示，所述用途包括：
步骤101，样品预处理。
在一些实施例中，样品预处理包括：将所述预处理试剂和所述样品混合后，在预设温度下孵育第一时长，得到孵育后的第一混合液。在一些实施例中，样品可以为全血样品、血浆样品或血清样品。优选的，所述样品为全血。
在一些实施例中，步骤101中样品与预处理试剂的体积比可为0.1:100、0.5:100、1:100、2:100、3:100、4:100、5:100、6:100、7:100、8:100、9:100、10:100、11:100、12:100、13:100、14:100、15:100、16100、17:100、18:100、19:100或20:100。还包括以上述端值的组合为特征的任一范围，包括但不限于0.1:100至20:100、5:100至20:100、10:100至20:100、15:100至20:100、0.1:100至15:100、0.1:100至10:100或0.1:100至5:100。优选的，步骤101中样品与预处理试剂的体积比可为1:100-10:100。
在一些实施例中，进一步的，步骤101中第一时长可约为3min、4min、5min、6min、7min或8min。还包括以上述端值的组合为特征的任一范围，包括但不限于约3min至约8min、约4min至约8min、约5min至约8min、约6min至约8min、约3min至约7min、约3min至约6min或约3min至约5min。较优的，步骤101中第一时长可约为3-5min。更优的，步骤101中第一时长可约为3min。
步骤102，抗原抗体结合反应。
在一些实施例中，抗原抗体结合反应包括：将所述孵育后的第一混合液与所述识别试剂混合，持续第二时长的反应，得到第二混合液。在一些实施例中，步骤101中的预处理试剂和步骤102中的识别试剂的体积比可为1:10、5:10、10:10、15:10、20:10、25:10、30:10、35:10、40:10、45:10、50:10、55:10、65:10、70:10、75:10、80:10、85:10、90:10、95:10或100:10。还包括以上述端值的组合为特征的任一范围，包括但不限于1:10至100:10、1:10至80:10、1:10至60:10、1:10至40:10、10:10至100:10、30:10至100:10、50:10至100:10或70:10至100:10。优选的，步骤101中的预处理试剂和步骤102中的识别试剂的体积比可为1:1-4:1。
在一些实施例中，进一步的，步骤102中第二时长可约为2min、3min、4min、5min或6min。还包括以上述端值的组合为特征的任一范围，包括但不限于约2min至约6min、3min至约6min、4min至约6min、2min至约5min或2min至约4min。较优的，步骤102中第二时长可为3-5min。更优的，步骤102中第二时长可约为3min。
步骤103，检测吸光度。
在一些实施例中，检测吸光度包括：检测所述第二混合液的吸光度。具体的，在免疫比浊检测的一点终点法中，检测抗原抗体结合反应预定时间以后的终点吸光度值，可基于该终点吸光度值确定肝素结合蛋白浓度。
在一些实施例中，检测吸光度包括：检测所述第一混合液和第二混合液的吸光度。具体的，在免疫比浊检测的两点终点法中，检测抗原抗体结合反应开始前的第一吸光度和抗原抗体结合反应到达终点或平衡时的第二吸光度，可基于第一吸光度与第二吸光度的样品吸光度差值确定肝素结合蛋白浓度。
在一些实施例中，进一步的，检测吸光度的预设测试主波长可为500nm、510nm、520nm、530nm、540nm、550nm、560nm、570nm、580nm、590nm、600nm、610nm、620nm、630nm、640nm、650nm、660nm、670nm、680nm、690nm或700nm。还包括以上述端值的组合为特征的任一范围，包括但不限于500nm至700nm、550nm至700nm、600nm至700nm、650nm至700nm、500nm至650nm、500nm至600nm或500nm至550nm。优选的，检测吸光度的预设测试主波长可为650nm。
步骤104，基于吸光度确定肝素结合蛋白浓度。
在一些实施例中，基于吸光度确定肝素结合蛋白浓度包括：通过测定一系列已知浓度的肝素结合蛋白标准品的标准品吸光度值制作标准曲线，基于步骤103检测到的终点吸光度值，利用标准曲线确定样品中肝素结合蛋白的浓度。
在一些实施例中，基于吸光度确定肝素结合蛋白浓度包括：通过测定一系列已知浓度的肝素结合蛋白标准品的标准品吸光度差值制作标准曲线，基于步骤103检测到的样品吸光度差值，利用标准曲线确定样品中肝素结合蛋白的浓度。
具体的，除如温度、第一时长、第二时长在内的个别可调节参数可能存在数值范围的差异外，上述步骤101至步骤104与常规免疫比浊试剂盒配合分析仪测定吸光度确定肝素结合蛋白浓度的步骤相同，因此，借助可调节参数的现有分析仪可以实现上述步骤101至步骤104的自动化执行。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂公司购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
实施例1、制备试剂
1.1制备预处理试剂
取去离子蒸馏水溶解氯化钠，加入PB缓冲液混合均匀，再加入少量TritonX-100、PEG6000和proclin300，调整浓度及pH值，制得预处理试剂。在预处理试剂中，PB缓冲液浓度为25mM，TritonX-100浓度为2.0mg/mL，氯化钠浓度为40mg/mL，PEG6000浓度为20mg/mL，proclin300浓度为0.3mg/mL。预处理试剂的pH值为6.0。
1.2制备识别试剂
识别试剂包括偶联HBP抗体的乳胶微球、PB缓冲液、氯化钠、牛血清白蛋白、吐温20，proclin300。在识别试剂中，PB缓冲液浓度为50mM，偶联HBP抗体的乳胶微球浓度为10mg/mL，氯化钠浓度为10mg/mL，牛血清白蛋白浓度为3.0mg/mL，吐温20浓度为1.0mg/mL，proclin300浓度为1.0mg/mL。识别试剂的pH值为7.2。其中，偶联HBP抗体的乳胶微球的制备方法包括：
1)取10mL100mM、pH＝5.0的MES溶液分散100mg含有羧基的乳胶微球(JSR株式会社，货号P0113，平均粒径为200nm)，加入5mgEDC，室温搅拌15min，离心弃上清液，取沉淀，用40mL50mM的PB缓冲液复溶沉淀，获得乳胶微球溶液；
2)取5uLHBP单克隆抗体(市售)，用1mL50mM的PB缓冲液稀释HBP单克隆抗体，制得HBP抗体溶液；
3)混合步骤1)的乳胶微球溶液和步骤2)的HBP抗体溶液，室温搅拌2h，制得偶联HBP抗体的乳胶微球。
1.3制备不同浓度的校准品
1.3.1选定高浓度校准品及零值校准品。选用市售的1000ng/ml的HBP抗原校准品作为高浓度HBP抗原校准品，选用小牛血清作为零值HBP抗原校准品。
1.3.2稀释。使用零值HBP抗原校准品稀释高浓度HBP抗原校准品，制备浓度为1000ng/ml、800ng/ml、600ng/ml、400ng/ml、200ng/ml、100ng/ml、50ng/ml、25ng/ml、0ng/ml的9个不同浓度的HBP抗原校准品。
1.4选定质控品
选用市售的25ng/ml的HBP企业精密度参考品1和市售的200ng/ml的HBP企业精密度参考品2作为质控品。
实施例2、制作标准曲线
2.1测定校准品吸光度
使用实施例1制备的预处理试剂、识别试剂以及9个不同浓度的HBP抗原校准品，在全自动蛋白分析仪上测定HBP抗原校准品的吸光度(OD)，测定条件见表1。每个浓度的HBP抗原校准品进行3次测定后取平均值，测定结果见表2。
表1.测定条件
| 温度 | 37℃ |
| 测试波长 | 650nm |
| 样本载入量 | 5ul |
| 预处理试剂载入量 | 150ul |
| 识别试剂载入量 | 50ul |
| 反应时间 | 3min |
表2.不同浓度HBP抗原校准品吸光度测定结果
| 浓度(ng/mL) | 0 | 25 | 50 | 100 | 200 | 400 | 600 | 800 | 1000 |
| 吸光度(OD) | 252 | 981 | 1279 | 2405 | 4860 | 8936 | 13633 | 18240 | 22647 |
2.2制作标准曲线
以HBP抗原校准品浓度为X轴，吸光度为Y轴，制作HBP反应标准曲线。制作的HBP反应标准曲线见图2。
实施例3、测定最低检出限(分析灵敏度)
3.1重复测定空白样品吸光度
以实施例1选用的零值HBP抗原校准品作为空白样品，使用实施例1制备的预处理试剂和识别试剂，在全自动蛋白分析仪上测定空白样品的吸光度。测定条件参见实施例2，重复测定10次，测定结果见表3。
表3.空白样品吸光度测定结果
| 测定序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
| 吸光度(OD) | 253 | 248 | 229 | 261 | 258 | 244 | 258 | 249 | 241 | 254 |
3.2计算最低检出限
计算空白样品的吸光度均值
和空白样品吸光度的标准差(SD)，
为249.5，SD为9.63。以
为代入值代入实施例2制作的HBP反应标准曲线，计算得出最低检出限为：2.06ng/ml。
实施例4、测定重复性(准确度)
4.1重复测定质控品HBP浓度
以实施例1选用的质控品，即HBP企业精密度参考品1和HBP企业精密度参考品2，作为样品，使用实施例1制备的预处理试剂和识别试剂，在全自动蛋白分析仪上重复测定样品的吸光度，重复次数为10次，测定条件参见表4。以测定吸光度为代入值代入实施例2制作的HBP反应标准曲线，计算得出质控品的HBP测定浓度。
表4.测定条件
| 温度 | 37℃ |
| 测试波长 | 650nm |
| 样本载入量 | 5ul |
| 预处理试剂载入量 | 150ul |
| 识别试剂载入量 | 50ul |
| 反应时间 | 3min |
4.2计算变异系数
计算质控品的
及SD，根据以下所示式-1计算变异系数(CV)：
式中，CV——变异系数；
SD——标准差。
质控品HBP浓度测定结果及CV计算结果见表5。
表5.质控品HBP浓度测定结果及CV计算结果
以变异系数考察重复性(精密度)。根据HBP浓度测定结果及CV计算结果，使用预处理试剂和识别试剂重复测定HBP企业精密度参考品1(25ng/ml)的HBP浓度时，该HBP测定浓度的变异系数为1.99％；使用预处理试剂和识别试剂重复测定HBP企业精密度参考品2(200ng/ml)的HBP浓度时，该HBP测定浓度的变异系数为1.44％。上述试剂符合CV≤10％的技术要求。
实施例5、同源性样品一致性分析
5.1HBP全血样品与HBP血浆样品一致性分析
5.1.1测定HBP全血/血浆同源样品的HBP浓度。制备同源的HBP全血样品和HBP血浆样品，共127组HBP全血/血浆同源样品。使用实施例1制备的预处理试剂和识别试剂，在全自动蛋白分析仪上测定N组HBP全血/血浆同源样品的HBP浓度，测定方法具体参见实施例4。
5.1.2HBP全血/血浆同源样品吸光度回归分析。以N组HBP全血/血浆同源样品中的HBP全血样品的HBP测定浓度作为X轴，N组HBP全血/血浆同源样品中的HBP血浆样品的HBP测定浓度作为Y轴，制作散点图并进行回归分析。HBP全血/血浆同源样品HBP测定浓度回归分析散点图见图3。根据回归分析结果，使用HBP全血样品和同源的HBP血浆样品测定的HBP浓度，其回归分析的相关指数r2为0.9981，符合r2≥0.99的技术要求，HBP全血样品的HBP测定浓度与HBP血浆样品的HBP测定浓度之间具有较好的一致性。
5.2HBP全血样品与HBP血清样品一致性分析
5.2.1测定HBP全血/血清同源样品的HBP测定浓度。制备同源的HBP全血样品和HBP血清样品，共127组HBP全血/血清同源样品。使用实施例1制备的预处理试剂和识别试剂，在全自动蛋白分析仪上测定N组HBP全血/血清同源样品的HBP浓度，测定方法具体参见实施例4。
5.2.2HBP全血/血清同源样品HBP测定浓度回归分析。以N组HBP全血/血清同源样品中的HBP全血样品的HBP测定浓度作为X轴，N组HBP全血/血清同源样品中的HBP血清样品的HBP测定浓度作为Y轴，制作散点图并进行回归分析。HBP全血/血清同源样品HBP测定浓度回归分析散点图见图4。根据回归分析结果，使用HBP全血样品和同源的HBP血清样品测定的HBP浓度，其回归分析的相关指数r2为0.9981，符合r2≥0.99的技术要求，HBP全血样品的HBP测定浓度与HBP血清样品的HBP测定浓度之间具有较好的一致性。
5.3一致性分析结论。通过使用实施例1制备的预处理试剂和识别试剂测定待测样品的吸光度以确定待测样品中HBP浓度，其中，待测样品为全血样品的测定结果、待测样品为血浆样品的测定结果以及待测样品为血清样品的测定结果之间具有较好的一致性。使用实施例1制备的预处理试剂和识别试剂对全血样品、血浆样品和血清样品进行HBP浓度测定均可保持较好的准确度和精密度。
本申请所披露的一种人肝素结合蛋白免疫比浊检测试剂盒，可能带来的有益效果包括但不限于：(1)通过预处理试剂中缓冲试剂提供的弱酸性反应环境，具有溶血作用的溶血剂TritonX-100以及电解质氯化钠提供的适宜的离子强度，本申请的试剂盒可使用全血样品检测HBP浓度，减少检测所需采血量；(2)利用全血样品进行检测，缩短检测流程和检测时间；(3)与常规蛋白质分析仪配合使用即可实现全自动检测。
需要说明的是，不同实施例可能产生的有益效果不同，在不同的实施例里，可能产生的有益效果可以是以上任意一种或几种的组合，也可以是其他任何可能获得的有益效果。
本领域的技术人员应当理解，以上实施例仅为说明本发明，而不对本发明构成限制。凡在本发明的精神和原则内所作的任何修改、等同替换和变动等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (16)
1.一种用于检测样品中肝素结合蛋白的试剂盒，其特征在于，包括用于预处理样品的预处理试剂和用于识别肝素结合蛋白的识别试剂，所述预处理试剂包括溶血剂和电解质，其中：
所述溶血剂是浓度为1-3mg/mL的TritonX-100，所述电解质是浓度为30-60mg/mL的氯化钠，并且所述预处理试剂的pH值为5.5-6.5。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述TritonX-100的浓度为2mg/mL。
3.如权利要求要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述氯化钠的浓度为40mg/mL。
4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述样品为全血。
5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述样品为血清或血浆。
6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述预处理试剂还含有缓冲试剂，所述缓冲试剂选自磷酸、2-(N-吗啉代)乙磺酸、磷酸氢二钠-柠檬酸、哌嗪-1,4-二乙磺酸中的一种或几种的组合。
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲试剂的浓度为5-100mmol/L。
8.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述预处理试剂还包括加速剂聚乙二醇6000，其中聚乙二醇6000的浓度为10-50mg/mL。
9.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述预处理试剂还包括防腐剂Proclin300，其中Proclin300的浓度为0.2-0.4mg/mL。
10.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述用于识别肝素结合蛋白的识别试剂包括偶联有肝素结合蛋白抗体或其抗原结合片段的乳胶微球。
11.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括浓度已知的肝素结合蛋白校准品。
12.如权利要求1至11任意一项所述的试剂盒在定量检测肝素结合蛋白中的用途，其特征在于，所述用途包括：
i)将所述预处理试剂和所述样品混合后，在预设温度下孵育第一时长，得到孵育后的第一混合液；
ii)将所述孵育后的第一混合液与所述识别试剂混合，持续第二时长的反应，得到第二混合液；
iii)检测所述第二混合液的吸光度；以及
iiii)基于所述步骤iii)检测到的所述吸光度，确定所述样品中肝素结合蛋白的浓度。
13.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述步骤i)中所述样品与所述预处理试剂的体积比为0.1:100-20:100。
14.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述步骤i)中的所述预处理试剂和所述步骤ii)中所述识别试剂的体积比为1:10-100:10。
15.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述步骤iii)中预设测试主波长为500-700nm。
16.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述第一时长为3-8分钟，以及
所述第二时长为2-6分钟。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110217641.2A CN113189341A (zh) | 2021-02-26 | 2021-02-26 | 一种人肝素结合蛋白免疫比浊检测试剂及其用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110217641.2A CN113189341A (zh) | 2021-02-26 | 2021-02-26 | 一种人肝素结合蛋白免疫比浊检测试剂及其用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113189341A true CN113189341A (zh) | 2021-07-30 |
Family
ID=76973027
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110217641.2A Pending CN113189341A (zh) | 2021-02-26 | 2021-02-26 | 一种人肝素结合蛋白免疫比浊检测试剂及其用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113189341A (zh) |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106771253A (zh) * | 2017-01-17 | 2017-05-31 | 安徽同致生物工程股份有限公司 | 肝素结合蛋白测定试剂盒 |
| CN108051439A (zh) * | 2017-12-25 | 2018-05-18 | 苏州康和顺医疗技术有限公司 | 一种单试剂肝素结合蛋白检测试剂盒及其制备方法 |
| CN108152512A (zh) * | 2017-12-25 | 2018-06-12 | 苏州康和顺医疗技术有限公司 | 肝素结合蛋白检测试剂盒及其制备方法 |
| CN108956978A (zh) * | 2018-04-11 | 2018-12-07 | 中翰盛泰生物技术股份有限公司 | 一种应用胶乳免疫比浊法的肝素结合蛋白测定试剂盒及测定方法 |
| CN110806487A (zh) * | 2019-12-02 | 2020-02-18 | 深圳上泰生物工程有限公司 | 一种用于人肝素结合蛋白检测的试剂盒及其制备方法 |
| CN111239406A (zh) * | 2020-01-17 | 2020-06-05 | 王兰珍 | 一种肝细胞生长因子胶乳免疫比浊检测试剂盒及其制备方法和应用 |
| CN111239422A (zh) * | 2018-12-25 | 2020-06-05 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种血清脂蛋白（a）胶乳增强比浊检测试剂盒 |
| CN111679086A (zh) * | 2020-08-11 | 2020-09-18 | 苏州康和顺医疗技术有限公司 | 一种hbp的磁微粒化学发光法检测试剂盒及其制备方法 |
-
2021
- 2021-02-26 CN CN202110217641.2A patent/CN113189341A/zh active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106771253A (zh) * | 2017-01-17 | 2017-05-31 | 安徽同致生物工程股份有限公司 | 肝素结合蛋白测定试剂盒 |
| CN108051439A (zh) * | 2017-12-25 | 2018-05-18 | 苏州康和顺医疗技术有限公司 | 一种单试剂肝素结合蛋白检测试剂盒及其制备方法 |
| CN108152512A (zh) * | 2017-12-25 | 2018-06-12 | 苏州康和顺医疗技术有限公司 | 肝素结合蛋白检测试剂盒及其制备方法 |
| CN108956978A (zh) * | 2018-04-11 | 2018-12-07 | 中翰盛泰生物技术股份有限公司 | 一种应用胶乳免疫比浊法的肝素结合蛋白测定试剂盒及测定方法 |
| CN111239422A (zh) * | 2018-12-25 | 2020-06-05 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种血清脂蛋白（a）胶乳增强比浊检测试剂盒 |
| CN110806487A (zh) * | 2019-12-02 | 2020-02-18 | 深圳上泰生物工程有限公司 | 一种用于人肝素结合蛋白检测的试剂盒及其制备方法 |
| CN111239406A (zh) * | 2020-01-17 | 2020-06-05 | 王兰珍 | 一种肝细胞生长因子胶乳免疫比浊检测试剂盒及其制备方法和应用 |
| CN111679086A (zh) * | 2020-08-11 | 2020-09-18 | 苏州康和顺医疗技术有限公司 | 一种hbp的磁微粒化学发光法检测试剂盒及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 中华人民共和国卫生部地方病防治司: "《血吸虫病研究资料汇编 1986-1990》", 上海科学技术出版社, pages: 372 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hara et al. | Urinary podocytes in primary focal segmental glomerulosclerosis | |
| JP5362564B2 (ja) | 細胞ヘモグロビンの測定方法 | |
| US6599713B1 (en) | Method for quantitating leukocyte count in whole blood sample | |
| CN109725160B (zh) | 一种降钙素原(pct)检测试剂盒 | |
| Smolenski et al. | Keratin and S100 calcium-binding proteins are major constituents of the bovine teat canal lining | |
| CN103308681B (zh) | 胰蛋白酶原-2检测试剂盒及制备方法 | |
| CN113866406B (zh) | 一种特异性检测糖缺失性转铁蛋白的试剂盒 | |
| CN109324181B (zh) | 一种免疫层析用封闭剂组合物、用途、及免疫层析试剂盒的制备方法 | |
| CN112698034B (zh) | 一种癌胚抗原cea的检测试剂盒 | |
| JPWO2020066722A1 (ja) | ヘモグロビンの測定試薬、測定キット及び測定方法 | |
| RU2408023C2 (ru) | Способ определения эндотоксина | |
| CN113189341A (zh) | 一种人肝素结合蛋白免疫比浊检测试剂及其用途 | |
| Lopes-Virella et al. | Urinary high density lipoprotein in minimal change glomerular disease and chronic glomerulopathies | |
| CN113049836A (zh) | 一种组合物及其脂联素检测试剂盒 | |
| CN112763725A (zh) | 一种胶乳比浊法测定c反蛋白检测试剂的制备及应用 | |
| CN115932239B (zh) | 一种氧化低密度脂蛋白保护剂、测定氧化低密度脂蛋白的检测试剂盒及其应用 | |
| JP2000258420A (ja) | 溶液中のヒトヘモグロビンの安定化方法および安定化溶液 | |
| CN109580931A (zh) | 一种α1-微球蛋白检测试剂盒 | |
| Hojo et al. | Hepatocyte growth factor and neutrophil elastase in idiopathic pulmonary fibrosis | |
| CN114875114A (zh) | 一种可溶性fms样酪氨酸激酶-1质控品及其制备方法 | |
| JP7325334B2 (ja) | ヘモグロビンとハプトグロビンとの複合体を安定化する方法、及びヘモグロビンを含む検体を保存するための保存溶液 | |
| JP2632989B2 (ja) | 不飽和鉄結合能の測定方法 | |
| Huang | Development and evaluation of an automated dye-binding assay for protein in cerebrospinal fluid. | |
| CN111624352B (zh) | 一种高准确性尿液中ngal检测试剂盒 | |
| JPH09224942A (ja) | ヒトヘモグロビンの安定化方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |