CN113181240A - 构树根皮在制备治疗特应性皮炎的药物上的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种构树根皮在制备治疗特应性皮炎的药物上的应用,属于医学药物技术领域。本发明是在确定构树根皮的正丁醇萃取部位效果显著的前提之下,以此为原料药制备成水凝胶制剂,并考察其在特应性皮炎小鼠模型上的疗效,使之更适合皮肤给药。由于特应性皮炎治疗周期长,水凝胶制剂也可提高患者的用药顺应性。实验结果表明含药水凝胶制剂同样具有明显疗效,且给药更具有顺应性,提高了药物在病患小鼠皮肤的停留时间,增加治疗效果。
Description
技术领域
本发明属于医学药物技术领域,特别涉及构树根皮在制备治疗特应性皮炎的药物上的应用。
背景技术
特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)是一种常见的炎症性皮肤病,以剧烈瘙痒和反复发作为主要特征,同时也伴随出现皮肤干燥、结痂、红斑和丘疹等现象。据统计,AD的发病率逐年上升,全球15%-30%的儿童和3%的成年人都受该病的困扰,其中大约1/2的AD儿童未来可能会患上过敏性哮喘,2/3的儿童存在患上过敏性鼻炎的风险,由AD过渡至过敏性鼻炎甚至过敏性哮喘,这个过程被称为过敏疾病三部曲。此外,由于搔抓行为导致患者皮肤屏障被破坏而加重病情,使患者陷入“瘙痒-搔抓-严重瘙痒”的恶性循环,加之病情易出现反复的情况,使得治疗成本不断增加。因此,AD严重影响患者的生活质量。然而,对于AD尚无根治疗法。目前治疗AD的药物集中在糖皮质激素类药物和抗组胺药物等方面,但是长时间使用这些药物会带来很大的副作用。长期外用糖皮质激素类药物会导致皮肤萎缩,继发或加重感染的情况发生;抗组胺药物则对儿童的神经中枢系统产生影响,甚至导致抽搐等情况。因而,亟需开发一种疗效好、毒性小的药物,用于治疗AD。
构树是桑科属植物,又名:楮树,具有速生、适应性强、分布广、易繁殖的特点。构树浑身都是“宝”,其叶可作为饲料,其韧皮纤维是造纸的高级原料,具有很强的经济价值。据中医古籍记载,构树的药用价值也不容小觑。历史上对构树的味甘、性凉、无毒的功效,最早记载是源于汉末陶氏的药学著作《名医别录》。在我国《本草纲目》等药典中也记载了构树的根、茎、皮、叶、乳汁、果实可作为中药材去治疗各种疾病。《中药大辞典》云:楮树根可以减轻大鼠的皮肤被动过敏反应。在现代研究中,构树在抗/抑菌、抗炎/氧化、抗肿瘤/癌/病毒、增强免疫力、调血糖/血脂等疾病领域依然发挥着不可磨灭的作用。
现有技术中,已有专利申请中,CN110711232A提出一种治疗皮肤病所致皮肤瘙痒的药物及其制备方法,其中提到用构树芽制备治疗包括皮炎的药物;CN110339236A提出一种皮肤用止痒止痛膏及其制备方法,其中提到用构树枝提取物制备皮肤病用的止痒止痛膏; CN109758397A提出一种构树叶活性成分提取方法及提取物的应用,其中提到用构树叶提取物制备治疗皮肤炎症的药物。因此,现有技术中关于构树的应用都集中在枝、叶、芽等部位,而构树根皮对于皮肤炎症的作用没有相关研究。
发明内容
本发明是在确定构树根皮的正丁醇萃取部位效果显著的前提之下,以此为原料药制备成水凝胶制剂,并考察其在特应性皮炎小鼠模型上的疗效,使之更适合皮肤给药。由于特应性皮炎治疗周期长,水凝胶制剂也可提高患者的用药顺应性。实验结果表明含药水凝胶制剂同样具有明显疗效,且给药更具有顺应性,提高了药物在病患小鼠皮肤的停留时间,增加治疗效果。
本发明比较了地塞米松(原料药,采用DMSO溶解)(DEX)、构树汁(割划树皮,待树汁流出,进行收集)(BP-pulp)、构树根皮乙酸乙酯萃取物(BP-R-EtOAc)、构树根皮正丁醇萃取物(BP-R-nBtOH)、构树茎皮正丁醇萃取物(BP-S-nBtOH)、构树根皮茎皮正丁醇萃取混合物(BP-RS-nBtOH)治疗AD的效果。实验结果表明,构树根皮正丁醇萃取物对AD小鼠的疗效优于地塞米松等其他组,表现为构树根皮正丁醇萃取物可以较好改善AD 小鼠皮肤的症状(红斑、水肿、表皮增厚、渗出等),使小鼠的皮肤更加光滑,更加湿润。除此之外,其还具有加快小鼠毛发恢复生长和皮肤伤口修复速度的效果,这是与市面上常用激素类药物的最大不同之处。
本发明通过试验表明,BP-R-nBtOH对AD的治疗效果优于BP-R-EtOAc、BP-S-nBtOH、以及常用药物DEX;BP-R-EtOAc对AD的治疗效果优于BP-pulp。
综上所述BP-R-nBtOH对AD的治疗具有显著的效果。
附图说明
图1为本发明的造模示意图;
图2为BP-R-EtOAc和BP-pulp对AD的治疗效果比较试验中,给药第5天各组小鼠皮肤情况图;
图3为BP-R-EtOAc和BP-pulp对AD的治疗效果比较试验中,给药第14天后,各组小鼠皮肤切片HE染色结果图;
图4为BP-R-EtOAc和BP-R-nBtOH对AD的治疗效果比较试验中,给药第6天,各组小鼠皮肤情况图;
图5为BP-R-EtOAc和BP-R-nBtOH对AD的治疗效果比较试验中,给药第14天,各组小鼠皮肤情况图;
图6为BP-R-EtOAc和BP-R-nBtOH对AD的治疗效果比较试验中,给药第14天,各组小鼠皮肤切片的HE染色结果图;
图7为BP-R-nBtOH和BP-S-nBtOH对AD的治疗效果对比试验中,给药第4天,各组小鼠皮肤情况图;
图8为BP-R-nBtOH和BP-S-nBtOH对AD的治疗效果对比试验中,给药第8天,各组小鼠皮肤情况图;
图9为BP-R-nBtOH和BP-S-nBtOH对AD的治疗效果对比试验中,给药第14天,各组小鼠皮肤情况图;
图10为BP-R-nBtOH和BP-S-nBtOH对AD的治疗效果对比试验中,给药第14天,各组小鼠皮肤切片HE染色结果图;
图11为各组AD评分图。
具体实施方式
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚,下面将结合具体实施例进行详细描述。
实验用药获取方法
称取构树根皮,粉碎,按照料液比1:4加入95%的乙醇,75℃加热回流提取,一次1小时,共提取3次。合并提取液,过滤后得上清液①,进行旋转蒸发至上清液①体积的1/10,得到浓缩液,然后加入两倍浓缩液体积量的蒸馏水进行分散;充分分散后,进行离心取得上清液②,旋转蒸发至无醇味,然后加入等体积乙酸乙酯进行萃取,重复2-3次,合并上层萃取液,得到乙酸乙酯萃取液;剩余的下层萃取液,再用等体积水饱和正丁醇进行萃取,重复2-3次,合并上层萃取液,得到正丁醇萃取液。最后将乙酸乙酯和正丁醇萃取液分别浓缩至浸膏样,烘干,得到最终产物。4℃保存,备用。
茎皮、茎皮根皮混合物提取方法与根皮提取方法相同,其中茎皮根皮混合物是按照1:1 重量比进行混合提取的。
AD动物模型的建立:经查阅大量文献与专利,总结出AD的造模方法。选用6-7周龄的BALB/c小鼠,实验开始前,对所有小鼠的背部进行脱毛,24小时后对小鼠进行AD致敏造模,引发小鼠免疫反应。造模试剂为2,4-二硝基甲苯(DNCB),基质为丙酮:橄榄油=1:4,配制成浓度为2%DNCB,给药量为每只小鼠200μL,每天1次,间隔1天再进行下一次致敏,总次数为3次。致敏结束后,继续喂养7天,然后进行第1次激发,激发时间为每3天1次,激发次数为4次,激发的药物浓度为0.5%的DNCB,给药量为100μL。在第一次激发的当天开始给药,每天1次,每次200μL,涂抹于小鼠造模处,持续14天。造模示意图如图1所示。
实验中,正常组指未经过炎症造模处理的小鼠组。
BP-R-EtOAc和BP-pulp对AD的治疗效果比较
实验方法:
实验分组:正常组(CON)、模型组(AD)、DEX组、BP-R-EtOAc组、BP-pulp(1/4、 1/8倍)。
溶液的配制:取一定量的DEX粉末(原料药)、BP-R-EtOAc、BP-pulp,用DMSO配制得到DEX溶液25μmol/L、BP-R-EtOAc溶液0.1g/mL、BP-pulp溶液(1/4及1/8倍)。
实验结果:
如图2所示为各组给药第5天小鼠皮肤情况图。由图2可知,给药第5天,AD小鼠背部还有红斑、渗出、结痂等症状;BP-pulp(1/4及1/8倍)小鼠皮肤有轻微红斑、结痂; DEX和BP-R-EtOAc小鼠背部皮肤较光滑,无红斑、渗出等症状出现。
如图3所示为各组给药第14天后,小鼠皮肤切片HE染色结果图。由图3可知,给药14天后,AD小鼠皮肤切片表、真皮厚度最厚;DEX组、BP-pulp组、BP-R-EtOAc组小鼠皮肤切片真皮和表皮厚度与AD组相比都较薄。BP-R-EtOAc真、表皮厚度与DEX相接近。
根据记载,BP-pulp有治疗AD的功效,但是在实验中,发现BP-pulp组小鼠在抹完BP-pulp后,抓挠次数明显增多,表明BP-pulp有一定的致痒作用,所以导致治疗效果不佳。BP-R-EtOAc组与AD组相比,有一定的疗效,背部皮肤较为平滑,没有明显的结痂,伤口渗出,组织水肿等症状,因此,推测BP-R-EtOAc对AD有治疗效果。
BP-R-EtOAc和BP-R-nBtOH对AD的治疗效果比较
实验方法:
实验分组:正常组(CON)、模型组(AD)、DEX组、BP-R-EtOAc组、BP-R-nBtOH 组。
溶液的配制:取一定量的DEX粉末、BP-R-EtOAc、BP-R-nBtOH,用DMSO配制得到 DEX溶液25μmol/L、BP-R-EtOAc溶液0.1g/mL、BP-R-nBtOH溶液0.1g/mL。
实验结果:
如图4所示为给药第6天,各组小鼠皮肤情况图。由图4可知,给药第6天时,AD组小鼠背部有结痂,渗出,红斑等症状。与AD组相比,DEX组小鼠背部皮肤较为光滑,但有渗出、红斑;BP-R-EtOAc有效果,小鼠背部结痂减少,但有轻微的红斑。BP-R-nBtOH 组小鼠皮肤的状态优于DEX组及BP-R-EtOAc组,具体表现为:小鼠背部皮肤光滑,没有结痂、红斑、渗出。
如图5所示为给药第14天,各组小鼠皮肤情况图。由图5可知,给药第14天时,各组小鼠皮肤症状都得到了改善,但是BP-R-nBtOH组小鼠皮肤状态改善最为显著。在之前的基础上,其背部出现了绒毛,皮肤干燥程度(皮屑)减轻且皮肤厚度变薄。BP-R-nBtOH 组小鼠皮肤是所有给药组中情况最好的,对AD的治疗效果超过了DEX组。
如图6所示为各组小鼠皮肤切片的HE染色结果图。由图6可知,给药第14天,AD 组表皮、真皮最厚,BP-R-EtOAc次之,DEX组真、表皮略薄于BP-R-EtOAc组,BP-R-nBtOH 组真、表皮厚度最薄。由此可见,BP-R-nBtOH组治疗AD效果显著。
BP-R-nBtOH和BP-S-nBtOH对特应性皮炎的治疗效果对比
实验方法:
实验分组:正常组(CON)、模型组(AD)、DEX组、BP-R-nBtOH组、BP-S-nBtOH、 BP-RS-nBtOH。
溶液配制:取一定量的卡波姆、根皮/茎皮/根皮茎皮混合物的正丁醇萃取物、蒸馏水混合均匀,再用三乙醇胺调节PH至6.5,最后加入0.1%苯氧乙醇,搅拌均匀,得萃取物水凝胶制剂。最终制得浓度分别为0.06、0.09、0.12g/mL的BP-R-nBtOH水凝胶制剂、0.09g/mL的BP-S-nBtOH水凝胶制剂和0.09g/mL的BP-RS-nBtOH水凝胶制剂;空白基质(不含治疗药物的DMSO溶液)及DEX配制同上。
说明:在前面的实验中发现水溶液流动太大,因此本实验中制成水凝胶,增加药物的停留时间。此外,也是对实验的再一次重复,以确证构树根皮正丁醇萃取液的功效。
给药时,先给予200μL的DEX溶液,其余各小组给予200μL空白基质,待所有小鼠背部溶液吸收后再给予水凝胶,每只小鼠的给药量为130μL,均匀抹于皮肤上。1天1次,持续14天。
实验结果:
如图7所示,为给药第4天各组小鼠皮肤情况图。由图7可知,给药第4天时,与AD 组相比,DEX组、BP-R-nBtOH-H组(0.12g/mL)、BP-R-nBtOH-M组(0.09g/mL)、 BP-R-nBtOH-L组(0.06g/mL)、BP-S-nBtOH组、BP-RS-nBtOH组表现出不同的治疗效果。 DEX组小鼠皮肤结痂脱落,背部皮肤有一些绒毛长出;BP-S-nBtOH仅结痂脱落,背部没有绒毛长出,且还有一些伤口;BP-RS-nBtOH组小鼠皮肤结痂脱落,背部皮肤处伤口较严重。而BP-R-nBtOH-M组小鼠皮肤结痂脱落,背部大面积长有绒毛,且伤口显著减少; BP-R-nBtOH-H和BP-R-nBtOH-L组效果优于DEX组、BP-S-nBtOH组及BP-RS-nBtOH组,但较BP-R-nBtOH-M组略差。
如图8所示为给药第8天各组小鼠皮肤情况图。由图8可知,给药第8天,与CON组相比,AD组小鼠背部皮肤虽然有些许绒毛,但还是有明显的空白(未长毛);与AD组相比,DEX组、BP-R-nBtOH-H/M/L组、BP-S-nBtOH组、BP-RS-nBtOH组小鼠背部皮肤都有较大的改善。DEX组小鼠背部长有较多绒毛,但背部还有没长毛的区域和轻微的疤痕。 BP-S-nBtOH组小鼠背部情况较差,背部绒毛数量较少,且伤口恢复较差,有肉眼可见的伤口疤痕。而BP-R-nBtOH-H/M/L组小鼠背部长有大面积绒毛,背部伤口修复较好,没有明显的伤口疤痕,其中BP-R-nBtOH-M剂量组小鼠皮肤状态最佳。
如图9所示,为给药第14天各组小鼠皮肤情况图。由图9可知,给药第14天,与CON组相比,AD组还有明显的伤口疤痕未长绒毛;DEX组、BP-R-nBtOH-H/M/L组小鼠背部长有大量绒毛。其中,BP-R-nBtOH-M组小鼠皮肤改善最为明显,表现为背部没有可见的伤口,绒毛基本覆盖背部皮肤。BP-S-nBtOH组、BP-RS-nBtOH组小鼠背部还有肉眼可见的疤痕和未长毛区域。
图10为BP-R-nBtOH和BP-S-nBtOH对AD的治疗效果对比试验中,给药第14天,各组小鼠皮肤切片HE染色结果图。由图可知,AD组小鼠背部皮肤真、表皮最厚。 BP-S-nBtOH组、BP-RS-nBtOH组小鼠背部皮肤明显厚于DEX组;BP-R-nBtOH-H组、 BP-R-nBtOH-L组小鼠背部皮肤略厚于DEX组。DEX组、BP-R-nBtOH-M组小鼠背部皮肤真、表皮厚度接近CON组,其中BP-R-nBtOH-M组要更为接近CON组。由此可知,BP-R-nBtOH-M对AD的治疗效果最好。
如图11所示为特应性皮炎评分图。特应性皮炎评分标准:0分,正常皮肤,无红斑、水肿、及角化渗出;1~2分,红斑、水肿均不明显,轻度角化渗出;3~4分,红斑、水肿较轻,有中度渗出或角化;5~6分,红斑、水肿、渗出、角化结痂。分值越高,代表皮肤状态越差。由图11可知,BP-R-nBtOH-H/M/L组分值均低于DEX组,其中 BP-R-nBtOH-M组分值最低。BP-S-nBtOH组分值高于DEX组分值;BP-RS-nBtOH组评分波动较大;表明BP-R-nBtOH-M组效果最好。
综上所述,BP-R-nBtOH对于AD的治疗显著效果,与市场上常用药物、以及构树其他部位相比有其独特的优势。因此,BP-R-nBtOH有望成为新的治疗AD的药物。
相对于现有技术,本发明的区别在于:
1)提取部位:发现正丁醇萃取物外用有治疗AD的效果,与乙酸乙酯萃取物不同;且该萃取物有效的结论是在比较了根皮的乙酸乙酯萃取物与正丁醇萃取物,以及茎皮和根皮正丁醇萃取物功效后得出的,发现根皮正丁醇萃取物最为有效。
2)给药方式:既往研究构树提取物抗炎功效都是采用灌胃给药,本研究采用外用给药。
3)炎症AD产生机制:既往的炎症AD(普遍采用LPS造炎症AD)与特应性皮炎机制不同,本研究是用DNCB致敏后再激发所形成AD小鼠,该皮炎AD虽与炎症反应相关,但更倾向与体内的免疫调控系统有关,这也与临床上特应性皮炎患者的发病机制相符合,使得试验更具说服力。该皮炎AD产生的机制包含炎症损伤以及过敏性损伤。
4)治疗指标:BP-R-nBtOH治疗特应性皮炎时,不仅具有显著的抗炎效果(缓解红斑、肿、渗出),还能加快小鼠皮肤损伤修复和毛发。
5)水凝胶制剂:将BP-R-nBtOH制备成水凝胶制剂,并考察了含药水凝胶的功效。
以上所述是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明所述原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (5)
1.构树根皮在制备治疗特应性皮炎的药物上的应用。
2.构树根皮正丁醇萃取物在制备治疗特应性皮炎的药物上的应用。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,构树根皮正丁醇萃取物的获取方法包括如下步骤:
称取构树根皮并粉碎,加入95%的乙醇后加热回流提取;
收集提取液,过滤后得上清液①,进行旋转蒸发至上清液①体积的1/10,得到浓缩液;
然后加入浓缩液两倍体积量的蒸馏水进行充分分散;
进行离心取得上清液②,旋转蒸发至无醇味;
然后加入等体积乙酸乙酯进行萃取,重复2-3次,合并上层萃取液,即为乙酸乙酯萃取液;
剩余的下层液体,用等体积的水饱和正丁醇萃取,重复2-3次,合并萃取液,即为正丁醇萃取液;
最后将正丁醇萃取液分别浓缩至浸膏样,烘干,得到最终产物。
4.根据权利要求1或2所述的应用,其特征在于,所述药物制剂为外用制剂。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于,所述外用制剂的剂型为凝胶剂、乳膏、软膏、涂膜剂、巴布剂中的至少一种。
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GR01 | Patent grant | ||
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