CN113181163A - 千层纸素a在制备治疗肺纤维化药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明具体涉及千层纸素在制备治疗肺纤维化药物中的应用，该中药单体学名为黄芩苷‑6‑甲醚，其分子式为C₁₆H₁₂O₅。本发明研究发现千层纸素A可以改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化，博来霉素诱导小鼠肺纤维化后，小鼠体重下降明显，而在给予千层纸素(OA)后小鼠的体重有所升高，表明千层纸素(OA)可用于制备抗肺纤维化的药物。

Description

千层纸素A在制备治疗肺纤维化药物中的应用

技术领域

本发明涉及一种来源于中药黄芩的天然产物千层纸素A，尤其是涉及千层纸素A在制备抗肺纤维化药物中的应用，属中药制药领域。

背景技术

肺纤维化(pulmonary fibrosis)是由各种肺损伤引起的，包括毒性、自身免疫性、药物性、感染性或创伤性损伤，其特征是肺实质不断瘢痕化。肺纤维化是一种与年龄相关的疾病，由于世界范围内人口老龄化升高，肺纤维化的发生率也随之上升，导致经济负担加重；并且肺纤维化诊断后的平均生存期仅2.8年，远高于大多数肿瘤疾病，被成为“类肿瘤疾病”。目前肺纤维化的治疗不容乐观，已经引起了我国卫生部门的高度关注。

肺纤维化发生的核心环节是肺成纤维细胞在受到刺激后异常增殖并分泌大量细胞外基质，同时伴随着不同程度的炎症。在各种因素的作用下，肺中成纤维化细胞、循环系统中由单个核细胞转化而来的成纤维化细胞、肺间质中的周细胞等都会被激活成肌成纤维细胞，从而分泌大量的细胞外基质，导致组织结构异常，从而丧失原有的功能。目前研究表明肺纤维化的发病机制涉及基因易感肺泡上皮的复发性微损伤，随后出现以过度胶原沉积为特征的异常修复过程。探讨抑制活化的肺肌成纤维细胞并减轻炎症及寻找有效的抗肺纤维化药物至关重要，已经成为国内外学者关注的热门话题。

目前被批准用于治疗肺纤维化的药物有吡非尼酮和尼达尼布，但是这两种药物的存在治疗周期长，连续治疗52周期后才能有效改善患者的肺功能，延长患者的无进展生存期，同时降低患者的死亡风险。并且现有的研究发现，在长时间给药后，患者会对药物产生耐受性，降低药物的治疗效果。肺纤维化的非药物治疗有氧疗、机械通气和肺移植等，这些方法复杂昂贵，对大部分患者不太友好。因此，寻找一种价廉、安全高效的肺纤维化治疗药物具有重要的意义。

千层纸素(Oroxylin A，OA)又称木蝴蝶素，是从我国传统的中药黄芩中提取而来，是一类重要的黄酮类有效成分。大量的研究表明，OA具有较强的抗炎、抗肿瘤、抗病毒、保护血管和神经细胞等作用。已有的研究表明OA可以改善香烟所导致的肺炎、减轻LPS诱导的急性肺损伤、抑制非小细胞肺癌细胞的生长，表明OA具有潜在的治疗肺部疾病的作用。我们的细胞和动物实验均表明OA具有较好的改善肺纤维化的作用，并且利用OA抗肺纤维化的研究，还未见有报道。

发明内容

本发明的目的旨在于提供黄芩提取物千层纸素A在制备抗肺纤维化药物中的应用。

本发明所涉及的抗肺纤维化药物，是从传统中药黄芩中提取的重要黄酮类有效成分，其化学名称是黄芩苷-6-甲醚，分子式为C₁₆H₁₂O₅，其结构式如下：

千层纸素在制备治疗肺纤维化药物中的应用。

千层纸素作为唯一成分在制备治疗肺纤维化药物中的应用。

千层纸素在制备治疗肺纤维化药物中的应用，千层纸素减轻肺部胶原沉积，减少肺组织中胶原相关蛋白α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin的表达，减少血清中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达，减轻肺部炎症因子IL-6、IL-18和TNF-α的表达，减轻肺部炎症因子IL-6、IL-18和TNF-α的表达，抑制TGF-β诱导的肺肌成纤维细胞的增殖，抑制TGF-β诱导的肺肌成纤维细胞的活力，降低肺肌成纤维细胞中α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin的mRNA的表达，减轻炎症因子的表达抑制肺肌成纤维细胞的活化。

千层纸素作为唯一成分在制备治疗肺纤维化药物中的应用，千层纸素减轻肺部胶原沉积，减少肺组织中胶原相关蛋白α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin的表达，减少血清中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达，减轻肺部炎症因子IL-6、IL-18和TNF-α的表达，减轻肺部炎症因子IL-6、IL-18和TNF-α的表达，抑制TGF-β诱导的肺肌成纤维细胞的增殖，抑制TGF-β诱导的肺肌成纤维细胞的活力，降低肺肌成纤维细胞中α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin的mRNA的表达，减轻炎症因子的表达抑制肺肌成纤维细胞的活化。

所述千层纸素在制备治疗肺纤维化药物中的应用，所述药物为千层纸素与本领域常规辅料复配制成的复方制剂。

所述千层纸素在制备治疗肺纤维化药物中的应用，所述复方制剂的剂型为片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂或注射剂。

所述千层纸素作为唯一成分在制备治疗肺纤维化药物中的应用，所述药物为千层纸素与本领域常规辅料复配制成的复方制剂。

所述千层纸素作为唯一成分在制备治疗肺纤维化药物中的应用，所述复方制剂的剂型为片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂或注射剂。

本发明的技术方案是采用小鼠肺纤维化模型和人肺肌成纤维细胞株(MRC-5)，研究OA在小鼠整体、体外细胞水平、分子水平上对肺纤维化指标、炎症指标关键蛋白表达情况等作用效果，揭示OA抗肺纤维化的分子机制，为制备抗肺纤维化的药物提供重要的实验依据。

本发明的实验结果表明：OA具有较强的改善肺纤维化的作用，不管是在抑制肺胶原沉积，还是减轻炎症方面都有较好的作用。所述的千层纸素A是一种具有抗肺纤维化作用的新化合物，可以用于制备抗肺纤维化药物。

附图说明

图1为本发明实施例1中OA对小鼠体重变化影响的显示示意图；

图2为本发明实施例1中OA对小鼠肺组织HE染色、Sirius Red染色、Masson染色、α

-SMA免疫组化影响的显示示意图；

图3为本发明实施例1中试剂盒检测OA对小鼠血清中炎症因子IL-1β影响的显示示意图；

图4为本发明实施例1中试剂盒检测OA对小鼠血清中炎症因子IL-6影响的显示示意图；

图5为本发明实施例1中试剂盒检测OA对小鼠血清中炎症因子TNF-α影响的显示示意图；

图6为本发明实施例1中Western blot实验检测OA对小鼠肺组织中胶原蛋白α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin影响的显示示意图；

图7为本发明实施例1中Western blot实验检测OA对小鼠肺组织中炎症因子TNF-α、IL-6和IL-18影响的显示示意图；

图8为本发明实施例2中不同浓度的OA对MRC-5细胞增殖的影响；

图9为本发明实施例3中不同浓度的OA对MRC-5细胞毒性的影响；

图10为本发明实施例4中PCR实验检测OA对MRC-5细胞中α-SMA蛋白mRNA影响的显示示意图；

图11为本发明实施例4中PCR实验检测OA对MRC-5细胞中CollagenⅠ蛋白mRNA影响的显示示意图；

图12为本发明实施例4中PCR实验检测OA对MRC-5细胞中Fibronectin蛋白mRNA影响的显示示意图；

图13为本发明实施例5中不同浓度的OA对MRC-5细胞中炎症因子Rantes、TNF-α、NF-κB、IL-6和IL-18表达影响的显示示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明针对肺纤维化的治疗提出一种具有潜力的抗肺纤维化药物，下面结合本发明的具体实施方式做进一步详细的描述：

实施例1：OA对博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的改善作用

1.1动物

SPF级雄性C57BL/6J小鼠60只，体重20～22g，由杭州医学院提供，生产许可证号：SCXK(浙)2019-0002。

1.2药物与主要试剂

千层纸素A(由中国药科大学郭青龙教授惠赠)，博来霉素(南京金益柏生物科技有限公司，货号HY-17565A)，生理盐水(雷根生物有限公司，货号CZ0030)，4％多聚甲醛(biosharp,批号70071800)，抗体TNF-α(ABlconal)、IL-1β(Affinity，AF5103)、IL-6(ABlconal)、NF-κB(Proteintech,10745-1-AP)；试剂盒TNF-α、IL-1β和IL-6(购自上海鑫乐生物科技有限公司)。

1.3主要仪器

酶标仪、曝光仪

1.4动物分组

60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(n＝10)，肺纤维化模型组(n＝10),千层纸素A低剂量(20mg/kg/d；n＝10)，千层纸素A中剂量(30mg/kg/d；n＝10)，千层纸素A高剂量(40mg/kg/d；n＝10)，吡非尼酮阳性药组(250mg/kg/d；n＝10)。

1.5动物模型建立

采用气管滴注博来霉素构建小鼠肺纤维化模型。具体步骤如下：(1)用戊巴比妥钠对小鼠进行腹腔注射麻醉(剂量为50mg/kg，0.1ml/10g)；(1)小鼠被充分麻醉后，将其仰卧固定于鼠板上，并将其四肢固定好，用棉线固定住小鼠上门牙；(3)完全固定好后，操作者一手拇指和食指顺势牵拉出小鼠舌头，中指轻轻固定于小鼠颈部，另一手持聚光灯对准小鼠颈部正中照射，仔细观察可见小鼠的声门随呼吸一张一合运动，小鼠吸气时声门处于开放状态，顺势将针头磨钝的7号腰穿针迅速插入气管之中；(4)用1ml的注射器将博来霉素溶液(5mg/kg，约50μl液体)迅速注入气管之中，随即向气管中注入1ml空气，使得药液完全进入小鼠气道不残留；(5)造模结束后将小鼠直立并轻轻晃动小鼠，使博来霉素在肺内分布均匀；(6)造模完毕后将小鼠放回鼠笼，待3-4h后观察小鼠复苏情况。

1.6治疗方法

药物治疗组：每日治疗一次，灌胃给药OA 20、30、40mg/kg；阳性药组每日灌胃吡非尼酮250mg/kg；正常对照组和模型组灌胃相同体积的生理盐水，共28天。

1.7指标检测

HE染色观察肺整体状态；Masson染色观察胶原沉积状态；Sirius Red染色检查Ⅰ、Ⅳ型胶原沉积状态；免疫组化观察α-SMA在肺组织中的表达情况；试剂盒检测血清中炎症指标IL-1β、IL-6、TNF-α的变化；Western blot检测肺组织中胶原纤维α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin的表达；Western blot检测肺组织中炎症因子IL-1β、IL-6、NF-κB、TNF-α、IL-18的表达。

1.8检测方法

小鼠适应性饲养结束后，于造模前称重，对应第0天，造模后第3、6、10、13、16、19、22、25、28天分别称重，以第0天为标准，造模后小鼠体重减去第0天，得到体重变化情况，采用Graph Pad软件进行分析。动物实验结束后，收集血清和肺组织，肺组织一部分存放于-80℃冰箱，一部分置于4％多聚甲醛中。血清室温静置2小时以上，然后4℃、3500rpm离心15分钟，收集上清，按试剂盒说明书进行炎症因子的检测；将4％多聚甲醛中的肺组织委托给博尔夫生物有限公司进行HE染色、Sirius Red染色、Masson染色和α-SMA免疫组化染色。称取冻存于-80℃冰箱的肺组织50mg,加入350ml的裂解液，采用组织匀浆仪研磨组织，4℃、12000rpm离心15分钟，取上清，加入loading buffer，于95℃煮15分钟，然后进行Westernblot实验。具体步骤如下：取50μg进行上样，先90V、40min，后120V、20min进行电泳；之后350mA、70min条件进行转模。按1:1000的比例稀释β-actin、α-SMA、CollagenⅠ、Fibronectin、TNF-α、IL-6、IL-18、抗体，4℃孵育过夜，然后按1:10000稀释二抗，孵育2小时后进行化学显影。

1.9统计学方法

实验数据均使用SPSS软件(version 20.0)进行分析，所有数据均采用SD或SEM表示。使用Prism 8.0(Graph Pad Software Inc,San Diego,CA)进行组间差异分析。以P<0.05为差别有统计学意义。

1.10结果结论

结果表明：小鼠体重变化曲线表明OA可以促进博来霉素诱导的肺纤维化小鼠体重的增长，提高小鼠的生存质量(见图1)；肺组织的HE染色表明OA可以改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化，Sirius Red和Masson染色表明OA可以通过减轻肺部胶原沉积改善肺纤维化，对α-SMA的染色也得到了相同的结果(见图2)；免疫印迹实验也表明OA可以减少肺组织中胶原相关蛋白α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin的表达(见图6)；试剂盒结果表明OA可以减少血清中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达(见图3；4；5)，免疫印迹实验表明OA可以减轻肺部炎症因子IL-6、IL-18和TNF-α的表达(见图7)。高剂量的OA(40mg/kg)可以达到与阳性药吡非尼酮相似的效果。

结论：OA通过减轻炎症因子的表达发挥抗肺纤维化的作用。

实施例2：体外实验[观察OA对TGF-β诱导的人肌成纤维细胞活化抑制作用(细胞增殖活性的检测)]

2.1实验用主要细胞

MRC-5

2.2实验药物及主要试剂

千层纸素A(由中国药科大学郭青龙教授惠赠)，TGF-β(南京金益柏生物有限公司)

MEM(上海源培生物科技股份有限公司)，胎牛血清(南京森贝伽生物科技有限公司)，PBS(实验室自制)，Trypsin(BIOFROX，货号1004GR100)，MTT(阿拉丁)，DMSO(上海凌峰化学试剂有限公司)，EDTA(BIOSHAP)

2.3主要仪器

倒置光学显微镜(ZEISS)，超净工作台(ESCO BIOTECH)，CO2培养箱(ThermoScientific)，全自动高压灭菌锅(美国致微ZEALWAY)，超低温冰箱(Haier)，纯水仪(南京汉隆实验器材有限公司)，冰箱(Haier)，电子天平(德国赛多利斯有限公司)，酶标仪(BioTek)。

2.4实验方法

取对数生长的MRC-5细胞，用胰蛋白酶消化后，接种于96孔板中，5000个/孔。放入37℃、5％CO₂培养箱中培养。当细胞密度为50％-60％时，每孔加入10ng/ml的TGF-β诱导其活化，6h后加入0、10、20、30、40、50、60、70、80、90μM的OA，每个浓度设置4个副孔，所有孔的体系均为180μl。加入药物培养24h后，每孔加入5mg/ml的MTT个20μl，继续在培养箱中培养4h。4h后弃去上清，每孔加入200μl的DMSO，在摇床上避光摇晃10min，然后用酶标仪测量490nm波长处的吸光度。根据所测药物组与对照组细胞的吸光度比值计算药物对细胞活力的抑制率，探索药物对细胞生长规律的影响。

2.5结果结论

结果表明：MTT法表明OA在20μM时能够抑制MRC-5的活力，且抑制作用随着药物剂量的增大而增强，呈现剂量依赖性效应；与对照组相比差异显著，OA在40μM时能够显著抑制MRC-5的活力(P<0.05)。(见图8)

结论：OA能够显著抑制TGF-β诱导的肺肌成纤维细胞的增殖。

实施例3：体外实验[OA对肺肌成纤维细胞的细胞毒作用(细胞毒性测定)]

3.1实验用主要细胞

MRC-5

3.2实验药物及主要试剂

千层纸素A(由中国药科大学郭青龙教授惠赠)，TGF-β(南京金益柏生物有限公司)

MEM(上海源培生物科技股份有限公司)，胎牛血清(南京森贝伽生物科技有限公司)，PBS(实验室自制)，Trypsin(BIOFROX，货号1004GR100)，EDTA(BIOSHAP)，乳酸脱氢酶测定试剂盒(碧云天，产品编号C10017)

3.3主要仪器

倒置光学显微镜(ZEISS)，超净工作台(ESCO BIOTECH)，CO2培养箱(ThermoScientific)，全自动高压灭菌锅(美国致微ZEALWAY)，超低温冰箱(Haier)，纯水仪(南京汉隆实验器材有限公司)，冰箱(Haier)，电子天平(德国赛多利斯有限公司)，酶标仪(BioTek)。

3.4实验方法

采用乳酸脱氢酶(LDH)检测OA对MRC-5的细胞毒性。取对数生长的MRC-5细胞，用胰蛋白酶消化厚，接种于96孔板中，5000个/孔，培养至细胞密度为50％时，加入10ng/ml的TGF-β诱导其活化，6小时后加入0、10、20、30、40、50、60、70、80、90μM的OA，每个浓度设置5个副孔，所有孔的体系均为200μl。培养箱内孵育24h后按试剂盒说明书操作进行检测。

3.5结果结论

结果表明：LDH释放检测表明OA在10～60μM无明显细胞毒性作用(见图9)。

结论：OA抑制TGF-β诱导的肺肌成纤维细胞的活力不是由于其直接的细胞毒性作用。

实施例4：体外实验[OA抑制肺肌成纤维细胞胶原纤维的表达]

4.1实验用主要细胞

MRC-5

4.2实验药物及主要试剂

千层纸素A(由中国药科大学郭青龙教授惠赠)，TGF-β(南京金益柏生物有限公司)

MEM(上海源培生物科技股份有限公司)，胎牛血清(南京森贝伽生物科技有限公司)，PBS(实验室自制)，Trypsin(BIOFROX，货号1004GR100)，EDTA(BIOSHAP)，Trizol(ambion)，氯仿(国药接团化学试剂有限公司)，异丙醇(南京化学试剂股份有限公司)，75％乙醇(实验室自制)，DEPC水(Beyotime)，逆转录试剂盒(上海翊圣生物科技有限公司，产品编号11141ES60)，扩增试剂盒(上海翊圣生物科技有限公司，产品编号11201ES60)。

4.3主要仪器

倒置光学显微镜(ZEISS)，超净工作台(ESCO BIOTECH)，CO2培养箱(ThermoScientific)，全自动高压灭菌锅(美国致微ZEALWAY)，超低温冰箱(Haier)，纯水仪(南京汉隆实验器材有限公司)，冰箱(Haier)，电子天平(德国赛多利斯有限公司)，实时荧光定量PCR仪(Bio-Rad)，Nanodrop One(ThermoFisher)。

4.4实验方法

取对数生长的且状态良好的MRC-5细胞，用胰酶消化后，1500rpm离心5min，弃上清，加入培养基吹匀，调整细胞浓度接种于4个小皿中，1×106个细胞/皿，待细胞密度为50％时，加入10ng/ml的TGF-β诱导其活化，6小时后加入OA，使其终浓度为0、20、40、60μM，继续培养24h。弃去培养基，用提前预冷的PBS清洗细胞3次，彻底除去培养基，每个小皿加入300μl的Trizol,反复吹打1min，移入1.5ml ep管中。每300μl Trizol加入60μl氯仿，盖紧样品管盖，用手用力摇15s并将其在室温(静置)3min。在4℃，12000r的离心机高速离心15min。将上层水样层转移到新的1.5ml离心管中，加入150μl异丙醇混匀(来回颠倒数次)，室温静置10min，4℃，12000r离心10min，RNA附于管底。弃去上清，加入300μl 75％乙醇，轻弹管壁，4℃，7400r离心5min。倒掉上清，通风橱放置10-30min，待乙醇挥干后加入20μl DEPC水，按试剂盒中说明书进行逆转录和扩增实验。

4.5结果结论

结果表明：OA能降低肺肌成纤维细胞中α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin的mRNA的表达，并且这种作用具有剂量依赖性。当作用浓度达到40μM时，与对照组相比，OA可显著降低胶原的表达情况(P<0.01)。(见图10；11；12)

结论：OA具有抗肺纤维化的作用。

实施例5：体外实验[OA对肺肌成纤维细胞中代表性炎症因子NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-8、Rantes蛋白表达的影响]

5.1实验用主要细胞

MRC-5

5.2实验药物及主要试剂

千层纸素A(由中国药科大学郭青龙教授惠赠)，TGF-β(南京金益柏生物有限公司)

MEM(上海源培生物科技股份有限公司)，胎牛血清(南京森贝伽生物科技有限公司)，PBS(实验室自制)，Trypsin(BIOFROX，货号1004GR100)，EDTA(BIOSHAP)，裂解液(碧云天)，电泳液(实验室自制)，电泳液(实验室自制)，曝光液(南京善本生物有限公司)，β-actin(Abclonal)、NF-κB(Proteintech,10745-1-AP)、TNF-α(ABclonal)、IL-8(ABclonal)、Rantes(ABclonal)、Goat anti-Rabbit IgG(Proteintech)、PVDF膜(GVS North AmericaSanford,ME)、

5.3主要仪器

倒置光学显微镜(ZEISS)，超净工作台(ESCO BIOTECH)，CO2培养箱(ThermoScientific)，全自动高压灭菌锅(美国致微ZEALWAY)，超低温冰箱(Haier)，纯水仪(南京汉隆实验器材有限公司)，冰箱(Haier)，电子天平(德国赛多利斯有限公司)，Nanodrop One(ThermoFisher)，电泳仪(Bio-Rad)，全能型凝胶成像系统(Bio-Rad)、制冰机(Scotsman)

5.4实验方法

取对数生长且状态良好的MRC-5细胞，用胰酶消化后，1500rpm离心5min，弃上清，加入培养基吹匀，调整细胞浓度接种于4个小皿中，1×106个细胞/皿，待细胞密度为50％时，加入10ng/ml的TGF-β诱导其活化，6小时后加入OA，使其终浓度为0、20、40、60μM，继续培养24h。提取蛋白，并测定蛋白浓度，然后加入Loading Buffer 95℃进行变性。取50μg进行上样，先90V、40min，后120V、20min进行电泳；之后350mA、70min条件进行转模。按1:1000的比例稀释β-actin、NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-18、Rantes抗体，4℃孵育过夜，然后按1:10000稀释二抗，孵育2小时后进行化学显影。

5.5结果结论

结果：Western blot结果表明OA能通过抑制炎症因子的表达减弱TGF-β诱导的肺肌成纤维细胞活化。随着药物浓度的增加，炎症因子NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-8、Rantes的表达显著降低。(见图13)

结论：OA能够通过减轻炎症因子的表达抑制肺肌成纤维细胞的活化从而发挥抗肺纤维化的作用。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (8)

1.千层纸素在制备治疗肺纤维化药物中的应用，其特征在于，千层纸素分子式为：C₁₆H₁₂O₅；结构式为：

2.如权利要求1所述千层纸素在制备治疗肺纤维化药物中的应用，其特征在于，千层纸素减轻肺部胶原沉积，减少肺组织中胶原相关蛋白α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin的表达，减少血清中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达，减轻肺部炎症因子IL-6、IL-18和TNF-α的表达，减轻肺部炎症因子IL-6、IL-18和TNF-α的表达，抑制TGF-β诱导的肺肌成纤维细胞的增殖，抑制TGF-β诱导的肺肌成纤维细胞的活力，降低肺肌成纤维细胞中α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin的mRNA的表达，减轻炎症因子的表达抑制肺肌成纤维细胞的活化。

3.千层纸素作为唯一成分在制备治疗肺纤维化药物中的应用，千层纸素分子式为：C₁₆H₁₂O₅；结构式为：

4.如权利要求3所述千层纸素作为唯一成分在制备治疗肺纤维化药物中的应用，其特征在于，千层纸素减轻肺部胶原沉积，减少肺组织中胶原相关蛋白α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin的表达，减少血清中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达，减轻肺部炎症因子IL-6、IL-18和TNF-α的表达，减轻肺部炎症因子IL-6、IL-18和TNF-α的表达，抑制TGF-β诱导的肺肌成纤维细胞的增殖，抑制TGF-β诱导的肺肌成纤维细胞的活力，降低肺肌成纤维细胞中α-SMA、CollagenⅠ和Fibronectin的mRNA的表达，减轻炎症因子的表达抑制肺肌成纤维细胞的活化。

5.如权利要求1所述千层纸素在制备治疗肺纤维化药物中的应用，其特征在于，所述药物为千层纸素与本领域常规辅料复配制成的复方制剂。

6.如权利要求1所述千层纸素在制备治疗肺纤维化药物中的应用，其特征在于，所述复方制剂的剂型为片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂或注射剂。

7.如权利要求1所述千层纸素作为唯一成分在制备治疗肺纤维化药物中的应用，其特征在于，所述药物为千层纸素与本领域常规辅料复配制成的复方制剂。

8.如权利要求1所述千层纸素作为唯一成分在制备治疗肺纤维化药物中的应用，其特征在于，所述复方制剂的剂型为片剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂或注射剂。

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