CN113173928B - 萜类化合物、其制备方法和其应用以及抗菌剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及天然化合物技术领域，具体而言，涉及萜类化合物、其制备方法和其应用以及抗菌剂。萜类化合物选自下述式（1）‑式（3）所示的化合物中的任意一种，
Figure 478357DEST_PATH_IMAGE001
式（1）、
Figure 908202DEST_PATH_IMAGE002
式（2）以及
Figure 212144DEST_PATH_IMAGE003
式（3）。该化合物具有优异的抗菌效果，特别是对葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌和链球菌有优异的抑菌效果，且该化合物是从石香薷内提取得到，进一步丰富了从石香薷提取得到的化合物的种类。

Description

萜类化合物、其制备方法和其应用以及抗菌剂
技术领域
本发明涉及天然化合物技术领域，具体而言，涉及萜类化合物、其制备方法和其应用以及抗菌剂。
背景技术
石香薷（Mosla chinensis Maxim.）为唇形科（Labiatae）石荠苎属（Mosla）植物，别名满山香、香薷草、细叶香薷、蓼刀竹、小香薷、小叶香薷等，其干燥地上部分作中药香薷应用。本植物适应性强，在我国山东，江苏，浙江，安徽，江西，湖北，广东，福建及台湾省等地均有分布，生长于草坡或林下，海拔至1400米。越南北部也有生长。民间全草入药，其性味辛、微辣，归肺、胃经，具有发汗解表，化湿和中的功效。可用于治疗暑湿感冒，恶寒发热，头痛无汗，胃痛呕吐，水肿，小便不利，皮肤湿疹瘙痒，多发性疖肿等疾病，外用亦可治疗毒蛇咬伤等。目前研究表明其中主要活性成分为挥发油类、黄酮类和萜类等。石香薷所含成分具有抗菌、抗病毒、抗氧化等生物活性。石香薷入药历史悠久，资源丰富，具有一定的开发利用价值。但是基本对挥发油类物质进行研究，而对萜类单体物质研究较少，且其单体生理生化功效研究更少。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供萜类化合物、其制备方法和其应用以及抗菌剂。本发明实施例提供一种萜类化合物，该萜类化合物具有良好的抗菌功效，且其从石香薷内提取得到，进一步丰富了从石香薷提取得到的化合物的种类。
本发明是这样实现的：
第一方面，本发明提供一种萜类化合物，其选自下述式（1）-式（3）所示的化合物中的任意一种，
Figure DEST_PATH_IMAGE001
式（1）、
Figure 483085DEST_PATH_IMAGE002
式（2）以及
Figure DEST_PATH_IMAGE003
式（3）。
第二方面，本发明提供一种前述实施方式所述的萜类化合物的制备方法，包括：对石香薷提取物进行后处理得到所述萜类化合物。
第三方面，本发明提供前述实施方式所述的萜类化合物在制备抗菌剂中的应用。
优选地，所述抗菌剂为抑制葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌和链球菌的抑菌剂。
第四方面，本发明提供一种抗菌剂，其活性成分包括前述实施方式所述的萜类化合物中的至少一种。
本发明具有以下有益效果：本发明实施例提供了一种萜类化合物，该化合物具有优异的抗菌效果，特别是对葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌和链球菌有优异的抑菌效果，且该化合物是从石香薷内提取得到，进一步丰富了从石香薷提取得到的化合物的种类。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实施例提供的化合物1的1H-NMR图谱；
图2为本发明实施例提供的化合物1的13C-NMR图谱和DEPT图谱；
图3为本发明实施例提供的化合物1的HSQC图谱；
图4为本发明实施例提供的化合物1的HMBC图谱；
图5为本发明实施例提供的化合物1的HR-ESI-MS谱图；
图6为本发明实施例提供的化合物2的1H-NMR图谱；
图7为本发明实施例提供的化合物2的13C-NMR图谱；
图8为本发明实施例提供的化合物2的HSQC图谱；
图9为本发明实施例提供的化合物2的HMBC图谱；
图10为本发明实施例提供的化合物2的HR-ESI-MS谱图；
图11为本发明实施例提供的化合物3的1H-NMR图谱；
图12为本发明实施例提供的化合物3的13C-NMR图谱；
图13为本发明实施例提供的化合物3的HSQC图谱；
图14为本发明实施例提供的化合物3的HMBC图谱；
图15为本发明实施例提供的化合物3的HR-ESI-MS谱图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
本发明实施例提供一种萜类化合物，其选自下述式（1）-式（3）所示的化合物中的任意一种，
Figure 262822DEST_PATH_IMAGE004
式（1）、
Figure DEST_PATH_IMAGE005
式（2）以及
Figure 471081DEST_PATH_IMAGE006
式（3）。上述化合物具有优异的抗菌效果，可以用于制备抗菌剂。
需要说明的是，本发明实施例提供的从石香薷内提取得到上述萜类化合物仅仅是举例，可以理解的是，从其他的含有上述萜类化合物的天然材料中提取得到的该萜类化合物也在本发明实施例的保护范围内。
本发明实施例提供一种上述萜类化合物的制备方法，包括：
S1、制备提取物；
对石香薷进行提取，具体地，利用超临界萃取制备石香薷提取物，其中，超临界萃取的操作包括：称取香薷适量，粉碎，置于超临界萃取釜中，开启萃取釜和分离釜加温装置，待达到设定温度后打开压缩泵；萃取釜压力保持为12-15.0 MPa（例如为12 MPa、13 MPa、14MPa以及15 MPa等12-15 MPa之间的任意数值），温度为45-50℃（例如为45℃、47℃和50℃等45-50℃之间的任意数值），以20-30 kg/h（例如为20 kg/h、25 kg/h以及30 kg/h等20-30kg/h之间的任意数值）的C02流速循环萃取；分离釜I压力和温度分别为9-10.0 MPa（例如为9MPa、9 .5MPa以及10 MPa等9-10 MPa之间的任意数值）和35-40℃（例如为35℃、36℃、37℃、38℃、39℃以及40℃等35-40℃之间的任意数值）；分离釜II压力和温度分别为6-8.0（例如为6MPa、7MPa以及8MPa等6-8 MPa之间的任意数值） MPa和25-30℃（例如25℃、26℃、27℃、28℃、29℃以及30℃等25-30℃之间的任意数值）；循环萃取2-3小时（例如2小时、2.5小时以及3小时等2-3小时之间的任意数值）。
需要说明的是，超临界萃取仅仅是本发明实施例的举例，该石香薷提取物可以是直接购买得到，也可以是采用其他提取方法得到，例如，浸提、煎煮提取和渗漉等，只要能提取得到含有上述萜类化合物的提取物均可。
S2、后处理；
而后对石香薷提取物进行后处理，继而得到上述萜类化合物。需要说明的是，下述后处理仅为举例，其他能够得到该萜类化合物的后处理方法也在本发明的保护范围内，具体地:
S2.1、初萃；
将醚类溶剂与所述石香薷提取物混合，使得石香薷提取物能够溶解在醚类溶剂或者形悬浊液；而后加入醇-水混合溶液进行萃取并收集萃取得到醇-水部的萃取物；为了提升萃取效果，减少萃取物中的杂质，可以进行多次萃取，具体地，利用醇-水混合溶液对收集萃取得到醇-水部的萃取物再进行萃取。
具体地，将适量的石油醚与石香薷提取物混合进行分散，而后加入醇-水混合溶液进行第一次萃取，而后收集醇-水部的第一萃取物，在将该第一萃取物与醇-水混合溶液进行二次萃取，再收集醇-水部的第二萃取物，如此反复萃取多次，最终得到石香薷浸膏。当然可以理解的是，也可以仅仅萃取一次，即萃取的次数可以根据实际需求进行调整。
其中，上述醚类溶剂可以为石油醚，也可以是其他极性与石油醚接近的其他醚类或者其他溶剂，且醇-水混合溶液中的醇类溶剂可以为甲醇，也可以采用其他醇类溶剂，例如乙醇和丙醇等，且醇-水混合溶液中醇类溶剂的质量百分数为10-50%，例如为15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%以及50%等10-50%之间的任意数值。
S2.2、初级柱层析分离;
初萃后，对初萃得到的石香薷浸膏进行初级柱层析分离得到10个组分，具体地，将石香薷浸膏湿法上样用硅胶柱进行分离。
进一步地，利用初级醚类-酯类混合溶剂或者初级烷基类-酯类混合溶剂和氯代烷类-醇类混合溶剂进行梯度洗脱；具体地，将石油醚和乙酸乙酯以10:1-2:1的体积比混合形成混合溶剂；将二氯甲烷-甲醇以9:1-6:4的体积比混合形成混合溶剂；而后进行洗脱；用TCL板进行检测并合并相同组分，得到10个组分，例如，将石油醚和乙酸乙酯以10:1、9:1和2:1的体积比混合形成混合溶剂进行洗脱；而后将二氯甲烷-甲醇以9:1、8:2、7:3和6:4的体积比混合形成混合溶剂再洗脱得到10个组分。即先利用石油醚和乙酸乙酯形成的混合溶液洗脱后，直至洗脱液中无法用TCL检测出化合物，而后再用二氯甲烷-甲醇形成的混合液进行洗脱。
S2.3、深度处理；
而后对上述初级柱层析分离得到的10个组分中的第1个组分、第5个组分和第6个组分分别进行深度处理。
S2.3.1、第1组分的深度处理；
具体地，对所述第1组分进行深度处理的步骤包括：对所述第1组分进行第一次柱层析分离得到9个组分，而后对第一次柱层析分离得到的第2个组分进行第二次柱层析分离得到9个组分，而后对第二次柱层析分离得到的第5个组分进行反相液相分离得到式（1）所示化合物。
进一步地，第一次柱层析分离的步骤包括：利用第一醚类-酯类混合溶剂或者第一烷基类-酯类混合溶剂进行洗脱得到9个组分；其中，第一醚类-酯类混合溶剂中的醚类溶剂为石油醚，所述第一醚类-酯类混合溶剂中的酯类溶剂为乙酸乙酯；第一烷基类-酯类混合溶剂中的烷基类溶剂为己烷，所述第一烷基类-酯类混合溶剂中的酯类溶剂为乙酸乙酯；且所述石油醚和所述乙酸乙酯的体积比为100:1-10:1; 所述己烷和所述乙酸乙酯的体积比为100:1-10:1;每次采用上述混合溶剂洗脱后都进行TCL板进行点板合并合同组分，再细分得到9个组分。
第二次柱层析分离的步骤包括：利用第二醚类-酯类混合溶剂或者第二烷基类-酯类混合溶剂进行洗脱得到9个组分；其中，第二醚类-酯类混合溶剂中的醚类溶剂为石油醚，所述第二醚类-酯类混合溶剂中的酯类溶剂为乙酸乙酯；所述第二烷基类-酯类混合溶剂中的烷基类溶剂为己烷，所述第二烷基类-酯类混合溶剂中的酯类溶剂为乙酸乙酯。具体地，第二次柱层析分离的步骤包括：将石油醚和乙酸乙酯按照体积比为80:1-2:1的比例混合形成第二醚类-酯类混合溶剂，而后进行梯度洗脱；例如，利用石油醚和乙酸乙酯按照体积比为80:1、50:1、20:1、10:1和2:1的比例混合分别形成第二醚类-酯类混合溶剂进行梯度洗脱。
反相液相分离的步骤包括：利用醇-水混合溶剂进行梯度洗脱。具体地，洗脱步骤包括：0-10 min 20%甲醇，10-15min 20~80%甲醇，15-35min 80%甲醇。上述%为甲醇的质量百分数，剩余则为水。
采用上述深度处理方法能够进一步有利于制备得到萜类化合物。
S2.3.2、第5组分的深度处理；
对所述第5组分进行深度处理的步骤包括：对所述第5组分进行第三次柱层析分离得到14个组分，而后再对第三次柱层析分离得到的第10个组分进行液相分离得到式（2）所示化合物。
进一步地，第三次柱层析分离的步骤包括：利用第三醚类-酯类混合溶剂或者第三烷基类-酯类混合溶剂进行洗脱得到14个组分；具体地，将石油醚和乙酸乙酯按照体积比为3:1-0:1的比例混合形成第三醚类-酯类混合溶剂，而后进行梯度洗脱；例如，利用石油醚和乙酸乙酯按照体积比为3:1、2:1和0:1的比例混合分别形成第三醚类-酯类混合溶剂进行梯度洗脱。
上述第三醚类-酯类混合溶剂和第三烷基类-酯类混合溶剂中的醚类溶剂、酯类溶剂以及烷基类溶剂的选择与上述第一醚类-酯类混合溶剂和第一烷基类-酯类混合溶剂中的醚类溶剂、酯类溶剂以及烷基类溶剂的选择一致，区别在于各物质的配比不同。
液相分离的条件包括：以甲醇-水溶液为洗脱剂，洗脱过程：0-10 min，20%甲醇等度洗脱；10-20 min，20-80%甲醇梯度洗脱；20-50 min 80%甲醇等度洗脱。具体地，样品经过0.45µm滤膜过滤，以甲醇-水溶液为洗脱剂，用10 mm×250 mm半制备ODS柱进行制备分离，色谱条件为0-10 min，20%甲醇等度洗脱；10-20 min，20-80%甲醇梯度洗脱；20-50 min 80%甲醇等度洗脱，流速3mL/min，检测波长210、280 nm。
采用上述方式对第5组分进行深度处理，有利于制备得到所需的萜类化合物。
S2.3.3、第6组分的深度处理；
对所述第6组分进行深度处理的步骤包括：对所述第6组分进行第四次柱层析分离得到7个组分，而后再对第四次柱层析分离得到的第3组分进行反相液相分离得到式（3）所示化合物。
进一步地，第四次柱层析分离的步骤包括：利用第四醚类-酯类混合溶剂或者第四烷基类-酯类混合溶剂进行洗脱得到7个组分；具体地，第四次柱层析分离的步骤包括：将石油醚和乙酸乙酯按照体积比为10:1-0:1的比例混合形成第四醚类-酯类混合溶剂，而后进行梯度洗脱；例如，利用石油醚和乙酸乙酯按照体积比为10:1、5:1、2:1和0:1的比例混合分别形成第四醚类-酯类混合溶剂进行梯度洗脱；
上述第四醚类-酯类混合溶剂和第四烷基类-酯类混合溶剂中的醚类溶剂、酯类溶剂以及烷基类溶剂的选择与上述第一醚类-酯类混合溶剂和第一烷基类-酯类混合溶剂中的醚类溶剂、酯类溶剂以及烷基类溶剂的选择一致，区别在于各物质的配比不同。
反相液相分离的步骤包括：利用醇-水混合溶剂进行梯度洗脱；
优选地，洗脱步骤包括：0-10 min 20%甲醇，10-20min 20~80%甲醇，20-50min 80%甲醇。上述%为甲醇的质量百分数，剩余则为水。
采用上述深度处理方法能够进一步有利于制备得到萜类化合物。
需要说明的是，本发明实施例采用柱层析分离对每次得到的洗脱液进行单独收集，用TCL板进行点板合并相同组分。
需要说明的是，本发明实施例的醇类溶剂为甲醇，仅仅为举例，其他的乙醇或者丙醇等一元醇也可以。醚类溶剂为石油醚也仅为举例，其他的满足要求的醚类也在本发明的保护范围内。同理，酯类溶剂、烷基类溶剂、氯代烷类也限于乙酸乙酯、己烷和二氯甲烷，也可以采用其他对应的酯类溶剂、烷基类溶剂和氯代烷类。
本发明实施例还提供一种抑菌剂，其活性成分包括上述萜类化合物中的至少一种。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供3个萜类化合物，其结构式分别如下所示：
Figure DEST_PATH_IMAGE007
式（1）（记为化合物1）、
Figure 285453DEST_PATH_IMAGE008
式（2）（记为化合物2）以及
Figure 107916DEST_PATH_IMAGE009
式（3）（记为化合物3）。
本实施例还提供上述3个萜类化合物的制备方法，包括：
采用超临界萃取对石香薷进行提取，超临界萃取的条件为：称取香薷10.0 kg，粉碎，置于50L超临界萃取釜中，开启萃取釜和分离釜加温装置，待达到设定温度后打开压缩泵；萃取釜压力保持为15.0 MPa，温度为45℃，以30 kg/h的C02流速循环萃取；分离釜I压力和温度分别为10.0 MPa和40℃；分离釜II压力和温度分别为8.0 MPa和30℃；循环萃取3小时。
取2公斤石香薷提取物与1L石油醚进行分散，将上述混合悬液倒入5 L分液漏斗中，再加入10%甲醇-水溶液2 L，充分振摇混匀，静置进行萃取。收集甲醇-水部位的萃取物，再加入10%甲醇-水溶液2 L萃取，并收集甲醇-水部位的萃取物，如此循环萃取5次，萃取完后旋蒸部分溶剂得到23 g的石香薷浸膏。
取石香薷浸膏18 g，湿法上样用硅胶柱进行分离，以石油醚-乙酸乙酯（V:V）（10:1、9:1、2:1）和二氯甲烷-甲醇（V:V）（9:1、8:2、7:3和6:4）梯度洗脱，每个馏分100 mL，共168个组分，用TCL板进行检测并合并相同组分，得到10个组分，（记为SXR1-1至SXR1-10）。其中，SXR1-1经薄层板检测，其化合物极性较小，遂对其进行再次分离。
SXR1-1（1.149g）湿法上样经硅胶柱进行分离，用石油醚-乙酸乙酯（V:V）（100:1）进行洗脱，用TCL板进行点板合并合同组分，再细分得到9个组分，（记为SXR1-1-1至SXR1-1-9）。取 SXR1-2（0.8739 g）湿法上样经硅胶柱进行分离，用石油醚-乙酸乙酯（V:V）（80:1、50:1、20:1、10:1和2:1）进行梯度洗脱，用TCL板进行点板合并相同组分，9个组分（记为得到SXR1-2-1至SXR1-2-9），其中，对SXR1-2-5进行反相液相分离，得到化合物1（7.67 mg）。其中，反相液相的条件：选用甲醇-水洗脱，洗脱条件为0-10 min 20%甲醇，10-20 min 20~80%甲醇，20-50 min 80%甲醇，流速3mL/min，检测波长210、280nm。
SXR1-5（0.5g）湿法上样，经石油醚-乙酸乙酯（V:V）（3:1、2:1和0:1）进行梯度洗脱，用TCL板进行点板合并相同组分，再细分得到14个组分（记为SXR1-5-1至SXR1-5-14）。SXR1-5-10经液相分离得到化合物化合物2（0.7 mg）。液相分离的条件为：0-10 min 20%甲醇，10-20 min 20~80%甲醇，20-50 min 80%甲醇，流速3mL/min，检测波长210、280nm。
SXR1-6（1.05g）湿法上样，经石油醚-乙酸乙酯（V:V）（10:1、5:1、2:1和0:1）进行梯度洗脱，用TCL板进行点板合并相同组分，再细分得到得到7个组分（记为SXR1-6-1至SXR1-6-7），其中，SXR1-6-3经反相液相分离得到化合物3（8.6 mg）。其中，反相液相的条件：选用甲醇-水洗脱，洗脱条件为：0-10 min 20%甲醇，10-20 min 20~80%甲醇，20-50 min 80%甲醇，流速3mL/min，吸收波长210、280nm。
表征
利用高效液相色谱、质谱以及核磁等对化合物1-化合物3分别进行鉴定，表征其结构，结果以及分析如下：
化合物1：淡黄色油状。参见图1-图5。根据图1-图5可知，由HR-ESI-MS得到准分子离子峰m/z: 265.1491[M-H]-，推断该化合物的分子式为C13H14O6。1H-NMR(500 MHz,Methanol-d)图谱显示化合物1有一个五取代苯环特征信号[δ H 7.09 (1H, s)]，一个顺式耦合的烯烃质子信号[δ H7.72 (1H, d, J = 2.5 Hz), 6.78 (1H, d, J = 2.5 Hz)]，一个甲氧基信号[δ H 3.86 (1H, s)]。由13C-NMR(125 MHz, Methanol-d4)和DEPT图谱可知，该结构中含有五个苯环上的季碳[δ C 129.42(s), 120.90 (s), 125.73 (s), 152.00 (s),149.79 (s)]，一个双键[δ C 147.26 (d), 107.94 (d)]，三个次甲基[δ C 68.65 (d), 71.98(d),102.52 (d)]，一个连氧亚甲基[δ C 72.90 (t)]以及一个甲氧基[δ C56.56 (q)]。HMBC图谱显示，H-2与C-3 (δ C 107.94)、C-3a (δ C 129.42)、C-11 (δ C 149.79)相关，综合以上信息说明该结构中含有一个苯并呋喃环；同时H3-12与C-9 (δ C 152.00)相关，说明甲氧基与苯环相连；H2-8与C-6 (δ C 102.52)、C-5 (δ C 71.98)、 C-8a (δ C 125.73)、C-9 (δ C 152.00)相关，H-6与C-5 (δ C 71.98)、C-4 (δ C 68.65)相关说明结构中含有一个与苯环相连的含氧环庚烷。综合以上数据，确定化合物1的结构式，命名为Molsol 3。具体NMR数据见表1。
表1 Molsol 3的1H-NMR和13C-NMR数据(500 MHz, 125 MHz, in methanol-d 4)
No. 1H-NMR 13C-NMR
1 2 3 3a3b 4 5 67 8 8a 910 11 12 — 7.72 (1H, d, J = 2.5 Hz) 6.78 (1H, d, J = 2.5 Hz) — — 5.14(1H, d, J = 3.0 Hz) 5.63 (1H, dd, J = 3.0, 4.0 Hz) 5.62 (1H, d, J =3.5 Hz) — 3.83 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-8a) 3.94 (1H, d, J = 4.5, 8.5Hz,H-8b) — — 7.09 (1H, s) — 3.86 (1H, s) — 147.26 107.94 129.42120.90 68.65 71.98 102.52— 72.90 125.73 152.00102.30 149.79 56.56
化合物2：参见图6-图10。由HR-ESI-MS得到准分子离子峰m/z: 265.1070[M+H]+，推断该化合物的分子式为C14H16O5。由1H-NMR（500 MHz, Chloroform-d）谱图可知，化合物2含有一个2, 3, 4, 5, 6五取代的苯环特征信号[δ H6.97 (1H, s)]，三个甲基（含有一个甲氧基）信号[δ H 1.40(3H, s), 1.23(3H, s), 3.84(3H, s)]，两个亚甲基（包括一个连氧亚甲基）信号[δ H 3.22 (2H, m), 5.20 (2H, s)]和一个次甲基信号[δ H4.82 (1H, m)]。由13C-NMR（125 MHz，Chloroform-d）和DEPT图谱可知，该结构中含有一个羰基的信号[δ C 169.13(s)]，五个苯环上的季碳[δ C 150.94 (s), 130.23 (s), 147.82 (s), 133.60 (s),109.03 (s)]，一个次甲基信号[δ C 91.83 (d)]，两个亚甲基[δ C 30.69 (t), 68.47 (t)]，三个甲基（包括一个连氧甲基）[δ C 24.17 (q), 26.29 (q), 56.19 (q)]。由以上数据推测，化合物2含有一个苯并呋喃环结构。根据化合物2的HMBC图谱相关性可知，甲氧基直接与苯环相连；并且H3-10与H3-11与C-8 (δ C 91.83)和C-9 (δ C71.86)相关，说明2-羟基-2-甲基丙基连接在呋喃环的C-9位置上；另外H2-13与C-12 (δ C 169.13)相关，说明这是一个内酯结构。综合以上数据，确定化合物2的结构式，命名为Molsolide 1。具体NMR数据见表2。
表2 Molsolide 1的1H-NMR和13C-NMR数据(500 MHz, 125MHz, in chloroform-d)
No. 1H-NMR 13C-NMR
1 2 3 4 5 6 78 9 10 11 1213 14 6.97 (1H, s) — — — — — 3.22 (2H, m) 4.82(1H, m) — 1.40 (3H, s) 1.22 (3H, s) — 5.20(2H, s) 3.84 (3H, s) 113.51 150.94 130.23 147.82 133.60109.03 30.49 91.82 71.86 26.29 24.17169.13 68.47 56.19
化合物3：无色油状。参见图11-15。由HR-ESI-MS得到准分子离子峰m/z: 187.1342[M-H]-，推断该化合物的分子式为C10H20O3。1H-NMR(500 MHz, Methanol-d 4)图谱显示化合物17有三个双峰甲基信号[δ H 0.90 (3H, d, J = 5.5 Hz), 0.88 (3H, d, J = 6.0 Hz),1.09 (3H, d, J = 7.0 Hz)]。由13C-NMR(125 MHz, Methanol-d 4)和DEPT图谱可知，该化合物结构中含有一个季碳[δ C 77.91 (s)]，四个次甲基[δ C 34.01 (d), 69.85 (d), 70.52(d), 33.95 (d)]，两个亚甲基[δ C 35.13 (t), 34.76 (t)]及三个甲基[δ C 16.27 (q),16.49 (q), 14.38 (q)]。由HMBC可以观察到H3-8、H3-9与C-7 (δ C 33.95)、C-1 (δ C 77.91)的相关信号；H-10与C-6 (δ C 35.13)、C-5 (δ C 34.01)、C-4 (δ C 69.85)的相关信号。说明化合物3的C-1位上被一个羟基和一个异丙基取代，C-5为上被一个甲基取代。综合以上数据，确定化合物3的结构式为1-异丙基-5-甲基环己烷-1,2,4-三醇。其具体的NMR数据如表3所示。
表3化合物3的1H-NMR和13C-NMR数据(500 MHz, 125MHz, in methanol-d 4)
No. 1H-NMR 13C-NMR
1 2 3 45 6 7 89 10 — 3.62 (1H, t, J = 3.0 Hz) 2.02 (2H, m) 4.04 (1H, dt) 1.91 (1H, m)2.01 (1H, m, H-2a) 1.63 (1H, m, H-2b) 2.01 (1H, m) 0.90 (3H, d, J = 5.5Hz) 0.88 (3H, d, J = 6.0 Hz) 1.09 (3H, d, J = 7.0 Hz) 77.91 70.52 34.7669.85 33.95 35.1334.01 16.27 16.4914.38
实验例
样品药敏纸片制备：用滤纸制成直径0.6cm的圆形纸片，灭菌后烘干。将受试药物化合物1~3，分别滴加在纸片上，分为三个剂量：10μL/片、5μL/片和2.5μL/片。
试验操作：将纯化的菌落以及标准菌株接种于5mL LB肉汤培养基中，37℃震荡培养8~12h。调整菌液至0.5麦氏浓度，用玻璃棒均匀涂布90cm的MH琼脂平板，然后在平板上贴好药敏纸片，做好标记，37℃恒温培养。细菌为葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌和链球菌。
药敏试验鉴定结果：四种病原菌沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌和链球菌对几大类抗生素都较敏感，尤其是本发明实施例提供的萜类化合物Molsol 3、Molsolide 1和1-异丙基-5-甲基环己烷-1,2,4-三醇对上述四类病原菌抑菌效果良好，跟部分广谱抗生素，如喹诺酮类、头孢类水平相当，优于大部分抗生素，如青霉素类、氨基糖苷类等，体现了广谱、高效的抗菌性。各类抗生素对分离菌的药敏试验结果如表4所示。
表4药敏试验结果
Figure 437266DEST_PATH_IMAGE010
综上可知，石香薷萜类化合物Molsol 3、Molsolide 1和1-异丙基-5-甲基环己烷-1,2,4-三醇对病原菌抑菌效果非常明显，对四种病原菌均有明显抑菌效果，说明其具有良好的药用开发价值和前景。对沙门氏菌的治疗效果最好，对葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌的治疗效果较好。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种萜类化合物，其特征在于，为下述式（1）或2所示的化合物，
Figure 593136DEST_PATH_IMAGE001
式（1），
Figure 262015DEST_PATH_IMAGE002
式（2）。
2.一种萜类化合物的制备方法，其特征在于，所述萜类化合物选自下述式（1）-式（3）所示的化合物中的任意一种，
Figure 317696DEST_PATH_IMAGE003
式（1）、
Figure 72025DEST_PATH_IMAGE004
式（2）、
Figure 120621DEST_PATH_IMAGE005
式（3）；
制备方法包括：
对石香薷提取物进行初萃得到石香薷浸膏；而后再对所述石香薷浸膏进行初级柱层析分离，得到10个组分，而后对所述10个组分中的第1个组分、第5个组分和第6个组分分别进行深度处理对应得到式（1）、式（2）和式（3）所示化合物，所述石香薷提取物为超临界萃取得到的提取物；超临界萃取的条件包括：萃取压力为12-15 MPa，温度为45-50℃，以20-30 kg/h的CO2流速循环萃取；
其中，初萃的步骤包括：将石油醚与所述石香薷提取物混合，而后加入醇-水混合溶液进行萃取并收集萃取得到醇-水部的萃取物，所述醇-水混合溶液中醇类溶剂的质量百分数为10-50%，所述醇-水混合溶液中的醇类溶剂为甲醇；
初级柱层析分离的步骤包括：将石油醚和乙酸乙酯以10:1-2:1的体积比混合形成混合溶剂进行洗脱；而后将二氯甲烷-甲醇以9:1-6:4的体积比混合形成混合溶剂再进行洗脱；
对初级柱层析分离得到的所述第1组分进行深度处理的步骤包括：对初级柱层析分离得到的所述第1组分进行第一次柱层析分离得到9个组分，而后对第一次柱层析分离得到的第2个组分进行第二次柱层析分离得到9个组分，而后对第二次柱层析分离得到的第5个组分进行反相液相分离；
对初级柱层析分离得到的所述第5组分进行深度处理的步骤包括：对初级柱层析分离得到的所述第5组分进行第三次柱层析分离得到14个组分，而后再对第三次柱层析分离得到的第10个组分进行液相分离；
对初级柱层析分离得到的所述第6组分进行深度处理的步骤包括：对初级柱层析分离得到的所述第6组分进行第四次柱层析分离得到7个组分，而后再对第四次柱层析分离得到的第3组分进行反相液相分离；
进一步地，第一次柱层析分离的步骤包括：利用由体积比为100:1-10:1的石油醚和乙酸乙酯形成的第一醚类-酯类混合溶剂或者体积比为100:1-10:1的己烷和乙酸乙酯的第一烷基类-酯类混合溶剂进行洗脱得到9个组分；
第二次柱层析分离的步骤包括：利用由体积比为80:1-2:1的石油醚和乙酸乙酯形成的第二醚类-酯类混合溶剂进行洗脱得到9个组分；
对第二次柱层析分离得到的第5个组分进行反相液相分离的步骤包括：利用醇-水混合溶剂进行梯度洗脱；洗脱步骤包括：0-10 min 20%甲醇，10-15min 20~80%甲醇，15-35min80%甲醇；
第三次柱层析分离的步骤包括：利用由体积比为3:1-0:1的石油醚和乙酸乙酯形成的第三醚类-酯类混合溶剂进行洗脱得到14个组分；
对第三次柱层析分离得到的第10个组分进行液相分离的条件包括：以甲醇-水溶液为洗脱剂，洗脱过程：0-10 min，20%甲醇等度洗脱；10-20 min，20-80%甲醇梯度洗脱；20-50min 80%甲醇等度洗脱；
第四次柱层析分离的步骤包括：利用由体积比为10:1-0:1的石油醚和乙酸乙酯形成的第四醚类-酯类混合溶剂进行洗脱得到7个组分；
对第四次柱层析分离得到的第3组分进行反相液相分离的步骤包括：利用醇-水混合溶剂进行梯度洗脱；洗脱步骤包括：0-10 min 20%甲醇，10-20 min 20~80%甲醇，20-50 min80%甲醇。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，第二次柱层析分离的步骤包括：利用石油醚和乙酸乙酯按照体积比为80:1、50:1、20:1、10:1和2:1的比例混合分别形成第二醚类-酯类混合溶剂进行梯度洗脱。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，第四次柱层析分离的步骤包括：利用石油醚和乙酸乙酯按照体积比为10:1、5:1、2:1和0:1的比例混合分别形成第四醚类-酯类混合溶剂进行梯度洗脱。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，初级柱层析分离的步骤包括：将石油醚和乙酸乙酯以10:1、9:1和2:1的体积比混合形成混合溶剂进行洗脱；而后将二氯甲烷-甲醇以9:1、8:2、7:3和6:4的体积比混合形成混合溶剂再进行洗脱。
6.一种抗菌剂，其特征在于，其活性成分包括权利要求1所述的萜类化合物中的至少一种。
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