CN113151327A - 一种蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶的突变体及其应用 - Google Patents

一种蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶的突变体及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113151327A
CN113151327A CN202110443809.1A CN202110443809A CN113151327A CN 113151327 A CN113151327 A CN 113151327A CN 202110443809 A CN202110443809 A CN 202110443809A CN 113151327 A CN113151327 A CN 113151327A
Authority
CN
China
Prior art keywords
maltopentaose
mutant
amylase
gly
alpha
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110443809.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113151327B (zh
Inventor
韦宇拓
汪桂萍
孙畅
潘世优
杜丽琴
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangxi University
Original Assignee
Guangxi University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangxi University filed Critical Guangxi University
Priority to CN202110443809.1A priority Critical patent/CN113151327B/zh
Publication of CN113151327A publication Critical patent/CN113151327A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113151327B publication Critical patent/CN113151327B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2411—Amylases
    • C12N9/2414—Alpha-amylase (3.2.1.1.)
    • C12N9/2417—Alpha-amylase (3.2.1.1.) from microbiological source
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01001—Alpha-amylase (3.2.1.1)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α‑淀粉酶的突变体，所述蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α‑淀粉酶突变体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明蜡样芽胞杆菌α‑淀粉酶的突变体水解淀粉获得麦芽五糖含量达到60％的糖浆，再经过大孔树脂AB‑8进行纯化后，麦芽五糖纯度达到93％。

Description

一种蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶的突变体及其应用
技术领域
本发明涉及酶工程和基因工程领域，具体涉及一种蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶的突变体及其应用。
背景技术
麦芽五糖是由五个葡萄糖聚合而成的一种麦芽低聚糖，不仅可以作为临床检查用试剂，用于诊断急性肝炎等各种疾病，在保健和医疗上有特殊用途，还可以作为新的功能食品原料，可见作为麦芽低聚糖的一种，麦芽五糖集营养与功能为一体有着广阔的发展前景。麦芽五糖一般是通过淀粉的水解产物中分离纯化得到，即利用淀粉酶不完全水解淀粉形成麦芽寡糖糖浆，然后再通过层析方法分离纯化到麦芽五糖，因此麦芽寡糖糖浆中目的产物麦芽五糖含量越高，越容易分离纯化，生产成本越低。麦芽五糖实际生产中要控制淀粉水解获得麦芽五糖含量高的麦芽寡糖糖浆存在工艺复杂，目的产物含量低等诸多问题，导致生产成本很高，所以找到能水解淀粉获得高产麦芽五糖的淀粉酶是降低麦芽五糖生产成本的有效方法。
目前在国际上仅有少数国家开始生产麦芽五糖，国内对麦芽五糖的研究较少，一般是寻找水解淀粉生成麦芽寡糖含量多的淀粉酶来水解淀粉，然后从麦芽寡糖糖浆中纯化麦芽五糖。但这些淀粉酶的反应产物除了较多的麦芽五糖外，还生成较多的葡萄糖、麦芽糖等副产品。为了解决这一难题，可以采用大通量筛选得到只水解产生麦芽五糖的淀粉酶的菌株或者对已知麦芽五糖淀粉酶进行改造从而提高麦芽五糖的纯度和产量，包括采取分子生物学技术、酶工程技术、基因工程技术等方法对菌种进行改良。
发明内容
本发明针对上述技术问题，提供一种蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶的突变体及其应用，在对蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)的α-淀粉酶研究中，发现其水解淀粉产物的麦芽五糖含量很高，并进一步通过酶分子改造使其能水解淀粉获得麦芽五糖含量更高的糖浆，并优化了水解淀粉制备麦芽五糖的反应条件和纯化工艺。
为实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：
一种蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶突变体，通过对来自蜡样芽胞杆菌的高产麦芽五糖α-淀粉酶进行蛋白质工程的改造和筛选得到；所述蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶的突变体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
所述蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶的突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，其中161位点的酪氨酸(Y)突变为缬氨酸(V)。
所述蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶的突变体在水解淀粉生产麦芽五糖中的应用。
本发明是经过对许多位点的预测分析，并对获得的多个候选位点进行突变研究和筛选比较才获得的，本发明所述的实施方法仅仅是对获得本发明突变酶实验过程的描述，而不包括对其它候选位点的突变实验过程的陈述。PCR定点饱和突变技术、基因表达技术和重组蛋白质的纯化技术，本实施方案中未作详细说明的分子生物学实验方法均为分子生物学专业人员熟悉的常规实验方法。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明将蜡样芽胞杆菌的α-淀粉酶突变体水解淀粉获得麦芽五糖含量达到60％的糖浆，再经过大孔树脂AB-8进行纯化后，麦芽五糖纯度达到93％。
附图说明
图1是温度对酶水解淀粉活力的影响的曲线图。
图2是pH对酶水解淀粉活力的影响的曲线图。
图3是酶水解淀粉产物的高效液相色谱检测分析图。
图4是纯化后麦芽五糖的高效液相色谱检测分析图。
具体实施方式
下面结合附图具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。实施例中采用的原料、试剂若无特殊说明，皆为市售所得。
对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。
实施例1
1.突变体的构建
通过对蜡样芽胞杆菌的α-淀粉酶HA的蛋白质3D结构分析，确定其底物结合关键氨基酸残基位点，然后研究该位点突变成不同氨基酸残基对酶水解淀粉的影响，利用PCR技术构建α-淀粉酶HA突变体的基因，并连接到表达载体pSE380构建重组表达载体，然后转化进大肠杆菌菌株中进行诱导表达，经镍柱纯化得到目的重组酶蛋白，经SDS-PAGE电泳得到单一目的条带后就可以进行酶学性质分析和水解淀粉特性额比较分析，经过对大量突变体的筛选，发现161位点的酪氨酸突变为缬氨酸的突变体Y161V水解淀粉获得麦芽五糖含量更高的水解产物。突变体Y161V核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.突变酶和原始酶水解淀粉产物的比较分析
为了比较突变体Y161V和原始酶HA(即未进行突变的)水解淀粉的水解产物组成，将相同蛋白含量的突变体Y161V和原始酶HA分别加入2％的可溶性淀粉溶液，在25℃反应24h后将反应物的上清液通过高效液相色谱HPLC来检测水解产物的组成成分情况，HPLC分析结果表明突变体Y161V水解淀粉产物中麦芽五糖含量达到64.3％，比原始酶HA的53％高了11.3％，结果见表1。
表1.突变体Y161V和原始酶HA水解淀粉产物比较
酶 G1(％) G2(％) G3(％) G4(％) G5(％) G6(％)
HA(原始酶) 2.92 9.14 30.21 4.71 53.02
Y161V(突变酶) 2.64 9.38 20.94 2.71 64.33
表1中，G1代表葡萄糖，G2代表麦芽糖，G3代表麦芽三糖，G4代表麦芽四糖，G5代表麦芽五糖，G6代表麦芽六糖。
实施例2
3.突变体的最适反应温度分析
以2％的可溶性淀粉为底物，测定温度对突变体Y161V的水解活力的影响，设定最适反应温度处的最高酶活力为100％，绘制温度对酶的相对活力的影响的曲线图，如图1所示，在最适反应pH 6.0的条件下反应20min，突变体Y161V的最适温度为45℃，属于中温α-淀粉酶，而且在温度40℃-60℃的范围内有75％以上的相对酶活力，pH低于5.5时酶活性降低；
4.酶的最适反应pH分析
以2％的可溶性淀粉为底物，测定pH对突变体Y161V的水解活力的影响，设定最适反应pH处的最高酶活力为100％，绘制pH对突变体Y161V相对活力的影响的曲线图，如图2所示，在37℃恒温反应20min的条件下，酶的最适pH为6.0，而且在pH 5.5-8.0的范围内有70％以上的相对酶活力，pH低于5.5时酶活性降低，属于弱碱性酶；
5.水解淀粉产物成分的分析
将含有0.6μg蛋白量的突变体Y161V酶液与终浓度为2％的可溶性淀粉溶液，在最适反应条件下(温度45℃、pH值6.0)进行反应，反应后将反应物的上清液通过高效液相色谱HPLC来检测淀粉酶水解产物的组成情况；如图3所示，结果表明突变体Y161V水解淀粉酶生成主要产物是麦芽五糖、麦芽三糖和麦芽糖，经峰面积计算麦芽五糖含量为60％。
6.突变体Y161V水解淀粉高产麦芽五糖反应条件的优化
为了优化最佳的添加酶量，在200μL的2％的可溶性淀粉溶液中分别加入不同蛋白量的突变酶Y161V，在不同温度(25℃，35℃，45℃)进行反应，反应24h后将反应物的上清液稀释合适倍数后通过高效液相色谱HPLC来检测淀粉酶水解产物的组成情况。经过比较分析，突变酶Y161V水解淀粉产麦芽五糖的最优的反应条件结果见表2。结果表明突变在25℃反应条件下，200μL的反应体积中加入1.2μg的酶蛋白，水解淀粉产物中麦芽五糖含量最高，达到64.4％。
表2.淀粉酶在25℃水解淀粉的产物比例
Figure BDA0003036126040000051
表2中，G1代表葡萄糖，G2代表麦芽糖，G3代表麦芽三糖，G4代表麦芽四糖，G5代表麦芽五糖，G6代表麦芽六糖。
7.麦芽五糖的纯化
大孔树脂层析柱的准备：将大孔树脂AB-8先用4％HCl浸泡4小时，然后用去离子水冲洗直至检测溶液pH值显中性，再用4％NaOH浸泡4小时，同样用去离子水冲洗直至检测溶液pH值显中性，最后用95％乙醇浸泡过夜，再用去离子水冲洗至无醇味即可以装柱；装柱完成以后，封闭层析柱，打开恒流泵，用去离子水冲洗填料，期间由于填料的不断压实高度会不断下降，所以要适时补充填料到所需高度；低速冲洗填料至无醇味，静置层析柱，平衡过夜，等待上样。
上样条件的优化：根据层析柱直径5厘米，长度100厘米计算，设定上样体积为1mL，将实施例2第6小节最优条件获得的水解淀粉产物10000RPM离心20分钟后取上清，利用真空冷冻干燥机冻干成干粉，然后再溶解于超纯水中，分别制备成不同浓度的上样样品，再分别上样到已经准备好的大孔树脂AB-8层析柱进行纯化，纯化产物用高效液相色谱HPLC来检测分析麦芽五糖的纯度，以麦芽糖五糖纯度最高的上样样品浓度为最佳上样样品浓度。
经过实验筛选得到上样条件为：上样体积为1mL、样品浓度为486.64mg/mL的条件下，以0.7mL/min的洗脱流速，在55℃条件下用无菌去离子水进行洗脱，然后用HPLC检测麦芽五糖的纯度，并利用峰面积计算麦芽糖五糖的纯度和含量，回收率＝回收后麦芽五糖质量/上样时麦芽五糖质量。HPLC检测结果如图4所示，结果表明经过大孔树脂AB-8的纯化，麦芽五糖纯度明显提高，经峰面积计算，麦芽五糖纯度为93％，回收率为74％。
序列表
<110> 广西大学
<120> 一种蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶的突变体及其应用
<130> JC
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1539
<212> DNA
<213> Bacillus cereus
<400> 1
atgtttaaaa gaataacaat agtcggattg tcagttgtta tgtttttacc tagtatatat 60
gacgggagta aagcatatgc agacacagtt aacaatggaa cgttaatgca gtattttgag 120
tggtatgctc cgaatgatgg gaatcattgg aatcgtttgc gtactgatgc tgaaaattta 180
gcggaaaaag gaattacatc tgtttggata ccacctgcat ataaaggaac tacgcaaaat 240
gacgtaggat atggagcata tgatttatat gatctggggg aattcaatca aaagggaaca 300
gtgcggacga aatatgggac gaaagcacaa ttgaaatctg caattgacgc tttacataag 360
aaaaacatcg atgtatacgg tgatgtagtt atgaatcata aaggtggggc tgattataca 420
gaaactgtca cagcagttga ggtagacccg agcaatcgga atattgaagt atcaggtgat 480
gttgaaatta gtgcgtggac gggatttaac tttccagggc gtggagattc ttattctaat 540
ttcaaatgga aatggtatca ttttgacgga acggattggg atgaaggaag gaaattaaac 600
cgaatttata aatttagggg cataggtaaa gcatgggact gggaagtgtc tagcgagaat 660
gggaattatg attatttgat gtatgcggat cttgattttg atcatccaga tgttgcgaat 720
gaaatgaaaa aatggggaac gtggtatgcg aatgaattaa atttagatgg ttttcgttta 780
gatgctgtta aacatattga tcatgaatat ttgcgcgatt gggtaaatca cgttagacag 840
caaacaggga aagaaatgtt tacagtagct gaatattggc aaaatgatat ccagacttta 900
aataattatt tagcgaaggt taattataat caatctgtgt tcgatgcacc acttcattat 960
aattttcatt atgcttcaac aggaaatgga aattatgata tgagaaatat tttaaaagga 1020
acggtagttg cgaatcatcc tacacttgcg gttactctag ttgaaaatca tgattcacag 1080
cctggtcagt cattggaatc tgtagtgagc ccttggttca agccgctggc atatgcattt 1140
attttaacgc gtgcagaggg gtatccttct gttttctatg gtgattacta tggtacaaaa 1200
ggaaatagta actatgaaat tccagcgtta aaggataaaa ttgatccgat tttgacggca 1260
cgaaaaaact ttgcatatgg tacgcagcgt gattattttg atcatccaga tgtgattggc 1320
tggacaagag aaggtgatag tgtacatgct aattctggtt tagcaacatt aatctctgat 1380
ggaccaggag gggcaaagtg gatggatgtt ggaaagaata acgcaggtga agtatggtac 1440
gatattacgg gtaatcaaac aaatactgta acaattaata aggatggttg gggacaattc 1500
caagtaagtg gaggatcagt ttccatatat gttcagcag 1539
<210> 2
<211> 513
<212> PRT
<213> Bacillus cereus
<400> 2
Met Phe Lys Arg Ile Thr Ile Val Gly Leu Ser Val Val Met Phe Leu
1 5 10 15
Pro Ser Ile Tyr Asp Gly Ser Lys Ala Tyr Ala Asp Thr Val Asn Asn
20 25 30
Gly Thr Leu Met Gln Tyr Phe Glu Trp Tyr Ala Pro Asn Asp Gly Asn
35 40 45
His Trp Asn Arg Leu Arg Thr Asp Ala Glu Asn Leu Ala Glu Lys Gly
50 55 60
Ile Thr Ser Val Trp Ile Pro Pro Ala Tyr Lys Gly Thr Thr Gln Asn
65 70 75 80
Asp Val Gly Tyr Gly Ala Tyr Asp Leu Tyr Asp Leu Gly Glu Phe Asn
85 90 95
Gln Lys Gly Thr Val Arg Thr Lys Tyr Gly Thr Lys Ala Gln Leu Lys
100 105 110
Ser Ala Ile Asp Ala Leu His Lys Lys Asn Ile Asp Val Tyr Gly Asp
115 120 125
Val Val Met Asn His Lys Gly Gly Ala Asp Tyr Thr Glu Thr Val Thr
130 135 140
Ala Val Glu Val Asp Pro Ser Asn Arg Asn Ile Glu Val Ser Gly Asp
145 150 155 160
Val Glu Ile Ser Ala Trp Thr Gly Phe Asn Phe Pro Gly Arg Gly Asp
165 170 175
Ser Tyr Ser Asn Phe Lys Trp Lys Trp Tyr His Phe Asp Gly Thr Asp
180 185 190
Trp Asp Glu Gly Arg Lys Leu Asn Arg Ile Tyr Lys Phe Arg Gly Ile
195 200 205
Gly Lys Ala Trp Asp Trp Glu Val Ser Ser Glu Asn Gly Asn Tyr Asp
210 215 220
Tyr Leu Met Tyr Ala Asp Leu Asp Phe Asp His Pro Asp Val Ala Asn
225 230 235 240
Glu Met Lys Lys Trp Gly Thr Trp Tyr Ala Asn Glu Leu Asn Leu Asp
245 250 255
Gly Phe Arg Leu Asp Ala Val Lys His Ile Asp His Glu Tyr Leu Arg
260 265 270
Asp Trp Val Asn His Val Arg Gln Gln Thr Gly Lys Glu Met Phe Thr
275 280 285
Val Ala Glu Tyr Trp Gln Asn Asp Ile Gln Thr Leu Asn Asn Tyr Leu
290 295 300
Ala Lys Val Asn Tyr Asn Gln Ser Val Phe Asp Ala Pro Leu His Tyr
305 310 315 320
Asn Phe His Tyr Ala Ser Thr Gly Asn Gly Asn Tyr Asp Met Arg Asn
325 330 335
Ile Leu Lys Gly Thr Val Val Ala Asn His Pro Thr Leu Ala Val Thr
340 345 350
Leu Val Glu Asn His Asp Ser Gln Pro Gly Gln Ser Leu Glu Ser Val
355 360 365
Val Ser Pro Trp Phe Lys Pro Leu Ala Tyr Ala Phe Ile Leu Thr Arg
370 375 380
Ala Glu Gly Tyr Pro Ser Val Phe Tyr Gly Asp Tyr Tyr Gly Thr Lys
385 390 395 400
Gly Asn Ser Asn Tyr Glu Ile Pro Ala Leu Lys Asp Lys Ile Asp Pro
405 410 415
Ile Leu Thr Ala Arg Lys Asn Phe Ala Tyr Gly Thr Gln Arg Asp Tyr
420 425 430
Phe Asp His Pro Asp Val Ile Gly Trp Thr Arg Glu Gly Asp Ser Val
435 440 445
His Ala Asn Ser Gly Leu Ala Thr Leu Ile Ser Asp Gly Pro Gly Gly
450 455 460
Ala Lys Trp Met Asp Val Gly Lys Asn Asn Ala Gly Glu Val Trp Tyr
465 470 475 480
Asp Ile Thr Gly Asn Gln Thr Asn Thr Val Thr Ile Asn Lys Asp Gly
485 490 495
Trp Gly Gln Phe Gln Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ile Tyr Val Gln
500 505 510
Gln

Claims (3)

1.一种蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶的突变体，其特征在于：所述蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶突变体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述突变体，其特征在于：所述蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶的突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，其中161位点的酪氨酸突变为缬氨酸。
3.采用如权利要求1或2所述突变体在水解淀粉生产麦芽五糖中的应用。
CN202110443809.1A 2021-04-23 2021-04-23 一种蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶的突变体及其应用 Active CN113151327B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110443809.1A CN113151327B (zh) 2021-04-23 2021-04-23 一种蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶的突变体及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110443809.1A CN113151327B (zh) 2021-04-23 2021-04-23 一种蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶的突变体及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113151327A true CN113151327A (zh) 2021-07-23
CN113151327B CN113151327B (zh) 2022-11-11

Family

ID=76870036

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110443809.1A Active CN113151327B (zh) 2021-04-23 2021-04-23 一种蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶的突变体及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113151327B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023225459A2 (en) 2022-05-14 2023-11-23 Novozymes A/S Compositions and methods for preventing, treating, supressing and/or eliminating phytopathogenic infestations and infections

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007302569A (ja) * 2006-05-08 2007-11-22 Hidetoshi Tsuchida 組換えヒト血清アルブミン−金属ポルフィリン錯体、並びにそれを含有する人工酸素運搬体および赤血球代替物
CN101407820A (zh) * 2008-09-26 2009-04-15 广西大学 一种编码糖基水解酶家族32的蔗糖酶的基因及其应用
WO2014068109A2 (en) * 2012-11-05 2014-05-08 Novozymes A/S Enzyme compositions enabling re-use of water in laundry
CN112574978A (zh) * 2021-01-19 2021-03-30 青岛尚德生物技术有限公司 提高降解醇溶蛋白能力的蛋白酶突变体及其编码基因和应用
CN112921017A (zh) * 2021-04-23 2021-06-08 广西大学 一种嗜水气单胞菌麦芽糖α-淀粉酶突变体及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2007302569A (ja) * 2006-05-08 2007-11-22 Hidetoshi Tsuchida 組換えヒト血清アルブミン−金属ポルフィリン錯体、並びにそれを含有する人工酸素運搬体および赤血球代替物
CN101407820A (zh) * 2008-09-26 2009-04-15 广西大学 一种编码糖基水解酶家族32的蔗糖酶的基因及其应用
WO2014068109A2 (en) * 2012-11-05 2014-05-08 Novozymes A/S Enzyme compositions enabling re-use of water in laundry
CN112574978A (zh) * 2021-01-19 2021-03-30 青岛尚德生物技术有限公司 提高降解醇溶蛋白能力的蛋白酶突变体及其编码基因和应用
CN112921017A (zh) * 2021-04-23 2021-06-08 广西大学 一种嗜水气单胞菌麦芽糖α-淀粉酶突变体及其应用

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JOONG HYUCK AUH等: ""A Novel Maltopentaose-Producing Amylase as a Bread Antistaling Agent"", 《FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY》 *
SHIYOU PAN等: ""Site-saturation mutagenesis at amino acid 329 of Klebsiella pneumoniae halophilic α-amylase affects enzymatic properties"", 《J BIOSCI BIOENG》 *
ZUI FUJIMOTO等: ""Crystal structure of a catalytic-site mutant α-amylase from Bacillus subtilis complexed with maltopentaose"", 《JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY》 *
ZWICK,M.E等: ""Glucan 1,4-alpha-maltohexaosidase[Bacilllus cereus Rock4-2]"", 《GENBANK DATABASE》 *
严自正等: ""麦芽四糖淀粉酶产生菌的筛选与发酵条件的研究"", 《生物工程学报》 *
曾静等: ""极端嗜热α-淀粉酶ApkA的高温"", 《生物技术通报》 *
薛蓓等: ""地衣芽孢杆菌Geobacillus sp.GXS1α-淀粉酶的饱和突变及酶学性质研究"", 《生物技术通报》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023225459A2 (en) 2022-05-14 2023-11-23 Novozymes A/S Compositions and methods for preventing, treating, supressing and/or eliminating phytopathogenic infestations and infections

Also Published As

Publication number Publication date
CN113151327B (zh) 2022-11-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3323886B1 (en) Endos mutant enzyme
CN110862979B (zh) 碱性蛋白酶的突变体及其应用
CN110923221B (zh) 一种来源于地衣芽孢杆菌的碱性蛋白酶高温突变体
CN110923222B (zh) 一种新型的来源于地衣芽孢杆菌的碱性蛋白酶酸性突变体
CN113151327B (zh) 一种蜡样芽胞杆菌高产麦芽五糖α-淀粉酶的突变体及其应用
CN114015708B (zh) 一种深海细菌来源的α-葡萄糖苷酶QsGH13及其编码基因与应用
CN110951803A (zh) 组合利用特异性琼胶酶制备高纯度新琼二糖的方法及应用
CN115975989B (zh) 一种制备玉米抗性淀粉的iii型普鲁兰水解酶突变体及其制备方法和应用
CN105647888B (zh) 内切几丁质酶及其编码基因和在生产几丁二糖中的应用
CN114457057B (zh) 一种壳聚糖酶突变体及其应用
CN114934035B (zh) 一种淀粉降解能力提高的嗜热酸性iii型普鲁兰水解酶突变体及其制备方法和应用
CN114807099B (zh) 普鲁兰酶突变体、工程菌及其应用
CN112342208B (zh) 一种普鲁兰酶突变体
CN113817709B (zh) 碳水化合物结合结构域cbm68及其应用
CN111154788B (zh) 一种海洋雪白链霉菌壳聚糖酶基因及其应用
CN114836406A (zh) 一种催化活力提高的琼胶酶突变体及其应用
CN110951716B (zh) 一种外切型褐藻胶裂解酶VsAly7D及其重组菌株和应用
CN110564748B (zh) 一种茯苓纤维素内切酶基因及其表达载体和蛋白
CN114277043A (zh) 一种耐热甘露糖苷酶基因及其表达蛋白和应用
CN109251923B (zh) 丝氨酸消旋酶突变体
CN108034649B (zh) 一种葡萄糖异构酶突变体及其应用
CN108251406B (zh) L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶及其在催化合成稀有糖d-阿洛酮糖中的应用
CN110656054A (zh) 一种胞外分泌褐藻胶裂解酶的重组里氏木霉菌及其应用
LU503704B1 (en) Type iii pullulan hydrolase mutant for preparing corn resistant starch, preparation method and application thereof
CN114752581B (zh) 一种α-半乳糖苷酶突变体及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant