CN113151257A

CN113151257A - 革利虱蝇线粒体全基因组序列的扩增引物及方法

Info

Publication number: CN113151257A
Application number: CN202110254677.8A
Authority: CN
Inventors: 孟凡明; 刘子超; 吴翔; 蒋立平; 杨帆
Original assignee: Central South University
Current assignee: Central South University
Priority date: 2021-03-09
Filing date: 2021-03-09
Publication date: 2021-07-23
Anticipated expiration: 2041-03-09
Also published as: CN113151257B

Abstract

本发明公开了一种革利虱蝇线粒体全基因组序列的扩增引物及其扩增方法，通过SEQ ID NO.1‑20所示的10对特异性引物对革利虱蝇基因组进行PCR扩增，扩增产物电泳后进行测序及序列拼接，获得虱蝇线粒体全基因组序列，可为川藏地区野生动物携带病虫害的防治，以及野生动物健康状况监测工作提供物质基础。

Description

革利虱蝇线粒体全基因组序列的扩增引物及方法

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种虱蝇线粒体全基因组序列的扩增引物及其扩增方法。

背景技术

革利虱蝇Lipoptena grahami,属于双翅目(Diptera)，虱蝇科(Hippoboscidae),利虱蝇属Lipoptena。利虱蝇属为广泛分布的专性吸血性昆虫，成虫寄生在鹿、羚牛、羊、马等大型有蹄类动物体表，吸食宿主血液，其体内由于携带有传染性病菌，可传播蜱蝇锥虫、伯氏疏螺旋体、蓝舌病病毒、巴尔通体等多种病菌，导致宿主严重感染甚至死亡。寄生在绵羊体表的虱蝇还可引起宿主体重下降、羊毛产量以及皮毛品质下降，给畜牧业带来严重经济损失。已有研究报道该物种在缺少天然宿主情况下，亦可吸食人类血液，为潜在的卫生防疫害虫。

革利虱蝇于1942年首次发现于中国四川地区，此后再无相关记录和报道，且一直未发现和记录其宿主为何种动物。本发明专利中涉及的革利虱蝇采集自西藏地区，并明确其宿主为林麝，在宿主体表营吸血生活，因此该物种对于川藏地区野生动物携带病虫害的防治，以及野生动物健康状况监测工作具有一定价值。国内外关于虱蝇的研究十分有限，仅有零星常见种类报道，而采用分子生物学技术对虱蝇的研究不多，目前该科类群中仅有一个种类有完整的线粒体基因组公布，关于该类群线粒体基因组全序列获得方法尚未见报道。鉴于目前虱蝇遗传学尤其是线粒体基因组方面的信息量十分有限,开展其线粒体基因组全序列的研究显得十分必要。

目前扩增线粒体基因组全序列的方法大多采用引物步移法，通过对公共数据库中近缘物种线粒体基因组中保守区设计引物，对目标区域扩增序列并测序,对测序得到的序列再继续设计引物进行扩增测序，重复这一步骤直到测序得到的全部序列经拼接后获得完整线粒体基因组序列位置。以往的引物扩增反应后产物长度较短(400-500bp)，按照线粒体基因组大小15000bp计算，需要设计30对以上的引物来完成全部片段的扩增和有效拼接，费时费力，且反复扩增测序导致错误率升高，影响测序后的拼接结果和注释准确性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种革利虱蝇线粒体全基因组序列的扩增引物，通过10对经过反复筛选的特异性引物对革利虱蝇基因组进行PCR扩增获得革利虱蝇线粒体全基因组序列，可为川藏地区野生动物携带病虫害的防治，以及野生动物健康状况监测工作提供研究基础。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种革利虱蝇线粒体全基因组序列的扩增引物，包括10对引物对，具体序列信息如下所示：

(1)第1对上游引物为：SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列(GTATCAAAAACTTTTGTGCATCA)，下游引物为：SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列(TAGTCAATTTCCAAATCCACCAAT)；

(2)第2对上游引物为：SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列(CTACTCCTTTAGAATTGCAGTCT)，下游引物为：SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列(CTATAAAGTGATTTAAGAGACCA)；

(3)第3对上游引物为：SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列(CAATGTTCAGAAATTTGTGG)，下游引物为：SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列(GCTCATGTAATAGTAATTCC)；

(4)第4对上游引物为：SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列(TTACAATTTATCAATGATGACG)，下游引物为：SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列(TGAAGATATTAAGGTGATTGAT)；

(5)第5对上游引物为：SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列(CTTTTAATGGATAAACTCC)，下游引物为：SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列(GCATTAGTTCATTCTTCAAC)；

(6)第6对上游引物为：SEQ ID NO.11所示的核苷酸序列(TGACTCAAAGTTGATAAAGC)，下游引物为：SEQ ID NO.12所示的核苷酸序列(GGTGGTTATGGTATGTTACG)；

(7)第7对上游引物为：SEQ ID NO.13所示的核苷酸序列(GAACATAAACCATGAGCAAT)，下游引物为：SEQ ID NO.14所示的核苷酸序列(GATTTACAAGACCAATGTTTTAG)；

(8)第8对上游引物为：SEQ ID NO.15所示的核苷酸序列(CAAAGAACCCTCACAAACTC)，下游引物为：SEQ ID NO.16所示的核苷酸序列(GCAAATCCTCCTCAAATTCA)；

(9)第9对上游引物为：SEQ ID NO.17所示的核苷酸序列(TACGGATGACTACTTCGAAC)，下游引物为：SEQ ID NO.18所示的核苷酸序列(CTATTTTGGCAGATTAGTG)；

(10)第10对上游引物为：SEQ ID NO.19所示的核苷酸序列(GTCAAAAAAGCAACTCTTAC)，下游引物为：SEQ ID NO.20所示的核苷酸序列(GATACAGAAATTATAGATCC)。

本发明还公开了一种试剂盒，所述试剂盒用于扩增虱蝇线粒体全基因组序列，所述试剂盒包括权利要求1所述的扩增引物。

如上述的革利虱蝇线粒体全基因组序列的扩增方法，以提取的革利虱蝇基因组DNA为模板，用上述的10对扩增引物进行PCR扩增，PCR产物经1.0％琼脂糖电泳检测后送生物公司测序。

作为优选，所述PCR的反应体系为50应体，其中：60ng DNA模板、0.2-1.0NA生引物、8物、-1.0NA生dNTP、5NTP1.0NA生物公司测序。扩、2.0mM MgCl₂、0.5M MTaq酶，余量为无核酸酶水。

作为优选，所述PCR扩增条件为：94℃预变性2min，然后94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸60s，共35个循环，最后72℃延伸10min。

上述的革利虱蝇线粒体全基因组序列的扩增引物扩增获得的革利虱蝇线粒体全基因组序列或者上述方法获得的革利虱蝇线粒体基因组全序列，革利虱蝇线粒体全基因组序列见SEQ ID NO.21所示的核苷酸序列。

上述的革利虱蝇线粒体全基因组序列的扩增引物扩增获得的革利虱蝇线粒体全基因组序列或者上述方法获得的革利虱蝇线粒体基因组全序列，该线粒体基因组长度为16053bp，全基因组序列包含2个核糖体RNA基因，13个不含内含子的蛋白编码基因，22个转运RNA基因和2个非编码区即控制区和轻链复制起始区。

本发明的有益效果是：

1、本发明针对西藏地区的革利虱蝇设计了10对特异性引物可以对革利虱蝇线粒体DNA进行PCR扩增，并获得线粒体全长基因。本发明的扩增体系可以用更少的引物来完成目的片段的全覆盖，减少了扩增工作量，同时也降低了多次扩增反应造成的扩增错误的概率；

2、革利虱蝇基因组目前可用的参考基因组非常少，扩增方法中每一对引物的反应条件都会有所不同，目前没有同类群或近缘类群物种的扩增引物组合报道，因此，本项目对于虱蝇类群线粒体基因组的获得有重要意义，可为川藏地区野生动物携带病虫害的防治，以及野生动物健康状况监测工作提供研究基础；

3.本发明中设计的特异性引物，经反复验证可通过10对引物完成全部序列的测序，测序产物长度范围1200-4800bp，具有扩增片段长、高保真性等特点，采用该方法对虱蝇类线粒体基因组进行扩增国内尚属首次，扩增体系的特异性和简化性明显优于同类。

附图说明

图1表示革利虱蝇特异性引物筛选结果；

图2表示革利虱蝇10对特异性引物的电泳图。

具体实施方式

下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。

本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。

实施例

1、材料与方法

1.1实验材料获取

革利虱蝇标本采自西藏昌都地区，活体样本采集后立即用无水乙醇浸泡，-20℃保存备用。

1.2DNA提取

采用组织细胞基因组DNA快速提取试剂盒(北京艾德莱生物科技有限公司)，对革利虱蝇标本的胸部肌肉组织的DNA进行提取，提取完成后，将基因组进行凝胶电泳，检测其质量合格后进行后续实验。

具体操作步骤如下：

1.2.1、将需要提取的样品剪碎，或者在液氮中研磨组织成细粉后，转入装有180μL组织裂解液TL的1.5mL离心管中，用大口径枪头吹打混匀；再加入20μL的蛋白酶K(20mg/mL)，立刻涡旋振荡充分混匀。

1.2.2、将1.2.1的裂解物放置在55℃水浴3小时或者直到组织消化完全，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。

1.2.3、加20μL RNase A(25mg/ml)溶液，振荡混匀，室温放置5-10分钟；再加入200μL结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀，70℃放置10分钟。

1.2.4、冷却后加入100μL异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀；用1mL的枪头吸取混合物，将混合物加入一个吸附柱AC中，(将吸附柱放入收集管中)，13000rpm离心60秒，倒掉收集管中的废液。

1.2.5、加入500μL抑制物去除液IR，12000rpm离心30秒，弃废液；再加入600μL漂洗液WB，12000rpm离心30秒，弃废液；重复数次

1.2.6、将吸附柱AC放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留的乙醇抑制下游反应。

1.2.7、取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好)，室温放置3-5分钟，12000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12000rpm离心1分钟。

1.3引物设计与PCR扩增

1.3.1引物设计

根据GenBank收录的革利虱蝇近源物种线粒体基因组特定区域信息设计特异性引物，特异性引物由长沙市墨比迪科生物科技有限公司合成，共24对，引物特性、目标扩增区域、预测扩增长度见下表

表1引物特性、目标扩增区域、预测扩增长度

1.3.2 PCR扩增

本实验中涉及长片段扩增，为保证扩增保真度及长度，在体系中使用长片段Taq酶(LA-PCR Taq polymerase)进行扩增。

PCR的反应体系为50应体，其中：60ng DNA模板、0.2-1.0NAs引物、8物、-1.0NAsdNTP、5NTP1.0NAse证扩增保真度、2.0mM MgCl₂、0.5M MTaq酶，余量为无核酸酶水。

PCR扩增条件为：94℃预变性2min，然后经94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸，共35个循环，最后72℃延伸10min。

PCR产物电泳检测：称量1g琼脂糖加入500mL1xTAE缓冲液的锥形瓶中，微波炉加热至琼脂粉完全溶解且无泡沫,冷却至50-60℃左右加入7核酸染料Gelview,轻轻摇匀避免产生气泡。待冷却至不烫手时将胶缓缓倒入胶槽内,待琼脂糖凝胶完全凝固后:竖直拔掉梳子,将5uL虱蝇DNA样本与1uL 6xDNA loading buffer混合后依次上样，最后点上6uLDL2000Marker后开始电泳。电泳电压设定为120V，电流300mA，时间30min。电泳完毕在凝胶成像系统照相，通过调节光圈和曝光时间,选择合适的滤光片,得到成像清晰、背景较低的照片。

1.4序列测定与拼接

1.4.1序列测定

将上一步电泳检测条带大小符合预期、带型单一的产物送公司测序，测序引物为片段扩增引物，双向测通，最终确定针对基因组中特定序列能够获得稳定扩增产物且条带清晰的引物共10对，引物特征如下

1.4.2序列拼接与分析

测序所得各片段直接运用Geneious R11软件进行拼接和基因注释，NCBI在线多序列比对。

2.结果

结果如表2和图1和图2所示。

表2引物扩增结果

事实上，设计得到的引物有高达数百对。根据经验，从中优选出24对引物，但即便经过数次筛选，结果发现，也并非所筛选的24对的引物都能稳定扩增产物且获得条带清晰的电泳结果。经过多次筛选和实验，最终确定针对基因组中特定序列能够获得稳定扩增产物且条带清晰的引物共10对。通过10对引物扩增，得到的电泳图如图2，说明仅需要这10对，就可以将革利虱蝇线粒体全基因组序列扩增出来，扩增片段长、保真性高、特异性强、简化性优。

经Geneious R11软件分析可知，革利虱蝇线粒体全基因组序列见SEQ ID NO.21所示的核苷酸序列。该线粒体基因组长度为16053bp，全基因组序列包含2个核糖体RNA基因，13个不含内含子的蛋白编码基因，22个转运RNA基因和2个非编码区即控制区和轻链复制起始区。

以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明做任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下，还有其他的变体和改型。

SEQUENCE LISTING

<110> 中南大学

<120> 革利虱蝇线粒体全基因组序列的扩增引物及方法

<130> 1

<160> 49

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 1

gtatcaaaaa cttttgtgca tca 23

<210> 2

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 2

tagtcaattt ccaaatccac caat 24

<210> 3

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 3

gctattgggt tcatacccca cttat 25

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 4

tggaaaggct atatcagggg c 21

<210> 5

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 5

cgatctgaat taggacatcc agg 23

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 6

tcgtccaggt gttgcatcta 20

<210> 7

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 7

ggacatccag gttcattaat tggt 24

<210> 8

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 8

tcgtccaggt gttgcatcta t 21

<210> 9

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 9

acacctggac gattaaatca aact 24

<210> 10

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 10

ttgaatcagc aattgtgaaa gga 23

<210> 11

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 11

ctactccttt agaattgcag tct 23

<210> 12

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 12

ctataaagtg atttaagaga cca 23

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 13

caatgttcag aaatttgtgg 20

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 14

gctcatgtaa tagtaattcc 20

<210> 15

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 15

ttacaattta tcaatgatga cg 22

<210> 16

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 16

tgaagatatt aaggtgattg at 22

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 17

tccaaggact tcatactcaa 20

<210> 18

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 18

gttcaatgtg atttttacca t 21

<210> 19

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 19

acccagacat aaaaggtatc cca 23

<210> 20

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 20

ttcttacagt cagcatggta aaa 23

<210> 21

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 21

cttttaatgg ataaactcc 19

<210> 22

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 22

gcattagttc attcttcaac 20

<210> 23

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 23

cccagacata aaaggtatcc cac 23

<210> 24

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 24

tttcttacag tcagcatggt aaa 23

<210> 25

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 25

tgactcaaag ttgataaagc 20

<210> 26

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 26

ggtggttatg gtatgttacg 20

<210> 27

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 27

accatgctga ctgtaagaaa a 21

<210> 28

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 28

tgagggttct ttgggaattt ca 22

<210> 29

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 29

gaacataaac catgagcaat 20

<210> 30

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 30

gatttacaag accaatgttt tag 23

<210> 31

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 31

caaagaaccc tcacaaactc 20

<210> 32

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 32

gcaaatcctc ctcaaattca 20

<210> 33

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 33

ccagaagaac ataaaccatg agca 24

<210> 34

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 34

gtgagggttc tttgggaatt tca 23

<210> 35

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 35

tccagaagaa cataaaccat gagc 24

<210> 36

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 36

tgagggttct ttgggaattt ca 22

<210> 37

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 37

tgaaattccc aaagaaccct cac 23

<210> 38

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 38

gctccatttg catgtaaagt tcg 23

<210> 39

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 39

tgaaattccc aaagaaccct ca 22

<210> 40

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 40

agttcgaagt agtcatccgt 20

<210> 41

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 41

aaaggtcctc ttcgcccaat 20

<210> 42

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 42

aaccggtgta agccaggttg 20

<210> 43

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 43

tacggatgac tacttcgaac 20

<210> 44

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 44

ctattttggc agattagtg 19

<210> 45

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 45

tccaacatcg aggtcgcaat 20

<210> 46

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 46

actcatctat gagctgagca a 21

<210> 47

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 47

gtcaaaaaag caactcttac 20

<210> 48

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 48

gatacagaaa ttatagatcc 20

<210> 49

<211> 16953

<212> DNA

<213> 人工合成

<400> 49

aatgaattgc ctgattaaag gattaccttg atagggtaaa taatgtaaaa tatacattca 60

ttatatttaa tagaattaaa ctatttctaa aagtatcaaa aacttttgtg catcatacac 120

taaaatataa aaagataagc taataaagct attgggttca taccccactt ataaaggtta 180

aatccttttc tttttaattt ttaataattc atcaaaaatt atatttataa ttattttaat 240

aataggatct ataatttctg tatcagctaa ttcttgatta agagcatgaa taggtttaga 300

aattaattta ttgtctttta tccccctaat aagagataat aaattaatat ctactgaatc 360

atcattaaaa tatttcttaa ttcaagcatt agcttctaca gtattattat tttcagtaat 420

ttctatatat ataaatataa ataaattttt taataattat tataatgaaa taataattat 480

ttcttccctt ttaataaaaa taggatcagc tccttttcat ttttgatttc ctaatattat 540

agaaggatta tcatgattta atgttataat tttaataact tgacaaaaaa ttgctccact 600

aatattaatt tcttatttta aaatagaaat aattatatta atttcaatta ttttatcatc 660

attaattgga gctttaggag gattaaatca agtatctctt cgaaaattaa tagcttactc 720

atcaattaat catttaagat gaatattaat aagaattttt aataacagta atatttgaat 780

aatatatttt ttaatttatt cattattaat ttctattatt gtaataatat ttaatttatt 840

taaaatttca tatattaatc aaataaattt tatattttta aattcaaaat taataaaatt 900

ttttattttt ttaaatttat tatcattagg aggattacct ccatttttag gattttttcc 960

taaatgatta attattcaag aaatattaat gaataatcaa attttgttaa cacttataat 1020

aattttatca actttagttt tactatttta ttatattcga atttgttata gaactttttt 1080

attaaattat tatgaaatta attgaataaa aatttcattt tataaaaatt attgaaatta 1140

cttattgatt aattcaataa tttctttaat aggattattt ataatttctt caatatattt 1200

ctttttatag tttaaggctt taagttaatt aaaactaata tccttcaaag ctataaatat 1260

aagaaagtct tttaagcctt agtataccta ctcctttaga attgcagtct aatatcatta 1320

attgactata aagctattga ttaaaaagaa attaatctta taaataaatt tacaatctat 1380

tgcctatatt cagccattta atcgaaacaa tgattatttt caactaatca taaagatatt 1440

ggcacattat atttcatttt tggagcttga tcaggaataa ttggaacatc attaagtatt 1500

ttaattcgat ctgaattagg acatccaggt tcattaattg gtaatgatca aatttataat 1560

gtaattgtta cagctcatgc ttttattata atttttttta tagtaatacc tacagttatt 1620

ggtggatttg gaaattgact agtaccccta atactaggag cccctgatat agcctttcca 1680

cgaataaata atataagatt ctgattactt ccaccagctt taactttact gctcataaga 1740

agaataacag aaaatggggc tggtactggt tgaacagttt acccaccact ttcatcaact 1800

attgctcata gaggagcatc agttgattta gcaatttttt cacttcattt agcaggaatc 1860

tcatcaattt taggagcagt taacttcatt acaacaatta ttaatatacg atcatcagga 1920

atatcatttg atcgaatgcc cctatttgtg tgatcagtaa taattacagc tattttatta 1980

ttattatcat tacctgtatt agcaggagct attactatac tactaactga tcgaaattta 2040

aatacctcat tttttgatcc agcaggagga ggagatccaa ttctttatca acatttattt 2100

tgattttttg gacatcctga agtttatatt ttaattttac caggatttgg cataatttct 2160

catattatta gtcaagaatc tggaaaaaaa gaaacttttg gatctttagg aataatttat 2220

gcaatattag caattggact tttaggattt attgtctgag ctcatcatat atttacaatt 2280

ggaatagatg ttgatacacg agcttatttt acatcagcaa ctataattat tgctgtacca 2340

acaggaatta aaatttttag atgattagct actctccatg gaactcaatt aacttattct 2400

ccagctatta tatgagcttt aggatttatt tttttattta cagttggagg attaacagga 2460

gtaattttag caaattcatc aattgatatt attttacatg atacttatta tgttgtagca 2520

cattttcatt atgttttatc tataggagct gtatttgcaa ttataagagg atttattcat 2580

tgatacccat tatttacagg attaacctta aatgaatttc atttaaaatc tcaatttata 2640

attatattta ttggggtaaa tttaacattt tttcctcaac atttcttagg attatcagga 2700

ataccacgac gatattcaga ttatcctgat gcttatacta catgaaatgt aatttcaact 2760

ataggatcaa caatttcttt tttaagaatt atttatttct tttttattat ttgagaaaga 2820

attattacta aacgaatagt aatattttca attcaattaa attcatctat tgaatgattt 2880

caaaataccc caccaactga acatagatac tctgaacttc cattattaac taatttctaa 2940

tatggcagat tagtgcaatg gatttaagct tcatatataa agaattttct tttattagaa 3000

ataaatggca acatgatcaa atttaaattt acaaaataga gcttctcctc ttatagaaca 3060

attaatcttt tttcatgatc atactttaat aattctagtt ataattacaa ctttagtagg 3120

atatttaata tttatattat tttttaataa atttattaat cgatatcttt tacatggaca 3180

aataattgaa attatttgaa caattattcc agctattatt ttattattta ttgctatacc 3240

atcattacgt ttactatact tattagatga aattaatgaa ccaataatta ctattaaatc 3300

aattggtcat caatgatact gaaaatatga atattcagat tttaaaaata ttgaatttga 3360

ttcatatata atcccaatta atgaattacc aaataatgga tttcgattat tagatgttga 3420

taatcgtgta attattccaa taaatactca aattcgagta ttagtaactg cagctgatgt 3480

aattcattca tgaacaattc catcgttagg aattaaaata gatgcaacac ctggacgatt 3540

aaatcaaact aattttttaa taaatcgacc aggattattt tttgggcaat gttcagaaat 3600

ttgtggaact aatcattcat ttataccaat cgtaattgaa agaattacta ataaatattt 3660

cattaaatga attaattcaa ataattcatt agatgactga aagcaagtat tggtctctta 3720

aatcacttta tagtaaatta gcaattactt ctaatgaaaa aattagttaa aaaataacat 3780

tagtttgtca aactaaaatt attaattatt aatatttttt aattccacaa atagcaccaa 3840

ttaaatgatt aagtttattt attatatttt taataatttt tttaattttt aatataataa 3900

atttttttaa ttataattta ataattccta aatctaaaat taattttaat ataaaatcaa 3960

taatttgaaa atgataacta atttattttc agtatttgac ccttcatcaa gaatttttaa 4020

tctatcatta aattgattaa gaaccataat aggaatttta attattccac caatattctg 4080

aattattcct tcacgaatta attatttatg aaatactatc tcaatttcat tacataaaga 4140

atttaaaata ttactaggaa ataaaaattc aaatggatca acaataatat ttatctcttt 4200

attttttata atttttttta ataattttat aggattattc ccttatattt ttactagaac 4260

aagacattta acatttacct tatccctagc tcttccatta tgattaacat tcatattatt 4320

tggatgaatt aataatactc aacatatatt tatacattta gttccacaag gaacccctcc 4380

aattttaata ccttttatag tatgcattga atcaattaga aatattattc gaccaggaac 4440

attagcaatt cgattaacag ctaatataat tgcaggtcat ttattattaa cacttttagg 4500

aaataatgga tcatcaataa atatttttct tttaaacatt ttaattatta cacaaatagc 4560

cttacttact ttagaaagag cagtagctat tattcaatca tatgtatttt ctgtattaag 4620

aacattatac tctagagaag ttaactaatg aaaacacatt ctaatcatcc atttcattta 4680

gttgattaca gaccatgacc attaatagct tcaattggag ctataacttt agtttctggc 4740

ttagtaaaat gatttcatta ttttgaacta aatttattca tcctaggaaa tctaattata 4800

gtaattacaa tttatcaatg atgacgagat gtaacacgag aaagaacatt ccaaggactt 4860

catactcaaa tagtaattaa tggattacaa tatggaataa ttttatttat tatttctgaa 4920

attatatttt ttacctcatt cttttgagct ttttttcata gaagattatc tccttcaatt 4980

gaattaggat ctatatgacc accaaaagga attattacct ttaatccttt ccaaattcca 5040

ttattaaata cgataatttt attatcatca ggaattacta ttacatgagc tcatcataga 5100

attataagaa ataaccactc acaaataact caaggtttat tttttacagt attattagga 5160

atttactttt caatattaca agcatatgaa tatatagaag ctcctttcac aattgctgat 5220

tcaatttatg gatcaacttt tttcatggct actggatttc atggaattca cgttattatt 5280

ggaacaatat ttttatttat ctgtctaatt cgacatataa attatcattt ttcaaaaaat 5340

catcattttg gattcgaagc tgcagcctga tattgacatt ttgttgatgt agtatgatta 5400

tttctttata tttcaattta ttgatgagga agatatctat atagtatata agtatatttg 5460

acttccaatc ataaggtcta aaaattagta tagataattc actcaatcac tataattagt 5520

tgtttattaa ttattatttc tataattata atattaattt cttcattact atcaaaaaaa 5580

tctattatag atcgagaaaa aagttcacct tttgaatgtg gatttgaccc aaaatcatct 5640

tctcgaatac ctttttcttt acgatttttt cttattacaa ttattttttt aatttttgat 5700

gtagaaattg ctttattact accaattata ataatttata aaatatcaaa tttaataact 5760

tgaataatta catcaatttt atttattata attctattaa ttggattata tcatgaatga 5820

aatcaaggaa tactaaattg aacaaaataa agggttgtag ttaattataa catttgattt 5880

gcaatcaaaa agtattgatt tcaatctacc ttgaatatga agtgatttat tacaattagt 5940

ttcgacctaa atttaggtat taataccctt attctttaat tgaagccaaa aagaggcata 6000

ttattgttaa taatataatt gaaattattt tccaattaaa gaaatattaa taaaaaagct 6060

tctaactttt ttacttttaa tggataaact ccatttatat ttctatttat atagtttaaa 6120

aaaaacatta cattttcact gtaataataa atatctaatt ttataaatta cttaaataaa 6180

ttcattaatt attcaaagat aatcaatcac cttaatatct tcaatattaa actcttctta 6240

agctatttga ataatttaaa aatattaata atattaatat aacaattcaa acaataaatc 6300

ttaatataaa taattttaat gaattatttt gtattaattg atttaatttt ctaagattaa 6360

ttaaatttaa atacaaataa ttagccccaa aatattcaga ccaaccttga tcaactattt 6420

tataaactaa ctttccaatt attattggaa aaaaaataat tccataagta ttaatatatg 6480

gtaaaaatca cattgaacct aaaaaaaaac taaatttata aaaatttaaa gctttattat 6540

tataataaaa agaaatattt gataatatta atccaaaaat taatcctaat aaacaaataa 6600

ttaaaattga aatttttata aataaaggta aaataattac atttacctta aaaaataata 6660

atcaatttaa tattcttcca ccaaaaattc taaataatat taatactaat attcttttta 6720

atataactca accttcatca tttaataaat ttaatgaaaa taaattataa tctcctaata 6780

tagtataaaa tactaaacga aatgaataac atacagttaa accagtagaa aaaaaaaata 6840

aaaatataat taataaatta actgaatcta ttatcactat ttctaaaatc aaatcttttg 6900

aataaaaccc agacataaaa ggtatcccac ataaagataa attagcaata ttaaaacaag 6960

atgaagttat tggtatcata actcttaatc tccctattat acgaatatct tgacaatttc 7020

ccaaattatg aataattgac cctgcacata taaataataa agctttaaat aaagcatgag 7080

ttaatatatg aaaataggct aatttataaa atcctaatga taaaattctt attattaacc 7140

ccaattgact caaagttgat aaagcaataa ttttttttaa atcaaattca aaattagctc 7200

ctaatccagc cataaatata gttaatcttg aaataattaa taataatctt gatcaattat 7260

ctaataataa attaaaacga attaataaat aaaccccagc agtaactaaa gttgaagaat 7320

gaactaatgc agatactggt gtaggagctg ctattgcagc aggtaatcaa gaagaaaaag 7380

gaatttgtgc tctcttagtt aatctagcta aaataactaa aataccaatc aattttatct 7440

cattacaatt ttttatatta tctaaataaa aaatataatt tcatcttcca aaatttaata 7500

ttcaagaaat agctaataat aatattacat ctccaattcg attagatata gcagttaata 7560

taccagcatt aaatctttta atattttgaa aatagactac taaacaataa gaaaccaaac 7620

ccaatccatc tcaacctaat aaaattctaa ttaaatttgg actaacaatt aataatatta 7680

ttgacaaaac aaatattaac actaatataa taaatcgatt aatatttata tctctaacta 7740

tatattctat tctataataa atgactaaac aagaaattaa taaaacaaaa gatataaaaa 7800

ttaatcttat tcaatcaaat aaaaaggtta taactactct tatcctattt aaagaaatta 7860

attctcattc aataaaaata acataattat agaaaattat ataaattcct aataaaaaac 7920

atactattct aaaaaatatt aaagtaaaaa atcaaattaa acatattggt aaacttaaaa 7980

taatttaaaa agaaataatc ttatcattga ttccacaaat caacattttt aataaactat 8040

ttaaattata atcataatat acaaatttca ctttttataa tcaaaaaatt taaaggaaat 8100

caatgtaata ataataaatg aaattctcga atttttcctc ttctaaaagt attcattctc 8160

ataaatattt taccatgctg actgtaagaa aataaatata atgaataagc tgcactaaaa 8220

aaacatataa atcctaatat aaatattctc aatcatgatc atataacaat tctattaatc 8280

aaactaatct cacctaataa atttaatctt ggaggagcag atatattaga tgaacataat 8340

aaaaatcatc acaatcttat tgaaggtata aaatttaata ttcctttatt aattaataaa 8400

cttcgactta ttgttcgttc ataaataata tttactaaac aaaataatcc agaagaacat 8460

aaaccatgag caattattaa taaataagaa ccacataatc caatatatct tatagttagt 8520

aatccaacca aaacaattcc tatatgagat actgatgaat aagccactaa agatttcaaa 8580

tcagtttgac gtaaacacat caatctaact aaaactccac caaccaatct aattctaatt 8640

caaattaaat taaacttaac tccaaaattt tgtataaaat aaaaaattcg taacatacca 8700

taaccaccta actttaatat aattccagcc aaaattattg aaccagatac aggtgcttca 8760

acatgagctt ttggtaatca taaatgtaat aaaaacatag gtatttttac caaaaatgct 8820

attaataaac aaaaatataa aatttcataa ttaattatat taaatcttaa taaataaaaa 8880

tctataaatc ctataaattt gtataaataa aaaattcctc ctaatatagg taaagaaact 8940

aataaagtat aaaataataa ataaattcca gcttgcaaac gttcaggttg ataacctcat 9000

cccaaaatta aaaataatgt aggaattaat cttctttcaa aaaataaata aaatataaac 9060

aaatttatac taaaaaaagt taaagataat aatattaata ataataaaac attaataata 9120

aaaaatattt tatagctatt aaaattaata atcttttctc tagctataat tattaaacta 9180

ataattcaaa tagataataa aaccaatcca tatgaaatta aatcacctcc aaaattataa 9240

gaaatcttaa tataataatc attatatata tttataataa ttattaaaaa ccctaatatg 9300

aataaaaaat tttgaaccat tcaacatata tttataaata aacatatagg tataataaat 9360

acaattccta ttaaatatat tatcattaaa taatattaaa tctttgaaaa taatcatttc 9420

catgagttcg aattattgaa actaaaattg aaattcccaa agaaccctca caaactctaa 9480

aagtcaaaaa taatattgta aaatataatt caaaatctat aaaccttaaa tatatatata 9540

aatataaaaa taaccttaaa acaatatatt ctaaacttaa caatattgat aataaatgtt 9600

tacgattaga aataaaaact aaaattccta taataaacaa aattattgaa aaattaaata 9660

taaaaatatt catttgtttt aatagtttaa ctaaaacatt ggtcttgtaa atcaaaaata 9720

agaaaaaatc ttttaaaact ttcaagaaaa aaaataaatt ttatcattaa tctccaaaat 9780

taatatttta aattaaacta tttcttgtat ttttcaatga attctactca tatttattct 9840

atatttaaac ttaattttta tatttacaat acatcctcta gctataggtt taattttact 9900

tatacaaact acattaattt caataattac aggattaata acctactcat tttgattttc 9960

atatattctt tttattgtat ttctaggagg aataatagta ttattcatct atattacatc 10020

tctagcatct aatgaaatat tctccttttc aataaaatta tttattatat caattatatt 10080

catattcact tttataatta ttatatctat atttgacaaa aatacaatta taataattat 10140

aaattcagaa actaaaaatt tttataatga acattcattt attaaagaaa ataatttatt 10200

actccataaa atatataatt atccaattaa tataattact attattttaa taaactattt 10260

attaattaca ttaattgcaa ttgtaaaaat tactaaacta tcaaaaggtc ctcttcgccc 10320

aatatttaac taatgaataa acctatacga ataaaacatc caatcttaaa aattacaaat 10380

aattcactta ttgatttacc aacccctatt aatatttctt catgatgaaa ttttggatct 10440

ttattaggat tatgtttaat aattcaaatt atatcaggat tatttctagc aatacattat 10500

actgccgata ttacaatagc atttaataga atcattcata tttgccgaga tgtaaattac 10560

ggatgactac ttcgaacttt acatgcaaat ggagcatcat ttttctttat ttgtatttat 10620

tttcatattg gacgaggcat atattatgga tcatatatat atacttcaac ctgattaatt 10680

ggaactataa tcttattctt attaatagca acagctttta taggatatgt attaccttga 10740

gggcaaatat ctttttgagg agctactgta attactaatt tattatcagc aattccatac 10800

ctaggaaata ccttagttca atgaatttga ggaggatttg ctattgataa tgcaacttta 10860

actcgattct ttacatttca ttttatttta ccatttatta ttttagctat aacaataatt 10920

catttaatat ttctacatga aacaggatca aataacccaa ttggattaaa ctctaatatt 10980

gacaaaattc ctttccatcc atactttaca tataaggata ttactggatt tattatttta 11040

ctaattatat tactaatatt aacaataatt aacccataca tattaagaga tccagacaac 11100

tttattccag caaatccatt agtaactcct ccacatattc aaccagaatg atatttttta 11160

tttgcttatg caattctacg atcaattcct aataaattag gaggagttat tgcattaatt 11220

ctatcaattg caattttaat aatcttacca ttttttcatc taagaaaaat tcgaggaatt 11280

caattttatc caattaataa aataatattt tgatctttaa tttccattat tatgttatta 11340

acttgaattg gagcacaacc tgttgaaaat ccatacgtaa taactggaca attattaaca 11400

attatatatt tctcatatta tattatattc ccatttattt ctaaatgatg agataatata 11460

attaattagt taatgagctt gaataagcat atgtcttgaa atcataatat agaaaataat 11520

ttttctatta actttactaa aataaattaa ctaaatataa ttaattaata taattttata 11580

tccaataatt aaaactaaat aatttaatga aaaaggtaaa aatctttttc aagctaaata 11640

cattaattta tcataacgaa atcgaggaaa agttccacga attcaaataa atataaatct 11700

aataaaagtt aacttaatat aaaatataaa agaaaaaata tcacctccta aaaatattaa 11760

tctaaaaatt attcttataa ataaaattct tgaatactca gctaaaaaaa ttaaagcaaa 11820

tcctcctctt ctatattcaa cattaaaccc agaaactaat tcagactcac cttcagcaaa 11880

atcaaaaggt gtacgatttg tttcagctaa tataattcta aatcaaacta atctcaaagg 11940

aaatgaaaaa aaaataaatc aaatatatat ttgatattta taaaatataa ttaaattata 12000

tctatcaatt aaaaaaataa aactcatcaa aattaatgct aatctaactt cataagaaat 12060

agtttgagca acagcacgta atccacctaa taatgcataa attgaatttg aagatcaacc 12120

agcaattatt acactatata cacctaatct tatacaagat aataaaaata atatacctaa 12180

attaaatgaa tataatttta caaaaattgg tatacatatt cataatatta aagataaaaa 12240

taatgaaaaa ataggagaaa aataatatat aatataattt gataataaag gataagattg 12300

ttctttagta aataatttaa tagcatcact aaaaggctga ggaataccaa taattccaac 12360

tttattagga cctttacgaa tttgaatata acctaaaatc tttcgctcaa ataaagtcaa 12420

aaaagcaact cttactaaaa caaaaataac taataacaat cttcttaata taaacataac 12480

aatttctaaa aaaatcaata ctatttgtat ttacatacat ttataaattc taaatttatt 12540

acactaatct gccaaaatag tattaataat attcataaat taaataatta aatattaaat 12600

atttgatcct ttcgtactaa aatattttaa tttattaaag atagaaacca acctggctta 12660

caccggtttg aactcagatc atgtaagaaa ttaaaagtcg aacagactta atttttaagc 12720

ttctacacct aaatttatct cttaatccaa catcgaggtc gcaatatttt ttatcaatat 12780

gaactctcca aaaaaattac gctgttatcc ctaaagtaac ttattctttt aatcaatatt 12840

aaaggatcaa ttaatcataa attaatgtta aataaaatta aaagttaatt aaattttaat 12900

atcaccccaa taaaatattt aaattaatag atataaatta atttctaatt aacataaatt 12960

aattaaatat aaagatttat agggtcttct cgtcttttaa taatatttta gctttttgac 13020

taaaaaataa aattccatta aaaattaata tgaaacagtc aatatttcgt ccaaccattc 13080

attccagcct tcaattaaaa gactaatgat tatgctacct ttgcacagtt aatatactgc 13140

ggccatttaa ttttatcagt gggcaggtta aactttttat taatattcaa aaagagatgt 13200

ttttgttaaa caggcgaata ttaatttgcc gaattcttta tactaactta tcaaatataa 13260

ataatttata caataaatat actaatttta tcattattac tttatttttt taattaaaat 13320

aaatatttta ataaactaat taaaacttaa taaataattt attttataat ataaattata 13380

acaatattca aaataatagc tacttctaag cttaaattta ttaaattaaa taaatatttt 13440

taataattta ttttacagct tatcccataa aatatttaaa attaataatt attaatttaa 13500

caataaaatt aataataata atttaataaa ttaaatttat ttcttaaaaa actagatacc 13560

tttaaaaccg aaacacttat cacttccaat atattattta aaataatttt ataacattaa 13620

atttaataat atattaactc ttttaaaatc gagaaattta ataattttta aaatttattt 13680

aataaaccct gatacacaag gtacaataaa taaaatcttc tttaaaatta aataattttc 13740

aaactatttc aacattcttt cacaatacta ttttactata ataaaaaata ttttttctat 13800

taatatacta aaaaatatta taaatatttt taacataaaa attatttaaa ataaatttaa 13860

taatttaatt ttatatcaat ttaaattgat ttgcacaaat atcttttcaa tgtaaatgaa 13920

atactttact aataagtttt aaattgcatt ctagatacac tttccagtac atctactatg 13980

ttacgactta tcttatctta ataataagag tgacgggcga tgtgtacata ttttagagct 14040

ataatcaaat tattaatctt tataaattta ctatcaaatc caccttcaat aaatatttca 14100

aatttatatc catttaaata aatttattgt aacccatttc tacttaaaca taaactacac 14160

cttgatttga tatattctaa caatttaaaa tcttaaaaat tataattctt ataaaatatt 14220

taaataacaa cggtatataa attgaataca aatttaagta aggtccatcg tggattatcg 14280

attacagaac aggttcctct gaatagacta aaataccgcc aaatttttta gatttcaaga 14340

acttaactaa tactacctta gtaataaatt tcaattaaaa taatagggta tctaatccta 14400

gtttataatt taatttttaa agcttcaatt ataaataaat ttaattattt aaatttaaaa 14460

tttcacctaa taaatttaat tatataaaaa taattcacat ttaactttta ctaaaaaaat 14520

ttactaataa taaattcgta taaccgcgat tgctggcaca aatttaatca ttatttatta 14580

atattactaa ttctaaattt ctttaataaa taatcttaat tactgcgaat aaataatttt 14640

tattatttaa attttaaaat tacccacaaa aatttacatg taaattaaac taaaagcaaa 14700

tcattaaacc aaaataaaac tttaataata attattaaat ttaaacctat caaaaaataa 14760

atttatcaat ttaaataaat aactaactaa agtataatta atataactaa ttttaaataa 14820

tattaaaatt taattattaa ataaactata atataaacta ataaatttta aaataaaaat 14880

aatctcttaa tataaattat taaataataa ataaattctt atataatgaa aataaatata 14940

aataatttaa tctaaattaa taaaatttaa aaattatatt attaattaat tttataataa 15000

tttaatattt ataaaattat actataaaat attaatatag gaacataaat ttaatttaaa 15060

tattaaaata atatatttta ttataaattt acttaaaata attcactttc ctcctaagaa 15120

agtatggtca tcaattaaaa ataacttcat ttctaactca caaattaaaa tttaatatta 15180

cccctaataa tttaaatttt aatccgaatt aattaataat attaaattta taattaaaat 15240

aattataatt taaatattaa attaattact aaaaatttta tattataaat aaattaatat 15300

aaatttaaat ataatacata tatatatatt taattatata caaattatta aaataaatta 15360

tataattaaa ttaattaaat aatttattta aataaattta attgttctaa aaattaaaat 15420

aacttattta attataattt aaataaaaat ttattacttc ccctaataat aataaatttt 15480

gtacaaatat aaatcaaata atttattaaa atattattaa atttattaat tacccctaat 15540

aatttaattt atttaaataa taatttttaa aaaaatattt actaaaattt taaaattaat 15600

aaacaaaaat ttatttttat attatatatt tataaataaa atttaatatt attttaaata 15660

aataatgtaa ttaataatta ttaaataatg aattaaaaat agtgtatata atatataaca 15720

ttaatataat aaaattataa taaattaatt aaaatattaa taatttattt tattattttt 15780

aaaatttgtt tatttatatt gaataattat atttattttc attatatttt acaaatcttt 15840

ttttttttta ataaaaattt aagaggtata ctaatattat ataaatattt atatgaatat 15900

aaatatttac ttaatttata gattatctat tattcttcgg aatgtataaa tatatatata 15960

tatataaatg tttaattatt atatcatgat ctgtaatatt aaaaccaaaa ctatacagta 16020

tttattaaac ttttgtcaat attgcatgta tttaacaata gttttattta attaccaata 16080

gaacctacaa ttatatagat aaatatctat acataattaa atcattgctc agctcataga 16140

tgagtaataa tttacaaata cactatatat atatatgcaa aataaatttc actgaatgac 16200

caaaatagca ctaaatttta cccaaaaaat ttttcgcaaa aacttgcaaa aatcgtgaaa 16260

ttgcatacta tttttttaat aaatgctaca aattttaaaa attaatatga atataatttt 16320

tttagacaca aaaaattagt cgattttttc gaaatttata taggtttttc attcaaatac 16380

ccccttgaat ggaaaacata taataattgg tgtatatata tatatagaaa tacttacata 16440

tatatataca ctaaaaaata attcacaata tattaaattt aaactaaaat ttactaggtt 16500

tttcatactt attaaaaata atataattaa ttaaatttaa taccataatc taaaattatt 16560

tttgataatt tttaaaatat caataaaatg aattttataa acaaaaataa aaaattttac 16620

aaaaaatata actacggtaa aatataataa atcattataa attacctatc aaaaaattaa 16680

aaaattaact atattttata ctataattaa ttaattaaat aataaattta taaacaaatt 16740

ttaaactaat aatcaaataa aactaaaatt aaaattaaac taaaaatttt taataatttt 16800

attttttttt tattaaataa atattttttt ttaaaaaaaa aaagatttgt aaaatataat 16860

gaaaataaat ataattattc aatataaata aacaaatttt taaaataata aaataaatta 16920

ttaatattta attaattata aatttattat att 16953

Claims

1.一种革利虱蝇线粒体全基因组序列的扩增引物，其特征在于，包括10 对引物对，具体序列信息如下所示：

（1）第1 对上游引物为：SEQ ID NO.1 所示的核苷酸序列，下游引物为：SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；

（2）第2 对上游引物为：SEQ ID NO.3 所示的核苷酸序列，下游引物为：SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；

（3）第3 对上游引物为：SEQ ID NO.5 所示的核苷酸序列，下游引物为：SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列；

（4）第4 对上游引物为：SEQ ID NO.7 所示的核苷酸序列，下游引物为：SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列；

（5）第5 对上游引物为：SEQ ID NO.9 所示的核苷酸序列，下游引物为：SEQ ID NO.10

所示的核苷酸序列；

（6）第6 对上游引物为：SEQ ID NO.11 所示的核苷酸序列，下游引物为：SEQ ID NO.12

所示的核苷酸序列；

（7）第7 对上游引物为：SEQ ID NO.13 所示的核苷酸序列，下游引物为：SEQ ID NO.14

所示的核苷酸序列；

（8）第8 对上游引物为：SEQ ID NO.15 所示的核苷酸序列，下游引物为：SEQ ID NO.16

所示的核苷酸序列；

（9）第9 对上游引物为：SEQ ID NO.17 所示的核苷酸序列，下游引物为：SEQ ID NO.18

所示的核苷酸序列；

（10）第10对上游引物为：SEQ ID NO.19所示的核苷酸序列，下游引物为：SEQ ID NO.20

所示的核苷酸序列。

2.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于扩增虱蝇线粒体全基因组序列，所述试剂盒包括权利要求1所述的扩增引物。

3.一种虱蝇线粒体全基因组序列的扩增方法，其特征在于，以提取的虱蝇基因组DNA为模板，用权利要求1所述的10 对扩增引物进行PCR 扩增，PCR 产物经1.0% 琼脂糖电泳检测后送测序。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR的反应体系为50μL，其中：60 ngDNA模板、0.2-1.0μM 引物、8μL 2.5mM dNTP、5μL 10×PCR Buffer、2.0mM MgCl₂、0 .5μLTaq酶，余量为无核酸酶水。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增条件为：94℃预变性2min，然后94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸60s，共35个循环，最后72℃延伸10min。

6.根据权利要求1 所述的虱蝇线粒体全基因组序列的扩增引物扩增获得的虱蝇线粒体全基因组序列或者根据权利要求3-5任一项所述方法获得的虱蝇线粒体基因组全序列，其特征在于，所述虱蝇线粒体全基因组序列如SEQ ID NO.21 所示。

7.根据权利要求1 所述的虱蝇线粒体全基因组序列的扩增引物扩增获得的虱蝇线粒体全基因组序列或者根据权利要求3-5任一项所述方法获得的虱蝇线粒体基因组全序列，其特征在于，该线粒体基因组长度为16053bp，全基因组序列包含2个核糖体RNA基因，13个不含内含子的蛋白编码基因，22个转运RNA基因和2个非编码区即控制区和轻链复制起始区。