CN113151200A

CN113151200A - 一种植物ACCase突变型蛋白及其基因序列和应用

Info

Publication number: CN113151200A
Application number: CN202110506568.0A
Authority: CN
Inventors: 许蓉芳; 秦瑞英; 李娟�; 魏鹏程; 刘小双
Original assignee: Rice Research Institute of Anhui Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Rice Research Institute of Anhui Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2021-05-10
Filing date: 2021-05-10
Publication date: 2021-07-23

Abstract

本发明公开了一种植物抗除草剂ACCase突变型蛋白以及相应基因和应用。所述ACCase突变型蛋白的氨基酸序列对应于野生型植物ACCase的氨基酸序列的第2097位发生突变，由色氨酸突变为缬氨酸、脯氨酸、精氨酸、丝氨酸、酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、色氨酸、赖氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、丙氨酸以及谷氨酸中的一种。本发明还提供一种介导产生内源抗除草剂植物的位点，通过改变植物乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)基因型，使突变体植株具有对乙酰辅酶A羧化酶抑制剂类除草剂的抗(耐)性。

Description

一种植物ACCase突变型蛋白及其基因序列和应用

技术领域

本发明涉及基因工程和植物育种领域，具体涉及采用分子育种或常规诱变等途径产生内源抗除草剂植物的位点，该基因所编码的蛋白的氨基酸序列对应于野生型植物ACCase的氨基酸序列的第2097位发生突变。

背景技术

粮食短缺是本世纪最严重的全球性问题之一，近年来随着社会经济的快速发展和农业技术的不断提高，粮食短缺的问题得到缓解，但为了满足由于人口迅速增长而不断扩大的粮食需求，急需提高植物产量和改善稻米品质。随着植物直播栽培技术在农业生产中的大面积应用，植物直播生产中农田杂草问题成为影响农作物产量的重要因素。为了防除稻田杂草，不仅投入大量的人力物力和财力，还喷洒了大量除草剂。而传统的育种方式周期长，可利用的种质资源匮乏，因此，培育抗除草剂的植物十分必要。

由于化学除草剂的广泛使用，杂草抗性发生的速度如此之快、范围如此之广，不但增加了除草成本，也增加了环境压力。目前，对抗性杂草种群形成的原因有两种观点：一种认为杂草长期与除草剂接触，而使除草剂作用部位的编码基因发生突变或者基因表达发生改变，结果导致杂草对除草剂的解毒能力提高或者出现对除草剂具有耐药性或抗药性的种群。总的来说，杂草抗性的形成，基本上是一个抗性基因被选择的过程，抗药性基因的遗传是杂草产生抗药性的基础。之前的报道认为，抗药性的产生不仅是由于植物改变了对除草剂的吸收与转运或植物加速了除草剂的代谢，且主要是因为除草剂的作用部位发生了改变。相当一部分杂草通过靶标酶ACCase的变化来解除或减少其与除草剂的亲和性而获得抗性。因此迫切需要开发新的抗除草剂位点来满足育种和生产所需。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种可以赋予植物抗(耐)乙酰辅酶A羧化酶类除草剂抗性的植物ACCase突变型蛋白。

为此，本发明提供了一种编码植物ACCase突变型蛋白的核酸或基因。

在一种实施方式中，本发明提供了一种植物ACCase突变型蛋白，所述ACCase突变型蛋白的氨基酸序列经过定点替换：其对应于植物ACCase的氨基酸序列的第2097位发生突变。

优选地，本发明的植物ACCase的氨基酸序列第2097位氨基酸由色氨酸突变为甘氨酸。

优选地，本发明的植物ACCase的氨基酸序列第2097位氨基酸突变除了甘氨酸之外的其它氨基酸。

优选地，本发明的ACCase突变型蛋白发生突变的氨基酸位点突变成其他氨基酸的情况也在本发明的保护范围之内，例如：第2097位氨基酸由色氨酸突变为缬氨酸、脯氨酸、精氨酸、丝氨酸、酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、色氨酸、赖氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、丙氨酸以及谷氨酸中的一种；

本发明还提供一种植物ACCase突变型蛋白，该植物ACCase突变型蛋白包括：(a)氨基酸序列为序列表中SEQ ID NO:1中所示序列的蛋白质，以及(b)对(a)中所示的氨基酸序列经过定点替换具有乙酰辅酶A羧化酶活性的由(a)衍生的蛋白质。

本发明还提供一种核酸或基因，其编码所述的蛋白。

本发明所述的核酸或基因，包括：

(i)编码所述的蛋白的核酸或基因；或

(ii)在严格条件下与(a)限定的核苷酸序列杂交且编码具有乙酰辅酶A羧化酶活性的蛋白质的核苷酸序列；或

(iii)其核苷酸序列选自SEQ ID NO:2的核酸或基因。

进一步地，本发明的植物ACCase突变型基因，所述植物ACCase基因存在以下三种突变：第6289位点核苷酸发生突变，分别由T变成G，或第6289、第6291位点核苷酸发生突变，分别由T变成G、G变成C/T。

作为优选，本发明的植物ACCase突变型基因，所述植物ACCase基因存在以下三种突变类型：第6289位点核苷酸发生突变，分别由T变成G，或第6289、第6291位点核苷酸发生突变，分别由T变成G、G变成C/T。

本发明的ACCase突变型基因发生突变的核苷酸，在上述位点突变成其他核苷酸的情况也在本发明的保护范围之内，例如：T突变为A、C、G，或G突变为A、T、C。

本发明还提供一种表达盒、重组载体，其含有所述的核酸或基因。

本发明还提供所述的植物ACCase突变型蛋白、核酸或基因，表达盒、重组载体在植物抗除草剂方面的应用。

本发明还提供获得具有除草剂抗性的植物的方法，包括如下步骤：

1)使植物包含所述核酸或基因；或

2)使植物表达所述植物ACCase突变型蛋白。

进一步地，所述获得具有除草剂抗性的植物的方法可为基因工程、分子育种、人工诱变或天然突变中的任意一种。

本发明还提供了获得具有除草剂抗性的植物的方法。进一步地，本发明提供了用于增强植物、植物组织、植物细胞对于至少一种除草剂的耐受性的方法，所述除草剂干扰ACCase酶的活性。因此，本发明中除草剂抗性指的是抗(耐)乙酰辅酶A羧化酶类除草剂。

本发明所述的增强植物、植物组织或者植物细胞对除草剂的抗性方法可以通过转化或者杂交、自交和无性繁殖的方法实施，也可通过基因定点突变的方式获得，使改变的植株包括本发明的核苷酸序列SEQ ID No:2。

本发明所述的增强植物、植物组织或者植物细胞对除草剂的抗性方法可以通过转化或者杂交、自交和无性繁殖的方法实施，也可通过基因定点突变的方式获得，使改变的植株表达本发明的氨基酸序列SEQ ID No:1。

本发明还提供了耐受除草剂的植物，其表达含有抗除草剂突变位点的ACCase基因，该基因序列不同于野生型植物植物的ACCase基因序列，是ACCase基因含有抗除草剂突变位点的序列。发现携带有ACCase突变位点的转基因植物可以抗ACCase类除草剂，而野生型植物对ACCase类除草剂表现敏感。本发明还提供了所述核酸或基因及蛋白在植物育种中的应用，用于培育具有除草剂抗性的植物，尤其是农作物，还提供了这些蛋白及其编码基因在转基因或者非转基因如水稻等植物中的应用。

附图说明

图1示出含有ACCase突变位点的转基因水稻在除草剂作用下与野生型的对比。

图2示出了突变型ACCase基因突变位点的测序图；

图3为含有不同ACCase突变体的愈伤组织在培养基上的筛选培养结果。

具体实施方式

以下参照实施例对本发明进行说明。但本领域技术人员可以理解，以下实施例仅用于说明本发明，而不以任何方式限制本发明的范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。

本申请的发明人在实验中发现，ACC基因的一个特定突变体具有优异的除草剂抗性，下面将结合实例对该基因突变的构成、获得以及应用验证进行详细描述。

实施例1、植物ACCase突变位点获得和植物表达载体的构建

以水稻为例，选择植物ACC基因中的核苷酸序列TTCCTCGTGCTGGACAAGTGTGG(下划线部分为所述5’NGG-3’结构的PAM序列)，作为打靶位点。按所选择靶位点合成(通用生物有限公司)正向寡核苷酸链(ACC2097-PE FP)和可与之互补的反向寡核苷酸链(ACC2097-PERP)，

具体序列为：

ACC2097-PE FP1:GGCAttcctcgtgctggacaagtgGTTTC

ACC2097-PE RP1:CTCTGAAACcacttgtccagcacgaggaa

ACC2097-PE FP2:GTGCgaaaNNNcacttgtccagcacga

ACC2097-PE RP1:AAAAtcgtgctggacaagtgNNNtttc

经过退火程序，将ACC2097-PE FP1+RP1和ACC2097-PE FP2+RP2两链分别退火形成具有粘性末端的双链DNA，作为构建重组载体的插入片段。

CRISPR介导的引导编辑系统，采用SpCas9蛋白介导的引导编辑系统pHUN411-PE2，该系统可在基因组上引入预先设计的突变。

用BsaI内切酶(NEB公司)在37℃酶切pHUN411-PE2载体4小时，65℃失活酶切体系10分钟，作为构建重组载体的骨架片段。用Goldgate法(NEB公司)将重组载体骨架片段和插入片段及sgRNA Scoffold首尾相连，转入大肠杆菌中。通过选择具有卡那霉素抗性且不具壮观霉素抗性的菌斑，获得阳性转化子。经测序验证后，提取阳性质粒，构成用于植物ACC基因CRISPR/Cas9靶向的重组载体质粒，命名为pHUN411-PE2-ACC 2097PegRNA，利用冻融法将植物表达载体转入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105(安徽省农业科学院农业部转基因生物产品成分监督检验测试中心植物组保存)，经菌落PCR筛选获得阳性克隆，获得含有pHUN411-PE2-ACC 2097PegRNA的农杆菌。

实施例2、阳性转基因植株获得

成熟水稻种子去掉颖壳后，用70％酒精浸泡种子1min，倒掉酒精。用含有1滴Tween20的50％次氯酸钠(原液有效氯浓度大于4％)溶液浸泡种子40min(150r/min)。倒掉次氯酸钠，无菌水洗5遍至溶液澄清，无次氯酸钠味道。无菌水浸泡种子过夜。用解剖刀对种子沿糊粉层将胚剥下，将胚接种于愈伤诱导培养基上。30℃下暗培养11天后将愈伤与胚乳及胚芽分离，将去芽的状态良好、分裂旺盛的初级愈伤组织进行预培养3～5天后用于农杆菌转化。

采用上述转入了重组表达载体的根癌农杆菌进行农杆菌介导的遗传转化，该遗传转化、转化子筛选及转基因植株再生等参照Yongbo Duan(Yongbo Duan，Chenguang Zhai，et al.An efficient and high-throughput protocol for Agrobacterium mediatedtransformation based on phosphomannose isomerase positive selection inJaponica rice(Oryza sativa L.)[J].Plant Cell Report，2012.DOI 10.1007/s00299-012-1275-3.)等提出的方法，在培养基上加入2μM的吡氟氯禾灵除草剂，获得抗性愈伤，进一步再生获得抗性植株(图1)。

实施例3：植物抗乙酰辅酶A羧化酶类除草剂突变体2097突变位点分析

将获得的抗除草剂的突变植株选取叶片并提取基因组DNA，送Invitrogen公司进行基因组测序。测序结果与野生型日本晴ACCase基因比较，发现在ACCase基因上发生了2个位点的突变，第6289位点核苷酸发生突变，分别由T变成G，或第6289、第6291位点核苷酸发生突变，分别由T变成G、G变成C/T，(即，6289-6291由TGG现在突变成GGG或GGC或GGT)导致其相应编码的氨基酸序列的第2097位点由色氨酸变为甘氨酸，即抗除草剂突变体的ACCase基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，其编码的ACCase蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

需要说明的是，在筛选过程中，需要培养不同位点的突变体，然后在培养基上通过除草剂进行筛选，图3示出了含有各种可能突变的愈伤组织在含除草剂基因的表现，在该图所示的实验中，仅一种愈伤组织获得了旺盛的生长，即含有本实施例所筛选出的含有ACCase2097突变位点(突变为甘氨酸)的植株。

与此同时，发明人发现另一个突变体也具有少许抗性(其第2097位点突变为亮氨酸)，但是其抗性远低于由色氨酸变为甘氨酸的突变体。

参见图1，发明人将野生型和两种突变植株移栽至土壤中，每隔3天喷施0.15g/L吡氟氯禾灵2次后，突变植株表现出对除草剂的抗性，三束植株分别是野生型植株、第2097位点突变为亮氨酸的植株和第2097位点突变为甘氨酸的植株。

如图1的中间部分所示，由于专利中将彩色图片转变成了灰度图像可能并不明显，但是原图中可以明显看出，最左侧的野生型基因植株已经枯黄，失去生机，中间的第2097位点突变为亮氨酸的植株W2097L虽然仍然具有生命迹象，为绿色株苗，但是生长还是受到了抑制，株高明显低于W2097G，

进而可以证明，本申请发明人所找到的突变体均具有除草剂抗性，W2097G抗性尤佳。

虽然上面结合本发明的优选实施例对本发明的原理进行了详细的描述，本领域技术人员应该理解，上述实施例仅仅是对本发明的示意性实现方式的解释，并非对本发明包含范围的限定。实施例中的细节并不构成对本发明范围的限制，在不背离本发明的精神和范围的情况下，任何基于本发明技术方案的等效变换、简单替换等显而易见的改变，均落在本发明保护范围之内。

序列表

<110> 安徽省农业科学院水稻研究所

<120> 一种植物ACCase突变型蛋白及其基因序列和应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 2

<211> 2414

<212> PRT

<213> 突变蛋白(ACCase)

<400> 2

Met Pro Met Arg Pro Trp Glu Phe Ile Ile Leu Gly Arg Thr Ala Pro

1 5 10 15

Ile Ser Pro Pro Pro Leu Gly Ile Ser Ala Phe Ser Arg Pro Leu Arg

20 25 30

Leu Arg Leu Arg Leu Arg Leu Ala Ala Val Val Asp Ala Ala Arg Ile

35 40 45

Gln Thr Pro Pro Arg Val Ala Phe Ser Ala Phe Phe Phe Phe Phe Phe

50 55 60

Phe Phe Ser Glu Gly Leu Ser Arg Glu Gly Thr Ala Ala Arg Leu Pro

65 70 75 80

Ala Leu Ile Tyr Arg Val Pro Phe Ile Pro Cys Leu Leu Gln Leu Gln

85 90 95

Ile Arg Ala Pro His Ala Asp Pro Arg Pro Ala Gly Phe Ser Cys Ala

100 105 110

His His Phe Leu Ala Leu Ala Gln Gly Leu Ser Ser Ser Leu Leu Ser

115 120 125

Gly Thr Ile Ser His Ile Trp Gly Phe Ile Phe Ser Leu Tyr Gly Thr

130 135 140

Thr His Leu Arg Asn Arg Ala Ile Leu Leu Phe Gly Leu Ala Gly Ile

145 150 155 160

Ile Asp Leu Pro Asn Asp Ala Ala Ser Glu Val Asp Ile Ser His Gly

165 170 175

Ser Glu Asp Pro Arg Gly Pro Thr Val Pro Gly Ser Tyr Gln Met Asn

180 185 190

Gly Ile Ile Asn Glu Thr His Asn Gly Arg His Ala Ser Val Ser Lys

195 200 205

Val Val Glu Phe Cys Thr Ala Leu Gly Gly Lys Thr Pro Ile His Ser

210 215 220

Val Leu Val Ala Asn Asn Gly Met Ala Ala Ala Lys Phe Met Arg Ser

225 230 235 240

Val Arg Thr Trp Ala Asn Asp Thr Phe Gly Ser Glu Lys Ala Ile Gln

245 250 255

Leu Ile Ala Met Ala Thr Pro Glu Asp Leu Arg Ile Asn Ala Glu His

260 265 270

Ile Arg Ile Ala Asp Gln Phe Val Glu Val Pro Gly Gly Thr Asn Asn

275 280 285

Asn Asn Tyr Ala Asn Val Gln Leu Ile Val Glu Ile Ala Glu Arg Thr

290 295 300

Gly Val Ser Ala Val Trp Pro Gly Trp Gly His Ala Ser Glu Asn Pro

305 310 315 320

Glu Leu Pro Asp Ala Leu Thr Ala Lys Gly Ile Val Phe Leu Gly Pro

325 330 335

Pro Ala Ser Ser Met His Ala Leu Gly Asp Lys Val Gly Ser Ala Leu

340 345 350

Ile Ala Gln Ala Ala Gly Val Pro Thr Leu Ala Trp Ser Gly Ser His

355 360 365

Val Glu Val Pro Leu Glu Cys Cys Leu Asp Ser Ile Pro Asp Glu Met

370 375 380

Tyr Arg Lys Ala Cys Val Thr Thr Thr Glu Glu Ala Val Ala Ser Cys

385 390 395 400

Gln Val Val Gly Tyr Pro Ala Met Ile Lys Ala Ser Trp Gly Gly Gly

405 410 415

Gly Lys Gly Ile Arg Lys Val His Asn Asp Asp Glu Val Arg Thr Leu

420 425 430

Phe Lys Gln Val Gln Gly Glu Val Pro Gly Ser Pro Ile Phe Ile Met

435 440 445

Arg Leu Ala Ala Gln Ser Arg His Leu Glu Val Gln Leu Leu Cys Asp

450 455 460

Gln Tyr Gly Asn Val Ala Ala Leu His Ser Arg Asp Cys Ser Val Gln

465 470 475 480

Arg Arg His Gln Lys Ile Ile Glu Glu Gly Pro Val Thr Val Ala Pro

485 490 495

Arg Glu Thr Val Lys Glu Leu Glu Gln Ala Ala Arg Arg Leu Ala Lys

500 505 510

Ala Val Gly Tyr Val Gly Ala Ala Thr Val Glu Tyr Leu Tyr Ser Met

515 520 525

Glu Thr Gly Glu Tyr Tyr Phe Leu Glu Leu Asn Pro Arg Leu Gln Val

530 535 540

Glu His Pro Val Thr Glu Trp Ile Ala Glu Val Asn Leu Pro Ala Ala

545 550 555 560

Gln Val Ala Val Gly Met Gly Ile Pro Leu Trp Gln Ile Pro Glu Ile

565 570 575

Arg Arg Phe Tyr Gly Met Asn His Gly Gly Gly Tyr Asp Leu Trp Arg

580 585 590

Lys Thr Ala Ala Leu Ala Thr Pro Phe Asn Phe Asp Glu Val Asp Ser

595 600 605

Lys Trp Pro Lys Gly His Cys Val Ala Val Arg Ile Thr Ser Glu Asp

610 615 620

Pro Asp Asp Gly Phe Lys Pro Thr Gly Gly Lys Val Lys Glu Ile Ser

625 630 635 640

Phe Lys Ser Lys Pro Asn Val Trp Ala Tyr Phe Ser Val Lys Ser Gly

645 650 655

Gly Gly Ile His Glu Phe Ala Asp Ser Gln Phe Gly His Val Phe Ala

660 665 670

Tyr Gly Thr Thr Arg Ser Ala Ala Ile Thr Thr Met Ala Leu Ala Leu

675 680 685

Lys Glu Val Gln Ile Arg Gly Glu Ile His Ser Asn Val Asp Tyr Thr

690 695 700

Val Asp Leu Leu Asn Ala Ser Asp Phe Arg Glu Asn Lys Ile His Thr

705 710 715 720

Gly Trp Leu Asp Thr Arg Ile Ala Met Arg Val Gln Ala Glu Arg Pro

725 730 735

Pro Trp Tyr Ile Ser Val Val Gly Gly Ala Leu Tyr Lys Thr Val Thr

740 745 750

Ala Asn Thr Ala Thr Val Ser Asp Tyr Val Gly Tyr Leu Thr Lys Gly

755 760 765

Gln Ile Pro Pro Lys His Ile Ser Leu Val Tyr Thr Thr Val Ala Leu

770 775 780

Asn Ile Asp Gly Lys Lys Tyr Thr Ile Asp Thr Val Arg Ser Gly His

785 790 795 800

Gly Ser Tyr Arg Leu Arg Met Asn Gly Ser Thr Val Asp Ala Asn Val

805 810 815

Gln Ile Leu Cys Asp Gly Gly Leu Leu Met Gln Leu Asp Gly Asn Ser

820 825 830

His Val Ile Tyr Ala Glu Glu Glu Ala Ser Gly Thr Arg Leu Leu Ile

835 840 845

Asp Gly Lys Thr Cys Met Leu Gln Asn Asp His Asp Pro Ser Lys Leu

850 855 860

Leu Ala Glu Thr Pro Cys Lys Leu Leu Arg Phe Leu Val Ala Asp Gly

865 870 875 880

Ala His Val Asp Ala Asp Val Pro Tyr Ala Glu Val Glu Val Met Lys

885 890 895

Met Cys Met Pro Leu Leu Ser Pro Ala Ser Gly Val Ile His Val Val

900 905 910

Met Ser Glu Gly Gln Ala Met Gln Ala Gly Asp Leu Ile Ala Arg Leu

915 920 925

Asp Leu Asp Asp Pro Ser Ala Val Lys Arg Ala Glu Pro Phe Glu Asp

930 935 940

Thr Phe Pro Gln Met Gly Leu Pro Ile Ala Ala Ser Gly Gln Val His

945 950 955 960

Lys Leu Cys Ala Ala Ser Leu Asn Ala Cys Arg Met Ile Leu Ala Gly

965 970 975

Tyr Glu His Asp Ile Asp Lys Val Val Pro Glu Leu Val Tyr Cys Leu

980 985 990

Asp Thr Pro Glu Leu Pro Phe Leu Gln Trp Glu Glu Leu Met Ser Val

995 1000 1005

Leu Ala Thr Arg Leu Pro Arg Asn Leu Lys Ser Glu Leu Glu Gly Lys

1010 1015 1020

Tyr Glu Glu Tyr Lys Val Lys Phe Asp Ser Gly Ile Ile Asn Asp Phe

1025 1030 1035 1040

Pro Ala Asn Met Leu Arg Val Ile Ile Glu Glu Asn Leu Ala Cys Gly

1045 1050 1055

Ser Glu Lys Glu Lys Ala Thr Asn Glu Arg Leu Val Glu Pro Leu Met

1060 1065 1070

Ser Leu Leu Lys Ser Tyr Glu Gly Gly Arg Glu Ser His Ala His Phe

1075 1080 1085

Val Val Lys Ser Leu Phe Glu Glu Tyr Leu Tyr Val Glu Glu Leu Phe

1090 1095 1100

Ser Asp Gly Ile Gln Ser Asp Val Ile Glu Arg Leu Arg Leu Gln His

1105 1110 1115 1120

Ser Lys Asp Leu Gln Lys Val Val Asp Ile Val Leu Ser His Gln Ser

1125 1130 1135

Val Arg Asn Lys Thr Lys Leu Ile Leu Lys Leu Met Glu Ser Leu Val

1140 1145 1150

Tyr Pro Asn Pro Ala Ala Tyr Arg Asp Gln Leu Ile Arg Phe Ser Ser

1155 1160 1165

Leu Asn His Lys Ala Tyr Tyr Lys Leu Ala Leu Lys Ala Ser Glu Leu

1170 1175 1180

Leu Glu Gln Thr Lys Leu Ser Glu Leu Arg Ala Arg Ile Ala Arg Ser

1185 1190 1195 1200

Leu Ser Glu Leu Glu Met Phe Thr Glu Glu Ser Lys Gly Leu Ser Met

1205 1210 1215

His Lys Arg Glu Ile Ala Ile Lys Glu Ser Met Glu Asp Leu Val Thr

1220 1225 1230

Ala Pro Leu Pro Val Glu Asp Ala Leu Ile Ser Leu Phe Asp Cys Ser

1235 1240 1245

Asp Thr Thr Val Gln Gln Arg Val Ile Glu Thr Tyr Ile Ala Arg Leu

1250 1255 1260

Tyr Gln Pro His Leu Val Lys Asp Ser Ile Lys Met Lys Trp Ile Glu

1265 1270 1275 1280

Ser Gly Val Ile Ala Leu Trp Glu Phe Pro Glu Gly His Phe Asp Ala

1285 1290 1295

Arg Asn Gly Gly Ala Val Leu Gly Asp Lys Arg Trp Gly Ala Met Val

1300 1305 1310

Ile Val Lys Ser Leu Glu Ser Leu Ser Met Ala Ile Arg Phe Ala Leu

1315 1320 1325

Lys Glu Thr Ser His Tyr Thr Ser Ser Glu Gly Asn Met Met His Ile

1330 1335 1340

Ala Leu Leu Gly Ala Asp Asn Lys Met His Ile Ile Gln Glu Ser Gly

1345 1350 1355 1360

Asp Asp Ala Asp Arg Ile Ala Lys Leu Pro Leu Ile Leu Lys Asp Asn

1365 1370 1375

Val Thr Asp Leu His Ala Ser Gly Val Lys Thr Ile Ser Phe Ile Val

1380 1385 1390

Gln Arg Asp Glu Ala Arg Met Thr Met Arg Arg Thr Phe Leu Trp Ser

1395 1400 1405

Asp Glu Lys Leu Ser Tyr Glu Glu Glu Pro Ile Leu Arg His Val Glu

1410 1415 1420

Pro Pro Leu Ser Ala Leu Leu Glu Leu Asp Lys Leu Lys Val Lys Gly

1425 1430 1435 1440

Tyr Asn Glu Met Lys Tyr Thr Pro Ser Arg Asp Arg Gln Trp His Ile

1445 1450 1455

Tyr Thr Leu Arg Asn Thr Glu Asn Pro Lys Met Leu His Arg Val Phe

1460 1465 1470

Phe Arg Thr Leu Val Arg Gln Pro Ser Val Ser Asn Lys Phe Ser Ser

1475 1480 1485

Gly Gln Ile Gly Asp Met Glu Val Gly Ser Ala Glu Glu Pro Leu Ser

1490 1495 1500

Phe Thr Ser Thr Ser Ile Leu Arg Ser Leu Met Thr Ala Ile Glu Glu

1505 1510 1515 1520

Leu Glu Leu His Ala Ile Arg Thr Gly His Ser His Met Tyr Leu His

1525 1530 1535

Val Leu Lys Glu Gln Lys Leu Leu Asp Leu Val Pro Val Ser Gly Asn

1540 1545 1550

Thr Val Leu Asp Val Gly Gln Asp Glu Ala Thr Ala Tyr Ser Leu Leu

1555 1560 1565

Lys Glu Met Ala Met Lys Ile His Glu Leu Val Gly Ala Arg Met His

1570 1575 1580

His Leu Ser Val Cys Gln Trp Glu Val Lys Leu Lys Leu Asp Cys Asp

1585 1590 1595 1600

Gly Pro Ala Ser Gly Thr Trp Arg Ile Val Thr Thr Asn Val Thr Ser

1605 1610 1615

His Thr Cys Thr Val Asp Ile Tyr Arg Glu Met Glu Asp Lys Glu Ser

1620 1625 1630

Arg Lys Leu Val Tyr His Pro Ala Thr Pro Ala Ala Gly Pro Leu His

1635 1640 1645

Gly Val Ala Leu Asn Asn Pro Tyr Gln Pro Leu Ser Val Ile Asp Leu

1650 1655 1660

Lys Arg Cys Ser Ala Arg Asn Asn Arg Thr Thr Tyr Cys Tyr Asp Phe

1665 1670 1675 1680

Pro Leu Ala Phe Glu Thr Ala Val Arg Lys Ser Trp Ser Ser Ser Thr

1685 1690 1695

Ser Gly Ala Ser Lys Gly Val Glu Asn Ala Gln Cys Tyr Val Lys Ala

1700 1705 1710

Thr Glu Leu Val Phe Ala Asp Lys His Gly Ser Trp Gly Thr Pro Leu

1715 1720 1725

Val Gln Met Asp Arg Pro Ala Gly Leu Asn Asp Ile Gly Met Val Ala

1730 1735 1740

Trp Thr Leu Lys Met Ser Thr Pro Glu Phe Pro Ser Gly Arg Glu Ile

1745 1750 1755 1760

Ile Val Val Ala Asn Asp Ile Thr Phe Arg Ala Gly Ser Phe Gly Pro

1765 1770 1775

Arg Glu Asp Ala Phe Phe Glu Ala Val Thr Asn Leu Ala Cys Glu Lys

1780 1785 1790

Lys Leu Pro Leu Ile Tyr Leu Ala Ala Asn Ser Gly Ala Arg Ile Gly

1795 1800 1805

Ile Ala Asp Glu Val Lys Ser Cys Phe Arg Val Gly Trp Ser Asp Asp

1810 1815 1820

Gly Ser Pro Glu Arg Gly Phe Gln Tyr Ile Tyr Leu Ser Glu Glu Asp

1825 1830 1835 1840

Tyr Ala Arg Ile Gly Thr Ser Val Ile Ala His Lys Met Gln Leu Asp

1845 1850 1855

Ser Gly Glu Ile Arg Trp Val Ile Asp Ser Val Val Gly Lys Glu Asp

1860 1865 1870

Gly Leu Gly Val Glu Asn Ser His Gly Ser Ala Ala Ile Ala Ser Ala

1875 1880 1885

Tyr Ser Arg Ala Tyr Lys Glu Thr Phe Thr Leu Thr Phe Val Thr Gly

1890 1895 1900

Arg Thr Val Gly Ile Gly Ala Tyr Leu Ala Arg Leu Gly Ile Arg Cys

1905 1910 1915 1920

Ile Gln Arg Leu Asp Gln Pro Ile Ile Leu Thr Gly Tyr Ser Ala Leu

1925 1930 1935

Asn Lys Leu Leu Gly Arg Glu Val Tyr Ser Ser His Met Gln Leu Gly

1940 1945 1950

Gly Pro Lys Ile Met Ala Thr Asn Gly Val Val His Leu Thr Val Ser

1955 1960 1965

Asp Asp Leu Glu Gly Val Ser Asn Ile Leu Arg Trp Leu Ser Tyr Val

1970 1975 1980

Pro Ala Tyr Ile Gly Gly Pro Leu Pro Val Thr Thr Pro Leu Asp Pro

1985 1990 1995 2000

Pro Asp Arg Pro Val Ala Tyr Ile Pro Glu Asn Ser Cys Asp Pro Arg

2005 2010 2015

Ala Ala Ile Arg Gly Val Asp Asp Ser Gln Gly Lys Trp Leu Gly Gly

2020 2025 2030

Met Phe Asp Lys Asp Ser Phe Val Glu Thr Phe Glu Gly Trp Ala Lys

2035 2040 2045

Thr Val Val Thr Gly Arg Ala Lys Leu Gly Gly Ile Pro Val Gly Val

2050 2055 2060

Ile Ala Val Glu Thr Gln Thr Met Met Gln Thr Ile Pro Ala Asp Pro

2065 2070 2075 2080

Gly Gln Leu Asp Ser Arg Glu Gln Ser Val Pro Arg Ala Gly Gln Val

2085 2090 2095

Gly Phe Pro Asp Ser Ala Thr Lys Thr Ala Gln Ala Leu Leu Asp Phe

2100 2105 2110

Asn Arg Glu Gly Leu Pro Leu Phe Ile Leu Ala Asn Trp Arg Gly Phe

2115 2120 2125

Ser Gly Gly Gln Arg Asp Leu Phe Glu Gly Ile Leu Gln Ala Gly Ser

2130 2135 2140

Thr Ile Val Glu Asn Leu Arg Thr Tyr Asn Gln Pro Ala Phe Val Tyr

2145 2150 2155 2160

Ile Pro Met Ala Ala Glu Leu Arg Gly Gly Ala Trp Val Val Val Asp

2165 2170 2175

Ser Lys Ile Asn Pro Asp Arg Ile Glu Cys Tyr Ala Glu Arg Thr Ala

2180 2185 2190

Lys Gly Asn Val Leu Glu Pro Gln Gly Leu Ile Glu Ile Lys Phe Arg

2195 2200 2205

Ser Glu Glu Leu Gln Asp Cys Met Ser Arg Leu Asp Pro Thr Leu Ile

2210 2215 2220

Asp Leu Lys Ala Lys Leu Glu Val Ala Asn Lys Asn Gly Ser Ala Asp

2225 2230 2235 2240

Thr Lys Ser Leu Gln Glu Asn Ile Glu Ala Arg Thr Lys Gln Leu Met

2245 2250 2255

Pro Leu Tyr Thr Gln Ile Ala Ile Arg Phe Ala Glu Leu His Asp Thr

2260 2265 2270

Ser Leu Arg Met Ala Ala Lys Gly Val Ile Lys Lys Val Val Asp Trp

2275 2280 2285

Glu Glu Ser Arg Ser Phe Phe Tyr Lys Arg Leu Arg Arg Arg Ile Ser

2290 2295 2300

Glu Asp Val Leu Ala Lys Glu Ile Arg Ala Val Ala Gly Glu Gln Phe

2305 2310 2315 2320

Ser His Gln Pro Ala Ile Glu Leu Ile Lys Lys Trp Tyr Ser Ala Ser

2325 2330 2335

His Ala Ala Glu Trp Asp Asp Asp Asp Ala Phe Val Ala Trp Met Asp

2340 2345 2350

Asn Pro Glu Asn Tyr Lys Asp Tyr Ile Gln Tyr Leu Lys Ala Gln Arg

2355 2360 2365

Val Ser Gln Ser Leu Ser Ser Leu Ser Asp Ser Ser Ser Asp Leu Gln

2370 2375 2380

Ala Leu Pro Gln Gly Leu Ser Met Leu Leu Asp Lys Met Asp Pro Ser

2385 2390 2395 2400

Arg Arg Ala Gln Leu Val Glu Glu Ile Arg Lys Val Leu Gly

2405 2410

<210> 3

<211> 7247

<212> DNA

<213> ACCase(突变型基因)

<400> 3

atgccgatgc ggccgtggga atttattatt ttaggccgca cagcccccat ctctccccca 60

cccctcggga tatccgcctt ctcccgcccg ctccgcctcc gcctccgcct ccgcctcgcc 120

gccgttgtcg acgccgcaag gatccaaacg ccgccccgcg tcgccttctc cgccttcttc 180

ttcttcttct tcttcttctc cgagggtctc tctcgggaag gtacagctgc ccgcctccct 240

gctcttattt atcgcgtgcc gttcattccg tgccttctcc agctccagat ccgcgcgccg 300

cacgccgatc cgcgcccggc cggttttagc tgcgctcatc atttcctcgc gttggctcag 360

ggtttaagct cctctttgtt aagtgggacg atttcacaca tctggggatt tatcttctct 420

ttgtatggca ctacacattt gagaaaccgt gcaattctac tgtttggtct tgctggcatc 480

attgacctcc caaatgacgc agcttcagaa gttgatattt cacatggttc cgaagatccc 540

agggggccta cggtcccagg ttcctaccaa atgaatggga ttatcaatga aacacataat 600

gggaggcatg cttcagtctc caaggttgtt gagttttgta cggcacttgg tggcaaaaca 660

ccaattcaca gtgtattagt ggccaacaat ggaatggcag cagctaagtt catgcggagt 720

gtccgaacat gggctaatga tacttttgga tcagagaagg caattcagct gatagctatg 780

gcaactccgg aggatctgag gataaatgca gagcacatca gaattgccga tcaatttgta 840

gaggtacctg gtggaacaaa caacaacaac tatgcaaatg tccaactcat agtggagata 900

gcagagagaa caggtgtttc tgctgtttgg cctggttggg gtcatgcatc tgagaatcct 960

gaacttccag atgcgctgac tgcaaaagga attgtttttc ttgggccacc agcatcatca 1020

atgcatgcat taggagacaa ggttggctca gctctcattg ctcaagcagc tggagttcca 1080

acacttgctt ggagtggatc acatgtggaa gttcctctgg agtgttgctt ggactcaata 1140

cctgatgaga tgtatagaaa agcttgtgtt actaccacag aggaagcagt tgcaagttgt 1200

caggtggttg gttatcctgc catgattaag gcatcttggg gtggtggtgg taaaggaata 1260

aggaaggttc ataatgatga tgaggttagg acattattta agcaagttca aggcgaagta 1320

cctggttccc caatatttat catgaggcta gctgctcaga gtcgacatct tgaagttcag 1380

ttgctttgtg atcaatatgg caacgtagca gcacttcaca gtcgagattg cagtgtacaa 1440

cggcgacacc aaaagataat cgaggaagga ccagttactg ttgctcctcg tgagactgtg 1500

aaagagcttg agcaggcagc acggaggctt gctaaagctg tgggttatgt tggtgctgct 1560

actgttgaat acctttacag catggaaact ggtgaatatt attttctgga acttaatcca 1620

cggctacagg ttgagcatcc tgtcactgag tggatagctg aagtaaattt gcctgcggct 1680

caagttgctg ttggaatggg tatacccctt tggcagattc cagagatcag gcgcttctac 1740

ggaatgaacc atggaggagg ctatgacctt tggaggaaaa cagcagctct agcgactcca 1800

tttaactttg atgaagtaga ttctaaatgg ccaaaaggcc actgcgtagc tgttagaata 1860

actagcgagg atccagatga tgggtttaag cctactggtg gaaaagtaaa ggagataagt 1920

ttcaagagta aaccaaatgt ttgggcctat ttctcagtaa agtctggtgg aggcatccat 1980

gaattcgctg attctcagtt cggacatgtt tttgcgtatg gaactactag atcggcagca 2040

ataactacca tggctcttgc actaaaagag gttcaaattc gtggagaaat tcattcaaac 2100

gtagactaca cagttgacct attaaatgcc tcagatttta gagaaaataa gattcatact 2160

ggttggctgg ataccaggat agccatgcgt gttcaagctg agaggcctcc atggtatatt 2220

tcagtcgttg gaggggcttt atataaaaca gtaactgcca acacggccac tgtttctgat 2280

tatgttggtt atcttaccaa gggccagatt ccaccaaagc atatatccct tgtctatacg 2340

actgttgctt tgaatataga tgggaaaaaa tatacaatcg atactgtgag gagtggacat 2400

ggtagctaca gattgcgaat gaatggatca acggttgacg caaatgtaca aatattatgt 2460

gatggtgggc ttttaatgca gctggatgga aacagccatg taatttatgc tgaagaagag 2520

gccagtggta cacgacttct tattgatgga aagacatgca tgttacagaa tgaccatgac 2580

ccatcaaagt tattagctga gacaccatgc aaacttcttc gtttcttggt tgctgatggt 2640

gctcatgttg atgctgatgt accatatgcg gaagttgagg ttatgaagat gtgcatgccc 2700

ctcttatcac ccgcttctgg tgtcatacat gttgtaatgt ctgagggcca agcaatgcag 2760

gctggtgatc ttatagctag gctggatctt gatgaccctt ctgctgttaa gagagctgag 2820

ccgttcgaag atacttttcc acaaatgggt ctccctattg ctgcttctgg ccaagttcac 2880

aaattatgtg ctgcaagtct gaatgcttgt cgaatgatcc ttgcggggta tgagcatgat 2940

attgacaagg ttgtgccaga gttggtatac tgcctagaca ctccggagct tcctttcctg 3000

cagtgggagg agcttatgtc tgttttagca actagacttc caagaaatct taaaagtgag 3060

ttggagggca aatatgagga atacaaagta aaatttgact ctgggataat caatgatttc 3120

cctgccaata tgctacgagt gataattgag gaaaatcttg catgtggttc tgagaaggag 3180

aaggctacaa atgagaggct tgttgagcct cttatgagcc tactgaagtc atatgagggt 3240

gggagagaaa gtcatgctca ctttgttgtc aagtcccttt ttgaggagta tctctatgtt 3300

gaagaattgt tcagtgatgg aattcagtct gatgtgattg agcgtctgcg ccttcaacat 3360

agtaaagacc tacagaaggt cgtagacatt gtgttgtccc accagagtgt tagaaataaa 3420

actaagctga tactaaaact catggagagt ctggtctatc caaatcctgc tgcctacagg 3480

gatcaattga ttcgcttttc ttcccttaat cacaaagcgt attacaagtt ggcacttaaa 3540

gctagtgaac ttcttgaaca aacaaaactt agtgagctcc gtgcaagaat agcaaggagc 3600

ctttcagagc tggagatgtt tactgaggaa agcaagggtc tctccatgca taagcgagaa 3660

attgccatta aggagagcat ggaagattta gtcactgctc cactgccagt tgaagatgcg 3720

ctcatttctt tatttgattg tagtgataca actgttcaac agagagtgat tgagacttat 3780

atagctcgat tataccagcc tcatcttgta aaggacagta tcaaaatgaa atggatagaa 3840

tcgggtgtta ttgctttatg ggaatttcct gaagggcatt ttgatgcaag aaatggagga 3900

gcggttcttg gtgacaaaag atggggtgcc atggtcattg tcaagtctct tgaatcactt 3960

tcaatggcca ttagatttgc actaaaggag acatcacact acactagctc tgagggcaat 4020

atgatgcata ttgctttgtt gggtgctgat aataagatgc atataattca agaaagtggt 4080

gatgatgctg acagaatagc caaacttccc ttgatactaa aggataatgt aaccgatctg 4140

catgcctctg gtgtgaaaac aataagtttc attgttcaaa gagatgaagc acggatgaca 4200

atgcgtcgta ccttcctttg gtctgatgaa aagctttctt atgaggaaga gccaattctc 4260

cggcatgtgg aacctcctct ttctgcactt cttgagttgg acaagttgaa agtgaaagga 4320

tacaatgaaa tgaagtatac cccatcacgg gatcgtcaat ggcatatcta cacacttaga 4380

aatactgaaa accccaaaat gttgcaccgg gtatttttcc gaacccttgt caggcaaccc 4440

agtgtatcca acaagttttc ttcgggccag attggtgaca tggaagttgg gagtgctgaa 4500

gaacctctgt catttacatc aaccagcata ttaagatctt tgatgactgc tatagaggaa 4560

ttggagcttc acgcaattag aactggccat tcacacatgt atttgcatgt attgaaagaa 4620

caaaagcttc ttgatcttgt tccagtttca gggaatacag ttttggatgt tggtcaagat 4680

gaagctactg catattcact tttaaaagaa atggctatga agatacatga acttgttggt 4740

gcaagaatgc accatctttc tgtatgccaa tgggaagtga aacttaagtt ggactgcgat 4800

ggtcctgcca gtggtacctg gaggattgta acaaccaatg ttactagtca cacttgcact 4860

gtggatatct accgtgagat ggaagataaa gaatcacgga agttagtata ccatcccgcc 4920

actccggcgg ctggtcctct gcatggtgtg gcactgaata atccatatca gcctttgagt 4980

gtcattgatc tcaaacgctg ttctgctagg aataatagaa ctacatactg ctatgatttt 5040

ccactggcat ttgaaactgc agtgaggaag tcatggtcct ctagtacctc tggtgcttct 5100

aaaggtgttg aaaatgccca atgttatgtt aaagctacag agttggtatt tgcggacaaa 5160

catgggtcat ggggcactcc tttagttcaa atggaccggc ctgctgggct caatgacatt 5220

ggtatggtag cttggacctt gaagatgtcc actcctgaat ttcctagtgg tagggagatt 5280

attgttgttg caaatgatat tacgttcaga gctggatcat ttggcccaag ggaagatgca 5340

ttttttgaag ctgttaccaa cctagcctgt gagaagaaac ttcctcttat ttatttggca 5400

gcaaattctg gtgctcgaat tggcatagca gatgaagtga aatcttgctt ccgtgttggg 5460

tggtctgatg atggcagccc tgaacgtggg tttcagtaca tttatctaag cgaagaagac 5520

tatgctcgta ttggcacttc tgtcatagca cataagatgc agctagacag tggtgaaatt 5580

aggtgggtta ttgattctgt tgtgggcaag gaagatggac ttggtgtgga gaatatacat 5640

ggaagtgctg ctattgccag tgcttattct agggcatata aggagacatt tacacttaca 5700

tttgtgactg gaagaactgt tggaatagga gcttatcttg ctcgacttgg catccggtgc 5760

atacagcgtc ttgaccagcc tattattctt acaggctatt ctgcactgaa caagcttctt 5820

gggcgggaag tgtacagctc ccacatgcag ttgggtggtc ccaaaatcat ggcaactaat 5880

ggtgttgtcc atcttactgt ttcagatgac cttgaaggcg tttctaatat attgaggtgg 5940

ctcagttatg ttcctgccta cattggtgga ccacttccag taacaacacc gttggaccca 6000

ccggacagac ctgttgcata cattcctgag aactcgtgtg atcctcgagc ggctatccgt 6060

ggtgttgatg acagccaagg gaaatggtta ggtggtatgt ttgataaaga cagctttgtg 6120

gaaacatttg aaggttgggc taagacagtg gttactggca gagcaaagct tggtggaatt 6180

ccagtgggtg tgatagctgt ggagactcag accatgatgc aaactatccc tgctgaccct 6240

ggtcagcttg attcccgtga gcaatctgtt cctcgtgctg gacaagtggg gcttttccag 6300

attctgcaac caagactgcg caggcattgc tggacttcaa ccgtgaagga ttacctctgt 6360

tcatcctcgc taactggaga ggcttctctg gtggacaaag agatcttttt gaaggaattc 6420

ttcaggctgg ctcgactatt gttgagaacc ttaggacata caatcagcct gcctttgtct 6480

acattcccat ggctgcagag ctacgaggag gggcttgggt tgtggttgat agcaagataa 6540

acccagaccg cattgagtgc tatgctgaga ggactgcaaa aggcaatgtt ctggaaccgc 6600

aagggttaat tgagatcaag ttcaggtcag aggaactcca ggattgcatg agtcggcttg 6660

acccaacatt aattgatctg aaagcaaaac tcgaagtagc aaataaaaat ggaagtgctg 6720

acacaaaatc gcttcaagaa aatatagaag ctcgaacaaa acagttgatg cctctatata 6780

ctcagattgc gatacggttt gctgaattgc atgatacatc cctcagaatg gctgcgaaag 6840

gtgtgattaa gaaagttgtg gactgggaag aatcacgatc tttcttctat aagagattac 6900

ggaggaggat ctctgaggat gttcttgcaa aagaaattag agctgtagca ggtgagcagt 6960

tttcccacca accagcaatc gagctgatca agaaatggta ttcagcttca catgcagctg 7020

aatgggatga tgacgatgct tttgttgctt ggatggataa ccctgaaaac tacaaggatt 7080

atattcaata tcttaaggct caaagagtat cccaatccct ctcaagtctt tcagattcca 7140

gctcagattt gcaagccctg ccacagggtc tttccatgtt actagataag atggatccct 7200

ctagaagagc tcaacttgtt gaagaaatca ggaaggtcct tggttga 7247

Claims

1.一种植物抗除草剂ACCase突变型蛋白，其中，所述ACCase突变型蛋白的氨基酸序列对应于野生型植物ACCase的氨基酸序列的第2097位发生突变。

2.根据权利要求1所述的ACCase突变型蛋白，其特征在于，所述ACCase突变型蛋白的氨基酸序列为野生型的对应基因第2097位氨基酸由色氨酸突变为缬氨酸、脯氨酸、精氨酸、丝氨酸、酪氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、色氨酸、赖氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、亮氨酸、丙氨酸以及谷氨酸中的一种。

3.根据权利要求1所述的ACCase突变型蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，其氨基酸序列经突变后，具有乙酰辅酶A羧化酶活性。

4.根据权利要求1所述的ACCase突变型蛋白，其特征在于，所述植物包括水稻、小麦、大麦、玉米、高粱、牧草或者草皮。

5.一种植物抗除草剂ACCase突变型基因，其特征在于，

(i)其编码根据权利要求1～4中任一项所述的蛋白；或

(ii)在严格条件下与(i)中限定的核苷酸序列杂交且编码具有乙酰辅酶A羧化酶活性的蛋白质的核苷酸序列；或

(iii)其核苷酸序列包含序列表中SEQ ID NO:2所示序列。

6.根据权利要求5所述的ACCase突变型基因，其特征在于，所述ACCase突变型基因导入到目标植物的基因中，以使所述目标植物具有对除草剂的抗性。

7.一种表达盒，其特征在于，所述表达盒包含权利要求5或6所述的ACCase突变型基因。

8.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体包含权利要求5或6所述的ACCase突变型基因。

9.一种权利要求1-4之一所述的ACCase突变型蛋白、权利要求5-6之一所述的ACCase突变型基因、权利要求7所述的表达盒以及权利要求8所述的重组载体的应用，其特征在于，所述应用包括将上述片段中的一种导入到目标植物中。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，在种植含有上述片段的植株的区域，使用下述除草剂进行除草：芳氧苯丙丙酸酯类(APP类)的禾草灵，炔草酸，氰氟草酯等；肟醚类环己二酮类(CHD类)及其衍生物类的烯草酮、噻草酮，环苯草酮，烯禾啶、三甲苯草酮。