CN113144014B

CN113144014B - 一种复方药物组合物及其应用

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Publication number: CN113144014B
Application number: CN202110429065.8A
Authority: CN
Inventors: 张晶晶; 杨洪军; 周瑞
Original assignee: Institute of Materia Medica of CAMS
Current assignee: Institute of Materia Medica of CAMS
Priority date: 2021-02-07
Filing date: 2021-04-21
Publication date: 2022-05-27
Anticipated expiration: 2041-04-21
Also published as: CN113144014A

Abstract

本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种复方药物组合物及其应用。所述复方药物组合物包括如下组分：黄连总碱、黄芪总皂苷和三七总皂苷。本发明具有治疗心、脑血管疾病以及糖尿病并发症效果显著、副作用小的优点。

Description

一种复方药物组合物及其应用

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种复方药物组合物及其应用。

背景技术

黄芪是一益气固表、对心脏有保护作用、能提高机体免疫功能的传统中药。它主要含有皂苷、多糖，此外还含有氨基酸、黄酮等成分。黄芪皂苷对急梗犬心有改善心肌收缩功能，缩小心肌梗塞面积，减轻心肌损伤的作用；黄芪皂苷能有效改善心肌缺血，保护心脑血管，改善心微循环。其主要起效成分为黄芪甲苷。现有黄芪药材中黄芪皂苷含量很低，约为0.04％。现有黄芪注射液补气作用较强。

三七(又名参三七、田七、南方人参)是五加科人参属植物，其根、叶、花等均具有药用价值，主要含有人参皂苷及其它物质。三七中提取的三七总皂苷具有有效改善血液循环的血流动力学，降低血液粘度，降低血脂，美容等功效，是常用的天然提取物。三七皂苷具有较好的活血化瘀作用，对改善脑血管循环、增加脑血流量有明显的效果，是治疗脑梗死的有效制剂，三七皂苷对心血管亦有很好的扩张作用，可降低外周阻力、减少心肌耗氧量、促进侧枝循环、抑制血小板凝集，对冠心病心绞痛有较好的疗效。现有三七皂苷注射液具有较好的活血化瘀作用。

黄连，中药名。别名：味连、川连、鸡爪连，为毛茛科、黄连属多年生草本植物。黄连主治湿热痞满，呕吐吞酸，泻痢，黄疸，高热神昏，心火亢盛，心烦不寐，心悸不宁，血热吐衄，目赤，牙痛，消渴，痈肿疗疮；外治湿疹，湿疮，耳道流脓。

脑血管病(cerebrovascular disease)，泛指脑部血管的各种疾病，包括脑动脉粥样硬化、血栓形成、狭窄、闭塞、脑动脉炎、脑动脉损伤、脑动脉瘤、颅内血管畸形、脑动静脉瘘等，其共同特点是引起脑组织的缺血或出血性意外，导致患者的残废或死亡。

心血管疾病是一大类疾病，常见的有冠状动脉疾病、高血压、血脂异常、先天性心脏病、瓣膜疾病、心律失常等。人们日常生活中最常见的冠心病属于冠状动脉疾病，大多是由于冠状动脉粥样硬化所引起的，平时一般没有症状，随着疾病的进展，当冠状动脉狭窄越来越重时，多于劳动后出现心前区的胸闷或者胸痛，考虑为冠心病、心绞痛。常见的其他心血管疾病，例如高血压、高血脂、心律失常，发病率都很高。

糖尿病是一种以慢性血葡萄糖水平增高为特征的代谢疾病，是由胰岛素分泌和/或作用缺陷所引起。糖尿病不是单一疾病，而是复合病因引起的综合征，是包括遗传及环境因素在内的多种因素共同作用的结果，胰岛素是由胰岛β细胞合成和分泌，经血液循环到达体内各组织器官的靶细胞，与特异受体结合并引发细胞内物质代谢效应，整个过程中任何一个环节发生异常均可导致糖尿病。

长期碳水化合物以及脂肪、蛋白质代谢紊乱可引起多系统损害，导致眼、肾、神经、心脏、血管等组织器官的慢性进行性病变、功能减退及衰竭，病情严重或应激时可发生急性严重代谢紊乱，这就是糖尿病并发症。糖尿病的慢性并发症可遍及全身各个重要器官，发病机制极为复杂，尚未完全阐明，目前认为与遗传易感性、胰岛素抵抗、高血糖、氧化应激等多方面因素的相互影响有关。主要慢性并发症有：糖尿病血管病变、肾脏病变、心脏病变、肝脏病变、视网膜病变、神经病变等等。

传统医学虽有一些用于防治心脑血管病和糖尿病的复方(如复方丹参等)，但其成分复杂、配方之间的关系不清、组方不精练、质量难控制。

中国专利申请CN1511534A公开了一种用于防治心脑血管病和糖尿病的组合物及其应用。三七总皂苷及阿魏酸虽然对心脑血管疾病及糖尿病并发症有一定的疗效，但其综合疗效有待提高。发明产品由以下重量百分比的原料组成：三七总皂苷5％-95％、阿魏酸5％-95％。三七总皂苷与阿魏酸两者伍用可以互相协同，共同调节血液功能、治疗或改善因血液系统或心脑血管变化或血糖变化而引起的疾病或功能失调。产品用途是配以适量药用或食用辅料，制成医药或食品上可以接受的制剂。积极效果是综合疗效好、组方精练、质量易控制。但是该专利申请制备的组合物治疗效果仍有待进一步提高。

因此，利用开发一种能解决上述技术问题的复方药物组合物及其应用是非常必要的。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种治疗心、脑血管疾病以及糖尿病并发症效果显著、副作用小的复方药物组合物及其应用。

本发明是通过以下技术方案予以实现的：

一种复方药物组合物，包括如下组分：黄连总碱、黄芪总皂苷和三七总皂苷。

优选地，所述的复方药物组合物，按照重量份数计，包括如下组分：黄连总碱5-10份、黄芪总皂苷5-10份和三七总皂苷1-3份。

更优选地，所述的复方药物组合物，按照重量份数计，包括如下组分：黄连总碱5份、黄芪总皂苷5份和三七总皂苷1份。

优选地，所述黄连总碱的制备方法包括如下步骤：将黄连粗粉采用乙醇提取，收集提取后的上清液，干燥，得黄连总碱。

更优选地，所述黄连粗粉与乙醇的质量体积比为1:0.8-1.2g/mL。

更优选地，所述提取的温度为20-30℃，所述提取的时间为20-30h。

更优选地，所述提取的次数为2-4次。

更优选地，所述乙醇的体积浓度为75-85％。

更优选地，所述黄连总碱的制备方法包括如下步骤：

将黄连粗粉(即干燥、粉碎后的黄连)采用0.8-1.2倍量(料液比为1:0.8-1.2g/mL)的75-85％(v/v)乙醇在20-30℃提取20-30h，用同样的方法提取2-4次，收集提取后的上清液，在旋转蒸发器下蒸发至干燥，得黄连总碱。

优选地，所述黄芪总皂苷购自成都克洛玛生物科技有限公司，货号CHB-QT-002；

优选地，所述三七总皂苷购自北京索莱宝科技有限公司，货号SS9450。

本发明还涉及一种制剂，包括上述的复方药物组合物。

优选地，所述制剂的剂型为注射剂或口服制剂。

本发明还涉及上述的复方药物组合物或上述的制剂在制备修复神经元细胞损伤的药物中的应用。

本发明还涉及上述的复方药物组合物或上述的制剂在制备治疗脑血管相关疾病的药物中的应用，所述脑血管相关疾病包括瘀血闭阻所致的中风、缺血性脑病和脑血栓中的至少一种。

瘀血闭阻所致的中风，症见：口眼歪斜，言语蹇涩，肢体麻木，活动不利等症。

本发明还涉及上述的复方药物组合物或上述的制剂在制备治疗心血管相关疾病的药物中的应用，所述心血管相关疾病包括瘀血闭阻所致的胸痹、冠心病、心绞痛、心肌梗塞和瘀血型肺心病中的至少一种。

瘀血闭阻所致的胸痹，症见：胸痛，胸闷，心悸。

本发明还涉及上述的复方药物组合物或上述的制剂在制备治疗糖尿病并发症的药物中的应用，所述糖尿病并发症包括糖尿病脑病、糖尿病心肌病和糖尿病肾病中的至少一种。

本发明的有益效果是：

脑血管疾病如缺血性脑病、脑血栓中脑部缺血导致神经元死亡和神经功能损伤是导致脑缺血后神经功能退化、病理改变的重要原因，并极大地影响患者神经功能的恢复。本发明能够有效地保护神经元细胞免受损伤，通过优化黄连总碱、黄芪总皂苷和三七总皂苷三者比例配伍，三种组分发生了协同作用，能够极大提高其神经元的保护作用，对脑血管疾病的治疗具有重要的作用。

糖尿病性脑病是糖尿病的严重并发症，主要表现为反应迟钝、记忆力下降，严重则出现脑血栓、脑中风及老年痴呆等情况，其中会引起相关的脑部神经元细胞的死亡。而本申请的组合物能够有效地保护神经元细胞免受损伤，对糖尿病脑病具有重要保护作用。

除此之外，氧化应激损伤是糖尿病脑病的关键环节，本发明的组合物对氧化应激损伤具有重要的保护作用，因此，本发明对糖尿病脑病等糖尿病并发症具有重要的保护作用。

附图说明

图1为黄连总碱、黄芪总皂苷、三七总皂苷及实施例1复方药物组合物对脑缺血再灌注大鼠的神经功能影响。

图2为黄连总碱、黄芪总皂苷、三七总皂苷及实施例1复方药物组合物用于脑缺血再灌注大鼠给药后的脑片拍照结果。

图3为黄连总碱、黄芪总皂苷、三七总皂苷及实施例1复方药物组合物对脑缺血再灌注大鼠的脑梗死率影响。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

各个实施例和对比例的黄芪总皂苷购自成都克洛玛生物科技有限公司，货号CHB-QT-002，批号CHB200105。三七总皂苷购自北京索莱宝科技有限公司，货号SS9450。

实施例1

一种复方药物组合物，按照重量份数计，包括如下组分：黄连总碱5份、黄芪总皂苷5份和三七总皂苷1份。

所述黄连总碱的制备方法包括如下步骤：将黄连粗粉采用1倍量(料液比为1g/mL)的80％(v/v)乙醇在25℃提取24h，用同样的方法提取3次，收集提取后的上清液，在旋转蒸发器下蒸发至干燥，得黄连总碱。

实施例2

一种复方药物组合物，按照重量份数计，包括如下组分：黄连总碱10份、黄芪总皂苷10份和三七总皂苷3份。

所述黄连总碱的制备方法包括如下步骤：将黄连粗粉采用1.2倍量(料液比为1:1.2g/mL)的75％(v/v)乙醇在30℃提取30h，用同样的方法提取4次，收集提取后的上清液，在旋转蒸发器下蒸发至干燥，得黄连总碱。

实施例3

一种复方药物组合物，按照重量份数计，包括如下组分：黄连总碱8份、黄芪总皂苷8份和三七总皂苷2份。

所述黄连总碱的制备方法包括如下步骤：将黄连粗粉采用0.8倍量(料液比为1:0.8g/mL)的85％(v/v)乙醇在20℃提取20h，用同样的方法提取2次，收集提取后的上清液，在旋转蒸发器下蒸发至干燥，得黄连总碱。

对比例1

与实施例1的区别仅在于黄连总碱、黄芪总皂苷和三七总皂苷的用量配比不同，为黄连总碱3份、黄芪总皂苷2份和三七总皂苷4份，其余条件均相同。

对比例2

与实施例1的区别仅在于复方药物组合物的组成不同，不含黄连总碱，其余条件均相同，具体如下：

一种复方药物组合物，按照重量份数计，包括如下组分：黄芪总皂苷5份和三七总皂苷1份。

对比例3

与实施例1的区别仅在于复方药物组合物的组成不同，不含黄芪总皂苷，其余条件均相同，具体如下：

一种复方药物组合物，按照重量份数计，包括如下组分：黄连总碱5份和三七总皂苷1份。

对比例4

与实施例1的区别仅在于复方药物组合物的组成不同，不含三七总皂苷，其余条件均相同，具体如下：

一种复方药物组合物，按照重量份数计，包括如下组分：黄连总碱5份和黄芪总皂苷5份。

测试例1

各实施例和对比例的药物组合物在测试过程中，称取黄连总碱、黄芪总皂苷和三七总皂苷各5mg，分别加入1mL二甲基亚砜(DMSO)溶解，制备为储备液。将各个储备液按照各组合物中有效成分的用量配比加入DMEMF12培养基中，混匀后进行梯度稀释，得到药物组合物溶液，药物组合物溶液的浓度为0.55μg/mL，具体如下：

1、Test 1：黄连总碱(实施例1制备的黄连总碱)0.55μg/mL；

2、Test 2：黄芪总皂苷0.55μg/mL；

3、Test 3：三七总皂苷0.55μg/mL；

4、Implement 1：实施例1(组合物总用量0.55μg/mL)，黄连总碱5份、黄芪总皂苷5份和三七总皂苷1份；

5、Implement 2：实施例2(组合物总用量0.55μg/mL)，黄连总碱10份、黄芪总皂苷10份和三七总皂苷3份；

6、Implement 3：实施例3(组合物总用量0.55μg/mL)，黄连总碱8份、黄芪总皂苷8份和三七总皂苷2份；

7、Contrast 1：对比例1(组合物总用量0.55μg/mL)，黄连总碱3份、黄芪总皂苷2份和三七总皂苷4份，其他条件与实施例1均相同；

8、Contrast 2：对比例2(组合物总用量0.55μg/mL)，黄芪总皂苷5份，三七总皂苷1份，不含黄连总碱，其他条件与实施例1均相同。

9、Contrast 3：对比例3(组合物总用量0.55μg/mL)，黄连总碱5份和三七总皂苷1份，其他条件与实施例1均相同。

10、Contrast 4：对比例4(组合物总用量0.55μg/mL)，黄连总碱5份和黄芪总皂苷5份，其他条件与实施例1均相同。

使用成年大白鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤的细胞系PC12细胞，用DMEMF12完全培养基培养于37℃、5％CO₂培养箱中。当细胞生长至80％汇合时，弃去培养液，加入3mL磷酸缓冲盐溶液(Phosphate-Buffered Saline，PBS，pH＝7.2)，轻轻晃动洗涤细胞，弃去PBS，加入1.5mL 0.25％胰蛋白酶消化细胞，待细胞变圆脱落后，加入4mL完全培养基停止消化，并将其转移至离心管中，1000rpm离心4min，弃去上层液体，收集细胞沉淀，加入5mL完全培养基重悬。将分离的单个细胞按照1×10⁵密度接种到96孔板中，体积为100μL，边缘孔加100μLPBS防止蒸发，置于37℃、5％CO₂培养箱中培养。24h后弃去培养液，模型组(model)和正常对照组(control，即正常细胞，不进行任何处理)按照100μL/孔加入DMEMF12基础培养基，黄连总碱(TA)、黄芪总皂苷(AS)、三七总皂苷(PNS)以及实施例1-3和对比例1-2给药组分别按照100μL/孔加入用DMEMF12基础培养基稀释的药物组合物溶液，置于37℃、5％CO₂培养箱中培养24h后，细胞进行全面换液，正常对照组(control)按照100μL/孔加入DMEMF12基础培养基，模型组(model)和给药组按照100μL/孔加入用DMEMF12基础培养基配置的200μM的H₂O₂，置于37℃、5％CO₂培养箱中诱导1h，加入10μL CCK-8溶液孵育1h，酶标仪测定450nm处的OD值。其中，细胞活力(％)＝(A实验-A空白)÷(A对照-A空白)×100％，其中A代表OD值。当细胞活力为50±10％时，模型成功。所述基础培养基为DMEMF12培养基，完全培养基为DMEMF12培养基+10％胎牛血清+1％双抗(10000单位/mL的青霉素和10000μg/mL链霉素)。细胞活力测试结果重复6次，取平均值，结果如表1所示。

表1

测试例2

成年雄性SPF级SD大鼠，体重为240±10g，购自北京金牧阳实验动物养殖有限责任公司。适应性喂养3d，自由进食水，室温22～26℃，湿度55％。大鼠随机分为6组，每组8只，(1)假手术组(sham)；(2)模型组(I/R)；(3)黄连总碱组(165mg^-1·1000g^-1·d^-1，I/R+CRA)；(4)黄芪总皂苷组(165mg^-1·1000g^-1·d^-1，I/R+AS)；(5)三七总皂苷组(165mg^-1·1000g^-1·d^-1，I/R+PNS)；(6)黄连总碱+黄芪总皂苷+三七总皂苷组(75+75+15mg^-1·1000g^-1·d^-1，I/R+CAP)，分组后每天灌胃给药1次，第6天给药后1h进行手术。

大鼠用戊巴比妥钠(50mg·kg^-1)腹腔注射麻醉并固定于手术台上进行脑缺血再灌注造模，剃毛器去颈部手术区毛发，碘伏消毒，经颈正中剪开皮肤、钝性分离皮下结缔组织及肌肉，使颈总动脉和颈外动脉暴露，小心分离血管，结扎颈外动脉远心端和颈总动脉近心端，在颈总动脉另打一松结作为固定线，动脉夹夹闭颈内动脉，颈总动脉两线之间剪一小口，向颈内方向插入线栓，扎紧固定线，松开颈内动脉动脉夹，轻推线栓入颈内动脉，一般插入18～20mm，松开颈总动脉近心端动脉夹。90min后，轻轻拔出线栓，扎紧颈总动脉固定线。假手术组不插入线栓，其余手术操作相同。

术后24h进行Longa 5神经功能学评分，正常，无症状为0分；患侧前爪不能完全伸展为1分；行走时，大鼠向患侧非追尾转圈为1.5分，追尾转圈为2分；行走时，大鼠身体向患侧倾倒为3分；不能自发行走，有意识丧失为4分；死亡为5分。评分结果如图1所示。其中，CRA为黄连总碱，AS为黄芪总皂苷，PNS为三七总皂苷，CAP为实施例1复方药物组合物，与sham相比#p＜0.05，与I/R相比*p＜0.05，与CAP相比^p＜0.05。

评分后大鼠用戊巴比妥钠(50mg·kg^-1)腹腔注射麻醉，断头取脑，用刀片以2mm为距将大脑按冠状面切成6片。然后将脑片置于37℃、1％红四氮唑(Triphenyltetrazoliumchloride,TTC)中避光染色20min，当脑片显色红白对比鲜明后(红色为正常脑组织，白色为脑梗死部位)，移入4％组织固定液中固定，拍照，结果如图2所示，使用Image J进行脑梗死率分析，结果如图3所示。其中，CRA为黄连总碱，AS为黄芪总皂苷，PNS为三七总皂苷，CAP为实施例1复方药物组合物，与sham相比#p＜0.05，与I/R相比*p＜0.05，与CAP相比^p＜0.05。

上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。

Claims

1.一种复方药物组合物或一种制剂在制备治疗脑缺血再灌注损伤药物中的应用，所述复方药物组合物，按照重量份数计，由如下组分组成：黄连总碱5-10份、黄芪总皂苷5-10份和三七总皂苷1-3份，所述制剂包括所述复方药物组合物；

所述黄连总碱的制备方法包括如下步骤：将黄连粗粉采用乙醇提取，收集提取后的上清液，干燥，得黄连总碱；

所述黄连粗粉与乙醇的质量体积比为1:0.8-1.2g/mL；所述提取的温度为20-30℃，所述提取的时间为20-30h；所述提取的次数为2-4次。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述制剂的剂型为注射剂或口服制剂。