CN113135918A

CN113135918A - 一种吡唑并[1,2]二氮杂类化合物

Info

Publication number: CN113135918A
Application number: CN202010062283.8A
Authority: CN
Inventors: 张贵民; 黄传青; 白文钦; 刘忠
Original assignee: Lunan Pharmaceutical Group Corp
Current assignee: Lunan Pharmaceutical Group Corp
Priority date: 2020-01-20
Filing date: 2020-01-20
Publication date: 2021-07-20
Anticipated expiration: 2040-01-20
Also published as: CN113135918B

Abstract

本发明提供了一种吡唑并[1,2]二氮杂类化合物和其制备方法与应用。本发明提供的化合物具有显著的选择性BTK激酶抑制作用，有效的改善了现有BTK抑制剂的脱靶效应现象，可以提高药物靶向性，从而减少毒副作用。

Description

一种吡唑并[1,2]二氮杂类化合物

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体为一种吡唑并[1,2]二氮杂类BTK抑制剂，以及这种抑制剂的制备方法和用途。

背景技术

BTK(布鲁顿酪氨酸激酶)是B细胞受体(BCR)信号通路的关键调节因子，在不同类型恶性血液病中广泛表达，参与B细胞的增殖、分化与凋亡，因此被作为治疗恶性血液肿瘤的重要靶点。BTK属于酪氨酸激酶抑制剂型受体，其在细胞增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及细胞凋亡的过程中发挥着至关重要的作用。研究表明在许多实体肿瘤中存在BTK的过度表达或异常突变，通过抑制BTK酪氨酸的激酶活性，可抑制肿瘤的生长。通过对BTK结构的分析，选择其特定部位作为靶点，干扰其信号传导，从而达到抑制肿瘤细胞生长的目的，已经成为开发抗肿瘤药物的新思路。

研究表明酪氨酸激酶抑制剂通过选择性地靶向BTK胞内酪氨酸激酶催化区，与ATP竞争性地结合激酶的口袋，抑制酪氨酸的磷酸化，中断激酶催化引起的下游信号传导，从而达到阻断BTK过度表达的目的。根据激酶抑制剂与靶点蛋白的结合方式可以分为可逆型抑制剂和不可逆型抑制剂。

2013年11月依鲁替尼被FDA批准，是全球唯一一个上市的BTK抑制剂，目前已上市适应症包括慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、

巨球蛋白血症。专利WO2012/158843、WO 2012158764、WO 2011153514、WO 2011046964、US20100254905、US 20100144705、US7718662、WO 2008054827和WO 2008121742均报道了有关依鲁替尼的研究情况；专利WO 2013010136、US 9090621、WO 2015127310、WO 2015095099和US 2014221333中披露了做为BTK抑制剂的研究结果。2016年依鲁替尼全球销售额超过30亿美元，是全球最畅销的白血病药物，虽然依鲁替尼自上市以来作为治疗白血病的重磅药物，但在临床中诸如心房颤动、腹泻、皮疹、关节痛和出血等不良事件时有发生，另外依鲁替尼也已知具有胃肠副作用，其被认为是继发的EGFR抑制活性的结果，主要是因为依鲁替尼的选择性较低，在对BTK具有抑制作用的同时，也对EGFR、TEC、ITK、HER-2等其他激酶具有相当的抑制作用，因此会出现比较常见的副作用就是针对其他激酶的脱靶效应。

尽管目前为止，不可逆型嘧啶类BTK抑制剂依鲁替尼获得了不错的临床效果，但随着其广泛使用，其耐药性逐渐显现。有研究证据表明，BTKC481S突变是与此相关的主要耐药机制之一。另外，还有相当一部分患者对其治疗不明显，提示BTK抑制剂单药作用的局限性，研究发现BTK抑制剂与某些靶向药物或化疗药物的联合治疗可能优于单药的疗效，但是可以预见的是患者的获得性抗性和药物的毒副作用的问题仍没有彻底的解决，因此本领域内仍需要不断的开发新型的具有BTK抑制活性的药物，尤其是能够靶向抑制C481S突变型的抑制剂，从而提供新的精准治疗方案。因此希望一种具有高BTK抑制性和靶向抑制C481S突变的抑制剂，该抑制剂对EGFR具有低抑制性以减少或避免胃肠副作用的BTK。

发明内容

本发明的目的在于提供一种吡唑并[1,2]二氮杂类BTK抑制剂，本发明提供的化合物对多种癌细胞具有较强的体外抑制作用，具备成药潜质，本发明通过简单方法高效的合成了关键中间体及目标化合物。

本发明提供的如式(I)的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，通过研究发现，其结构中吡唑5位邻甲氧基苯磺酰胺可在BTK酪氨酸激酶结合区与靶点的氨基酸形成强氢键，从而极大的增强本化合物与BTK靶点的亲和力。而[1,2]二氮杂3位引入取代基能提高化合物与BTK铰链区的氢键作用，进而增强二者的亲和力。而本发明提供的化合物的整体延展性大，可以伸入溶剂暴露区，提高了该化合物与溶剂的亲和力，从而极大的改善了化合物的溶解性，有助于其快速的渗透癌变细胞的膜组织，以更好的发挥其细胞毒性。

本发明第一方面，提供一种如式Ⅰ所示的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、前药、立体异构体或互变异构体。

其中：

R₁选自：C_3-6环烷基、C_3-6杂环烷基、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、卤代C_1-6烷氧基、硫代C_1-6烷氧基、芳基、杂芳基；其中所述C_3-6环烷基、C_3-6杂环烷基、芳基、杂芳基还可被一至多个R₃基团进一步取代；

R₂选自：-C(O)-R₄、-S(O)₂-R₄；

X选自：H、卤素；

其中R₁可以进一步的连接选自卤素、羟基、C_1-3烷基-R₄、-C(O)-R₄、-S(O)₂-R₄、C_1-3烷氧基-R₄、-NR₅R₆的基团；

其中R₄选自C_1-3烷基、C_1-3卤代烷基、羟基、-NHR₇、C_1-3烷氧基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基；其中R₇选自C_3-6环烷基、芳基、杂芳基、C_1-3烷基、C_1-3烷基胺；

其中R₅独立的选自H或C_1-3烷基；R₆独立的选自H、C_1-3烷基、C_3-6环烷基、C_1-3卤代烷基、芳基、杂芳基；

其中R₃独立的选自C_1-3烷基、烷氧基、氨基、羟基氨基、酰胺基、脲、氧代、卤代、吡唑基、咪唑基、三唑基、CN、-NHC(O)(C_1-3烷基)、酰基、磺酰基、磺酰胺基、-(CH₂)_m(C_3-7杂环烷基)；各m独立的为0、1、2或3；

其中所述C_3-6环烷基、C_3-6杂环烷基、芳基、杂芳基还可被一至多个R₃基团进一步取代。

本发明优选方案，如式(Ⅰ)所示的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，所述R₁选自C_3-6环烷基、C_3-6杂环烷基、芳基、杂芳基，所述R₁还可被一至多个R₃基团进一步取代。

本发明优选方案，如式(I)所示的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，所述R₁选自C_3-6杂环烷基、杂芳基，所述R₁还可被一至多个R₃基团进一步取代。

本发明优选方案，如式(I)所示的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，所述R2选自-C(O)-R₄、-S(O)₂-R₄；所述R4选自-NHR₇、芳基、杂芳基，所述芳基、杂芳基均可被取代基取代。

本发明优选方案，如式(I)所示的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，所述R1选自C_3-6杂环烷基、芳基、杂芳基，其中R₁还可被一至多个R₃基团进一步取代，R₃选自C_1-3烷基、烷氧基、氨基、羟基氨基、酰胺基、脲、氧代、卤代、吡唑基、咪唑基、三唑基、CN、-NHC(O)(C_1-3烷基)、酰基、磺酰基、磺酰胺基、-(CH₂)_m(C_3-7杂环烷基)；各m独立的为0、1、2或3；R₂选自-C(O)-R₄、-S(O)₂-R₄，其中R₄选自-NHR₇、芳基、杂芳基，所述芳基、杂芳基均可被取代基取代。

本发明优选方案，如式(I)所示的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，所述R₁选自C_3-6杂环烷基、芳基、杂芳基，其中R₁还可被一至多个R₃基团进一步取代，R₃选自C_1-3烷基、烷氧基、氨基、羟基氨基、酰胺基、脲、氧代、卤代；R₂选自-C(O)-R₄、-S(O)₂-R₄，其中R₄选自-NHR₇、芳基、杂芳基，所述芳基、杂芳基均可被取代基取代。

本发明优选方案，如式(I)所示的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，具体选自下组：

本发明优选方案，一种如式(I)的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，所述药学上可接受的盐为无机酸盐或有机酸盐，所述无机酸盐选自盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、酸式磷酸盐；所述的有机酸盐选自甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、丙酮酸盐、羟乙酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、水杨酸盐、苦味酸盐、谷氨酸盐、水杨酸盐、抗坏血酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐。

本发明第二方面，提供一种如式(I)的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物的制备方法。本发明提供的化合物可以使用本领域技术人员已知的多种方式制备得到，也可以使用本文描述的方法及有机化学合成方法或者本领域技术人员所理解的其变化来合成。优选的方法包括但不限于本文所列举的方法：

其中R为本发明式(I)化合物所定义。

优选的如式(I)所示的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物的制备方法，其包括以下步骤：

步骤1：化合物1丙二腈在乙醇钠的条件下自身发生聚合反应生成中间体2；

步骤2：中间体2与水合肼加热回流发生闭环反应生成中间体3；

步骤3：中间体3在碱性条件下回流发生水解反应生成中间体4；

步骤4：中间体4加热至回流、脱水生成中间体5；

步骤5：中间体5与水合肼回流反应生成中间体6；

步骤6：中间体6与R₂发生酰胺化反应生成中间体7；

步骤7：中间体7与三溴氧磷回流反应生成中间体8；

步骤8：中间体8与胺基类化合物R₁发生取代反应生成目标化合物9即式I化合物。

优选方案，步骤1中反应的溶剂为乙醇、甲醇或水，其中特别优选乙醇。

优选方案，步骤1中反应的温度为25℃～100℃，其中特别优选80℃。

优选方案，步骤1中的化合物1和乙醇钠的摩尔比为1:1.05～1.5，其中特别优选1:1.2。

优选方案，步骤2中反应的溶剂为水、叔丁醇、正丁醇、N,N-二甲基甲酰胺，其中特别优选水做溶剂。

优选方案，步骤2中反应的温度为60-100℃，特别优选90℃。

优选方案，步骤3中的中间体3与氢氧化钠的摩尔比为1:1.01-10，其中特别优选1:5。

优选方案，步骤3中的中间体3与水的摩尔比为1:1.01-20，其中特别优选1:10。

优选方案，步骤4中反应的溶剂为二甲基亚砜、乙酸酐、N,N-二甲基甲酰胺或正辛醇，其中特别优选乙酸酐。

优选方案，步骤4中反应的温度为80-110℃，其中特别优选100℃。

优选方案，步骤4中的中间体4与DCC(二环己基碳二亚胺)的摩尔比为1:1.01-1.50，其中特别优选1:1.30。

优选方案，步骤5中反应的溶剂为水合肼、乙酸、叔丁醇、正丁醇或N,N-二甲基甲酰胺，其中特别优选乙酸。

优选方案，步骤5中反应的温度为80-140℃，特别优选120℃。

优选方案，步骤5中的中间体5与水合肼的摩尔比为1:1.01～1:1.50，特别优选1:1.1。

优选方案，步骤6中的R₂选自2-甲氧基苯磺酸、2-甲基苯甲酸、2-乙基苯甲酸、2-甲氧基苯甲酸、4-甲氧基吡啶-3-羧酸或3-甲基环戊-1,3-二烯-1-羧酸。

优选方案，步骤6中的中间体6与R₂的摩尔比为1:1.01-1.50，其中特别优选1:1.10。

优选方案，步骤6中的中间体6与R₂发生酰胺化反应的催化剂为1-羟基苯并三唑和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸；其中，R₂与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸的摩尔比为1:1.01-1.50，其中特别优选1:1.05；R₂与1-羟基苯并三唑的摩尔比为1:1.01-1.50，其中特别优选1:1.05。

优选方案，步骤6中反应的溶剂为二氯甲烷、二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺，其中特别优选二氯甲烷。

优选方案，步骤6中反应的温度为0-100℃，特别优选25℃。

优选方案，步骤7中的中间体7与三溴氧磷的摩尔比为1:2.01-4.0，其中特别优选1:2.50。

优选方案，步骤7中反应的溶剂为二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、二氧六环、N,N-二甲基甲酰胺，其中特别优选1,2-二氯乙烷。

优选方案，步骤7中反应的温度为60-140℃，特别优选120℃。

优选方案，步骤8中的中间体8与烷基胺的摩尔比为1:1.01～1.50，其中特别优选1:1.10。

优选方案，步骤8中反应的溶剂为1,2-二氯乙烷，异丙醇、二氧六环、正丁醇、N,N-二甲基甲酰胺，其中特别优选异丙醇。

本发明第三方面，提供一种药物组合物，所述的药物组合物包括：治疗有效量的本发明所述的式(I)吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，或其药学上可接受的盐、互变异构体、光学异构体、药学上可接受的溶剂合物中的一种或多种，以及任选的药学上可接受的载体、赋形剂、佐剂、辅料或稀释剂。

优选方案，所述的药物组合物可用于治疗与酪氨酸激酶表达异常或酪氨酸激酶活性较高相关的疾病。

优选方案，所述的与酪氨酸激酶表达异常或酪氨酸激酶活性较高相关的疾病包括但不限于细胞异常增值、形态变化、运动功能亢进、血管新生疾病、肿瘤生长、肿瘤转移疾病。

优选方案，一种BTK抑制剂，所述的抑制剂含有抑制有效量的如本发明所述的式(I)吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，或其药学上可接受的盐、互变异构体、光学异构体、药学上可接受的溶剂合物中的一种或多种，以及任选的药学上可接受的载体、赋形剂、佐剂、辅料或稀释剂。

本发明化合物可直接用于预防和治疗，或者优选地以药物组合物的形式。尽管活性成份能够单独给药，但优选为药物制剂或组合物的形式。因此，本发明提供了一种药物制剂，其包含本发明的化合物以及药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体(在这里统称为“载体”材料)。本发明的药物组合物可采取下文所述的药物制剂的形式。因此，本发明涉及一种药物组合物，其包含至少一种式(I)的化合物以及常规的赋形剂。

用于口服给药的示例性组合物包括：悬浮剂，其可包含例如微晶纤维素用于赋予体积，藻酸或藻酸钠作为助悬剂，甲基纤维素作为粘度增强剂，以及甜味剂或调味剂；速释片剂，其可包含例如微晶纤维素、磷酸二钙、淀粉、硬脂酸镁、硫酸钙、山梨糖醇、葡萄糖和/或乳糖和/或其他赋形剂、粘合剂、膨胀剂、崩解剂、稀释剂和润滑剂。合适的粘合剂包括：淀粉、明胶、天然的糖如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味剂、天然和合成树胶如阿拉伯胶、黄芪胶或藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇和蜡等。崩解剂包括但不限于：淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土和黄原胶等。式(I)的化合物也可通过舌下和/或含服方式经口腔递送。模制片、压制片或冻干片是可使用的示例性形式。示例性的组合物包括将本发明化合物与快速溶解的稀释剂如甘露醇、乳糖、蔗糖和/或环糊精。这些制剂中还可包括高分子量赋形剂如纤维素(微晶粉末纤维素)或聚乙二醇(PEG)。这些制剂也可包括有助于粘膜粘附的赋形剂，例如羟丙基纤维素(HPC)，羟丙基甲基纤维素(HPMC)，羧甲基纤维素钠(SCMC)，马来酸酐共聚物(例如，Gantrez)和控制释放的试剂如聚丙烯酸类共聚物(例如Carbopo1934)。还可加入润滑剂，助流剂，调味剂，着色剂和稳定剂以便于制备和使用。这些剂型中使用的润滑剂包括：油酸钠，硬脂酸钠，硬脂酸镁，苯甲酸钠，乙酸钠和氯化钠等。对于液体形式的口服给药，口服药物组分可以与任何口服、非毒性的药学上可接受的惰性载体如乙醇、甘油和水等组合

本发明的药物制剂包括适用于口服、胃肠外[包括皮下、皮内、肌内、静脉内(推注或输注)和关节内]，吸入(包括可通过各种类型的计量加压气溶胶的方式产生的细颗粒粉剂或喷雾剂)，喷雾器或吸入器，直肠、腹膜内和局部(包括皮肤、含服、舌下和眼内)给药的制剂，虽然最合适的途径可能取决于例如接受者的病症和状态。

适用于口服给药的本发明的制剂可以是各种含有预定量的活性成分的独立单位的形式，例如胶囊、扁胶囊、丸剂或片剂；粉末或颗粒；在水性液体或非水性液体的溶液或悬液，例如酏剂、酊剂、混悬剂或糖浆剂；或水包油乳液剂或油包水乳液剂。该活性成分也可制成大丸剂、药糖剂或糊剂。

片剂可以通过与任选的一种或多种辅助成份压缩或模塑来制作。压缩片剂的制作方法可以是在合适的机器中将任选与粘结剂、润滑剂、惰性稀释剂、润滑剂、表面活性剂或分散剂混合的诸如粉末或颗粒等自由流动形式的活性成份进行压缩。模塑片剂可通过在合适的机器中对用惰性液态稀释剂湿润的粉末状化合物的混合物进行模塑。片剂可任选地包衣或刻痕，并可配制成能够提供其中活性成分的缓释或控释。本发明化合物可以适用于速释或缓释的形式给予。速释或缓释可通过利用包含本发明化合物的合适的药物组合物来实现，或者尤其是在缓释的情况下，利用例如皮下植入物或渗透泵的装置来实现。本发明化合物也可以脂质体方式给予。优选的单位剂量制剂是包含有效剂量(如下文所述)或者其合适部分的活性成分的制剂。

应该理解的是，除上述特别提到的成分，本发明的制剂还可以包括与所研究制剂类型有关领域的其他常规药剂，例如，适宜于口服的制剂可以包括调味剂。

所述制剂可以作为单位剂型方便地提供，且可通过药学领域熟知的任何方法制造。所有方法均包括使活性成分与构成一种或多种附加成分的载体结合的步骤。通常，使活性成分与液体载体和/或细分固体载体均匀且密切地结合以制备制剂，然后，如果需要，将该产物成型，得到所需制剂。

本发明的化合物也可脂质体递送系统，例如小单室囊泡、大单室囊泡和多室囊泡的形式给予。脂质体可以由各种磷脂、1，2-二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、二磷脂酰甘油(心磷脂)或磷脂酰胆碱(卵磷脂)形成。

用于胃肠外给药的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液，其可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂以及使得制剂与指定接受者的血液等渗的溶质；以及水性和非水性无菌混悬液，其可包含助悬剂和增稠剂。可以用单位剂量或多剂量容器，例如密封的安瓿和药瓶提供该制剂，也可通过冷冻干燥(冻干)条件保存该组合物，临用前只需要加入无菌液体载体如盐水或注射用水即可使用。临时用的注射溶液和混悬液可以由前文描述的无菌粉末、颗粒和片剂进行制备。用于胃肠外给药的示例性组合物包括：可注射溶液剂或悬浮剂，其可包含例如合适的非毒性胃肠外可接受的稀释剂或溶剂，例如聚乙二醇、乙醇、1，3-丁二醇、水、林格溶液、氯化钠等渗溶液、或其他合适的分散剂或润湿剂以及助悬剂，包括合成的单或二甘油酯和脂肪酸，包括油酸和Cremaphor。

用于鼻腔、气溶胶或吸入给药的示例性组合物包括盐水中的溶液，其可包含例如苄基醇或其他合适的防腐剂，吸收促进剂以提高生物利用度，和/或其他增溶剂或分散剂如本领域已知的那些。

用于直肠给药的制剂可以用常规载体如可可油/合成甘油酯或聚乙二醇制成栓剂形式。这些载体在常温条件下通常为固体，但在直肠管腔内液化和/或溶解以释放药物。

口腔内局部给药例如含服或舌下给药的制剂，包括锭剂，其包含在调味基质如蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶中的活性成分，和软锭剂，其包含在明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶中的基质中的活性成分。局部给药的示例性组合物包括局部载体如Plastibase(用聚乙烯胶化的矿物油)。

本发明第四方面，提供一种如式(I)的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物的用途，具体的可用于制备酪氨酸激酶抑制剂，用于体外非治疗性的抑制酪氨酸激酶的活性，用于体外非治疗性的抑制肿瘤细胞生长或其组合用途，其在治疗或预防其中BTK起作用的疾病中的用途。

优选方案，本发明所述的如式(I)的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，其用于制备治疗或预防其中BTK起作用的疾病的药物。

优选方案，所述的BTK起作用的疾病包括癌症或代谢系统相关的疾病，具体的所述癌症包括但不限于非小细胞肺癌、卵巢癌、宫颈癌、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、胃癌、肺癌、肝细胞癌、胃癌、胃肠道间质瘤(GIST)、甲状腺癌、胆管癌、子宫内膜癌、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、急性髓细胞白血病(AML)、多发性骨髓瘤、黑色素瘤或间皮瘤；所述代谢系统相关的疾病包括但不限于糖尿病、动脉粥样硬化、肥胖症等疾病，其中特别优选为非小细胞肺癌。

优选方案，所述的治疗是指减轻或缓和疾病及其并发症状的方法；所述的预防是指减少或消除疾病、病状或病症的症状或并发症的发作。

术语解释

以下列出了用于描述本申请的各种术语的定义。这些定义适用于整个说明书和权利要求书中使用的术语，除非在特定情况下单独地或作为较大组的一部分另有限制。

本发明中的术语“烷基”是指饱和的直链或支链烃基，在某些实施方案中，分别含有1至6个或1至3个碳原子，C_1-6烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、新戊基、正己基或类似基团，并且C_1-3烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基或类似基团。

本发明中的术语“卤代”是指卤素原子取代碳原子上的氢原子所形成的基团，其中卤素原子包括但不限于F、Cl、Br、I。

本发明中的术语“烷氧基”是指-O-烷基，其中所述烷基包括但不限于C_1-3烷基、C_1-6烷基和C_3-6环烷基，具体的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基及其卤代形式的基团。

本发明中的术语“芳基”是指单环或多环碳环系统，其具有一个或多个稠合或非稠合的芳环，包括但不限于苯基、萘基、四氢萘基等类似基团，并且其环碳上的氢原子还可以被一至多个取代基取代，所述取代基包括但不限于C_1-3烷基、烷氧基、氨基、酰胺基、脲、氧代、卤代、吡唑基、咪唑基、三唑基、CN、-NHC(O)(C_1-3烷基)、酰基、磺酰基、磺酰胺基、-(CH₂)_m(C_3-7杂环烷基)；各m独立的为0、1、2或3。

本发明的术语“杂环烷基”指含有2至6个环碳原子和1至3个环杂原子的单环或多环非芳香族环体系，其中所述杂原子选自N、O、S。

本发明的术语“环烷基”是指单环或多环的饱和或部分不饱和碳环化合物的单价基团，C_3-6环烷基的包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基等，并且其环碳上的氢原子还可以被一至多个取代基取代，所述取代基包括但不限于C_1-3烷基、烷氧基、氨基、酰胺基、脲、氧代、卤代、吡唑基、咪唑基、三唑基、CN、-NHC(O)(C_1-3烷基)、酰基、磺酰基、磺酰胺基、-(CH₂)_m(C_3-7杂环烷基)；各m独立的为0、1、2或3。

本发明的术语“杂芳基”是指含有1至6个碳和至少一个杂原子的芳香环体系，其中所述杂原子选自N、S、O；并且其环碳上的氢原子还可以被一至多个取代基取代，所述取代基包括但不限于C_1-3烷基、烷氧基、氨基、酰胺基、脲、氧代、卤代、吡唑基、咪唑基、三唑基、CN、-NHC(O)(C_1-3烷基)、酰基、磺酰基、磺酰胺基、-(CH₂)_m(C_3-7杂环烷基)；各m独立的为0、1、2或3。具体实施中的杂芳基包括但不限于吡唑基、吡嗪基、嘧啶基、吡咯基、吡啶基、咪唑基、噻唑基、噻吩基、呋喃基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基等类似基团。

本发明的术语“烷基胺”是指基团-烷基-NR_aR_b，其中烷基包括但不限于C_1-3烷基、C_1-3卤代烷基、C_1-3烷氧基和C_3-6环烷基，R_a和R_b各自独立的选自H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基。

本发明的术语“酰基”是指-C(O)-取代基，其中取代基包括但不限于C_1-3烷基、C_1-3卤代烷基、羟基、C_1-3烷氧基、-NH-C_3-6环烷基、-NH-芳基、-NH-取代芳基、-NH-杂芳基、-NH-C_1-3烷基、-NH-C_1-3烷基胺等。

本发明的术语“酰胺基”是指基团-C(O)NR_aR_b，其中R_a和R_b各自独立的选自H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基。

本发明的术语“脲”是指基团-NR_aC(O)NR_b，其中R_a和R_b各自独立的选自H、C_1-3烷基或C_3-6环烷基。

本发明所述的“药学上可接受的盐”指本发明化合物的盐，有本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。本发明中含有相对碱性的官能团，可通过在纯的溶液或者合适的惰性溶剂中用足量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐，药学上可接受的酸加成盐包括无机盐和有机酸盐。所述无机酸盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐硝酸盐、磷酸盐、酸式磷酸盐；所述的有机酸盐包括但不限于甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、丙酮酸盐、羟乙酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、水杨酸盐、苦味酸盐、谷氨酸盐、水杨酸盐、抗坏血酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐等。

本发明所述的“溶剂合物”是指含有化学计量或非化学计量的溶剂加成形式，溶剂可选自水、乙醇、异丙醇、乙醚、丙酮等。

本发明所述的“前药”是指通过代谢的方式在体内可转化的化合物，以提供通过本申请化学式所描述的任何化合物，且各种形式的药物是本领域已知的。

本发明所述的“有效量”是指能够在所需的对象中达到所需的治疗效果，但不会造成过度的负面影响的剂量，具体的剂量通常可以由本领域的技术人员根据需要确定。

本发明所述的“治疗”是指减轻或缓和疾病及其并发症状的方法；所述的预防是指减少或消除疾病、病状或病症的症状或并发症的发作。

应该理解的是在上文中未解释的，但出现在本发明中的其它术语，应按照本领域专业技术人员的通常理解来定义。

应该理解的是，在本发明的范围内，本发明的上述各技术特征和在下文中(包括实施例)具体描述的各技术特征之间都可以相互结合，从而构成新的或优选的技术方案。

与现有技术相比，本发明的主要优点包括：

(1)本发明提供了一种结构新颖的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，与现有的化合物相比，本发明的化合物具有更低的肿瘤细胞抑制浓度，化合物的活性具有显著的提升。

(2)与现有的BTK激酶抑制剂相比，本发明提供的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物对于BTK激酶具有显著的抑制作用，而对于其它EGFR、TEC、JAK-3、ITK、HER-2、HER-4酶没有明显的抑制作用，表现出了对BTK激酶较好的选择性，也极大的降低了脱靶效应。

(3)本发明提供的式I胺基嘧啶类化合物，与已知的相近化合物相比，合成路线较短，操作更为简单，适合工业化放大生产。

具体实施方式

下面通过实施例来进一步说明本发明，应该正确理解的是：本发明的实施例仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，所以，在本发明的方法前提下对本发明的简单改进均属本发明要求保护的范围。

制备实施例

本发明提供的化合物可以使用本领域技术人员已知的多种方式制备得到，也可以使用本文提供的方法及有机化学合成方法或者本领域技术人员所理解的其变化来合成；本文实施例部分给出了本发明所要求保护的部分化合物的制备实施例，其中通式化合物中的R₁和R₂基团可以购买自市售产品或者根据本领域常规方法制备。

中间体2的制备

将NaOH固体(853.3g)加至无水乙醇(3000ml)中，室温搅拌1h，倒入1280g丙二腈，缓慢升温至回流，反应1h后冷却至20℃，搅拌析晶2h，抽滤，用400ml 0～5℃乙醇淋洗一次，固体35℃减压烘料2h，烘干后转移至三口瓶，倒入5000ml纯净水，室温搅拌至溶解，用5mol/L盐酸调pH到3～4，过滤，滤饼用500ml纯净水重结晶，得白色针状晶体，35℃减压烘料2h得化合物2，收率82％。

中间体3的制备

将中间体2(200g)加入到500ml水中，搅拌下加入水合肼50ml，缓慢升温至90℃，搅拌反应30min，降温至0℃，过滤析出沉淀，35℃减压烘料2h得化合物3，收率86％。

中间体4的制备

将200g NaOH固体加入到500ml水中，搅拌溶解，加入40g中间体3，加热至100℃回流反应10h，冰浴降温，反应液用5mol/L盐酸调pH到3～4，过滤，35℃减压烘料2h得类白色固体中间体4，收率92％。

中间体5的制备

将中间体4：5-氨基-3-(羧甲基)-1H-吡唑-4-羧酸(150g,0.90mol)、乙酸酐(500ml)、DCC(240.5g,1.17mol)加入到1L三口瓶中，置于油浴锅中，设温100℃，回流反应3h后结束，冷却至0℃，抽滤，滤饼用200ml甲基叔丁基醚淋洗两次，35℃减压烘料2h得白色固体中间体5，收率91％。

中间体6的制备

称取90.5g(0.50mol)的中间体5，倒入圆底烧瓶，倒入181ml乙酸搅拌溶解，缓慢加入80％的水合肼36.3ml(0.55mol)，逐渐升温至120℃,反应5h，过滤，滤饼用50ml甲基叔丁基醚淋洗2次，35℃减压烘料2h得白色固体中间体6，收率94％。.

中间体7的制备

称取250mmol 2-甲氧基苯磺酸(2-甲基苯甲酸、2-乙基苯甲酸、2-甲氧基苯甲酸、4-甲氧基吡啶-3-羧酸或3-甲基环戊-1,3-二烯-1-羧酸)溶解于300ml干燥的二氯甲烷中，依次加入262.5mmol EDCI,262.5mmol HOBt和41.2g中间体6。室温搅拌反应36h，检测反应完全后终止反应。反应液直接经拌样、柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1～5:1)，得到类白色固体中间体7，收率75～90％。

中间体8的制备

称取105.3mmol中间体7，加入到1,2-二氯乙烷(200ml)中，倒入三溴氧磷74.7g(263.2mmol)，逐渐升温至120℃，回流反应反12h，TLC检测反应结束，自然降至室温，将反应液倒入冰水中，用固体碳酸钠调pH≈8，过滤，滤饼用100ml纯净水淋洗三次，65℃减压烘料2h得白色固体中间体8，收率78～87％。

T-1的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，微溶，倒入3.5g(34.7mmol)三乙胺，溶液逐渐变为浅绿色澄清，室温搅拌10min,加入2.8g(37.9mmol)N，N-二甲基甲二胺，逐渐升温至140℃，搅拌反应10h，TLC检测反应结束，高温减压蒸除DMF，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-1，收率47％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.35(s,2H),4.66(s,2H),3.92(s,3H),2.76(s,6H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,133.4,129.5,120.9,118.7,112.2,98.7,78.1,54.8,45.5(2C),27.0.MS-ESI m/z:471.02(M+H)⁺。

根据实施例八制备过程，可以成功制备得到相应的式(I)化合物，具体结构确证数据如下：

T-2的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，微溶，倒入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min，加入3.6g环己胺，逐渐升温至回流，搅拌反应10h，TLC检测反应结束，高温减压蒸除DMF，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-2，收率：48％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.55～3.47(m,1H),1.74～1.69(m,2H),1.50～1.43(m,4H),1.23～1.11(m,4H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,133.4,129.5,120.9,118.7,112.2,98.7,54.8,50.1,35.6(2C),27.0,25.6,26.7(2C).MS-ESI m/z:496.01(M+H)⁺。

T-3的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，微溶，倒入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min，加入3.9g苯胺，逐渐升温至回流，搅拌反应10h，TLC检测反应结束，高温减压蒸除DMF，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-3，收率：46％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,4H),7.23～7.33(m,5H),6.35(s,2H),3.92(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,137.1,133.4,134.3,130.4,129.5,128.8(2C),127.5,120.9,118.7,112.2,98.7,54.8,27.1.MS-ESI m/z:490.12(M+H)⁺。

T-4的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到150mlDMSO中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入4.1g对氟苯胺，逐渐升温至130℃，搅拌反应10h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-4，收率：51％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,4H),7.23～7.33(m,4H),6.35(s,2H),3.92(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,133.4,120.8,129.5,127.3,126.8,122.5,120.7(2C),120.1,118.7,112.2,98.7,54.8,27.0.MS-ESI m/z:508.11(M+H)⁺。

T-5的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到150mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入3.4g 2-氨基吡啶，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-5，收率：49％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),8.08～8.15(m,2H),7.82～7.74(m,4H),7.23～7.33(m,2H),6.35(s,2H),3.92(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,139.5,134.7,133.4,130.7,129.5,126.5,124.4,120.9,118.7,112.2,98.7,54.8,27.0.MS-ESI m/z:490.89(M+H)⁺。

T-6的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMSO中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min，加入4.9g 4-甲氧基-3-甲基苯胺，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-6，收率：52％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,3H),7.23～7.33(m,4H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.32(s,3H),2.15(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,135.1,133.4,131.0,129.5,128.1,125.4,123.3,122.8,120.9,118.7,112.2,98.7,56.4,54.8,27.0,18.2.MS-ESI m/z:534.03(M+H)⁺。

T-7的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入4.8g 1H-苯并咪唑-2-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-7，收率：55％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),10.56(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,6H),7.23～7.33(m,2H),6.35(s,2H),3.92(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,133.4,130.3,129.5,126.8,123.2(2C),122.5,120.9,118.7,118.4,118.7,112.2,98.7,54.8,27.2.MS-ESI m/z:530.21(M+H)⁺。

T-8的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到150mlNMP中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min，9.2g4-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯胺，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-8，收率：44％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,5H),7.23～7.33(m,3H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.11(m,4H)；2.74(m,1H)；2.45(m,8H)；2.36(s,3H)；1.82(m,4H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,133.4,129.5,120.9,120.6(2C),118.7,118.4,118.3,117.7(2C),112.2,98.7,63.4(2C),56.7(2C),54.8,54.3(2C),53.3,45.3,29.4(2C),27.0.MS-ESI m/z:573.10(M+H)⁺。

T-9的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到150mlNMP中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,9.2g4-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯胺，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-9，收率：51％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.72～3.54(m,4H),2.79～2.68(m,1H),2.17(s,3H),1.87～1.64(m,4H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):173.5,168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,133.4,129.5,120.9,118.7,112.2,98.7,54.8,53.2,51.6,50.1,48.6,35.6,23.1,20.9.MS-ESI m/z:539.22(M+H)⁺。

T-10的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min，加入4.5g 1-(3-氨基吡咯烷-1-基)乙-1-酮，逐渐升温至回流，搅拌反应15h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-10，收率：47％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.72～3.54(m,4H),2.79～2.68(m,1H),2.17(s,3H),1.97～1.83(m,2H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):173.5,168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,133.4,129.5,120.9,118.7,112.2,98.7,54.8,53.3,51.7,50.3,46.8,23.1,20.9.MS-ESI m/z:525.01(M+H)⁺。

T-11的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入4.8g 1-(5-氨基吡啶-2-基)乙-1-酮，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-11，收率：44％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),8.20(d,J＝8.4Hz,1H),7.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,3H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),2.12(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):195.2,168.4,165.7,157.6,155.5,150.2,143.3,141.1,138.5,133.4,129.5,122.1,121.6,120.9,118.7,112.2,98.7,54.8,50.1,27.9.MS-ESI m/z:533.01(M+H)⁺。

T-12的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入4.0g 1-(3-氨基哌啶-1-基)乙-1-酮，逐渐升温至回流，搅拌反应15h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-12，收率：43％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.72～3.54(m,4H),2.79～2.68(m,1H),2.17(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):173.5,168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,133.4,129.5,120.9,118.7,112.2,98.7,54.8,53.3,51.7,50.3,46.8,20.9.MS-ESI m/z:511.02(M+H)⁺。

T-13的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入7.2g(4-氨基嘧啶-2-基)(哌啶-1-基)甲酮，逐渐升温至回流，搅拌反应15h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-13，收率：55％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),8.63～8.58(d,J＝8.2Hz,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.83～6.78(d,J＝8.2Hz,1H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.74～3.69(m,4H),1.70～1.63(m,4H),1.53～1.46(m,2H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):169.7,168.4,162.3,158.1,157.6,156.8,155.5,150.2,141.1,133.4,129.5,120.9,118.7,112.2,111.0,98.7,54.8,50.1,46.9(2C),26.3(2C),24.6.MS-ESI m/z:603.16(M+H)⁺。

T-14的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入6.9g4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己-1-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应14h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-14，收率：43％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.11(m,4H)；2.74(m,2H)；2.45(m,8H)；2.36(s,3H)；1.82(m,4H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,133.4,129.5,120.9,118.7,112.2,98.7,73.1,63.4(2C),57.3(2C),55.9,52.3,45.3,29.4(2C),28.6,27.0(2C).MS-ESIm/z:595.16(M+H)⁺。

T-15的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入6.2g 4-(哌啶-1-基)苯胺，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-15，收率：45％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.63～6.52(m,4H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.60～3.51(m,4H),1.71～1.60(m,6H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,137.5,133.4,129.5,128.6,120.9,118.7,117.6(2C),114.4(2C),112.2,98.7,55.2(2C),54.8,50.1,25.6(2C),24.3.MS-ESI m/z:573.02M+H)⁺。

T-16的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入5.9g 3-(哌啶-1-基)环戊烷-1-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应14h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-16，收率：49％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.63～6.52(m,4H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.60～3.51(m,4H),2.74～2.66(m,2H),1.92～1.76(m,6H),1.71～1.60(m,6H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,137.5,133.4,129.5,128.6,120.9,118.7,117.6(2C),114.4(2C),112.2,98.7,68.9,55.2(2C),54.8,51.5,50.1,35.8,32.4,29.0,25.6(2C),24.3.MS-ESI m/z:565.13(M+H)⁺。

T-17的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入5.4g 3-(哌啶-1-基)环丁烷-1-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应14h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-17，收率：49％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.63～6.52(m,4H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.60～3.51(m,4H),2.74～2.66(m,2H),1.92～1.76(m,4H),1.71～1.60(m,6H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,137.5,133.4,129.5,128.6,120.9,118.7,117.6(2C),114.4(2C),112.2,98.7,68.9,55.2(2C),54.8,51.5,50.1,35.8,32.4,2,25.6(2C),24.3.MS-ESI m/z:551.07(M+H)⁺。

T-18的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入6.4g 3-(哌啶-1-基甲基)环戊烷-1-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应14h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-18，收率：49％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.63～6.52(m,4H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.60～3.51(m,4H),2.74～2.66(m,3H),1.92～1.76(m,6H),1.71～1.60(m,6H),1.51～1.40(m,1H),；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,137.5,133.4,129.5,128.6,120.9,118.7,117.6(2C),114.4(2C),112.2,98.7,68.9,61.2,55.2(2C),54.8,51.5,50.1,35.8,32.4,30.3,25.6(2C),24.3.MS-ESI m/z:579.16(M+H)⁺。

T-19的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入6.2g 3-苯氧基环戊烷-1-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应14h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-19，收率：53％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,4H),6.93～6.82(m,3H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.38～2.26(m,1H),2.74～2.66(m,1H),1.92～1.76(m,6H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,137.5,133.4,129.5,129.1(2C),128.6,120.9,120.3,118.7,114.4(2C),112.2,98.7,78.9,54.8,51.5,45.8,29.0,28.3.MS-ESI m/z:574.05(M+H)⁺。

T-20的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入6.2g 3-氨基-N-(环戊-1,3-二烯-1-基)环丁烷-1-甲酰胺，逐渐升温至回流，搅拌反应14h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-20，收率：44％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),10.22(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.57～6.47(m,2H),6.35(s,2H),5.9(s,1H),3.92(s,3H),3.13～3.03(m,2H),2.95～2.88(m,2H),2.25～2.01(m,4H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):172.1,168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,133.7,133.4,133.0,132.5,129.5,120.9,118.7,112.2,106.2,98.7,54.8,50.1,46.3,35.6,34.6,33.5(2C).MS-ESI m/z:575.02(M+H)⁺。

T-21的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入6.6g 1-苄基-3-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应14h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-21，收率：55％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,4H),6.93～6.82(m,3H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.66(s,2H),2.70～2.68(m,1H),2.61～2.46(m,4H),1.82～1.56(m,4H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,137.5,133.4,129.5,128.5(2C),128.2(2C),120.9,120.3,118.7,112.2,98.7,78.9,65.2,62.8,56.8,51.5,35.8,29.0,28.3.MS-ESIm/z:589.01(M+H)⁺。

T-22的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入6.7g(3-氨基吡咯烷-1-基)(吡啶-3-基)甲酮，逐渐升温至回流，搅拌反应14h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-22，收率：60％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),9.06(s,1H),8.98(s,1H),8.12～7.84(m,4H),7.23～7.33(m,3H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.61～3.50(m,4H),2.97～2.85(m,1H),2.01～1.93(m,2H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):176.6,168.4,157.6,155.5,150.2,148.9,148.2,141.1,135.3,133.4,131.0,125.6,129.5,120.9,118.7,112.2,98.7,58.7,54.8,50.1,47.9,46.2,35.5.MS-ESIm/z:588.03(M+H)⁺。

T-23的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入7.2g 1-(3-氨基哌啶-1-基)-2-(环戊二烯基-1,3-二烯-1-基)乙-1-酮，逐渐升温至回流，搅拌反应14h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-23，收率：47％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.70～6.52(m,3H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),2.88～2.74(m,4H),2.70～2.68(m,1H),2.61～2.46(m,4H),1.82～1.56(m,4H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):176.6,168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,135.3,133.4,132.4,132.1,131.0,129.5,120.9,118.7,112.2,98.7,58.7,54.8,50.1,47.9,46.2,42.5(2C),35.5,22.2.MS-ESI m/z:590.08(M+H)⁺。

T-24的制备

称取15g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯磺酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入7.2g 3-氨基N-苯基-1-甲酰胺，逐渐升温至回流，搅拌反应14h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-24，收率：58％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),8.73(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.43～7.37(m,3H),7.23～7.33(m,4H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.61～3.50(m,4H),2.97～2.85(m,1H),2.01～1.93(m,2H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,159.1,157.6,155.5,150.2,141.1,139.5,133.4,129.5,128.3(2C),128.0,122.5(2C),120.9,118.7,112.2,98.7,58.7,54.8,50.1.47.9,46.2,35.5.MS-ESI m/z:602.06(M+H)⁺。

T-25的制备

称取13.4g(31.6mmol)中间体8(R₂为2-甲基苯甲酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入5.4g 3-(哌啶-1-基)环丁烷-1-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应16h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-25，收率：44％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.35(s,2H),3.12～2.84(m,2H),2.49(s,3H),2.52～2.46(m,4H),2.02～1.79(m,4H),1.57～1.46(m,6H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,164.3,157.6,155.5,150.2,141.1,133.4,129.5,120.9,118.7,112.2,98.7,57.8(2C),55.8,50.1,44.3,37.6(2C),26.2(C),25.1,19.8.MS-ESI m/z:497.12(M+H)⁺。

T-26的制备

称取13.4g(31.6mmol)中间体8(R₂为2-甲基苯甲酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入6.4g 3-(哌啶-1-基甲基)环戊烷-1-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应16h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-26，收率：59％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.35(s,2H),3.12～2.84(m,2H),2.49(s,3H),2.46～2.33(m,4H),1.89～1.73(m,7H),1.52～1.36(m,7H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,164.3,157.6,155.5,150.2,141.1,133.4,131.7,129.5,120.9,118.7,112.2,98.7,63.4,57.8(2C),55.8,50.1,44.3,37.6(2C),26.2(C),25.1,19.8.MS-ESI m/z:525.10(M+H)⁺。

T-27的制备

称取13.4g(31.6mmol)中间体8(R₂为2-甲基苯甲酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入6.2g 3-苯氧基环戊烷-1-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应16h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-27，收率：66％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.37～7.23(m,4H),,6.96～6.81(m,3H)6.35(s,2H),,3.72～3.63(m,1H),2.49(s,3H),,2.57～2.43(m,1H)2.03～1.84(m,2H),1.53～1.67(m,4H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,157.1,155.5,150.2,141.1,133.4,131.6,129.5,128.1(2C),120.9,120.3,118.7,114.8(2C),112.2,98.7,76.6,52.3,50.1,45.5,29.6,29.1,19.8.MS-ESI m/z:520.09(M+H)⁺。

T-28的制备

称取13.4g(31.6mmol)中间体8(R₂为2-甲基苯甲酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入7.5g 3-氨基-N-(环戊-1,3-二烯-1-基)环丁烷-1-磺酰胺，逐渐升温至回流，搅拌反应15h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-28，收率：41％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),8.26(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,3H),6.52～6.37(m,3H),6.35(s,2H),3.22～3.11(m,3H),2.49(s,3H),2.28～2.15(m,4H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,145.6,141.1,133.4,132.9,130.1,129.5,128.4,120.9,118.7,112.2,101.9,98.7,61.4,50.1,45.4,34.2,26.8(2C),19.8.MS-ESI m/z:559.31(M+H)⁺。

T-29的制备

称取13.4g(31.6mmol)中间体8(R₂为2-甲基苯甲酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入7.1g(3-氨基哌啶-1-基)(苯基)甲酮，逐渐升温至回流，搅拌反应15h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-29，收率：44％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,4H),7.63～7.54(m,3H),7.23～7.33(m,2H),6.35(s,2H),3.56～3.42(m,4H),2.59～2.51(m,1H),2.49(s,3H),1.69～1.55(m,4H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):172.5,168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,135.2,133.4,129.5,129.1,128.3(2C),126.8(2),124.4,120.9,118.7,112.2,98.7,53.6,52.1,50.1,49.5,35.6,23.1,19.8.MS-ESI m/z:535.16(M+H)⁺。

T-30的制备

称取13.4g(31.6mmol)中间体8(R₂为2-甲基苯甲酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入7.9g 1-(吡啶-3-基磺酰基)吡咯烷-3-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应14h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-30，收率：44％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),8.77～8.56(m,3H),7.82～7.74(m,3H),7.23～7.33(m,2H),6.35(s,2H),,2.88～2.74(m,5H)2.49(s,3H),1.96～1.73(m,2H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,147.3,147.7,141.1,134.6,133.4,132.9,129.5,126.4,124.1,120.9,118.7,112.2,98.7,56.9,52.6,50.1,45.2,33.8,19.8.MS-ESI m/z:572.15(M+H)⁺。

T-31的制备

称取13.4g(31.6mmol)中间体8(R₂为2-甲基苯甲酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入6.7g 1-((环戊-1,3-二烯-1-基氨基)甲基)哌啶-3-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应14h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-31，收率：44％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),8.33(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.67～6.54(m,3H),6.35(s,2H),4.15(s,2H),3.56～3.42(m,4H),2.96～2.84(m,2H),2.49(s,3H)2.59～2.51(m,1H),1.69～1.55(m,4H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,145.5,141.1,133.9,133.4,132.1,129.5,126.4,120.9,118.7,112.2,102.0,98.7,71.5,59.5,54.9,51.6,50.1,35.2,34.3,21.1,19.8.MS-ESI m/z:536.19(M+H)⁺。

T-32的制备

称取13.4g(31.6mmol)中间体8(R₂为2-甲基苯甲酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入7.9g 1-(苯基磺酰基)吡咯烷-3-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应14h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-32，收率：47％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.64(m,6H),7.23～7.33(m,4H),6.35(s,2H),,2.88～2.74(m,5H)2.49(s,3H),1.96～1.73(m,2H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,147.3,147.7,132.6,131.4,130.9,129.4,128.5,126.4,124.1,122.3,120.9,118.7,112.2,98.7,56.9,52.6,50.1,45.2,33.8,19.8.MS-ESI m/z:586.19(M+H)⁺。

T-33的制备

称取13.9g(31.6mmol)中间体8(R₂为4-甲氧基吡啶-3-羧酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入2.6g N，N-二甲基甲二胺，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-33，收率：44％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),9.03(s,1H),8.98(s,1H),8.47～8.36(m,1H),7.23～7.33(m,1H),6.35(s,2H),4.66(s,2H),3.92(s,3H),2.76(s,6H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):166.8,164.3,154.6,147.2,141.1,133.4,129.5,120.9,118.7,112.2,98.7,78.1,54.8,45.5(2C),27.0.MS-ESI m/z:434.26(M+H)⁺。

T-34的制备

称取13.9g(31.6mmol)中间体8(R₂为4-甲氧基吡啶-3-羧酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，微溶，倒入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入3.6g环己胺，逐渐升温至回流，搅拌反应10h，TLC检测反应结束，高温减压蒸除DMF，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-34，收率：48％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),9.03(s,1H),8.98(s,1H),8.47～8.36(m,1H),7.23～7.33(m,1H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.55～3.47(m,1H),1.74～1.69(m,2H),1.50～1.43(m,4H),1.23～1.11(m,4H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):166.8,164.3,154.6,147.2,141.1,133.4,129.5,120.9,118.7,112.2,98.7,78.1,54.8,35.6(2C),27.0,25.6,26.7(2C).MS-ESI m/z:459.16(M+H)⁺。

T-35的制备

称取13.9g(31.6mmol)中间体8(R₂为4-甲氧基吡啶-3-羧酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，微溶，倒入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入3.9g苯胺，逐渐升温至回流，搅拌反应10h，TLC检测反应结束，高温减压蒸除DMF，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-35，收率：60％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.07～7.01(m,3H),6.77～6.64(m,3H),6.35(s,2H),3.92(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,140.5,133.4,129.8(2C),129.5,123.0,120.9,118.7,116.5(2C),112.2,98.7,54.8,50.1.MS-ESI m/z:453.19(M+H)⁺。

T-36的制备

称取13.9g(31.6mmol)中间体8(R₂为4-甲氧基吡啶-3-羧酸)加入到150mlDMSO中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入4.1g对氟苯胺，逐渐升温至130℃，搅拌反应10h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-36，收率：65％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),6.97～6.84(m,3H),6.71～6.64(m,2H),6.35(s,2H),3.92(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,156.2,155.5,150.2,141.1,140.5,133.4,129.5,123.0,121.8(2C),120.9,118.7,116.8(2C),98.7,54.8,50.1.MS-ESI m/z:471.02(M+H)⁺。

T-37的制备

称取13g(31.4mmol)中间体8(R₂为3-甲基环戊-1,3-二烯-1-羧酸)加入到150mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入3.4g 2-氨基吡啶，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-37，收率：58％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.93～7.85(m,1H),7.38～7.31(m,2H),6.67～6.49(m,2H),6.27～6.19(m,1H),6.35(s,2H),2.89～2.78(m,2H),2.45～2.36(m,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):165.6,158.6,148.9,148.1,147.3,143.3,142.5,140.5,139.2,138.6,134.5,120.6,119.5,108.6,97.9,41.8,31.5,19.5.MS-ESI m/z:425.21(M+H)⁺。

T-38的制备

称取13g(31.4mmol)中间体8(R₂为3-甲基环戊-1,3-二烯-1-羧酸)加入到100mlDMSO中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入4.9g 4-甲氧基-3-甲基苯胺，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-38，收率：58％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.17(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.44(s,1H),6.88(s,1H),6.58～6.42(m,4H),6.35(s,2H),3.78(s,3H),2.89～2.78(m,2H),2.25(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):165.6,158.6,148.9,148.1,147.3,143.3,142.5,140.5,139.2,138.6,134.5,126.3,120.6,119.5,108.6,97.9,57.8,41.8,31.5,16.6.MS-ESI m/z:454.17(M+H)⁺。

T-39的制备

称取13g(31.4mmol)中间体8(R₂为3-甲基环戊-1,3-二烯-1-羧酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入4.8g 1H-苯并咪唑-2-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-39，收率：55％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),11.94(s,1H),9.76(s,1H),7.48(s,1H),7.13～7.05(m,4H),6.27～6.19(m,2H),6.35(s,2H),2.89～2.78(m,2H),2.15(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):165.6,158.6,148.9,148.1,147.3,142.5,140.5,139.2,136.7(2C),134.5,123.6(2C),120.6,116.3(2C),97.9,41.8,31.5,19.5.MS-ESI m/z:465.12(M+H)⁺。

T-40的制备

称取13g(31.4mmol)中间体8(R₂为3-甲基环戊-1,3-二烯-1-羧酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入6.2g 4-(哌啶-1-基)苯胺，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-40，收率：49％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.11(s,1H),11.92(s,1H),9.76(s,1H),7.48(s,1H),6.63～6.45(m,4H),6.17～6.09(m,1H),6.35(s,2H),3.72～3.59(m,4H),2.89～2.78(m,2H),2.15(s,3H),1.77～1.58(m,6H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):165.6,158.6,148.9,147.3,142.5,140.5,139.2,136.7,134.5,123.6,120.6,117.3(2C),114.1(2C),97.9,55.6(2C),41.8,31.5,26.4(2C),24.6,19.5.MS-ESIm/z:509.16(M+H)⁺。

T-41的制备

称取13.8g(31.4mmol)中间体8(2-乙基苯甲酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入8.4g 1-((环戊-1,3-二烯-1-基甲基)磺酰基)哌啶-3-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-41，收率：56％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.11(s,1H),11.37(s,1H),8.62(s,1H),8.11～8.05(m,1H),7.84～7.69(m,2H),7.22～7.15(m,1H),6.63～6.45(m,3H),6.35(s,2H),3.44～3.28(m,4H),2.89～2.78(m,2H),2.60～2.48(m,3H),1.89～1.78(m,2H),1.59～1.47(m,4H),1.21～1.16(m,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):165.6,163.8,158.6,148.9,147.3,142.5,140.5,136.5,135.4,134.5,133.2,132.6,131.5,128.9,126.7,97.9,68.8,53.4,50.6,49.5,41.8,34.1,28.3,26.4,19.5,14.4.MS-ESI m/z:601.09(M+H)⁺。

T-42的制备

称取13.8g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-乙基苯甲酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入8.4g 1-((吡啶-2-基甲基)磺酰基)吡咯烷-3-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-42，收率：56％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.11(s,1H),11.37(s,1H),8.62(s,1H),8.54～8.49(m,1H),8.11～8.05(m,1H),7.84～7.69(m,3H),7.22～7.15(m,3H),6.35(s,2H),5.11(s,2H),3.34～3.28(m,4H),2.89～2.78(m,3H),1.89～1.78(m,2H),1.21～1.16(m,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):165.6,163.8,158.6,148.9,148.1,147.3,140.5,139.5,136.5,135.4,132.6,131.5,128.9,126.7,124.1,120.3,97.9,68.8,55.6,52.1,48.3,34.5,28.3,26.4,14.4.MS-ESI m/z:600.16(M+H)⁺。

T-43的制备

称取13.8g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯甲酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入7.5g 1-(5-氨基吡啶-2-基)-2-(嘧啶-5-基)乙-1-酮，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-43，收率：44％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),11.31(s,1H),9.12(s,1H),8.60～8.51(m,3H),8.21～8.16(m,1H),7.82～7.74(m,2H),7.54～7.46(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.35(s,2H),4.02(s,2H),3.92(s,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):191.3,168.4,157.6,156.7(2C),155.5,150.2,149.6,148.4,142.5,141.1,138.6,133.4,130.5,129.5,123.8,122.5(2C),121.8,120.9,112.2,98.7,54.8,46.1,28.8.MS-ESI m/z:575.06(M+H)⁺。

T-44的制备

称取13.8g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯甲酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入6.8g 1-(3-氨基哌啶-1-基)-2-(噻吩-2-基)乙-1-酮，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-44，收率：44％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,3H),7.33～7.23(m,3H),6.88～6.76(m,2H),6.35(s,2H),4.28～4.16(m,4H),3.77(s,2H),6.35(s,2H),3.26～3.13(m,1H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,164.5,162.7,157.6,155.5,150.2,141.1,133.4,129.5,128.6,127.3,125.1,121.6,120.9,118.7,112.2,98.7,54.8,53.7(2C),43.1,38.4,28.1.MS-ESI m/z:557.26(M+H)⁺。

T-45的制备

称取13.8g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯甲酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入6.8g 2-(哌啶-1-基氧基)嘧啶-4-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-45，收率：44％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),8.12～8.04(m,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,3H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),2.88～2.76(m,4H),1.55～1.49(m,6H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):173.6,168.4,157.6,155.5,150.2,148.5,141.1,135.2,133.4,129.5,125.8,120.9,118.7,112.2,98.7,91.8,59.7(2C),54.8,50.1,24.9,23.8(2C).MS-ESI m/z:553.16(M+H)⁺。

T-46的制备

称取13.8g(31.4mmol)中间体8(R₂为2-甲氧基苯甲酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入6.8g 2-(哌啶-1-基氧基)嘧啶-4-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-46，收率：44％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.15(s,1H),9.76(s,1H),8.98(s,1H),7.82～7.74(m,2H),7.23～7.33(m,2H),6.35(s,2H),3.92(s,3H),3.11(m,4H)；2.74(m,1H)；2.45(m,8H)；2.36(s,3H)；1.82(m,4H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):168.4,157.6,155.5,150.2,141.1,133.4,130.5,129.5,120.9,118.7,112.2,98.7,70.1,56.7(2C),55.6,54.8,54.3(2C),53.3,45.3,29.4(2C),27.0.MS-ESI m/z:557.12(M+H)⁺。

T-47的制备

称取13.8g(31.4mmol)中间体8(2-乙基苯甲酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入6.2g 4-(吡咯烷-1-基氧基)苯胺，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-47，收率：52％。¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.11(s,1H),11.37(s,1H),8.62(s,1H),8.11～8.05(m,1H),7.84～7.69(m,2H),7.20～7.15(m,1H),6.68～7.55(m,4H),6.35(s,2H),2.95～2.84(m,4H),2.89～2.78(m,2H),1.89～1.78(m,4H),1.21～1.16(m,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):165.6,163.8,158.6,140.5,139.5(2C),136.5,135.4,131.5,128.9,114.1,113.3,97.9,57.6,52.1,47.7(2C),39.3,26.1(2C),26.4,22.6,14.4,11.2,9.9.MS-ESI m/z:535.29(M+H)⁺。

T-48的制备

称取13.8g(31.4mmol)中间体8(2-乙基苯甲酸)加入到100mlDMF中，开启搅拌，加入3.5g(34.7mmol)三乙胺，室温搅拌10min,加入5.7g 6-(3-甲基氮杂-1-基)吡啶-3-胺，逐渐升温至回流，搅拌反应12h，TLC检测反应结束，高温减压蒸干，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝20:1～10:1)得终产物T-48，收率：54％。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.11(s,1H),11.37(s,1H),8.62(s,1H),8.11～8.05(m,1H),7.84～7.69(m,2H),7.20～7.15(m,2H),6.68～7.55(m,2H),6.35(s,2H),3.69～3.54(m,4H),2.89～2.78(m,2H),2.40～2.28(m,1H),1.89～1.78(m,3H),1.01～0.96(m,3H)；¹³C-NMR(100MHz,DMSO-d₆):165.6,163.8,158.6,147.3,145.2,140.5,139.5,136.5,135.4,133.7,132.6,131.5,128.9,127.9,127.5,122.6,110.5,97.9,63.5(2C),26.1,26.4,21.1,14.4.MS-ESI m/z:520.26(M+H)⁺。

细胞体外增殖抑制实验

B淋巴瘤Ramos细胞、人弥漫大B淋巴瘤TMD-8细胞经胰酶消化处理10min后弃掉液体，用5％血清的培养液吹打，调细胞浓度为300～400个/μL，依次加入受试化合物，预留只含培养液的空白组，在培养箱中培养24h。弃掉上清液，将稀释好的不同浓度的目标化合物加入96孔板(上海卧宏生物科技有限公司)，对照组只加细胞液，每组浓度均设置三个副孔，混匀后继续培养36h，观察不同时间段细胞形态变化，细胞与受试化合物充分作用后，每孔加入现配的MTT溶液显色，继续培养6h。弃掉上层液体，100μLDMSO溶解形成紫色结晶，选定490nm，酶标仪(HBS-1096A酶标分析仪，南京德铁实验设备有限公司)测定吸光度。通过公式：细胞抑制率(％)＝(1-A实验/A对照)×100％，求出IC₅₀值(用细胞存活率对剂量对数作图法，所得结果为多次实验的平均值)。

表1化合物对肿瘤细胞毒性实验结果(IC₅₀/nM)

表2部分化合物对肿瘤细胞毒性实验结果(IC₅₀/nM)^a

注:a表中数值为3次实验的平均值；*表示P<0.05，表示与参照化合物相比其作用效果具有显著性差异

通过实验结果可以看出本发明提供的化合物对B淋巴瘤Ramos细胞或人弥漫大B淋巴瘤TMD-8细胞均具有较好的抑制作用，且作用效果与Ibrutinib的作用效果相当，其中化合物T-19、T-27、T-29、T-45和T-47具有比较优异的抑制作用。

激酶活性抑制实验

化合物对BTK、EGFR、TEC、JAK-3、ITK、HER-2、HER-4酶的活性抑制实验使用均相时间分辨荧光(HTRF)技术，具体如下：配制一系列梯度浓度的待测化合物，在室温条件下与特定浓度的酶溶液共同孵育5分钟，之后加入适量的酶反应底物、ATP以及启动酶反应过程，30分钟后，向酶反应体系中加入适量的反应终止液和检测液，孵育1个小时后，在MolecularDevice公司的Flexstation III多功能酶标仪上，测定特定化合物浓度下的酶活力，并计算不同浓度的化合物对酶活力的抑制活性，根据参数方程,对不同浓度化合物下酶活力的抑制活性进行拟合，计算出IC₅₀值。

表3化合物对激酶活性抑制实验结果(IC₅₀,nM)

本实验通过本发明化合物对BTK、EGFR、TEC、JAK-3、ITK、HER-2、HER-4酶活性抑制的研究，结果显示本发明的大部分化合物对激酶的抑制选择性较好，从上表列举的化合物T-19、T-27和T-29对于BTK激酶结果可以看出具有比较优异的抑制效果，而对于其它试验激酶并无显著的抑制效果，而对比参照药物Ibrutinib虽然对BTK也有相当的抑制效果，但是其对EGFR、TEC、ITK、HER-2激酶也具有显著的抑制效果，表现了Ibrutinib药物选择性差的弊端。因此，本发明提供的化合物对BTK激酶具有较好的抑制能力，对其它激酶的抑制能力大大降低，明显的降低了对其它激酶的脱靶效应。

药代动力学实验:

每一个受试化合物均采用如下方法进行生物利用度的考察：用0.2M的磷酸缓冲溶液溶解受试化合物，配制成2mg/ml的溶液为给药配方，雄性SD大鼠(体重200-240g，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司)6只，分成A、B两组，禁食但可自由饮水12小时后，采取0时刻空白血浆；取A组大鼠，分别灌胃(po)给药化合物，给药剂量为10mg/kg；取B组大鼠经由尾巴静脉(iv)给药化合物，给药剂量为2mg/kg；于给药后5min，30min，1h，2h，4h，8h，12h，24h，从眼底静脉丛连续取血300μl置于分布有肝素抗凝的试管中，8000rpm/min离心10min后取上层血浆；精密量取100μl血浆样品于空白离心管中，加入10μl银杏内酯B内标溶液(5.85μg/ml)，混合混匀，再加入1ml乙酸乙酯提取液，涡旋振荡3min，14000r/min离心10min，提取上层有机相，LC-MS/MS分析；根据试验所得的血药浓度-时间数据，采用WinNonlin的非房室模型来处理药动数据求算药代动力学参数，对照药物Ibrutinib采用同样的实验方法进行药代动力学及生物利用度的考察，具体实验结果见表4：

表4本发明式(I)化合物在大鼠体内的药代动力学参数

注：po：口服灌胃给药；iv：静脉注射；T_1/2：半衰期；C_max：峰浓度；AUC_(0-t)曲线下面积；F：相对生物利用度。

实验结果表明，本发明提供的化合物都具有相似的药代动力学特征，也有比较相近的生物利用度，本化合物与对照药物Ibrutinib相比，具有更短的半衰期，具有更高的相对生物利用度。

Claims

1.一种吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、前药、立体异构体或互变异构体，其特征在于，其结构如式I所示，

其中：

R₁选自：C_3-6环烷基、C_3-6杂环烷基、C_1-6烷基、C_1-6卤代烷基、C_1-6烷氧基、卤代C_1-6烷氧基、芳基、杂芳基；其中所述C_3-6环烷基、C_3-6杂环烷基、芳基、杂芳基还可被一至多个R₃基团进一步取代；

R₂选自：-C(O)-R₄、-S(O)₂-R₄；

X选自：H、卤素；

其中R₃独立的选自C_1-3烷基、烷氧基、氨基、酰胺基、脲、氧代、卤代、吡唑基、咪唑基、三唑基、CN、-NHC(O)(C_1-3烷基)、酰基、磺酰基、磺酰胺基、-(CH₂)_m(C_3-7杂环烷基)；各m独立的为0、1、2或3；

2.如权利要求1所述的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，其特征在于，所述R₁选自C_3-6环烷基、C_3-6杂环烷基、芳基、杂芳基，所述R₁还可被一至多个R₃基团进一步取代。

3.如权利要求1所述的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，其特征在于，所述R₁选自C_3-6杂环烷基、杂芳基，所述R₁还可被一至多个R₃基团进一步取代。

4.如权利要求1所述的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，其特征在于，所述R1选自C_3-6杂环烷基、芳基、杂芳基，其中R₁还可被一至多个R₃基团进一步取代，R₃选自C_1-3烷基、烷氧基、氨基、羟基氨基、酰胺基、脲、氧代、卤代、吡唑基、咪唑基、三唑基、CN、-NHC(O)(C_1-3烷基)、酰基、磺酰基、磺酰胺基、-(CH₂)_m(C_3-7杂环烷基)；各m独立的为0、1、2或3；R₂选自-C(O)-R₄、-S(O)₂-R₄，其中R₄选自-NHR₇、芳基、杂芳基，所述芳基、杂芳基均可被取代基取代。

5.如权利要求1所述的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，其特征在于，所述R₁选自C_3-6杂环烷基、芳基、杂芳基，其中R₁还可被一至多个R₃基团进一步取代，R₃选自C_1-3烷基、烷氧基、氨基、羟基氨基、酰胺基、脲、氧代、卤代；R₂选自-C(O)-R₄、-S(O)₂-R₄，其中R₄选自-NHR₇、芳基、杂芳基，所述芳基、杂芳基均可被取代基取代。

6.如权利要求1所述的吡唑并[1,2]二氮杂类化合物，其特征在于，具体选自下述化合物：