CN113134053A - 一种芦荟提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种芦荟提取物及其制备方法和应用。所述芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：(1)芦荟全叶经清洗、去皮、切块后，获得芦荟果肉丁；(2)将芦荟果肉丁与提取溶液按质量比1:3‑8混合，进行微波加热提取，获得混合液，所述提取溶液包括尿素和氯化胆碱，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.5‑2.5:1；(3)混合液过滤后取滤液，加入无水乙醇，静置醇沉，离心取上清液，浓缩干燥后，得到芦荟提取物。本发明选用含有尿素和氯化胆碱的低共熔溶剂作为芦荟提取物的提取溶液，结合微波提取工艺，有利于缩短提取时间，且制备得到的芦荟提取物中芦荟多糖含量较高，具有良好的抗氧化能力以及促进细胞增殖活性，可用于制备医药和/或化妆品。

Description

一种芦荟提取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及芦荟提取物技术领域，具体涉及一种芦荟提取物及其制备方法和应用。
背景技术
芦荟(Aloe)是百合科芦荟属多年生常绿多肉草本植物，具有抗菌、抗肿瘤、促进伤口愈合、抗紫外线辐射、增强免疫系统、保湿、防晒等作用，是一种常见的药用植物。现代研究结果表明，芦荟的主要化学成分为蒽醌类化学物、糖类、氨基酸和各种有机酸、维生素、多肽、矿物质。现有技术中提取芦荟中的有效成分，主要采用浸提法、有机溶液萃取法、索氏提取法、超声提取法、超临界萃取法等工艺，采用水、醇溶剂或其他有机溶剂进行提取，得到的提取物中有效分成含量低，特别是得到的芦荟提取物中芦荟多糖有效成分含量低，使得芦荟提取物的效果大大降低，限制了芦荟提取物的应用。因此，需要对芦荟提取工艺进行改进，提升芦荟多糖的提取率。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种芦荟提取物的制备方法，该方法简单可行，且得到的芦荟提取物中芦荟多糖含量较高。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
一种芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)芦荟全叶经清洗、去皮、切块后，获得芦荟果肉丁；
(2)将芦荟果肉丁与提取溶液按质量比1:3-8混合，进行微波加热提取，获得混合液，所述提取溶液包括尿素和氯化胆碱，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.5-2.5:1；
(3)混合液过滤后取滤液，加入无水乙醇，静置醇沉，离心取上清液，浓缩干燥后，得到所述芦荟提取物。
发明人试验发现，相较于其它种类的低共熔溶剂，本发明选用包括尿素和氯化胆碱的低共熔溶剂作为芦荟提取物的提取溶液，对芦荟多糖的提取效率较高，获得的芦荟提取物中的芦荟多糖含量更高，本发明通过优化芦荟果肉丁与提取溶液的比例、尿素和氯化胆碱的比例，有利于提高芦荟多糖的提取效果。
本发明在微波加热条件下进行提取，加速细胞破裂，使得细胞中的多糖有效成分易于释放，缩短提取时间，也减少提取溶液的消耗，提高芦荟多糖的提取率。
进一步地，所述芦荟为库拉索芦荟，优选健康2年以上的库拉索芦荟叶。
进一步地，所述芦荟果肉丁的长、宽、高不超过1cm，更优选为0.1～0.5cm，在提取过程中有利于加速有效成分的释放。
进一步地，所述步骤(2)中，芦荟果肉丁与提取溶液的质量比1:4-5，有利于提高芦荟多糖的提取率。
发明人经过试验发现，微波提取工艺参数与提取效果具有紧密的联系，其中，提取温度过低，容易导致芦荟提取效率降低，提取温度过高，影响低共熔溶剂的稳定性，也会导致提取率有所降低；在一定范围内，随着微波提取时间延长，芦荟多糖提取率增加，但超过25min后，提取率趋于平稳；微波功率过低，对于提升提取效果不明显，微波功率过高，影响低共熔溶剂的稳定性，也会导致芦荟多糖提取率有所降低；进一步地，所述步骤(2)中，微波加热的微波功率为400-600W，微波提取时间为15-25min，提取温度为70-75℃，有利于提高提取效率。
进一步地，所述步骤(2)中，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.6-1.8:1，有利于提高芦荟多糖的提取率。
进一步地，所述步骤(3)中，静置醇沉的时间为6-12h。
进一步地，所述步骤(3)中，离心的转速为4000-5000r/min，离心的时间为5-8min。
本发明还提供了根据上述方法制备得到的芦荟提取物。
本发明还提供了上述芦荟提取物在医药和/或化妆品中的应用。本发明制备得到的芦荟提取物中芦荟多糖含量较高，具有良好的抗氧化能力，能够促进细胞增殖，可应用于医药和/或化妆品。
本发明还提供了尿素和氯化胆碱在制备芦荟提取物中的应用，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.5-2.5:1。
进一步地，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.6-1.8:1，有利于提高芦荟多糖的提取率。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明选用含有尿素和氯化胆碱的低共熔溶剂作为芦荟提取物的提取溶液，结合微波提取工艺，有利于缩短提取时间，且获得提取物中芦荟多糖含量较高。
(2)本发明制备得到的芦荟提取物中芦荟多糖含量较高，具有良好的抗氧化能力和促进细胞增殖活性，可应用于医药和/或化妆品。
具体实施方式
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明进一步说明。本领域技术人员应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
一种芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取健康2年以上的库拉索芦荟全叶，经清洗、去皮、切块为0.1-0.5cm的芦荟果肉丁；
(2)将芦荟果肉丁与提取溶液按质量比1:3混合，进行微波加热提取，获得混合液，其中，所述提取溶液包括尿素和氯化胆碱，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.6:1；微波加热的微波功率为500W，微波提取时间为25min，提取温度为75℃；
(3)混合液过滤后取滤液，加入无水乙醇，静置醇沉8h，离心取上清液，离心的转速为5000r/min，离心的时间为6min，浓缩干燥后，得到所述芦荟提取物。
实施例2
一种芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取健康2年以上的库拉索芦荟全叶，经清洗、去皮、切块为0.1-0.5cm的芦荟果肉丁；
(2)将芦荟果肉丁与提取溶液按质量比1:4混合，进行微波加热提取，获得混合液，其中，所述提取溶液包括尿素和氯化胆碱，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.6:1；微波加热的微波功率为500W，微波提取时间为25min，提取温度为75℃；
(3)混合液过滤后取滤液，加入无水乙醇，静置醇沉8h，离心取上清液，离心的转速为5000r/min，离心的时间为6min，浓缩干燥后，得到所述芦荟提取物。
实施例3
一种芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取健康2年以上的库拉索芦荟全叶，经清洗、去皮、切块为0.1-0.5cm的芦荟果肉丁；
(2)将芦荟果肉丁与提取溶液按质量比1:5混合，进行微波加热提取，获得混合液，其中，所述提取溶液包括尿素和氯化胆碱，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.6:1；微波加热的微波功率为500W，微波提取时间为25min，提取温度为75℃；
(3)混合液过滤后取滤液，加入无水乙醇，静置醇沉8h，离心取上清液，离心的转速为5000r/min，离心的时间为6min，浓缩干燥后，得到所述芦荟提取物。
实施例4
一种芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取健康2年以上的库拉索芦荟全叶，经清洗、去皮、切块为0.1-0.5cm的芦荟果肉丁；
(2)将芦荟果肉丁与提取溶液按质量比1:8混合，进行微波加热提取，获得混合液，其中，所述提取溶液包括尿素和氯化胆碱，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.6:1；微波加热的微波功率为500W，微波提取时间为25min，提取温度为75℃；
(3)混合液过滤后取滤液，加入无水乙醇，静置醇沉8h，离心取上清液，离心的转速为5000r/min，离心的时间为6min，浓缩干燥后，得到所述芦荟提取物。
实施例5
一种芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取健康2年以上的库拉索芦荟全叶，经清洗、去皮、切块为0.1-0.5cm的芦荟果肉丁；
(2)将芦荟果肉丁与提取溶液按质量比1:5混合，进行微波加热提取，获得混合液，其中，所述提取溶液包括尿素和氯化胆碱，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.5:1；微波加热的微波功率为500W，微波提取时间为25min，提取温度为75℃；
(3)混合液过滤后取滤液，加入无水乙醇，静置醇沉8h，离心取上清液，离心的转速为5000r/min，离心的时间为6min，浓缩干燥后，得到所述芦荟提取物。
实施例6
一种芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取健康2年以上的库拉索芦荟全叶，经清洗、去皮、切块为0.1-0.5cm的芦荟果肉丁；
(2)将芦荟果肉丁与提取溶液按质量比1:5混合，进行微波加热提取，获得混合液，其中，所述提取溶液包括尿素和氯化胆碱，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.8:1；微波加热的微波功率为500W，微波提取时间为25min，提取温度为75℃；
(3)混合液过滤后取滤液，加入无水乙醇，静置醇沉8h，离心取上清液，离心的转速为5000r/min，离心的时间为6min，浓缩干燥后，得到所述芦荟提取物。
实施例7
一种芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取健康2年以上的库拉索芦荟全叶，经清洗、去皮、切块为0.1-0.5cm的芦荟果肉丁；
(2)将芦荟果肉丁与提取溶液按质量比1:5混合，进行微波加热提取，获得混合液，其中，所述提取溶液包括尿素和氯化胆碱，尿素和氯化胆碱的摩尔比为2:1；微波加热的微波功率为500W，微波提取时间为25min，提取温度为75℃；
(3)混合液过滤后取滤液，加入无水乙醇，静置醇沉8h，离心取上清液，离心的转速为5000r/min，离心的时间为6min，浓缩干燥后，得到所述芦荟提取物。
实施例8
一种芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取健康2年以上的库拉索芦荟全叶，经清洗、去皮、切块为0.1-0.5cm的芦荟果肉丁；
(2)将芦荟果肉丁与提取溶液按质量比1:5混合，进行微波加热提取，获得混合液，其中，所述提取溶液包括尿素和氯化胆碱，尿素和氯化胆碱的摩尔比为2.5:1；微波加热的微波功率为500W，微波提取时间为25min，提取温度为75℃；
(3)混合液过滤后取滤液，加入无水乙醇，静置醇沉8h，离心取上清液，离心的转速为5000r/min，离心的时间为6min，浓缩干燥后，得到所述芦荟提取物。
实施例9
一种芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取健康2年以上的库拉索芦荟全叶，经清洗、去皮、切块为0.1-0.5cm的芦荟果肉丁；
(2)将芦荟果肉丁与提取溶液按质量比1:5混合，进行微波加热提取，获得混合液，其中，所述提取溶液包括尿素和氯化胆碱，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.8:1；微波加热的微波功率为300W，微波提取时间为30min，提取温度为75℃；
(3)混合液过滤后取滤液，加入无水乙醇，静置醇沉8h，离心取上清液，离心的转速为5000r/min，离心的时间为6min，浓缩干燥后，得到所述芦荟提取物。
实施例10
一种芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取健康2年以上的库拉索芦荟全叶，经清洗、去皮、切块为0.1-0.5cm的芦荟果肉丁；
(2)将芦荟果肉丁与提取溶液按质量比1:5混合，进行微波加热提取，获得混合液，其中，所述提取溶液包括尿素和氯化胆碱，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.8:1；微波加热的微波功率为500W，微波提取时间为25min，提取温度为80℃；
(3)混合液过滤后取滤液，加入无水乙醇，静置醇沉8h，离心取上清液，离心的转速为5000r/min，离心的时间为6min，浓缩干燥后，得到所述芦荟提取物。
对比例1
一种芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取健康2年以上的库拉索芦荟全叶，经清洗、去皮、切块为0.1-0.5cm的芦荟果肉丁；
(2)将芦荟果肉丁与提取溶液按质量比1:1混合，进行微波加热提取，获得混合液，其中，所述提取溶液包括尿素和氯化胆碱，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.6:1；微波加热的微波功率为500W，微波提取时间为25min，提取温度为75℃；
(3)混合液过滤后取滤液，加入无水乙醇，静置醇沉8h，离心取上清液，离心的转速为5000r/min，离心的时间为6min，浓缩干燥后，得到所述芦荟提取物。
对比例2
一种芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取健康2年以上的库拉索芦荟全叶，经清洗、去皮、切块为0.1-0.5cm的芦荟果肉丁；
(2)将芦荟果肉丁与提取溶液按质量比1:4混合，进行微波加热提取，获得混合液，其中，所述提取溶液包括柠檬酸和氯化胆碱，柠檬酸和氯化胆碱的摩尔比为1.6:1；微波加热的微波功率为500W，微波提取时间为25min，提取温度为75℃；
(3)混合液过滤后取滤液，加入无水乙醇，静置醇沉8h，离心取上清液，离心的转速为5000r/min，离心的时间为6min，浓缩干燥后，得到所述芦荟提取物。
对比例3
一种芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取健康2年以上的库拉索芦荟全叶，经清洗、去皮、切块为0.1-0.5cm的芦荟果肉丁；
(2)将芦荟果肉丁与提取溶液按质量比1:4混合，进行微波加热提取，获得混合液，其中，所述提取溶液包括乙二醇和氯化胆碱，乙二醇和氯化胆碱的摩尔比为1.6:1；微波加热的微波功率为500W，微波提取时间为25min，提取温度为75℃；
(3)混合液过滤后取滤液，加入无水乙醇，静置醇沉8h，离心取上清液，离心的转速为5000r/min，离心的时间为6min，浓缩干燥后，得到所述芦荟提取物。
对比例4
一种芦荟提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)选取健康2年以上的库拉索芦荟全叶，经清洗、去皮、切块为0.1-0.5cm的芦荟果肉丁；
(2)将芦荟果肉丁与提取溶液按质量比1:4混合，进行微波加热提取，获得混合液，其中，所述提取溶液包括尿素和氯化胆碱，尿素和氯化胆碱的摩尔比为3:1；微波加热的微波功率为500W，微波提取时间为25min，提取温度为75℃；
(3)混合液过滤后取滤液，加入无水乙醇，静置醇沉8h，离心取上清液，离心的转速为5000r/min，离心的时间为6min，浓缩干燥后，得到所述芦荟提取物。
(一)芦荟多糖含量测定
以葡萄糖作为参照，根据苯酚-硫酸法测定上述实施例和对比例制备得到的芦荟提取物中芦荟多糖含量，结果如表1所示。
表1
Figure BDA0002999700500000081
Figure BDA0002999700500000091
实施例1-4和对比例1结果可知，芦荟果肉丁与提取溶液的质量比为1:3-8，尤其是1:4-5时，制备得到的芦荟提取物中芦荟多糖含量较高。
比较实施例2和对比例2-3结果可知，虽然柠檬酸/氯化胆碱、乙二醇/氯化胆碱也属于常用的低共熔溶剂，然而，不同种类的低共熔溶剂对于芦荟多糖提取物的提取效果并不等同，本发明选用包括尿素和氯化胆碱的低共熔溶剂作为芦荟提取物的提取溶液，对芦荟多糖具有良好的选择性。
比较实施例3、实施例5-8和对比例4结果可知，当尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.5-2.5:1，尤其是1.6-1.8:1时，制备得到的芦荟提取物中芦荟多糖含量较高。
由实施例6、实施例9-10结果可知，微波加热提取工艺参数对提取物中芦荟多糖的含量也有所影响，为提高芦荟多糖的提取率，本发明优选微波加热的微波功率为400-600W，微波提取时间为15-25min，提取温度为70-75℃。
可见，本发明制备得到的芦荟提取物中芦荟多糖含量较高，可作为润肤保湿功效成分应用在化妆品中。
(二)芦荟提取物抗氧化能力测试
采用DPPH自由基清除实验来测试芦荟提取物的抗氧化能力。
DPPH自由基清除实验原理：DPPH自由基有单电子，在517nm处有一强吸收，其醇溶液呈紫色的特性。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速的定量分析。
具体操作步骤：
将1mg提取物样品加2mL的20μg/mL DPPH甲醇溶液，避光30min，紫外分光光度计测定A517的吸光度。
DPPH清除率％＝(1-A样品/A对照)×100％
试验采用维生素C作为阳性对照，测试待测样品(芦荟提取物)的抗氧化能力,结果如表2所示。
表2
组别 DPPH·清除率(％)
实施例1 65.3
实施例2 78.9
实施例3 80.2
实施例4 68.5
实施例5 73.2
实施例6 83.7
实施例7 71.2
实施例8 70.3
实施例9 66.5
实施例10 67.2
对比例1 44.5
对比例2 36.8
对比例3 50.1
对比例4 31.7
阳性对照 85.4
上述试验结果表明，本发明的芦荟提取物具有良好的抗氧化活性，可作为化妆品中的抗氧化抗衰老功效成分。
(三)促细胞增殖试验
采用3T3细胞作为测试细胞株，采用CCK-8试剂盒检测。
具体实验步骤：
(1)3T3细胞2000cells/well，37℃，5％CO2细胞培养箱培养24h。
(2)样品浓度：分别取实施例3、实施例6的芦荟提取物作为样品，分别按1:200、1:500的质量比稀释作为待测溶液，加样50μL/孔，每孔补加50μL培养基至100μL，对照组则只加培养基100μL，每个浓度设立5个复孔。
(3)加样培养3天后加入10μL wst-8；37℃，2h，测定OD450。
细胞增殖率结果如表3所示。
表3
Figure BDA0002999700500000111
试验结果表明，本发明制备得到的芦荟提取物具有较好的促细胞增殖活性。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (10)

1.一种芦荟提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)芦荟全叶经清洗、去皮、切块后，获得芦荟果肉丁；
(2)将芦荟果肉丁与提取溶液按质量比1:3-8混合，进行微波加热提取，获得混合液，所述提取溶液包括尿素和氯化胆碱，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.5-2.5:1；
(3)混合液过滤后取滤液，加入无水乙醇，静置醇沉，离心取上清液，浓缩干燥后，得到所述芦荟提取物。
2.根据权利要求1所述的芦荟提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，芦荟果肉丁与提取溶液的质量比1:4-5。
3.根据权利要求1所述的芦荟提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，微波加热的微波功率为400-600W，微波提取时间为15-25min，提取温度为70-75℃。
4.根据权利要求1所述的芦荟提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.6-1.8:1。
5.根据权利要求1所述的芦荟提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，静置醇沉的时间为6-12h。
6.根据权利要求1所述的芦荟提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，离心的转速为4000-5000r/min，离心的时间为5-8min。
7.根据权利要求1-6任一项所述方法制备得到的芦荟提取物。
8.权利要求7所述的芦荟提取物在医药和/或化妆品中的应用。
9.尿素和氯化胆碱在制备芦荟提取物中的应用，其特征在于，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.5-2.5:1。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，尿素和氯化胆碱的摩尔比为1.6-1.8:1。
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