CN113134015A - 细胞外囊泡及其在皮肤产品的用途 - Google Patents

细胞外囊泡及其在皮肤产品的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN113134015A
CN113134015A CN202110076177.XA CN202110076177A CN113134015A CN 113134015 A CN113134015 A CN 113134015A CN 202110076177 A CN202110076177 A CN 202110076177A CN 113134015 A CN113134015 A CN 113134015A
Authority
CN
China
Prior art keywords
stem cell
mesenchymal stem
extracellular vesicles
cells
skin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110076177.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN113134015B (zh
Inventor
马兰
寇晓星
施松涛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Medical Micro Cell Biotechnology Guangzhou Co ltd
Original Assignee
Medical Micro Cell Biotechnology Guangzhou Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Medical Micro Cell Biotechnology Guangzhou Co ltd filed Critical Medical Micro Cell Biotechnology Guangzhou Co ltd
Publication of CN113134015A publication Critical patent/CN113134015A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113134015B publication Critical patent/CN113134015B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A61K31/05—Phenols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/155—Amidines (), e.g. guanidine (H2N—C(=NH)—NH2), isourea (N=C(OH)—NH2), isothiourea (—N=C(SH)—NH2)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A61K31/553—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having at least one nitrogen and one oxygen as ring hetero atoms, e.g. loxapine, staurosporine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48—Reproductive organs
    • A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
    • A61K35/545—Embryonic stem cells; Pluripotent stem cells; Induced pluripotent stem cells; Uncharacterised stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/14—Liposomes; Vesicles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
    • A61K8/981—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin of mammals or bird
    • A61K8/983—Blood, e.g. plasma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q7/00—Preparations for affecting hair growth
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0662—Stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0662—Stem cells
    • C12N5/0663—Bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0696—Artificially induced pluripotent stem cells, e.g. iPS

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本公开属于生物医药领域，涉及细胞外囊泡及其在作用于皮肤的药物、保健品或护肤品方面的用途。

Description

细胞外囊泡及其在皮肤产品的用途
技术领域
本公开属于生物医药领域，涉及细胞外囊泡及其在皮肤产品的用途。
发明背景
细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)是细胞分泌的含有蛋白质、核酸及各种细胞因子的纳米级载体。细胞外囊泡可以通过内分泌或旁分泌的方式作用于靶细胞，在细胞间物质传递和信息交流过程中发挥了重要作用。研究发现，细胞外囊泡所介导的信息交流在机体生理或病理过程中发挥了重要的调控作用，涉及到免疫调节、肿瘤生长、血管生成、损伤修复等。目前该领域的研究主要集中在外泌体(exosomes)方向。外泌体是直径在30-150nm左右的细胞外囊泡，其内含有RNA、脂质和蛋白质等成分。外泌体广泛参与了机体的各种生理/病理性调控，能够用作多种疾病的诊断、治疗和预后评估。迄今为止，间充质干细胞(mesenchymal stemcells，MSCs)被认为是产生外泌体能力最强的细胞。众多的研究发现MSCs来源的外泌体能模拟MSCs的生物学功能，在促进细胞生长和分化，修复组织缺损等方面发挥了重要的调控作用。因此，近年来以MSCs来源的外泌体为基础的细胞囊泡疗法取得了显著的发展。然而，目前以外泌体为基础的细胞囊泡治疗仍然存在诸多问题，主要表现在外泌体的提取和纯化过程复杂，耗时长，对设备和试剂的要求较高，生理性外泌体产量较低等等，这些缺陷都限制了外泌体治疗的临床转化和应用。
导致毛发脱落的疾病有多种，其中最常见的是斑秃。斑秃(Alopecia areata)俗称“鬼剃头”，是一种突然发生的局限性斑片状的脱发，局部皮肤正常，无自觉症状。目前病因不明，病理检查可见毛囊减少，在毛囊周围有淋巴细胞浸润，且本病有时合并其他自身免疫性疾病(Alopecia Areata:Review ofEpidemiology,Clinical Features,Pathogenesis,and New Treatment Options.DarwinE,Hirt PA,Fertig R,Doliner B,Delcanto G,Jimenez JJ.Int J Trichology.2018；10(2):51-60)。大多数普通斑秃有自然痊愈倾向，少数病例反复发生，所以治疗困难，但有很多疗法可以联合治疗脱发。可发生于任何年龄，但以青壮年多见，两性发病率无明显差异。皮损表现为圆形或卵圆形非瘢痕性脱发，在斑秃边缘常可见“感叹号”样毛发。头发全部或几乎全部脱落，称为全秃。全身所有的毛发(包括体毛)都脱落，称为普脱，还可见匍行性脱发。病区皮肤除无毛发外，不存在其他异常。目前有文献报道在C3H/HeJ小鼠中可通过局部涂抹咪喹莫特的方法制作斑秃模型，目前对于斑秃尚无有效的治疗方法。
发明内容
一方面，本公开提供了诱导性囊泡在制备或作为皮肤产品或皮肤附属器产品方面的用途。
在本公开中，“皮肤产品”是指，可以对皮肤起到作用的产品，例如，对皮肤起到治疗、改善、修复、除皱或消除伤口等作用的产品，可以直接或间接作用于皮肤，可以是药物、药物载体、食品、保健品、护肤品或医美用品。
在一些实施方案中，所述产品为：药物、药物载体、食品、保健品、护肤品、或医美用品。
在一些实施方案中，所述皮肤为表皮、真皮、或皮下组织。
在一些实施方案中，所述皮肤附属器为毛、头发、汗腺、皮脂腺、指甲、或趾甲。
发明人在研究过程中，偶然发现，向裸鼠注射IEV，IEV在心、肾、脑中无分布，但在指甲中分布，推测与IEV的靶向性有关。
经过进一步研究，发明人发现IEV对毛发再生，伤口愈合有很好的治疗效果。一方面是IEV对皮肤或皮肤附属器具有治疗作用，一方面是其刚好靶向于皮肤或皮肤附属器，使得其尤其适合制备或作为皮肤产品或皮肤附属器产品进行应用。
一方面，本公开提供了一种组合物，包括：诱导性囊泡和皮肤药物或护养物。
在一些实施方案中，所述皮肤药物与护养物被包裹在细胞外囊泡中，或以分开的形式存在于组合物中。
在一些实施方案中，所述组合物的剂型优选地选自冻干粉针、注射剂、片剂、胶囊或贴剂；在一些实施方案中，所述贴剂选自微针贴剂；在一些实施方案中，所述剂型选自注射剂或微针贴剂。
在一些实施方案中，所述诱导性囊泡是在干细胞处于正常存活期间通过外力诱导凋亡而产生的囊泡；在一些实施方案中，所述诱导性囊泡是通过添加星形孢菌、紫外线照射、饥饿法、或热应力法或其中一种或多种的组合诱导干细胞或干细胞凋亡产生。
一方面，本公开提供了一种组合物，所述的组合物包括由干细胞或干细胞胞外囊泡组成的第一剂；和，由抗衰老物质或Wnt信号通路正向调节剂组成的第二剂。
在一些实施方案中，所述细胞外囊泡指的是在前体细胞(例如干细胞、尤其例如间充质干细胞)正常存活期间，被干预或诱导，使其凋亡产生的一类亚细胞产物，也称之为诱导性囊泡。优选地，前体细胞是早期的前体细胞。
通常这一类亚细胞产物：其有膜结构，包含有遗传物质DNA，不能分裂的、可运动的和迁移的。是介于细胞和细胞外囊泡(凋亡小体、外泌体等)之间的一类物质。
在一些实施方案中，所述的干细胞选自诱导性多能干细胞、血液干细胞、骨髓间充质干细胞、尿液间充质干细胞、口腔间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、脐带间充质干细胞、骨膜间充质干细胞、皮肤间充质干细胞中的一种或多种。
在一些实施方案中，所述的干细胞选自诱导性多能干细胞、血液干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、脐带间充质干细胞、口腔间充质干细胞、皮肤间充质干细胞中的一种或多种。
在一些实施方案中，所述的干细胞选自诱导性多能干细胞、脐带间充质干细胞、血液干细胞或骨髓间充质干细胞中的一种或多种。
在一些实施方案中，所述的干细胞胞外囊泡选自外泌体、迁移体、微泡、凋亡小体、诱导性细胞外囊泡中的一种或多种。
在一些实施方案中，所述的干细胞胞外囊泡选自诱导性细胞外囊泡。
在一些实施方案中，所述抗衰老物质选自二甲双胍，白黎芦醇中的一种或多种。
在一些实施方案中，所述抗衰老物质选自二甲双胍。
在一些实施方案中，所述Wnt信号通路选自Wnt/β-catenin通路。
在一些实施方案中，所述正向调节剂选自激动剂。
在一些实施方案中，所述激动剂选自Licl、CHIR99021、SB-216763、BIO、WntAgonist或WAY 262611中的一种或多种。
在一些实施方案中，所述激动剂选自Licl。
在一些实施方案中，所述正向调节剂选自包含进行运动的提示。
在一些实施方案中，所述提示选自包装，标签或说明书中的一种或多种。
在一些实施方案中，所述组合物中，包含干细胞或干细胞胞外囊泡与抗衰老物质的比例为(0.5-5)×107个：(0.05-10)mg。
在一些实施方案中，所述组合物中，包含1×107-3×107个干细胞或干细胞胞外囊泡；和，0.1-5mg抗衰老物质。
在一些实施方案中，所述组合物中包含1.8×107-2.7×107个干细胞或干细胞胞外囊泡。
在一些实施方案中，所述组合物中包含0.2-3mg抗衰老物质。
将所述组合物应用时，可以将所述细胞外囊泡任选地通过选自由静脉内注射、肌肉注射、皮下注射、鞘内注射或输注以及器官内输注所组成的组中的途径进行给药。例如，作为例子，对于静脉注射，可以通过尾静脉注射。器官内输注包括输注至解剖学空间中，例如，作为例子，胆囊、胃肠腔、食道、肺系统(通过吸入)和/或膀胱。
作为例子，对于胃肠腔输注中腹腔注射，与尾静脉注射注射相比，腹腔注射也可以获得良好的治疗效果。腹腔注射的安全性和可操作性要优于尾静脉注射。
在一些实施方案中，组合物中的两种试剂以单一药物组合物的形式提供，并且在一些实施方案中，可以预期是包含两种试剂中的每一种的试剂盒或组合的分配器包装。应当理解，本公开的内容涵盖两种试剂中的任一种对受试者的共同施用，无论这种施用是以单一制剂还是以分开的制剂组合，以及这种施用是同时的还是交错的。
在一些实施方案中，所述细胞外囊泡是通过添加星形孢菌素、紫外线照射、饥饿法、或热应力法或其组合诱导间充质干细胞凋亡产生。
在一些实施方案中，所述细胞外囊泡是通过添加星形孢菌素诱导间充质干细胞凋亡产生。
一些实施方案中，所述间充质干细胞的代数可以为第2～5代，但又不限于此。
在一些实施方案中，所述星形孢菌素的浓度为大于或等于1nM；优选地，为1-15000nM；优选地，为200-10000nM；优选地，为250-1000nM；优选地，为500-1000nM。除此之外，星形孢菌素的浓度还可以是280-9000nM；还可以是230-8500nM；还可以是500-1000nM；还可以是500-900nM；还可以是500-800nM。在一些实施方案中，所述星形孢菌素的浓度为500nM。
在一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的直径为0.45μm或以下。一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的直径为0.05-0.45μm。一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的直径为0.1-0.45μm。一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的直径为0.1-0.35μm。一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的直径为0.15-0.35μm。一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的直径为0.15-0.3μm。一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的直径为0.15-0.2μm。一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的直径为0.05-0.4μm。一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的直径为0.05-0.38μm。一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的直径为0.05-0.35μm。一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的直径为0.05-0.32μm。一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的直径为0.05-0.3μm。一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的直径为0.05-0.25μm。一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的直径为0.05-0.22μm。一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的直径为0.15-0.22μm。一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的直径还可以是0.15-0.45μm，还可以是0.2-0.3μm。
在一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡具有标志物Syntaxin 4。在一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡高表达标志物Syntaxin 4。在一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的标志物Syntaxin 4的表达高于MSC或外泌体。在一些实施方案中，所述标志物Syntaxin 4的表达量为来源于间充质干细胞的外泌体中Syntaxin 4的表达量的3-6倍。在一些实施方案中，所述标志物Syntaxin 4的表达量为来源于间充质干细胞的外泌体中Syntaxin 4的表达量的3.5-5倍。在一些实施方案中，所述标志物Syntaxin 4的表达量为来源于间充质干细胞的外泌体中Syntaxin 4的表达量的4.45倍。在一些实施方案中，所述标志物还包括Annexin V、Flotillin-1、Cadherin 11和Integrin alpha 5中的一种或多种。在一些实施方案中，所述标志物为Syntaxin 4、Annexin V、Flotillin-1、Cadherin 11和Integrin alpha 5的组合。在一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡高表达标志物Annexin V、Flotillin-1、Cadherin 11、Integrin alpha 5。在一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡的标志物AnnexinV、Flotillin-1、Cadherin 11、Integrin alpha 5的表达量高于MSC或外泌体。在一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡中的标志物Annexin V、Flotillin-1、Cadherin 11、Integrin alpha 5的表达量相对于来源于间充质干细胞的外泌体中标记物的表达量分别为1-2倍、2-3倍、1-3倍和3-4倍。在一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡中的标志物Annexin V、Flotillin-1、Cadherin 11、Integrinalpha 5相对于来源于间充质干细胞的外泌体中标记物的表达量分别为1.5-2倍、2.5-3倍、1.5-2.5倍和3.5-4倍。在一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡中的标志物AnnexinV、Flotillin-1、Cadherin11、Integrin alpha 5相对于来源于间充质干细胞的外泌体中标记物的的表达量分别为1.76倍、2.81倍、2.41倍、3.68倍。本公开中所述诱导性细胞外囊泡与外泌体有本质的不同，例如与外泌体相比，本公开所述的诱导性细胞外囊泡IEVs高表达Syntaxin 4，以及其AnnexinV、Flotillin-1、Cadherin 11、Integrin alpha 5的表达量明显高于外泌体(见实施例3)。除了标志物表达有差别之外，所述诱导性细胞外囊泡IEVs在功能上或治疗效果上也呈现出有别于干细胞和其他的细胞外囊泡如外泌体的特性。在一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡还表达CD29、CD44、CD73、CD166；且不表达CD34、CD45。在一些实施方案中，所述诱导性细胞外囊泡还表达CD9、CD63、CD81和C1q中的一个或多个。
在一些实施方案中，还提供了所述的组合物在制备促毛发再生或促伤口愈合药物中的应用。
在一些实施方案中，所述组合物还包含药学上可接受的载体；所述组合物的剂型优选地选自冻干粉针、注射剂、片剂、胶囊或贴剂。
在一些实施方案中，所述贴剂选自微针贴剂；在一些实施方案中，所述剂型选自注射剂、微针贴剂或片剂。
在一些实施方案中，还提供了所述的细胞外囊泡的制备方法，包括如下步骤：
1)体外培养间充质干细胞，细胞汇合80％-90％时，PBS冲洗2-5遍；
2)将步骤1)制得的间充质干细胞加入含有500-1000nM星形孢菌素的无血清培养基，37℃孵育16-24h，收集细胞上清液；
3)将步骤2)收集的细胞上清液在4℃下500-15000g离心5-30分钟，收集上清液；
4)将步骤3)收集的细胞上清液在4℃下1500-2500g离心5-30分钟，收集上清液；
5)将步骤4)收集的细胞上清液在4℃下10000-30000g离心15-60分钟，所得沉淀物为细胞外囊泡；
在一些实施方案中，还包括细胞外囊泡的清洗步骤；在一些实施方案中，所述清洗步骤具体为：6)将步骤5)制得的细胞外囊泡用PBS重悬，在4℃下10000-30000g离心15-60分钟，所得沉淀物为细胞外囊泡。
一方面，本公开还提供了抗衰老物质在制备干细胞服用品的伴随药物方面的用途。
本公开实施方案中的“干细胞服用品”包括但不限于能使干细胞或干细胞囊泡进入动物体内的产品或方法。
作为示范性的例子，能使干细胞服用品进入动物体内的产品包括冻干粉针、注射剂、片剂、胶囊或贴剂。
作为示范性的例子，能使干细胞服用品进入动物体内的方法包括口服、注射、敷贴、涂抹、喷撒、滴注。
本公开实施方案中的“伴随药物”包括随另外一种或多种药物一同进入体内的药物。伴随药物可以同时或几乎同时进入体内。
作为示范性的例子，几乎同时进入可以是一个接一个地进入；或在同一天的不同时刻进入体内。例如，可以将多个药剂或其活性成分配制成一种制剂，或者两种或多种制剂至少基本上同时进入体内。例如，相互在约1小时内。
在一些实施方案中，所述的干细胞服用品为干细胞或干细胞胞外囊泡。
在一些实施方案中，所述的干细胞服用品为用以摄入动物体的干细胞或干细胞胞外囊泡；优选地，所述动物为哺乳动物；优选地，所述哺乳动物为人。
一方面，本公开还提供了一种干细胞服用系统，其包括：干细胞服用品，和，伴随品；所述的伴随品选自抗衰老物质或Wnt信号通路正向调节剂中的一种或两种；所述的干细胞服用品包含干细胞或干细胞胞外囊泡；所述抗衰老物质或Wnt信号通路正向调节剂如前所述。
一方面，本公开还提供了干细胞或干细胞胞外囊泡在制备Wnt信号通路调控的干细胞或干细胞胞外囊泡代谢而促进毛发再生或伤口愈合的药物方面的用途；
在一些实施方案中，所述促进毛发再生或伤口愈合的药物包括干细胞或干细胞胞外囊泡；和，抗衰老物质。所述干细胞或干细胞胞外囊泡及抗衰老物质如前所述。
一方面，本公开还提供了一种促进干细胞服用品排出动物体外、或毛发再生、或伤口愈合的方法，所述方法包括，在服用干细胞服用品期间，同时或几乎同时服用抗衰老物质，或进行运动。
本公开的一些实施方案中，“Wnt信号通路正向调节剂”包括那些可以上调、激活Wnt的试剂或方法，如激动剂，但并不限于此。前述的“方法”的实现包括对受试者的提示，说明，处方，嘱咐等。
一方面，本公开还提供一种皮肤或皮肤附属器疾病的治疗方法，包括以下步骤：向有需要的受试者施用所述的诱导性囊泡，组合物，干细胞服用系统。
在一些实施方案中，所述皮肤或皮肤附属器疾病选自创伤、脱发、瘢痕、烧烫伤或溃疡。在一些实施方案中，所述创伤选自切除伤口、切割、刺伤或穿刺伤口。
诱导性多能干细胞包括通过导入特定的转录因子将终末分化的体细胞重编程而形成的多能性干细胞。
附图说明
图1为实施例1中流式细胞检测图；
图2为实施例2制备IEV的技术路线图；
图3为用流式细胞分析技术分析的MSCs(106个MSCs)产生的IEVs数量统计结果；
图4A-图4F为IEVs颗粒的直径检测：图4A为流式检测IEVs的颗粒直径分布图；图4B为侧向散射光(SSC)分析IEVs的散射光强，显示IEVs颗粒直径分布；图4C为以BangsLaboratories公司生产的标准化小颗粒微球分析IEVs的散射光强，显示IEVs的颗粒直径分布；图4D为透射电镜(TEM)观察的IEVs，显示IEVs的颗粒直径分布；图4E为纳米粒子跟踪分析(NTA)，显示IEVs颗粒直径分布；图4F为纳米流式检测技术对IEVs进行单囊泡水平的粒径检测，显示IEVs的颗粒直径分布；
图5A-图5K为流式细胞技术IEVs的表面膜蛋白进行分析结果；
图6A-图6D为IEVs的内容物分析：图6A为DIA定量技术对MSCs、MSCs-Exosomes、MSCs-IEVs蛋白组学定量分析结果；图6B为筛选IEVs特异性高表达的蛋白绘制的热图；图6C为差异蛋白的GO富集分析IEVs表达Annexin V，Flotillin-1，Cadherin 11，Integrinalpha 5和Syntaxin 4分子的结果；图6D为western blot验证MSCs、MSCs-Exosomes、MSCs-IEVs表达Annexin V,Flotillin-1，Cadherin 11，Integrin alpha 5和Syntaxin 4的结果；
图7A为实施例3中IEV在皮肤表面的动态代谢示意图；
图7B显示随着时间推移，IEV逐渐从皮下组织向真皮层和表皮移动；
图7C显示第7天时在小鼠体表拔下的毛发中发现毛囊中存在PKH26-IEV；
图8A显示活体成像技术检测的第1，3，7天IEV在小鼠全身的分布情况；
图8B为第7天时IEV在小鼠各器官中的分布与对照组的对比；
图8C表示第3天时，IEV在小鼠指甲和门齿中的代谢示意图；
图9A为实施例4中不同处理的小鼠在第0天，第10天，第14天的背部毛发再生情况示意图；
图9B为实施例4中不同处理的小鼠在第0天，第10天，第14天的背部毛发再生面积统计分析示意图；
图10为实施例6中不同处理的小鼠在在第0天，第11天，第13天，第16天的背部毛发再生情况示意图；
图11为实施例5中不同药物与IEV联用，7天后IEV在皮肤表面的分布图；
图12为实施例5中不同药物与IEV联用对毛发再生促进效果示意图；
图13A为实施例6中施用Wnt激动剂Licl后的Western Blot结果；
图13B为实施例6中施用Wnt抑制剂Xav939后的Western Blot结果；
图13C为实施例6中在Xav939作用下的免疫荧光结果；
图13D为实施例6不同处理下的细胞涂片结果；
图13E为实施例6中不同处理后，IEV在表皮的排出情况免疫荧光结果；
图14A显示运动后循环中DKK1的水平；
图14B显示运动与否血液中IEV的数量及流式结果；
图14C为运动后IEV在皮肤表面排出量的免疫荧光结果；
图14D为活体成像技术检测的运动1或3天后IEV在小鼠全身的分布情况；
图14E为活体成像技术检测的运动1或3天后IEV在小鼠皮肤的分布情况；
图14F为流式检测运动7天后IEV在体内(血液)中的结果；
图15A显示实施例7中IEV和MSC处理对伤口愈合的促进作用；
图15B为实施例7中不同处理组对伤口愈合的作用示意图；
图15C为实施例7中不同处理组的免疫荧光分析结果；
图16为实施例10中水光导入IEV前后，受试者下巴部位皱纹对比图；
图17为实施例11中电镜下iPSC来源的IEVs；
图18为实施例12中高内涵细胞成像分析系统拍摄的hiPSCs和hUCMSCs死亡过程图；
图19为实施例12中使用流式分析诱导凋亡的hiPSCs和hUCMSCs；
图20为实施例12中使用流式分析的hiPSCs和hUCMSCs的Annexin5表达阳性率；
图21-23依次为实施例12中，NTA表征的hiPSCs-IEVs和hUCMSCs-IEVs的粒径、产量和电位；
图24为实施例12皮肤损伤模型中，不同处理组在不同时间点的伤口情况及伤口面积统计图。
具体实施方式
以下通过具体的实施例进一步说明本公开的技术方案，具体实施例不代表对本公开保护范围的限制。其他人根据本公开理念所做出的一些非本质的修改和调整仍属于本公开的保护范围。
本公开实施例中的IEVs为诱导性囊泡的简称，可称为诱导性囊泡，也可称为诱导性细胞外囊泡(Induced extracellularvesicles,IEVs)。诱导性细胞外囊泡是指的是一种在前体细胞(例如干细胞)正常存活时，被干预或诱导，使其凋亡产生的一类亚细胞产物。通常这一类亚细胞产物，具有膜结构，表达凋亡性标志物，部分包含有遗传物质DNA。发明人发现诱导性细胞外囊泡是区分于细胞和常规细胞外囊泡(如外泌体等)的一类物质。在一些实施方式中，所述的正常存活时的细胞，例如是非凋亡的细胞、非衰老的细胞、非老化而增殖停滞的细胞、非冻存后复苏的细胞、非发生恶变而异常增殖的细胞或非出现损伤的细胞等。在一些实施方式中，所述的正常存活时的细胞取自细胞培养过程中，细胞接触融合80-100％的时候的细胞。一些实施方式中，所述的正常存活时的细胞取自对数期细胞。一些实施方式中，所述的正常存活时的细胞取自人或鼠组织来源的原代培养及其传代培养细胞。一些实施方式中，所述的正常存活时的细胞取自已确立的细胞系或细胞株。在一些实施方式中，所述的前体细胞取自早期的细胞。
本公开中，IEV同IEVs。
本公开中的STS为星形孢菌素。
在本公开中，“组合物”中的组分可以是混合的形式存在，也可以被分开包装。分开的包装的组分也可以含有其各自的佐剂。所述的佐剂是指在药学中，可辅助药物疗效的手段。对于组合物中的组分在分开包装的情况下，各个分开包装的组分可以是同时施用或者是以任意的前后顺序施用，其中患者先用一种药物治疗，然后再给以另一种药物。所述的患者是指哺乳动物受治疗者，尤其是人类。
在本公开中，所述的“组合物”还可以是一种组分被另外一种组分包裹的形式存在。在一些实施方式中，在组合物中，所述的诱导性囊泡作为药物载体，将治疗或预防疾病的药物包裹在所述诱导性囊泡中。
“包含”或“包括”旨在表示组合物(例如介质)和方法包括所列举的要素，但不排除其他要素。当用于定义组合物和方法时，“基本上由……组成”意味着排除对于所述目的的组合具有任何重要意义的其他要素。因此，基本上由本文定义的元素组成的组合物不排除不会实质上影响要求保护的本公开的基本和新颖特征的其他材料或步骤。“由……组成”是指排除其他组成部分的微量元素和实质性的方法步骤。由这些过渡术语中的每一个定义的实施方案都在本公开的范围内。
如本文所使用的术语“和/或”是指并且涵盖一个或多个相关联的所列项目的任何和所有可能的组合。当在两个或多个项目的列表中使用时，术语“和/或”表示所列出的项目中的任何一个可以单独使用，或者可以使用两个或多个所列出的项目的任何组合。例如，如果组合物，组合，构造等被描述为包括(或包含)组分A，B，C和/或D，则该组合物可以单独包含A；单独包含B；单独包含C；单独包含D；包含A和B的组合；包含A和C的组合；包含A和D的组合；包含B和C的组合；包含B和D的组合；包含C和D的组合；包含A，B和C的组合；包含A，B和D组合；包含A，C和D的组合；包含B，C和D组合；或A，B，C和D组合使用。
实施例1 MSCs的分离培养
依据动物伦理委员会的指导用过量CO2处死小鼠，在无菌条件下，取下胫骨和股骨，剥净附着在其上的肌肉和结缔组织，进一步分离干骺端、暴露骨髓腔，用10mL无菌注射器抽取喊体积分数为10％胎牛血清的PBS反复冲洗骨髓腔，70μm孔径细胞滤网过滤后，500g离心5min，去除上清液后收集底部的细胞沉淀，PBS重悬，再次500g离心5min，收集最终的细胞沉淀。而后对细胞进行流式分选，以CD34-和CD90+为分选标准，分选出骨髓间充质干细胞(BMMSCs)。最后以Dex(-)培养液重悬细胞并接种于10cm直径细胞培养皿，37℃、5％CO2培养。24h后，吸除上清液未贴壁细胞，PBS清洗后，加入Dex(-)培养液继续培养。1周后加入等量Dex(+)培养液，再1周后可见密集的原代BMMSCs集落。采用胰蛋白酶37℃孵育消化BMMSCs并传代扩增，之后每3日换Dex(+)培养液，长满后传代。使用P2代BMMSCs进行后续实验。
其中，Dex(-)培养液成分如表1所示，Dex(+)培养液成分如表2所示：
表1 Dex(-)培养液成分表
Figure BDA0002907709310000061
表2 Dex(+)培养液配方表
Figure BDA0002907709310000071
采用流式细胞术分析表面标志物的方法来评估分离的BMMSCs的纯度。对于表面标志鉴定，胰蛋白酶消化收集P2代BMMSCs后，PBS清洗1次，以5×105/mL密度重悬细胞于含3％FBS的PBS中，加入1μL PE荧光偶联的CD29、CD44、CD90、CD45和CD34抗体，空白组不加。4℃避光孵育30min，PBS清洗2遍后，上机检测。检测结果如图1所示。
实施例2 BMMSC来源的IEV的制备
将实施例1中培养至第2代的MSCs(骨髓来源的MSCs)，用实施例1中的培养基(Dex(+)培养液)继续培养至细胞汇合80％-90％时，PBS冲洗2遍，加入含500nM STS的无血清培养基(α-MEM培养基)诱导凋亡，37℃孵育16-24h，收集细胞上清液，4℃下800g离心10分钟，收取上清液4℃下2000g离心10分钟，再次收集上清液4℃下16000g离心30分钟，所得沉淀物为IEV。500μl PBS重悬沉淀，4℃下16000g再次离心30分钟，即得到清洗后的IEV。
制备路线如图2所示。
对比例1同种MSC来源的外泌体分离和提取
将实施例1中培养至第2代的MSCs(骨髓来源的MSCs,BMMSCs)，用实施例1中的培养基继续培养至细胞汇合80％-90％时，用PBS冲洗2遍，加入无血清培养基，37℃孵育48h，收集细胞上清液，用于分离和提取外泌体。
提取步骤包括：800g离心10分钟—收集上清液—2000g离心10分钟—收集上清液—16000g离心30分钟—收集上清液—120000g离心90分钟—移除上清液，无菌PBS重悬沉淀—120000g再次离心90分钟，移除上清，收集底部的外泌体，无菌PBS重悬。
实施例3 IEVs的分析
(1)IEVs的定量和膜蛋白的分析
利用流式细胞技术对实施例2获得的IEVs进行定量分析，测量时间点为第1h、第4h、第8h、第16h和第24h，结果显示106个MSCs在诱导至第1h、第4h、第8h、第16h和第24h后分别可以产出0.76×108个、1.29×108个、1.95×108个、2.48×108个、3.14×108个IEVs，从中可以看出，诱导至24h后，单个MSC可以产出300个IEVs(图3)。
此外，流式检测发现IEVs的颗粒直径分布都集中在1μm以下，占94.97％(图4A)。
侧向散射光(SSC)分析结果同样显示IEVs散射光强集中在1μm以下范围(图4B)。
进一步的，通过Bangs Laboratories公司生产的标准化小颗粒微球(0.2μm，0.5μm，1μm)分析IEVs的散射光强，结果显示IEVs的颗粒直径都在0.2μm以下(图4C)。
透射电镜(TEM)观察的结果与流式检测结果相似，大部分囊泡的直径都在200nm及200nm以下(图4D)。
纳米粒子跟踪分析(NTA)结果与透射电镜观察结果相符，IEVs颗粒直径平均为169nm(图4E)。
利用最先进的纳米流式检测技术进行单囊泡水平的粒径检测，结果也显示IEVs的平均颗粒直径在100.63nm(图4F)。
利用流式细胞技术对实施例3提取的IEVs的表面膜蛋白进行分析，结果显示，MSCs来源的IEVs能够表达和MSCs相似的表面蛋白，即CD29，CD44，CD73，CD166阳性，CD34，CD45阴性。同时，IEVs能够表达细胞外囊泡的普遍性表面蛋白CD9，CD63，CD81和C1q(如图5A-5K)。
(2)IEVs的内容物分析
利用蛋白DIA定量技术完成MSCs，MSCs-Exosomes(对比例1提取的)，MSCs-IEVs(实施例2获得的)的蛋白组学定量分析。结果显示，MSCs-Exosomes和MSCs-IEVs的蛋白内容物表达与母细胞具有较高的重叠性，170种蛋白在IEVs中特异性高表达(图6A)。通过生物信息学分析，筛选IEVs特异性高表达的蛋白，绘制热图(图6B)，进一步结合差异蛋白的GO富集分析结果，明确IEVs能特异性高表达Annexin V，Flotillin-1，Cadherin 11，Integrin alpha5和Syntaxin 4分子(图6C)。与同种MSCs来源的Exosomes相比，IEVs的5种特征性分子的表达量均显著上调，具体为：IEVs中的标志物AnnexinV、Flotillin-1、Cadherin 11、Integrinalpha 5和Syntaxin 4相对于外泌体中相应标记物的表达量分别为1.76倍、2.81倍、2.41倍、3.68倍和4.45倍。最后利用western blot技术再次进行验证，结果与DIA定量分析结果相符(图6D)。
MSCs-Exosomes：指的是来源于MSCs的外泌体。
MSCs-IEVs：指的是来源于MSCs的IEVs。
其中所述的内容物分析中的MSCs和与提取外泌体和IEVs的MSCs为同一细胞株。
实施例4 IEV可经皮肤和毛发排出
取4×106的实施例2制备的IEV用DIR标记，200微升PBS重悬，通过尾静脉系统性注射裸鼠BALB/c-nu/nu体内，观察1，3，7天后用活体成像仪器检测IEV在皮肤表面的分布，结果如图7A-7C所示。
图7A显示IEV可到达皮肤表面，在第3天时数量最多，第7天基本消失，显示IEV在皮肤表面的动态代谢过程(图7A)。免疫荧光结果显示PKH26-IEV系统性注射C57小鼠后，随着时间推移，逐渐从皮下组织向真皮层和表皮移动。第7天在皮肤表面角质层观测到IEV大量存在，提示系统性注射的IEV可以随着皮肤角质层的脱落而排泄出去(图7B)。同时，第7天时在小鼠体表拔下的毛发中发现毛囊中存在PKH26-IEV，说明系统性注射的IEV还可随着毛发的脱落而代谢出去(图7C)。
此外，活体成像数据和免疫荧光结果均显示IEV在心、肾、脑中无分布，但在指甲中分布，进一步证明IEV可随着代谢排出体外(图8A-图8C)。
本实施例表明IEV可以通过皮肤和毛发排出，说明注射或增加IEV在体内的含量具有安全性。
实施例5 IEV能够促进毛发再生
7周的雌性C57小鼠(毛发静止期)进行脱毛处理，分别皮下注射PBS、IEVs、MSC和2％米诺地尔(Minoxidil)。比较第10天和第14天小鼠背部的毛发再生面积，实验结果显示IEVs和MSC较对照组有明显的促毛发再生作用，与传统的防脱发药物米诺地尔相比，在第14天时，IEVs和MSC都具有更明显的促毛发再生效果(图9A-9B)。
实施例6用微针贴片导入的IEV可促进毛发再生
用1300针微针贴片向C57小鼠背部导入人脐带间充质干细胞(UCMSC)来源的IEV。
UCMSC来源的IEV的获取方式：
采用的细胞是南京泰盛生物科技有限公司提供的脐带间充质干细胞(UCMSC)。获得的UCMSC使用STS(500nm)处理10小时诱导凋亡后，按以下流程提取IEV：
1.诱导完毕,自培养箱取出诱导完毕的细胞，用移液器吹打涮洗皿底及皿壁。混匀后，吸出混悬液,分别收集在对应编号的无菌离心管中，离心，离心时间10min,离心转速：800g，温度4℃。
2.离心完毕，将上述离心管中上清液吸出，收集于对应编号的新准备的无菌离心管中待二次离心提纯。管中沉淀用于凋亡率检测。
3.同步将上述离心后收集的上清液继续离心，离心时间10min，离心转速2000g，温度4℃。
4.离心完毕，收集上清液，弃去沉淀，过程进行观察。
5.将上清液分别吸入对应新编号无菌管中，待用。
6.将上述二次离心后，离心管中收集的上清液继续离心，离心时间30min，离心转速16000g，温度4℃。
7.离心完毕，收集沉淀，弃去上清液，过程进行观察。
8.准备好生理盐水，待离心完毕，弃去上清液，往离心管中分别加入适量生理盐水，吹打混悬洗涤，肉眼观察液相均匀为止。继续离心，离心时间30min，离心转速16000g，温度4℃。
9.离心完毕，弃去上清液，往离心管中加入适量生理盐水，与沉淀物混悬。
无菌操作，利用胶布将微针贴片固定与剃毛后的C57小鼠背部皮肤处，1小时后受试皮肤表面涂布IEV(4×106个来源于脐带间充质干细胞)。
各处理组的设计如表3所示。
表3
组别 载体
1 对照组
2 皮下注射IEV
3 1300针微导入IEV
如图10所示，1300针微针贴片导入IEV具有良好的促进毛发再生效果。
实施例7雷帕霉素、二甲双胍、达沙替尼和白黎芦醇与IEV联用显著提升IEV在皮肤的排出及提升毛发再生速度等方面的作用及对比
PKH26-IEV系统性注射C57小鼠，雷帕霉素(Rapamycin，5mg/kg)、二甲双胍(Metformin，100mg/kg)、达沙替尼(Dadatinib，5mg/kg)和白黎芦醇(Resveratrol，10mg/kg)分别腹腔连续注射7天后，免疫荧光结果显示二甲双胍能够显著增加IEV在皮肤组织的排出量，白黎芦醇次之，雷帕霉素和达沙替尼无明显增强作用(图11)。
小鼠毛发再生结果显示IEV能显著促进毛发再生，而联合应用抗衰老物质，如二甲双胍或白黎芦醇，都能提升IEV对毛发再生的促进作用(图12)。
本实施例表明，二甲双胍或白黎芦醇与IEV联用，能有效促进IEV在皮肤的排出量，缩短了IEV在体内的时间，提升了IEV的安全性。
本实施例还表明，二甲双胍或白黎芦醇与IEV联用，能够促进毛发再生，提示了抗衰老物质和IEV的组合物在作为促毛发再生的药物应用的可能性。
实施例8 Wnt信号通路调控IEV在皮肤的功能性代谢
Wnt通路是细胞生物学中的一个经典信号通路。它能让细胞保持在类似于干细胞的状态中，帮助它们不断生出新的细胞。Wnt信号通路在皮肤的自我更新中发挥重要作用。
Wnt激动剂Licl以10mg/kg溶于PBS中，腹腔连续注射3天；Wnt抑制剂Xav939以1mg/kg溶于10％DMSO的生理盐水中，腹腔连续注射3天。
Western Blot结果显示使用Wnt激动剂Licl后IEV在皮肤的排泄显著加强，使用Wnt抑制剂Xav939后IEV在皮肤的排泄明显降低(图13A-B)。免疫荧光结果也同样证明在Xav939影响下皮下注射的PKH26-IEV在皮肤表面的排出大大减少(图13C)。同时细胞涂片结果显示皮肤间充质干细胞对IEV的摄入能力受Licl和Xav939的影响(图13D)。更重要的是，免疫荧光结果证明IEV注射后大大增强了皮肤中active-β-catenin的强度，提示IEV能刺激皮肤中Wnt信号通路的活化，Xav939抑制剂使这一活化过程被减弱，且active-β-catenin强度的变化与IEV在表皮层的排出数量变化相一致(图13E)。
运动已被证实对Wnt信号通路具有调控作用。ELISA结果显示运动后循环中DKK1水平显著降低(图14A)，说明运动可以激活体内Wnt信号通路。
流式结果显示运动后小鼠体内生理性IEV大量减少(图14B)，免疫荧光结果显示运动后PKH26-IEV在皮肤表面的排出增加(图14C)，活体成像结果显示运动1天后IEV在体内和皮肤的分布大大加强，运动3天后较对照组开始减弱(图14D-E)。利用流式检测PKH-67标记的IEV运动后在体内的数目，结果显示运动7天后PKH67-IEV在血液中较对照组大量减少(图14F)。以上数据提示运动可能激活Wnt信号通路，促进IEV从皮肤排泄。
实施例9 IEVs可促进伤口愈合
在小鼠身上制作1cm×1cm的全皮层创口，检测系统性注射MSCs和IEVs对伤口愈合的促进作用。结果显示IEVs和MSCs均对伤口愈合有促进作用(图15A)，无显著差异。Wnt激动剂Licl能加速IEVs对伤口愈合的促进作用，而抑制剂Xav939能显著减缓IEVs对伤口愈合的促进作用。免疫荧光结果显示Licl组IEVs在伤口处的聚集明显增强，Xav939组IEVs在伤口处的聚集显著减少，说明Wnt信号通路可能通过调控IEVs的排泄来影响伤口愈合(图15B-C)。
实施例10局部注射IEV的除皱效果
IEV的获取方式同实施例6。
使用水光仪注射导入IEV。水光注射的原理：采用负压技术，可以准确地在皮肤不同深度下补充所需物质，微针进入皮肤前利用负压仪将皮肤提起，然后多针头再准确的进入到表皮深层。注入剂量、注射频率可调节。另外，针头在出来前就已经放开了注射器的压力，因此不会有营养物的损耗。
导入步骤：
将步骤9制备的UCMSC来源的IEV置于注射器内，放置于导入仪卡槽中、调节注射深度至0.3mm。
受试者被告知整个过程，并确认知情同意。受试部位消毒、将水光导入仪针头对准受试部位(下巴部位)，开启负压，按照操作程序进行，将IEV注入受试部位。
如图16所示，水光导入注射IEV50天后(2020年1月16日至2020年3月8日)，注射部位的皱纹有显著改善，说明IEV有良好的除皱效果，有望应用于医美行业。
实施例11诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells，iPS细胞，iPSC)细胞培养及其来源的IEV制备
(1)慢病毒制备：
将1mL DMEM移入EP管，加入5μg基因表达质粒和5μg vsvg质粒加入25微升的脂质体，轻轻搅拌，室温20分钟。将混合物逐滴加入培养的GP2-293细胞(95％混匀)中，旋转使混合物均匀分布。12小时后更换培养基(DMEM+10％FBS(热灭活)+谷氨酰胺)。更换培养基24小时后，收集含有病毒的培养基，48小时后再次收集培养基。
(2)诱导细胞重编程：
每孔(12孔板)接种步骤(1)中培养的GP2-293细胞5×105个，80％汇合在500-1000微升/孔的培养基(DMEM+10％FBS(热灭活)+谷氨酰胺)中加入病毒100ng，加入4微克/毫升聚布伦，孵育12h，换新培养基，重复此步骤。在7天内，5×104个经诱导的细胞接种到带有饲养细胞的10cm培养皿中(mEFs)。第二天，将培养基改为Es培养基，含bFGF(4ng/ml)，每隔一天换一次，5天后，细胞开始出现克隆，如果40天后没有Es样克隆，则认为失败。
(3)细胞传代：
60％汇合后，每皿添加0.5毫升的accutase，在室温下静置1分钟。将分离的细胞聚集物转移到15mL离心管中，并用另外的2mL mTeSR1以收集任何剩余的聚集物。将冲洗液加入15毫升试管中。在室温下离心含有200×g细胞聚集物的15mL试管5分钟。吸出上清液。使细胞再悬浮并确保细胞保持聚集状态。将人iPS细胞与mTeSR1聚集在涂有基质凝胶的新板上。将培养皿放入37℃培养箱中，快速左右移动培养皿使细胞聚集物均匀分布团块的运动。在37℃下用5％的二氧化碳和95％湿度培养。每天换液。
(4)iPS来源的IEV制备
同实施例2的制备方法。
400倍光镜下，iPS细胞(iPSC)来源的IEVs如图17所示。
实施例12不同分化潜能干细胞来源的IEV
一般实验方法：
流式检测细胞凋亡：使用星形环孢菌素(500nM)诱导传代至P26-P29代的hiPSCs(人诱导性多能干细胞(human inducedpluripotent stem cells,hiPSCs))和P7-P9代的hUCMSCs(人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs))约9h使细胞发生凋亡，染AnnexinV(15mins)和7AAD(3mins)，流式检测细胞凋亡率。在本实施例中，使用传代至P26代的hiPSCs和传代至P7代的hUCMSCs。
分离IEV并用流式检测AnnexinV表达率：使用差数离心法制备IEV，步骤包括：800g离心10mins，之后2000g离心5mins，之后16000g离心30mins，之后16000g离心30mins，获取IEV，AnnexinV染色15mins，流式上机。
皮肤损伤模型造模：在小鼠背部造边长1.7cm的正方形皮肤创口。在Day1，4，8，12分别尾静脉给IEV(hiPSCs-IEVs，hUCMSCs的注射量均为6×107个/次)，并且每天拍照记录伤口大小。Day14取材。
结果：
1、使用高内涵细胞成像分析系统拍摄了hiPSCs和hUCMSCs死亡过程。如图18所示，发现两者死亡过程存在差异，hiPSCs以核和质多个中心进行收缩，继而发出树枝状分支伴随出泡；而hUCMSCs是以核为中心的单中心收缩，同时伴随发出分支和出泡等活动。
2、如图19所示，对诱导凋亡的hiPSCs和hUCMSCs使用流式分析凋亡率，证明绝大部分细胞发生了凋亡。
3、如图20所示，上述使用差数离心法获取的IEV，使用流式分析Annexin5表达的阳性率hiPSCs和hUCMSCs两者表达均在80％以上。
4、使用Nanoparticle Tracking Analysis(NTA)对两种IEVs进行表征：
4.1如图21所示，hiPSCs-IEVs的粒径约100nm，hUCMSCs-IEVs的粒径约180nm；
4.2如图22所示，IEVs的产量：21971particles/hiPSCs，886particles/hUCMSCs；
4.3如图23所示，电位hiPSC-IEVs电位约-12mV，hUCMSC-IEVs电位约-45mV。
5、使用皮肤损伤模型对两种细胞来源的IEVs进行体内修复再生功能的比较。
如图24所示，结果显示hiPSCs-IEVs能明显促进伤口的愈合，hiPSCs-IEVs相比hUCMSCs-IEVs有更强的组织修复再生功能。
鉴于可以应用所公开的发明的原理的许多可能的实施例，应当认识到，所示的实施例仅是本公开的优选示例，而不应视为限制本公开的范围。相反，本公开的范围由所附权利要求书限定。因此，我们要求保护所有落入这些权利要求的范围和精神内的发明。

Claims (15)

1.诱导性囊泡在制备或作为皮肤产品或皮肤附属器产品方面的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述产品为：药物、药物载体、食品、保健品、护肤品、或医美用品；
优选地，所述皮肤为表皮、真皮、或皮下组织；
优选地，所述皮肤附属器为毛、头发、汗腺、皮脂腺、指甲、或趾甲。
3.一种组合物，其特征在于，包括：
诱导性囊泡和皮肤药物或护养物。
4.如权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述皮肤药物与护养物被包裹在细胞外囊泡中，或
以分开的形式存在于组合物中；
优选地，所述组合物的剂型优选地选自冻干粉针、注射剂、片剂、胶囊或贴剂；
优选地，所述贴剂选自微针贴剂；
优选地，所述剂型选自注射剂或微针贴剂。
5.如权利要求1-4任一所述的用途/组合物，其特征在于，所述诱导性囊泡是在干细胞处于正常存活期间通过外力诱导凋亡而产生的囊泡；
优选地，所述诱导性囊泡是通过添加星形孢菌、紫外线照射、饥饿法、或热应力法或其中一种或多种的组合诱导干细胞或干细胞凋亡产生；
优选地，所述的干细胞选自诱导性多能干细胞、血液干细胞、骨髓间充质干细胞、尿液间充质干细胞、口腔间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、脐带间充质干细胞、骨膜间充质干细胞、皮肤间充质干细胞中的一种或多种；
优选地，所述的干细胞选自诱导性多能干细胞、血液干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、脐带间充质干细胞、口腔间充质干细胞、皮肤间充质干细胞中的一种或多种；
优选地，所述的干细胞选自诱导性多能干细胞、脐带间充质干细胞、血液干细胞或骨髓间充质干细胞中的一种或多种。
6.一种组合物，其特征在于，包括：
由干细胞或干细胞胞外囊泡组成的第一剂；和，
由抗衰老物质或Wnt信号通路正向调节剂组成的第二剂。
7.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述的干细胞选自诱导性多能干细胞、血液干细胞、骨髓间充质干细胞、尿液间充质干细胞、口腔间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、脐带间充质干细胞、骨膜间充质干细胞、皮肤间充质干细胞中的一种或多种；
优选地，所述的干细胞选自诱导性多能干细胞、血液干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、脐带间充质干细胞、口腔间充质干细胞、皮肤间充质干细胞中的一种或多种；
优选地，所述的干细胞选自诱导性多能干细胞、脐带间充质干细胞、血液干细胞或骨髓间充质干细胞中的一种或多种；
优选地，所述的干细胞胞外囊泡选自外泌体、迁移体、微泡、凋亡小体、诱导性细胞外囊泡中的一种或多种；
优选地，所述的干细胞胞外囊泡选自诱导性细胞外囊泡；
优选地，所述诱导性囊泡是在干细胞处于正常存活期间通过外力诱导凋亡而产生的囊泡；
优选地，所述抗衰老物质选自二甲双胍，白黎芦醇中的一种或多种；
优选地，所述抗衰老物质选自二甲双胍；
优选地，所述Wnt信号通路选自Wnt/β-catenin通路；
优选地，所述正向调节剂选自激动剂；
优选地，所述激动剂选自Licl、CHIR99021、SB-216763、BIO、Wnt Agonist或WAY 262611中的一种或多种；更优选Licl；
优选地，所述正向调节剂选自包含进行运动的提示；
优选地，所述提示选自包装，标签或说明书中的一种或多种。
8.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述组合物中，包含干细胞或干细胞胞外囊泡与抗衰老物质的比例为(0.5-5)×107个：(0.05-10)mg；
优选地，包含1×107-3×107个干细胞或干细胞胞外囊泡；和，0.1-5mg抗衰老物质；
优选地，包含1.8×107-2.7×107个干细胞或干细胞胞外囊泡；
优选地，包含0.2-3mg抗衰老物质。
9.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述干细胞胞外囊泡是通过添加星形孢菌素、紫外线照射、饥饿法、或热应力法或其组合诱导间充质干细胞凋亡产生；
优选地，所述干细胞胞外囊泡是通过添加星形孢菌素诱导间充质干细胞凋亡产生；
优选地，所述星形孢菌素的浓度为500-1000nM；
优选地，所述星形孢菌素的浓度为500-900nM；
优选地，所述星形孢菌素的浓度为500nM-800nM；
优选地，所述星形孢菌素的浓度为500nM。
10.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包含药学上可接受的载体；
优选地，所述组合物的剂型优选地选自冻干粉针、注射剂、片剂、胶囊或贴剂；
优选地，所述贴剂选自微针贴剂；
优选地，所述剂型选自注射剂、微针贴剂或片剂。
11.如权利要求6-10任一所述的组合物在制备促毛发再生或促伤口愈合药物中的应用。
12.如权利要求6-10任一所述的组合物，其特征在于，所述干细胞胞外囊泡的制备方法包括如下步骤：
1)体外培养间充质干细胞，细胞汇合80％-90％时，PBS冲洗2-5遍；
2)将步骤1)制得的间充质干细胞加入含有500-1000nM星形孢菌素的无血清培养基，37℃孵育16-24h，收集细胞上清液；
3)将步骤2)收集的细胞上清液在4℃下500-15000g离心5-30分钟，收集上清液；
4)将步骤3)收集的细胞上清液在4℃下1500-2500g离心5-30分钟，收集上清液；
5)将步骤4)收集的细胞上清液在4℃下10000-30000g离心15-60分钟，所得沉淀物为细胞外囊泡；
优选地，还包括细胞外囊泡的清洗步骤；
优选地，所述清洗步骤具体为：6)将步骤5)制得的细胞外囊泡用PBS重悬，在4℃下10000-30000g离心15-60分钟，
所得沉淀物为细胞外囊泡。
13.抗衰老物质在制备干细胞服用品的伴随药物方面的用途；
优选地，所述的干细胞服用品为干细胞或干细胞胞外囊泡；
优选地，所述的干细胞服用品为用以摄入动物体的干细胞或干细胞胞外囊泡；优选地，所述动物为哺乳动物；优选地，所述哺乳动物为人；
优选地，所述的干细胞选自诱导性多能干细胞、血液干细胞、骨髓间充质干细胞、尿液间充质干细胞、口腔间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、脐带间充质干细胞、骨膜间充质干细胞、皮肤间充质干细胞中的一种或多种；
优选地，所述的干细胞选自诱导性多能干细胞、血液干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、脐带间充质干细胞、口腔间充质干细胞、皮肤间充质干细胞中的一种或多种；
优选地，所述的干细胞选自诱导性多能干细胞、脐带间充质干细胞、血液干细胞或骨髓间充质干细胞中的一种或多种；
优选地，所述的干细胞胞外囊泡选自外泌体、迁移体、微泡、凋亡小体、诱导性细胞外囊泡中的一种或多种；
优选地，所述的干细胞胞外囊泡选自诱导性细胞外囊泡；
优选地，所述抗衰老物质选自二甲双胍，白黎芦醇中的一种或多种；
优选地，所述抗衰老物质选自二甲双胍。
14.一种干细胞服用系统，其包括：
如权利要求13所述的干细胞服用品，和，
伴随品；所述的伴随品选自抗衰老物质或Wnt信号通路正向调节剂中的一种或两种；
所述的干细胞服用品包含干细胞或干细胞胞外囊泡；
优选地，所述抗衰老物质选自二甲双胍，白黎芦醇中的一种或多种；
优选地，所述抗衰老物质选自二甲双胍；
优选地，所述Wnt信号通路为Wnt/β-catenin通路；
优选地，所述正向调节剂选自激动剂；
优选地，所述激动剂选自Licl、CHIR99021、SB-216763、BIO、Wnt Agonist或WAY 262611中的一种或多种；更优选Licl；
优选地，所述正向调节剂选自包含进行运动的提示；
优选地，所述提示选自包装，标签或说明书中的一种或多种。
15.干细胞或干细胞胞外囊泡在制备Wnt信号通路调控的干细胞或干细胞胞外囊泡代谢而促进毛发再生或伤口愈合的药物方面的用途；
优选地，所述的药物包括干细胞或干细胞胞外囊泡；和，抗衰老物质；
优选地，所述的干细胞选自诱导性多能干细胞、血液干细胞、骨髓间充质干细胞、尿液间充质干细胞、口腔间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、脐带间充质干细胞、骨膜间充质干细胞、皮肤间充质干细胞中的一种或多种；
优选地，所述的干细胞选自诱导性多能干细胞、血液干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、脐带间充质干细胞、口腔间充质干细胞、皮肤间充质干细胞中的一种或多种；
优选地，所述的干细胞选自诱导性多能干细胞、脐带间充质干细胞、血液干细胞或骨髓间充质干细胞中的一种或多种；
优选地，所述的干细胞胞外囊泡选自外泌体、迁移体、微泡、凋亡小体、诱导性细胞外囊泡中的一种或多种；
优选地，所述的干细胞胞外囊泡选自诱导性细胞外囊泡；
优选地，所述抗衰老物质选自二甲双胍，白黎芦醇中的一种或多种；
优选地，所述抗衰老物质选自二甲双胍。
CN202110076177.XA 2020-01-20 2021-01-20 细胞外囊泡及其在皮肤产品的用途 Active CN113134015B (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2020100661546 2020-01-20
CN202010067658X 2020-01-20
CN202010067658 2020-01-20
CN202010066154 2020-01-20

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113134015A true CN113134015A (zh) 2021-07-20
CN113134015B CN113134015B (zh) 2023-11-17

Family

ID=76811282

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110076177.XA Active CN113134015B (zh) 2020-01-20 2021-01-20 细胞外囊泡及其在皮肤产品的用途

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20230084480A1 (zh)
JP (1) JP2023513394A (zh)
CN (1) CN113134015B (zh)
WO (1) WO2021147922A1 (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113876928A (zh) * 2021-10-22 2022-01-04 北京远胜达生物科技发展有限公司 成纤维细胞外囊泡制备及在美容和药品中的应用
WO2023024637A1 (zh) * 2021-08-26 2023-03-02 中山大学 一种力学性囊泡的制备方法
WO2023123215A1 (zh) * 2021-12-30 2023-07-06 医微细胞生物技术(广州)有限公司 细胞外囊泡的应用
WO2023123216A1 (zh) * 2021-12-30 2023-07-06 中山大学 囊泡在制备治疗肺部疾病的药物中的应用
WO2023155146A1 (en) * 2022-02-18 2023-08-24 Tsinghua University Methods for regulating mitochondria homeostasis
WO2024179309A1 (zh) * 2023-02-27 2024-09-06 上海萨丽斐生物科技有限公司 膜联蛋白a5在生发、育发、护发、防脱发以及治疗脱发中的用途和相关产品和药物组合物

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107567329A (zh) * 2015-03-05 2018-01-09 路博润先进材料公司 皮壳正青霉的发酵提取物和其美容用途
CN107893050A (zh) * 2017-10-17 2018-04-10 杜水果 一种细胞外囊泡及其制备方法和用途

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20160110232A (ko) * 2015-03-11 2016-09-21 주식회사 엠디헬스케어 유산균 유래 세포밖 소포체를 유효성분으로 포함하는 염증질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR102394638B1 (ko) * 2015-09-30 2022-05-09 (주)아모레퍼시픽 유산균 유래의 세포외 소낭을 포함하는 탈모 방지 또는 육모 촉진용 조성물
KR102015116B1 (ko) * 2018-05-04 2019-10-21 (주)메디톡스 표적 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 미생물로부터 유래한 세포외 소낭 및 그의 용도
CN111494417B (zh) * 2020-02-10 2024-04-09 寇晓星 诱导性细胞外囊泡在制备治疗肿瘤药物中的应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107567329A (zh) * 2015-03-05 2018-01-09 路博润先进材料公司 皮壳正青霉的发酵提取物和其美容用途
CN107893050A (zh) * 2017-10-17 2018-04-10 杜水果 一种细胞外囊泡及其制备方法和用途

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023024637A1 (zh) * 2021-08-26 2023-03-02 中山大学 一种力学性囊泡的制备方法
CN113876928A (zh) * 2021-10-22 2022-01-04 北京远胜达生物科技发展有限公司 成纤维细胞外囊泡制备及在美容和药品中的应用
CN113876928B (zh) * 2021-10-22 2022-08-05 北京赛尔再生医学生物科技有限公司 成纤维细胞外囊泡制备及在美容和药品中的应用
WO2023123215A1 (zh) * 2021-12-30 2023-07-06 医微细胞生物技术(广州)有限公司 细胞外囊泡的应用
WO2023123216A1 (zh) * 2021-12-30 2023-07-06 中山大学 囊泡在制备治疗肺部疾病的药物中的应用
WO2023155146A1 (en) * 2022-02-18 2023-08-24 Tsinghua University Methods for regulating mitochondria homeostasis
WO2024179309A1 (zh) * 2023-02-27 2024-09-06 上海萨丽斐生物科技有限公司 膜联蛋白a5在生发、育发、护发、防脱发以及治疗脱发中的用途和相关产品和药物组合物

Also Published As

Publication number Publication date
US20230084480A1 (en) 2023-03-16
WO2021147922A1 (zh) 2021-07-29
CN113134015B (zh) 2023-11-17
JP2023513394A (ja) 2023-03-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113134015B (zh) 细胞外囊泡及其在皮肤产品的用途
CN109414459A (zh) 源自脐带血的外泌体用于组织修复的用途
US9999589B2 (en) Culture medium of adipose-derived stem cell, method for preparing the same, and composition including the same for promoting hair growth
EP3862009A1 (en) Composition for skin regeneration and wound healing, comprising induced exosomes
Emmert et al. Transcatheter based electromechanical mapping guided intramyocardial transplantation and in vivo tracking of human stem cell based three dimensional microtissues in the porcine heart
CN110123838B (zh) 负载白藜芦醇的人多能干细胞外泌体及其制备方法与用途
JP6353073B2 (ja) 細胞回復のための組成物並びにその作製及び使用方法
CN101748096A (zh) 亚全能干细胞、其制备方法及其用途
JP5809068B2 (ja) 免疫抑制−関連疾患の治療
WO2021147923A1 (zh) 一种囊泡及其应用
CN113136362B (zh) 一种囊泡及其应用
JP7386162B2 (ja) 線維芽細胞の再生活性の増強
CN113355290B (zh) 一种抗肿瘤的工程化外泌体、制备方法和应用
US10695293B2 (en) Method of preventing or treating radiation-induced dermatitis with extracellular vesicles
CN109402175B (zh) 表达趋化因子受体ccr2b的脂肪干细胞及制备方法与应用
CN113952362A (zh) 诱导性细胞外囊泡在制备延长哺乳动物寿命或治疗或预防衰老制剂中的应用
WO2021195154A1 (en) Isolation and purification of exosomes for regenerative medicine
Li et al. Human induced pluripotent stem cells labeled with fluorescent magnetic nanoparticles for targeted imaging and hyperthermia therapy for gastric cancer
CN110123839A (zh) 负载光敏药物的人多能干细胞外泌体及制备与用途
CN114672456A (zh) 利用超声刺激提高脂肪干细胞分泌胞外囊泡效率的方法及应用
CN114073715A (zh) 细胞外囊泡在制备调节卵巢功能的制剂中的应用
CN115651890A (zh) 成纤维细胞向毛乳头样细胞转分化的方法及其应用
Yin et al. Cell primitive-based biomimetic nanomaterials for Alzheimer's disease targeting and therapy
KR20150091519A (ko) 다계열 분화능 세포 생성 방법
CN114099534A (zh) 高表达miR-214的外泌体及其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant