CN113125227A - 核型分析用制备高分辨染色体的秋水溶液及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种核型分析专用制备高分辨染色体的秋水溶液及其应用，由以下组分组成：秋水仙素或秋水仙胺水溶液、吖啶或其衍生物、缓冲液。本发明的核型分析专用制备高分辨染色体的秋水溶液，用于制备高分辨染色体核型，操作非常方便，可以稳定制备出分辨率超过550的染色体核型。本发明方法简单易行，成本低，适合推广使用。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及细胞遗传学领域的染色体制备和核型分析。
背景技术
根据经典细胞遗传学，从细胞制备出的染色体，可以在显微镜下进行分析，这一分析称为染色体核型分析，应用于对可能存在的遗传缺陷进行诊断。染色体制备需要对收获的细胞进行秋水、低渗、固定、制备、老化、酶消化和显带等处理，在这些处理之后，才可以在显微镜下对细胞的染色体进行分析，以判断是否存在染色体异常。这一经典的方法在建立之初一直沿用到现在。
在过去的几十年中，细胞遗传学技术取得了多方面的重大突破，在高分辨染色体制备方面的技术进展主要包括细胞周期同步化技术和染色体收缩抑制技术。细胞周期同步化技术主要应用同步细胞分裂周期，在特定的时间将尽可能多的将细胞调整到同一分裂周期，进而在细胞有丝分裂中期进行收获处理，制备数量更多和质量更好的染色体，通过调整收获方法中的秋水处理时间，制备出高分辨的染色体核型。用于调控细胞周期的化学试剂包括氨甲蝶呤、 5-氟脱氧尿苷、5-溴-2’脱氧尿苷或过量的胸腺嘧啶核苷。商业化的细胞周期同步化试剂盒有上海乐辰生物公司的淋巴细胞同步化试剂盒和意大利Euroclone公司的淋巴细胞同步化试剂盒等。细胞周期同步化技术的一个缺点是要根据细胞培养基周期，分别在限定的时间向细胞培养基中分别加入两种细胞周期同步化试剂，操作步骤多，处理时间有严格的要求，有时实验室的工作不是很好的安排。染色体收缩抑制技术主要应用特定的化学试剂抑制秋水处理前和后、低渗处理中的染色体收缩进程，从而实现高分辨染色体制备。特定的化学试剂与DNA 或染色质结合，或嵌入DNA或染色质当中。在细胞被固定之前，用这些化学试剂对细胞进行特定时间的处理，能够阻止中期细胞的染色体的正常收缩，部分化学试剂对染色体的特定区域有特异性。这些化学试剂可以不同程度的抑制染色体收缩，应用于高分辨染色体制备。目前常用的染色体收获抑制剂有EB和AMD，其中EB(溴化乙锭)的毒性较大，AMD(放线菌素 D)的成本很高。在进行高分辨染色体制备实验过程中，EB和AMD两种染色体收缩抑制剂均易造成染色体断裂的情况发生，影响正常的染色体核型分析工作。此外，EB和AMD两种染色体收缩抑制剂对染色体收缩的抑制效率不是很高，使用过程中需要在秋水仙素或秋水仙胺处理前加入到细胞培养基中，处理约1小时后，再加入秋水仙素或秋水仙胺溶液进行处理，进行高分辨染色体制备。
发明内容
为了解决现有技术问题，本发明的目的在于提供一种新型的专用制备高分辨染色体的秋水溶液，该秋水溶液将高效率的染色体收缩抑制剂和秋水仙素或秋水仙胺试剂两者进行结合。在高分辨染色体制备过程中，将染色体收缩抑制剂和秋水试剂同时加入到细胞培养基中，快速且简便的进行高分辨染色体制备，还有效避免了染色体断裂情况的发生。
为达到上述发明创造目的，本发明采用如下技术方案：
一种核型分析用制备高分辨染色体的秋水溶液，由以下组分组成：秋水溶液、吖啶或其衍生物、缓冲液。
优选地，所述秋水溶液为秋水仙素溶液或秋水仙胺溶液。
优选地，所述秋水溶液中的秋水仙素或秋水仙胺的浓度为1～100ug/mL。进一步优选地，所述秋水溶液中的秋水仙素或秋水仙胺的浓度为10～20ug/mL。
优选地，所述吖啶或其衍生物的浓度为1～1000ug/mL。进一步优选地，所述吖啶或其衍生物的浓度为50～500ug/mL。更进一步优选地，所述吖啶或其衍生物的浓度为100～200ug/mL。
优选地，所述吖啶或其衍生物为吖啶、盐酸吖啶、甲基吖啶、9-氨基吖啶、9-氨基吖啶盐酸、吖啶黄素、吖啶橙、吖啶酮、9-羟基-4-甲氧基吖啶、盐酸胺苯吖啶、吖啶酮乙酸中的任意一种或任意几种的混合物；
优选地，所述缓冲液为D-hanks缓冲液和PBS缓冲液中的任意一种或者两种的混合液。
优选地，所述缓冲液的溶质摩尔浓度不高于0.05M，pH为7.0～7.4。
一种本发明核型分析用制备高分辨染色体的秋水溶液的应用，用于制备高分辨染色体，包括如下步骤：
(1)向含有细胞培养基的细胞培养管中无菌添加经抗凝处理的全血0.3～0.5mL，混均，在37℃培养48～72h；
(2)向培养管中继续加入50uL制备高分辨染色体的秋水溶液，培养30～60分钟；然后在不低于1000rpm的条件下进行离心处理至少5min；再手动吸除上清液，保留0.5mL的细胞液，充分混悬细胞；
(3)然后向培养管中加入5～8mL的低渗溶液，充分混匀细胞，在室温低渗处理10～30 min；
(4)然后向培养管中加入0.5～0.8mL固定液，充分混悬细胞，在室温处理至少5min；
(5)然后对混合液进行不低于1000rpm的条件下的离心处理过程至少5min，吸除上清液，保留0.5mL的细胞液；再加入5～8mL固定液，充分混悬细胞，室温处理至少5min；
(6)重复操作所述步骤5的过程2～3次，固定细胞；
(7)然后在不低于1000rpm的条件下进行离心处理至少5min，吸除上清液，视培养管的管底细胞量加入适当量的固定液，轻轻混匀制成细胞悬液；
(8)然后采用细胞悬液进行滴片，空控制1～2滴/载玻片，每滴30～50μL，染色体在载玻片表面分散开来；
(9)然后干燥处理载玻片，得到高分辨染色体样品，作为进行显带和染色体核型分析的试样。
优选地，在所述步骤(3)中，所述低渗溶液采用摩尔浓度不低于0.075M的KCl溶液。
优选地，在所述步骤(4)中，所述低渗溶液采用体积比为3∶1的甲醇和乙酸的混合液。
本发明与现有技术相比较，具有如下显而易见的突出实质性特点和显著优点：
1.本发明通过对多种细胞同步化试剂和染色体收缩抑制剂的研究和测试分析，开发一种新型的秋水溶液，将吖啶或其衍生化试剂和秋水试剂进行同时使用，稳定实现了高分辨染色体制备；
2.本发明设计并配制一种新型的核型分析专用制备高分辨染色体的秋水溶液，该溶液包括了秋水仙胺或秋水仙素、吖啶或其衍生化试剂和缓冲液，适合应用于制备高分辨染色体，解决高分辨染色体制备过程中染色体断裂和使用不方便的问题；
3.本发明方法简单易行，成本低，适合推广使用。
附图说明
图1是本发明实施例一制备的高分辨染色体核型图。
具体实施方式
本发明用下面的实施例作进一步说明，但对本发明的范围不起限制作用。本发明的优选实施例详述如下：
实施例1
制备高分辨染色体的秋水溶液1：
本实施例制备高分辨染色体的秋水溶液：所含各物质的含量分别为：秋水仙素10ug/mL，吖啶橙100ug/mL，缓冲液是D-hanks缓冲液。
配制方法：采用直接向d-hanks缓冲液中加入相应比例的秋水仙素和吖啶橙，得到高分辨染色体的秋水溶液1。参见图1，为本实施例的高分辨染色体核型图。本实施例核型分析专用制备高分辨染色体的秋水溶液用于制备高分辨染色体核型，操作非常方便，能稳定制备出分辨率超过550的染色体核型，解决高分辨染色体制备过程中染色体断裂和使用不方便的问题，本发明秋水溶液组分简单，易行制备，成本低，适合推广使用。
实施例2
本实施例与实施例1基本相同，特别之处在于：
制备高分辨染色体的秋水溶液2：
本实施例制备高分辨染色体的秋水溶液：所含各物质的含量分别为：秋水仙胺10ug/mL，吖啶橙100ug/mL，缓冲液是D-hanks缓冲液。
配制方法：采用直接向d-hanks缓冲液中加入相应比例的秋水仙胺和吖啶橙，得到高分辨染色体的秋水溶液2。利用本实施例核型分析专用制备高分辨染色体的秋水溶液，能稳定制备出分辨率超过550的染色体核型，解决高分辨染色体制备过程中染色体断裂和使用不方便的问题，本发明秋水溶液组分简单，易行制备，成本低，适合推广使用。
实施例3
本实施例与前述实施例基本相同，特别之处在于：
制备高分辨染色体的秋水溶液3
本实施例制备高分辨染色体的秋水溶液：所含各物质的含量分别为：秋水仙素10ug/mL， 9-氨基吖啶200ug/mL，缓冲液是D-hanks缓冲液。
配制方法：采用直接向d-hanks缓冲液中加入相应比例的秋水仙素和9-氨基吖啶，得到高分辨染色体的秋水溶液3。利用本实施例核型分析专用制备高分辨染色体的秋水溶液，能稳定制备出分辨率超过550的染色体核型，解决高分辨染色体制备过程中染色体断裂和使用不方便的问题，本发明秋水溶液组分简单，易行制备，成本低，适合推广使用。
实施例4
本实施例与前述实施例基本相同，特别之处在于：
制备高分辨染色体的秋水溶液4
本实施例制备高分辨染色体的秋水溶液：所含各物质的含量分别为：秋水仙胺10ug/mL， 9-氨基吖啶200ug/mL，缓冲液是浓度为0.05M的PBS缓冲液，缓冲液pH：7.0～7.4。
配制方法：采用直接向PBS缓冲液中加入相应比例的秋水仙胺和9-氨基吖啶，得到高分辨染色体的秋水溶液4。利用本实施例核型分析专用制备高分辨染色体的秋水溶液，能稳定制备出分辨率超过550的染色体核型，解决高分辨染色体制备过程中染色体断裂和使用不方便的问题，本发明秋水溶液组分简单，易行制备，成本低，适合推广使用。
实施例5
本实施例与前述实施例基本相同，特别之处在于：
制备高分辨染色体的秋水溶液5
本实施例制备高分辨染色体的秋水溶液：所含各物质的含量分别为：秋水仙素10ug/mL，盐酸吖啶100ug/mL，缓冲液是D-hanks缓冲液。
配制方法：采用直接向D-hanks缓冲液中加入相应比例的秋水仙素和9-氨基吖啶，得到高分辨染色体的秋水溶液5。利用本实施例核型分析专用制备高分辨染色体的秋水溶液，能稳定制备出分辨率超过550的染色体核型，解决高分辨染色体制备过程中染色体断裂和使用不方便的问题，本发明秋水溶液组分简单，易行制备，成本低，适合推广使用。
实施例6
本实施例与前述实施例基本相同，特别之处在于：
制备高分辨染色体的秋水溶液6
本实施例制备高分辨染色体的秋水溶液：所含各物质的含量分别为：秋水仙素10ug/mL，盐酸胺苯吖啶100ug/mL，缓冲液是D-hanks缓冲液。
配制方法：采用直接向D-hanks缓冲液中加入相应比例的秋水仙素和9-氨基吖啶，得到高分辨染色体的秋水溶液:6。利用本实施例核型分析专用制备高分辨染色体的秋水溶液，能稳定制备出分辨率超过550的染色体核型，解决高分辨染色体制备过程中染色体断裂和使用不方便的问题，本发明秋水溶液组分简单，易行制备，成本低，适合推广使用。
实施例7
本实施例与前述实施例基本相同，特别之处在于：
制备高分辨染色体的秋水溶液7
本实施例制备高分辨染色体的秋水溶液：所含各物质的含量分别为：秋水仙素10ug/mL，吖啶橙50ug/mL，缓冲液是D-hanks缓冲液。
配制方法：采用直接向d-hanks缓冲液中加入相应比例的秋水仙素和吖啶橙，得到高分辨染色体的秋水溶液7。本实施例核型分析专用制备高分辨染色体的秋水溶液用于制备高分辨染色体核型，能稳定制备出分辨率超过550的染色体核型，解决高分辨染色体制备过程中染色体断裂和使用不方便的问题，本发明秋水溶液组分简单，易行制备，成本低，适合推广使用。
实施例8
本实施例与前述实施例基本相同，特别之处在于：
制备高分辨染色体的秋水溶液8
本实施例制备高分辨染色体的秋水溶液：所含各物质的含量分别为：秋水仙素20ug/mL，吖啶橙200ug/mL，缓冲液是D-hanks缓冲液。
配制方法：采用直接向d-hanks缓冲液中加入相应比例的秋水仙素和吖啶橙，得到高分辨染色体的秋水溶液8。本实施例核型分析专用制备高分辨染色体的秋水溶液用于制备高分辨染色体核型，能稳定制备出分辨率超过550的染色体核型，解决高分辨染色体制备过程中染色体断裂和使用不方便的问题，本发明秋水溶液组分简单，易行制备，成本低，适合推广使用。
实施例9
本实施例与前述实施例基本相同，特别之处在于：
制备高分辨染色体的秋水溶液9
本实施例制备高分辨染色体的秋水溶液：所含各物质的含量分别为：秋水仙素20ug/mL，吖啶橙500ug/mL，缓冲液是D-hanks缓冲液。
配制方法：采用直接向d-hanks缓冲液中加入相应比例的秋水仙素和吖啶橙，得到高分辨染色体的秋水溶液9。本实施例核型分析专用制备高分辨染色体的秋水溶液用于制备高分辨染色体核型，能稳定制备出分辨率超过550的染色体核型，解决高分辨染色体制备过程中染色体断裂和使用不方便的问题，本发明秋水溶液组分简单，易行制备，成本低，适合推广使用。
实施例10
本实施例与前述实施例基本相同，特别之处在于：
上述实施例的核型分析用制备高分辨染色体的秋水溶液的应用，用于制备高分辨染色体，进行染色体制备具体实施方法如下：
(1)向含有细胞培养基的细胞培养管中无菌添加经抗凝处理的全血0.3～0.5mL，混均，在37℃培养72h；
(2)向培养管中继续加入50uL制备高分辨染色体的秋水溶液，培养30～60分钟；然后在1000rpm的条件下进行离心处理5min；再手动吸除上清液，保留0.5mL的细胞液，充分混悬细胞；
(3)然后采用摩尔浓度不低于0.075M的KCl溶液作为低渗溶液，向培养管中加入5～8mL 的低渗溶液，充分混匀细胞，在室温低渗处理10～30min；
(4)然后采用体积比为3∶1的甲醇和乙酸的混合液作为固定液，向培养管中加入0.5～0.8mL固定液，充分混悬细胞，在室温处理5min；
(5)然后对混合液进行1000rpm的条件下的离心处理过程5min，吸除上清液，保留0.5mL 的细胞液；然后采用体积比为3∶1的甲醇和乙酸的混合液作为固定液，加入5～8mL固定液，充分混悬细胞，室温处理5min；
(6)重复操作所述步骤5的过程2～3次，固定细胞；
(7)然后在1000rpm的条件下进行离心处理5min，吸除上清液，视培养管的管底细胞量加入适当量的固定液，轻轻混匀制成细胞悬液；
(8)然后采用细胞悬液进行滴片，每片载玻片滴加1～2滴，每滴30～50μL，染色体在载玻片表面分散开来；
(9)然后干燥处理载玻片，得到高分辨染色体样品，作为进行显带和染色体核型分析的试样。本实施例方法简单易行，成本低，适合推广使用。
上述实施例核型分析专用制备高分辨染色体的秋水溶液的组分保秋水仙素或秋水仙胺水溶液、吖啶或其衍生物、缓冲液。上述实施例核型分析专用制备高分辨染色体的秋水溶液，用于制备高分辨染色体核型，操作非常方便，可以稳定制备出分辨率超过550的染色体核型。
上面对本发明实施例结合附图进行了说明，但本发明不限于上述实施例，还可以根据本发明的发明创造的目的做出多种变化，凡依据本发明技术方案的精神实质和原理下做的改变、修饰、替代、组合或简化，均应为等效的置换方式，只要符合本发明的发明目的，只要不背离本发明的技术原理和发明构思，都属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种核型分析用制备高分辨染色体的秋水溶液，其特征在于，由以下组分组成：秋水溶液、吖啶或其衍生物、缓冲液。
2.根据权利要求1所述核型分析用制备高分辨染色体的秋水溶液，其特征在于：所述秋水溶液为秋水仙素溶液或秋水仙胺溶液。
3.根据权利要求1和2所述核型分析用制备高分辨染色体的秋水溶液，其特征在于：所述秋水溶液中的秋水仙素或秋水仙胺的浓度为1～100ug/mL。
4.根据权利要求3所述核型分析用制备高分辨染色体的秋水溶液，其特征在于：所述秋水溶液中的秋水仙素或秋水仙胺的浓度为10～20ug/mL。
5.根据权利要求1所述核型分析用制备高分辨染色体的秋水溶液，其特征在于：所述吖啶或其衍生物的浓度为1～1000ug/mL。
6.根据权利要求5所述核型分析用制备高分辨染色体的秋水溶液，其特征在于：所述吖啶或其衍生物的浓度为50～500ug/mL。
7.根据权利要求1所述核型分析用制备高分辨染色体的秋水溶液，其特征在于：所述吖啶或其衍生物为吖啶、盐酸吖啶、甲基吖啶、9-氨基吖啶、9-氨基吖啶盐酸、吖啶黄素、吖啶橙、吖啶酮、9-羟基-4-甲氧基吖啶、盐酸胺苯吖啶、吖啶酮乙酸中的任意一种或任意几种的混合物；
或者，所述缓冲液为D-hanks缓冲液和PBS缓冲液中的任意一种或者两种的混合液。
8.根据权利要求1所述核型分析用制备高分辨染色体的秋水溶液，其特征在于：所述缓冲液的溶质摩尔浓度不高于0.05M，pH为7.0～7.4。
9.一种权利要求1所述核型分析用制备高分辨染色体的秋水溶液的应用，用于制备高分辨染色体，其特征在于：包括如下步骤：
(1)向含有细胞培养基的细胞培养管中无菌添加经抗凝处理的全血0.3～0.5mL，混均，在37℃培养48～72h；
(2)向培养管中继续加入50uL制备高分辨染色体的秋水溶液，培养30～60分钟；然后在不低于1000rpm的条件下进行离心处理至少5min；再手动吸除上清液，保留0.5mL的细胞液，充分混悬细胞；
(3)然后向培养管中加入5～8mL的低渗溶液，充分混匀细胞，在室温低渗处理10～30min；
(4)然后向培养管中加入0.5～0.8mL固定液，充分混悬细胞，在室温处理至少5min；
(5)然后对混合液进行不低于1000rpm的条件下的离心处理过程至少5min，吸除上清液，保留0.5mL的细胞液；再加入5～8mL固定液，充分混悬细胞，室温处理至少5min；
(6)重复操作所述步骤5的过程2～3次，固定细胞；
(7)然后在不低于1000rpm的条件下进行离心处理至少5min，吸除上清液，视培养管的管底细胞量加入适当量的固定液，轻轻混匀制成细胞悬液；
(8)然后采用细胞悬液进行滴片，每片载玻片滴加1～2滴，每滴30～50μL，染色体在载玻片表面分散开来；
(9)然后干燥处理载玻片，得到高分辨染色体样品，作为进行显带和染色体核型分析的试样。
10.根据权利要求9所述染色体的制备方法，其特征在于：在所述步骤(3)中，所述低渗溶液采用摩尔浓度不低于0.075M的KCl溶液；
或者，在所述步骤(4)或步骤(5)中，所述固定液采用体积比为3∶1的甲醇和乙酸的混合液。
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Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0368662A2 (en) * | 1988-11-09 | 1990-05-16 | MITSUI TOATSU CHEMICALS, Inc. | Parent cell lines for producing human hybridomas |
| JPH03151871A (ja) * | 1989-11-10 | 1991-06-28 | Kowa Co | 新規ハイブリドーマ |
| WO1995011967A1 (en) * | 1993-10-25 | 1995-05-04 | Sandoz Ltd. | Viable zygote |
| JPH08116966A (ja) * | 1994-10-25 | 1996-05-14 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | ウシ胚性幹細胞およびその作製方法 |
| JPH0940661A (ja) * | 1992-12-21 | 1997-02-10 | Canon Inc | ピリリウム塩又はピリリウム類似塩を含む蛍光性染色剤、それを用いた核酸の検出方法、及び生物試料の蛍光染色法 |
| US20050084968A1 (en) * | 2001-09-21 | 2005-04-21 | Norio Nakatsuji | Tailor-made multifunctional stem cells and utilization thereof |
| WO2013056685A1 (en) * | 2011-10-21 | 2013-04-25 | Univerzita Palackeho | Sample slide preparation method and device |
| CN106754690A (zh) * | 2016-12-06 | 2017-05-31 | 河北意和医学检验所有限公司 | 一种快速收获中期细胞的染色体培养基及应用 |
| CN108601850A (zh) * | 2015-10-19 | 2018-09-28 | 马萨诸塞大学 | 抗癌和抗炎症治疗及其方法 |
| CN109540644A (zh) * | 2019-01-23 | 2019-03-29 | 北京仁基源医学研究院有限公司 | 核型分析专用制备高分辨染色体分散液 |
-
2021
- 2021-04-19 CN CN202110416764.9A patent/CN113125227A/zh active Pending
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0368662A2 (en) * | 1988-11-09 | 1990-05-16 | MITSUI TOATSU CHEMICALS, Inc. | Parent cell lines for producing human hybridomas |
| JPH03151871A (ja) * | 1989-11-10 | 1991-06-28 | Kowa Co | 新規ハイブリドーマ |
| JPH0940661A (ja) * | 1992-12-21 | 1997-02-10 | Canon Inc | ピリリウム塩又はピリリウム類似塩を含む蛍光性染色剤、それを用いた核酸の検出方法、及び生物試料の蛍光染色法 |
| WO1995011967A1 (en) * | 1993-10-25 | 1995-05-04 | Sandoz Ltd. | Viable zygote |
| JPH08116966A (ja) * | 1994-10-25 | 1996-05-14 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | ウシ胚性幹細胞およびその作製方法 |
| US20050084968A1 (en) * | 2001-09-21 | 2005-04-21 | Norio Nakatsuji | Tailor-made multifunctional stem cells and utilization thereof |
| WO2013056685A1 (en) * | 2011-10-21 | 2013-04-25 | Univerzita Palackeho | Sample slide preparation method and device |
| CN108601850A (zh) * | 2015-10-19 | 2018-09-28 | 马萨诸塞大学 | 抗癌和抗炎症治疗及其方法 |
| CN106754690A (zh) * | 2016-12-06 | 2017-05-31 | 河北意和医学检验所有限公司 | 一种快速收获中期细胞的染色体培养基及应用 |
| CN109540644A (zh) * | 2019-01-23 | 2019-03-29 | 北京仁基源医学研究院有限公司 | 核型分析专用制备高分辨染色体分散液 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 戴英等: "固定前用吖啶橙处理细胞的高分辨显带法", 国际遗传学杂志, no. 04, 31 December 1983 (1983-12-31), pages 223 * |
| 李尊爱等: "小鼠外周血网织红细胞微核吖啶橙染色法的研究", 卫生毒理学杂志, vol. 13, no. 02, 31 December 1999 (1999-12-31), pages 144 - 148 * |
| 熊统安等: "用吖啶橙处理法制备猪高分辨G带染色体", 华中农业大学学报, vol. 16, no. 01, 28 February 1997 (1997-02-28), pages 67 - 70 * |
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