CN113121489A - 芸香苷-丙酮醛加合物、制备方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种芸香苷‑丙酮醛加合物、制备方法及应用，属于标准物质合成和食品检测技术领域，所述芸香苷‑丙酮醛加合物，分子式为C33H36O20或C33H34O20，所述制备方法为将芸香苷与丙酮醛按照(10：1)～(1：10)的摩尔比加入磷酸缓冲盐溶液中，搅拌状态下，恒温加热反应，得到含所述芸香苷‑丙酮醛加合物的混合液，通过分离纯化得到所述高纯度芸香苷‑丙酮醛加合物，用于检测食品中丙酮醛加合物，可快速定量检测食品中芸香苷‑丙酮醛加合物含量，评估食品中芸香苷‑丙酮醛加合物的暴露水平，从而对此类食品的安全性进行较为全面的评价。

Description

芸香苷-丙酮醛加合物、制备方法及应用
技术领域
本发明涉及食品检测技术领域，特别是涉及一种芸香苷-丙酮醛加合物、制备方法及应用。
背景技术
丙酮醛(MGO)是一种高反应性的内源性代谢产物，广泛存在于食品和城市大气、卷烟烟气等环境中。烘焙产品、面食、油炸食品、甜酱和调味品等经热加工发生美拉德与焦糖化等反应会产生大量丙酮醛。研究发现丙酮醛可通过修饰蛋白质，与之反应而引起蛋白的变性，进一步诱导细胞损伤。此外，丙酮醛是晚期糖基化终末产物(AGEs)的前体，与糖尿病等慢性疾病有关，引起人们的广泛关注。
芸香苷是一类具有多种生物活性的多酚，可预防多种慢性疾病。近年来，多酚提取物及富含多酚的加工副产物被广泛添加于焙烤食品中，如面包、蛋糕、饼干等。添加芸香苷可与丙酮醛反应抑制或中断其进一步重排反应，降低热加工食品中内源性有害物质的含量。芸香苷降低热加工食品中丙酮醛含量的机制是与丙酮醛反应形成加合物，从而消除了丙酮醛，然而对于这些加合物对人体健康的影响尚无评价，可能带来食品安全风险。获得芸香苷-丙酮醛加合物标准品和对其在食品中的含量进行有效检测是评估食品中这类加合物安全性的前提。
由于食品中化合物繁多，分离难度大，如何获得高产率、高纯度，并可作为检测食品中丙酮醛反应加合物的标准物质是本领域亟需解决的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种芸香苷-丙酮醛加合物、制备方法，本发明的方法简单，获得的产物产率高、纯度高。
本发明的另一目的在于提供上述芸香苷-丙酮醛加合物的应用，所述芸香苷-丙酮醛加合物应用于食品检测领域，用作检测食品中丙酮醛反应产物的标准物，以便更快速分析食品中丙酮醛加合物的种类及含量。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
技术方案一：
本发明提供一种芸香苷-丙酮醛加合物，分子式为C33H36O20或C33H34O20，结构式见式Ⅰ(产物a)、式Ⅱ(产物b)或式Ⅲ(产物c)：
Figure BDA0003028055650000021
技术方案二：
本发明提供一种所述芸香苷-丙酮醛加合物的制备方法，包括以下步骤：将芸香苷与丙酮醛按照(10：1)～(1：10)的摩尔比加入磷酸缓冲盐溶液中，搅拌状态下，恒温加热反应，得到所述芸香苷-丙酮醛加合物。
进一步地，所述芸香苷与丙酮醛的摩尔比为1：10。
进一步地，所述搅拌转速为10～20rpm。
进一步地，所述加热反应为在室温～100℃反应6～24h，优选在60～70℃反应12～14h。
进一步地，所述制备方法还包括纯化过程：加热反应完成后，将反应液浓缩、滤膜过滤，得到滤液，凝胶层析法除盐后，再用反相硅胶层析法进行纯化，收集洗脱液，冷冻干燥后得到纯化后产物。葡聚糖凝胶树脂的型号为LH-20、G-10、G-15、G-25的一种，洗脱液为甲醇溶液、乙醇溶液中的一种；十八烷基键合硅胶的型号为A-HG、AQ-HG、MB75-100、AR100g型中的一种。
进一步地，纯化过程中所述滤膜为0.45μm滤膜，所述浓缩为减压浓缩；
所述凝胶层析法具体为：葡聚糖凝胶柱上样，纯水洗脱，通过TLC法监测并收集目标加合物的混合溶液。
所述反相硅胶层析法具体：反相硅胶ODS树脂，上样，依次采用20％甲醇水溶液和50％甲醇水溶液进行分段洗脱，通过TLC法监测并收集目标加合物，再由高效液相检测法检验纯度，收集洗脱液，冷冻干燥，得到纯化后样品。
所述冷冻干燥的条件为-70～-40℃，1～100Pa，冷冻48h。
进一步地，纯化具体包括以下步骤：
(1)反应原液前处理
取出反应原液，浓缩，0.45μm滤膜过滤；
(2)羟丙基葡聚糖凝胶除盐
a)装凝胶柱：取凝胶粉，加纯水搅拌，活化后装入玻璃柱中；
b)上样：干燥样品中加入1mL的洗脱剂，超声，上样，纯水洗脱，通过TLC监测并收集目标产物；
c)将含目标产物溶液合并于烧瓶，干燥备用；
(3)反相硅胶层析柱分离
a)装硅胶柱：取硅胶粉，加甲醇，硅胶粉与甲醇的体积比为3：4，搅拌浸泡，装入玻璃柱中，并将柱中洗脱剂平衡至甲醇与水体积比为2:8；
b)上样：加入1mL的洗脱剂至烧瓶中，超声，上样；
c)依次加入洗脱溶剂如下：甲醇-水，体积比2:8；甲醇-水，体积比1:1，洗脱至黄绿色带洗出；
d)收集步骤c)馏分，进行HPLC验纯，相同物质合并，干燥洗脱溶剂，经冷冻干燥后收集粉末产品，得到纯化后的芸香苷-丙酮醛加合物。
技术方案三：
本发明提供所述的加合物在食品中丙酮醛加合物检测方面的应用。
进一步地，检测方法包括如下步骤：将待检测食品粉碎，水或甲醇提取，得到待检测液，采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS/MS)进行检测，以芸香苷-丙酮醛加合物为标准品作标准曲线，获得检测结果。
进一步地，所述的检测方法为高效液相色谱-质谱联用法，检测波长范围在200～420nm，所述HPLC-MS/MS法色谱条件为色谱柱Phenomenex Aeris Peptide XB-C18，250mm×4.60mm，5μm，流动相A为0.1％甲酸水，流动相B为甲醇；色谱条件为：检测波长360nm，流速0.5mL/min，柱温40℃，进样量2μL；二元梯度洗脱程序为0～12min，10％～70％B；12～15min，70％～90％B；15～17min，90％B；17～18min，90％～10％B；18～25min，10％B；
质谱条件为：采用电喷雾离子源(ESI)作离子源，扫描范围为m/z 50～800，在负离子模式下以多反应监测法(MRM)进行检测分析。产物定性、定量离子对如下：产物a的定量离子对为m/z＝751→399；定性离子对为m/z＝751→371和m/z＝751→442；产物b的定量离子对为m/z＝751→399；定性离子对为m/z＝751→371和m/z＝751→424；产物c的定量离子对为m/z＝749→397；定性离子对为m/z＝749→440和m/z＝751→613。
本发明公开了以下技术效果：
本发明提供了一种芸香苷-丙酮醛加合物及其制备方法，制备得到的芸香苷-丙酮醛产率高，纯度高，用于检测食品中丙酮醛加合物，可快速定量检测食品中芸香苷-丙酮醛加合物含量，评估食品中芸香苷-丙酮醛加合物的暴露水平，从而对此类食品的安全性进行较为全面的评价。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例1的产物a的HPLC验纯结果；
图2为实施例1的产物b的HPLC验纯结果；
图3为实施例1的产物c的HPLC验纯结果；
图4为实施例3制备的加合物a的一级质谱图(正离子模式)；
图5为实施例3制备的加合物a的一级质谱图(负离子模式)；
图6为实施例3制备的加合物a的13C NMR核磁谱图；
图7为实施例3制备的加合物a的Dept-135核磁谱图；
图8为实施例3制备的加合物a的1H NMR核磁谱图；
图9为实施例3制备的加合物b的一级质谱图(正离子模式)；
图10为实施例3制备的加合物b的一级质谱图(负离子模式)；
图11为实施例3制备的加合物b的13C NMR核磁谱图；
图12为实施例3制备的加合物b的Dept-135核磁谱图；
图13为实施例3制备的加合物b的1H NMR核磁谱图；
图14为实施例3制备的加合物c的一级质谱图(正离子模式)；
图15为实施例3制备的加合物c的一级质谱图(负离子模式)；
图16为实施例3制备的加合物c的13C NMR核磁谱图；
图17为实施例3制备的加合物c的1H NMR核磁谱图；
图18为实施例1饼干提取物中加合物a、b、c的HPLC谱图；
图19为实施例1面包提取物中加合物a、b、c的HPLC谱图；
图20为实施例1薯片提取物中加合物a、b、c的HPLC谱图；
图21为实施例1饼干提取物中加合物a的质谱图(负离子模式)；
图22为实施例1饼干提取物中加合物b的质谱图(负离子模式)；
图23为实施例1饼干提取物中加合物c的质谱图(负离子模式)；
图24为实施例1面包提取物中加合物a的质谱图(负离子模式)；
图25为实施例1面包提取物中加合物b的质谱图(负离子模式)；
图26为实施例1面包提取物中加合物c的质谱图(负离子模式)；
图27为实施例1薯片提取物中加合物a的质谱图(负离子模式)；
图28为实施例1薯片提取物中加合物b的质谱图(负离子模式)；
图29为实施例1薯片提取物中加合物c的质谱图(负离子模式)。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
本发明所述HPLC-MS/MS法过程中多种品牌和型号的色谱柱均可，本发明的实施例以色谱柱Phenomenex Aeris Peptide XB-C18，250mm×4.60mm，5μm为例进行说明。本发明实施例中凝胶层析法选用Sephadex LH-20葡聚糖凝胶，反相硅胶层析法中选用A-HG型反相硅胶ODS树脂。
实施例1
三种芸香苷-丙酮醛加合物的制备方法，包括以下步骤：在0.2M磷酸缓冲盐中，将芸香苷与丙酮醛按照摩尔比为1:10进行避光加热反应(37℃反应24h，转速20rpm)，减压浓缩至1～2mL，过0.45μm滤膜后，得到滤液，用凝胶柱层析法除盐后用反相硅胶层析法进行纯化，纯化后收集的馏分进行HPLC验纯，相同物质合并，旋干洗脱溶剂，经-70℃，10Pa冷冻干燥48h后收集粉末产品，得到三种芸香苷-丙酮醛加合物：化合物a、化合物b和化合物c，三种芸香苷-丙酮醛加合物的产率分别为a：28.5％、b：29.4％、c：10.4％。
本实施例所述凝胶柱层析法除盐的方法如下：
a)装凝胶柱：取69g凝胶粉，加300mL纯水搅拌，活化后装入玻璃柱中；
b)上样：旋干样品中加入1mL的水作为洗脱剂水，超声使其全部溶解，上样，纯水洗脱，通过TLC监测并收集目标产物；
c)将含目标产物溶液合并于烧瓶中，旋干备用。
本实施例所述反相硅胶层析柱分离方法如下：
a)装硅胶柱：取150mL硅胶粉，加200mL甲醇搅拌，装入玻璃柱中，并将柱中洗脱剂平衡至甲醇：水＝2:8；
b)上样：加入1mL的洗脱剂(甲醇：水＝2:8)至烧瓶中，超声使其全部溶解，上样。
c)依次加入洗脱溶剂如下：
甲醇：水＝2:8(200mL)；
甲醇：水＝1:1(400mL)洗脱，至有黄绿色带(目标产物色带)洗出，对3个色带进行分段收集。
本实施例所述HPLC验纯的方法如下：
取0.5ml各馏分采用日本岛津仪器公司的LC-20AT高效液相色谱(HPLC)分析系统验纯，所述HPLC法测定的条件为：色谱柱Phenomenex Aeris Peptide XB-C18(250mm×4.60mm，5μm)，流动相A为0.1％甲酸水，流动相B为甲醇；色谱条件为：检测波长360nm，流速0.5mL/min，柱温40℃，进样量10μL；二元梯度洗脱程序为0～12min，10％～70％B；12～15min，70％～90％B；15～17min，90％B；17～18min，90％～10％B；18～25min，10％B。在该检测方法下，产物标准品的保留时间分别为产物a(6-(1-羟基丙酮)-8-(1，2-丙二酮)-芦丁)：17.16min、产物b(6-(1，2-丙二酮)-8-(1-羟基丙酮)-芦丁):17.66min、产物c(6-(1，2-丙二酮)-8-(1，2-丙二酮)-芦丁):17.85min，结果见图1～图3，本发明方法制备得到的加合物的纯度≥97％，其中三种加合物的高效液相色谱图各个显示波长下(200～400nm)的目标单峰的峰纯度≥97％，化合物a、化合物b和化合物c的纯度分别为98.1％、98.0％、97.5％，从图1～图3可以得到的产物a～c的保留时间、峰面积情况见表1。
表1
产物 保留时间/min 峰面积 面积/％
产物a 17.163 15337511 98.1
产物b 17.663 11210495 98.0
产物c 17.847 18200975 97.5
食品中加合物的检测
饼干的前处理及提取：磨碎荞麦饼干样品，取约5g样品，用20ml甲醇涡旋提取3次，涡旋时间为5min，10000rpm离心10分钟，收集三次上清液合并，然后50℃旋转蒸发除去甲醇。将提取物溶于5ml甲醇中，0.22μm尼龙膜过滤，采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)分析。
面包的前处理及提取：取约5g面包碎屑，用20ml甲醇涡旋提取3次，涡旋时间为5min，10000rpm离心10分钟，收集三次上清液合并，然后50℃旋转蒸发除去甲醇。将提取物溶于5ml甲醇中，0.22μm尼龙膜过滤，采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)分析。
薯片的前处理及提取：采用正己烷作溶剂对薯片进行脱脂，挥干溶剂，磨碎脱脂薯片，取约5g样品，用20ml甲醇涡旋提取3次，涡旋时间为5min，10000rpm离心10分钟，收集三次上清液合并，然后50℃旋转蒸发除去甲醇。将提取物溶于5ml甲醇中，0.22μm尼龙膜过滤，采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)分析。
所述HPLC-MS/MS法使用日本岛津公司的三重四级杆液质联用仪(LC-MS8045)，采用的色谱柱为Phenomenex Aeris Peptide XB-C18(250mm×4.60mm，5μm)，色谱条件为：流动相A为0.1％甲酸水，流动相B为甲醇；检测波长360nm，流速0.5mL/min，柱温40℃，进样量2μL；二元梯度洗脱程序为0～12min，10％～70％B；12～15min，70％～90％B；15～17min，90％B；17～18min，90％～10％B；18～25min，10％B。质谱条件为：采用电喷雾离子源(ESI)作离子源，电喷雾离子源参数如下：雾化气流量50Psi，干燥气流量50Psi，解簇电压为50V。扫描范围为m/z 50～800，在负离子模式下以多反应监测法(MRM)进行检测分析。产物a的定量离子对为m/z＝751→399(碰撞能量为50eV，保留时间为13.1min)；定性离子对为m/z＝751→371(碰撞能量为51eV)和m/z＝751→442(碰撞能量为37eV)；产物b的定量离子对为m/z＝751→399(碰撞能量为49eV，保留时间为13.8min)；定性离子对为m/z＝751→371(碰撞能量为49eV)和m/z＝751→424(碰撞能量为44eV)；产物c的定量离子对为m/z＝749→397(碰撞能量为39eV，保留时间为14.2min)；定性离子对为m/z＝749→440(碰撞能量为50eV)和m/z＝751→613(碰撞能量为38eV)。
以芸香苷-丙酮醛加合物为标准品作标准曲线：称取适宜量的芸香苷-丙酮醛加合物，以甲醇溶解，定容，制备标准品母液，通过稀释得到不同浓度梯度标准溶液，0.22μm尼龙膜过滤，采用上述HPLC-MS/MS法分析，以检测到的定量离子对丰度为纵坐标，标注物质浓度为横坐标制作标准曲线，供食品中加合物定量用。在该检测方法下，产物标准品的保留时间分别为产物a(6-(1-羟基丙酮)-8-(1，2-丙二酮)-芦丁)：13.139min、产物b(6-(1，2-丙二酮)-8-(1-羟基丙酮)-芦丁):13.814min、产物c(6-(1，2-丙二酮)-8-(1，2-丙二酮)-芦丁):14.238min，与饼干/面包/薯片提取物中检测到的产物保留时间(表2)一致，产物a、b、c在HPLC色谱图中呈现可重复、分离度高、尖锐无拖尾的良好峰型(图18-20)。产物含量采用MRM模式下检测到的定量离子对丰度(图21-29)，以对应的芸香苷-丙酮醛标准曲线进行计算得到。
表2
Figure BDA0003028055650000091
实施例2
芸香苷-丙酮醛加合物的制备方法，包括以下步骤：在0.2M磷酸缓冲盐中，将芸香苷与丙酮醛按照摩尔比为1:5进行避光加热反应(70℃反应12h，转速20rpm)，减压浓缩至1～2mL，过0.45μm滤膜后，得到滤液，用凝胶柱层析法除盐后用反相硅胶层析法进行纯化，纯化后收集的馏分进行HPLC验纯，相同物质合并，旋干洗脱溶剂，经-50℃、20Pa冷冻干燥48h后收集粉末产品(即为芸香苷-丙酮醛加合物)，化合物、化合物b和化合物c的纯度分别为98.0％、97.5％、98.6％，三种芸香苷-丙酮醛加合物的产率分别为a：15.4％、b：14.3％、c：33.0％。
本实施例的凝胶柱层析法除盐、用反相硅胶层析法进行纯化的步骤以及HPLC验纯的步骤同实施例1。
食品(饼干、面包、薯片)中加合物的检测同实施例1，检测结果和实施例1结果类似，HPLC色谱图中呈现可重复、分离度高、尖锐无拖尾的良好峰型。
实施例3
芸香苷-丙酮醛加合物的制备方法，包括以下步骤：在0.2M磷酸缓冲盐中，将芸香苷与丙酮醛按照摩尔比为1:10进行避光加热反应(70℃反应13h，转速20rpm)，减压浓缩至1～2mL，过0.45μm滤膜后，得到滤液，用凝胶柱层析法除盐后用反相硅胶层析法进行纯化，纯化后收集的馏分进行HPLC验纯，相同物质合并，旋干洗脱溶剂，经-40℃、10Pa冷冻干燥48h后收集粉末产品(即为芸香苷-丙酮醛加合物)，化合物、化合物b和化合物c的纯度分别为97.2％、98.0％、98.3％，三种芸香苷-丙酮醛加合物的产率分别为a：17.6％、b：22.8％、c：43.6％。
本实施例的凝胶柱层析法除盐和用反相硅胶层析法进行纯化的步骤以及HPLC验纯的步骤同实施例1。
本实施例得到的三种加合物产物的鉴定：
芸香苷-丙酮醛加合物a的一级质谱图(正离子模式)见图4，加合物a的一级质谱图(负离子模式)见图5，加合物a的13C NMR核磁谱图见图6，加合物a的Dept-135核磁谱图见图7，加合物a的1H NMR核磁谱图见图8，由图4～图8可知加合物a的分子式为C33H36O20，化学名为6-(1-羟基丙酮)-8-(1，2-丙二酮)-芦丁，分子量：752，结构式如下：
Figure BDA0003028055650000111
芸香苷-丙酮醛加合物b的一级质谱图(正离子模式)见图9，加合物b的一级质谱图(负离子模式)见图10，加合物b的13C NMR核磁谱图见图11，加合物b的Dept-135核磁谱图见图12，加合物b的1H NMR核磁谱图见图13，由图9～图13可知加合物b的分子式为C33H36O20，化学名为6-(1，2-丙二酮)-8-(1-羟基丙酮)-芦丁，分子量：752，结构式如下：
Figure BDA0003028055650000112
芸香苷-丙酮醛加合物c的一级质谱图(正离子模式)见图14，加合物c的一级质谱图(负离子模式)见图15，加合物c的13C NMR核磁谱图见图16，加合物c的1H NMR核磁谱图见图17，由图14～图17可知加合物c的分子式为C33H34O20，化学名为6-(1，2-丙二酮)-8-(1，2-丙二酮)-芦丁，分子量：750，结构式如下：
Figure BDA0003028055650000121
食品(饼干、面包、薯片)中加合物的检测同实施例1，检测结果和实施例1结果类似，HPLC色谱图中呈现可重复、分离度高、尖锐无拖尾的良好峰型。
实施例4
芸香苷-丙酮醛加合物的制备方法，包括以下步骤：在0.2M磷酸缓冲盐中，将芸香苷与丙酮醛按照摩尔比为1:1进行避光加热反应(70℃反应24h，转速20rpm)，减压浓缩1～2mL，过0.45μm滤膜后，得到滤液，用凝胶柱层析法除盐后用反相硅胶层析法进行纯化，纯化后收集的馏分进行HPLC验纯，相同物质合并，旋干洗脱溶剂，经-70℃、30Pa冷冻干燥48h后收集粉末产品(即为芸香苷-丙酮醛加合物)，化合物a、化合物b和化合物c的纯度分别为97.7％、98.0％、98.2％，三种芸香苷-丙酮醛加合物的产率分别为a：7.0％、b：3.3％、c：15.0％。
本实施例的凝胶柱层析法除盐和用反相硅胶层析法进行纯化的步骤以及HPLC验纯的步骤同实施例1。
食品(饼干、面包、薯片)中加合物的检测同实施例1，检测结果和实施例1结果类似，HPLC色谱图中呈现可重复、分离度高、尖锐无拖尾的良好峰型。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (10)

1.一种芸香苷-丙酮醛加合物，其特征在于，分子式为C33H36O20或C33H34O20，结构式见式Ⅰ、式Ⅱ或式Ⅲ：
Figure FDA0003028055640000011
2.一种如权利要求1所述芸香苷-丙酮醛加合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将芸香苷与丙酮醛按照(10：1)～(1：10)的摩尔比加入磷酸缓冲盐溶液中，搅拌状态下，恒温加热反应，得到所述芸香苷-丙酮醛加合物。
3.根据权利要求2所述的芸香苷-丙酮醛加合物的制备方法，其特征在于，所述芸香苷与丙酮醛的摩尔比为1：10。
4.根据权利要求2所述的芸香苷-丙酮醛加合物的制备方法，其特征在于，所述搅拌转速为10～20rpm。
5.根据权利要求2所述的芸香苷-丙酮醛加合物的制备方法，其特征在于，所述加热反应为在室温～100℃反应6～24h。
6.根据权利要求2所述的芸香苷-丙酮醛加合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括纯化过程：加热反应完成后，将反应液浓缩、滤膜过滤，得到滤液，凝胶层析法除盐后，再用反相硅胶层析法进行纯化，收集洗脱液，冷冻干燥后得到纯化后产物。
7.根据权利要求6所述的芸香苷-丙酮醛加合物的制备方法，其特征在于，所述滤膜为0.45μm滤膜，所述浓缩为减压浓缩；
所述冷冻干燥的条件为-70～-40℃，1～100Pa，冷冻48h。
8.一种如权利要求1所述的加合物在食品中丙酮醛加合物检测方面的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，检测方法包括如下步骤：将待检测食品粉碎，水或甲醇提取，得到待检测液，采用高效液相色谱-质谱联用法进行检测，以芸香苷-丙酮醛加合物为标准品作标准曲线，获得检测结果。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的检测方法为高效液相色谱-质谱联用法，检测波长范围在200～420nm；
质谱条件为：采用电喷雾离子源作离子源，扫描范围为m/z 50～800，在负离子模式下以多反应监测法进行检测分析；产物定性、定量离子对如下：产物a的定量离子对为m/z＝751→399；定性离子对为m/z＝751→371和m/z＝751→442；产物b的定量离子对为m/z＝751→399；定性离子对为m/z＝751→371和m/z＝751→424；产物c的定量离子对为m/z＝749→397；定性离子对为m/z＝749→440和m/z＝751→613。
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