CN113106108B - 一种增强生防菌杀灭白蚁效果的双链核酸Dicer-1 dsRNA - Google Patents

一种增强生防菌杀灭白蚁效果的双链核酸Dicer-1 dsRNA Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种增强生防菌杀灭白蚁效果的双链核酸Dicer‑1 dsRNA。本发明中Dicer‑1 dsRNA的设计来源于黑胸散白蚁Dicer‑1基因，DNA序列为SEQ 1。基于SEQ 1序列，设计并克隆含有目的基因Dicer‑1片段SEQ 2的纯净质粒。通过SEQ 2序列，设计并克隆Dicer‑1 dsRNA模板，通过T7体外转录系统合成Dicer‑1 dsRNA。将Dicer‑1 dsRNA与白蚁食物混合，随后放入白蚁群体中供白蚁取食。用生防真菌感染取食Dicer‑ 1 dsRNA的白蚁后，染菌白蚁相互理毛行为次数下降，疾病防御相关基因发生紊乱，抗菌活性下降，死亡率显著上升。这表明Dicer‑1 dsRNA能够显著提高生防真菌对白蚁的生物防治效果。本发明获得的Dicer‑1基因可作为白蚁防治的靶标分子，与生防真菌结合使用，有效提高白蚁防治效果，具有良好的应用前景。

Description

一种增强生防菌杀灭白蚁效果的双链核酸Dicer-1 dsRNA
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及Dicer-1基因和Dicer-1 dsRNA，一种增强生防菌杀灭白蚁效果的双链核酸Dicer-1 dsRNA。
背景技术
白蚁是一种古老的社会性有害昆虫，能够危害农林作物、房屋建筑和水利工程等，具有“无牙老虎”之称，严重威胁人民的生命和财产安全。在我国，白蚁危害主要发生在华中地区、华南地区、西南地区以及东南沿海地区。我国每年因白蚁危害造成的经济损失达100亿人民币。目前，化学防治仍是白蚁防治的主要手段。然而，基于对环境、人畜安全的考虑，许多高毒高污染化学药剂已被禁用。因此，研究和开发无毒、无污染、对环境友好的生物防治药剂成为白蚁防治领域的迫切需求之一。生防真菌，例如绿僵菌（Metarhizium）和白僵菌（Beauveria）是应用最为广泛的昆虫致病真菌之一，其生防药剂对蝗虫、马尾松毛虫、蛴螬、天牛、象甲等害虫致病力强，具有一定专一性、对人畜无害、不污染环境、无残留、害虫不会产生抗药性等优点，因此备受推崇。前期研究结果表明，绿僵菌对单头白蚁具有较强致死效果，但是随着白蚁密度的增加，绿僵菌的致死效果降低。之所以出现这种现象，研究者认为与白蚁独特的行为防御和生理免疫有关。
白蚁抵御病原菌侵染的过程中，相互理毛行为是一种重要的行为防御机制：当白蚁遭受绿僵菌侵染时，白蚁聚集成群，彼此通过口器舔舐同伴皮肤表面并及时移除体表绿僵菌孢子。研究发现，染菌白蚁通过加强相互理毛，能够在染菌后3小时内清理体表80%的绿僵菌孢子。此外，白蚁抵御绿僵菌侵染的过程中，上调免疫基因表达是一种重要的生理免疫机制：模式识别受体识别病原菌后，激活包括体液免疫和细胞免疫在内的先天免疫系统，最后通过抗菌肽和免疫细胞杀灭病原菌。此外，一些氧化还原基因（例如解毒基因和抗氧化基因）也在白蚁抵御绿僵菌侵染过程中发挥重要作用。因此，如何削弱白蚁行为防御和生理免疫成为提高白蚁生物防治效果的关键。
Dicer-1是动物体内加工生成miRNAs（一种18-25 bp的非编码RNA）的关键酶之一。miRNAs能够负向调控多个功能相同或者不同的靶标基因，在动物生长、发育、代谢、免疫、行为等方面发挥重要作用。相比于其他靶标基因，Dicer-1基因介导的miRNAs功能紊乱对动物的影响范围更大、程度更深。因此，本发明以白蚁Dicer-1基因为靶标基因，通过喂食白蚁Dicer-1 dsRNA沉默Dicer-1基因，削弱白蚁群体卫生行为和个体生理免疫，从而提高金龟子绿僵菌对白蚁的杀灭效果，推动RNAi介导的白蚁生物防治技术的发展。
发明内容
本发明的目的是提供靶标基因Dicer-1以及Dicer-1 dsRNA在白蚁生物防治中的应用：通过同时削弱白蚁行为防御和生理免疫提高生防真菌的杀虫效果。
本发明Dicer-1 dsRNA的设计来源于白蚁体内一种关键miRNAs加工酶基因，即Dicer-1基因，DNA序列来源于黑胸散白蚁转录组数据库，为SEQ 1。通过SEQ 1设计上游引物SEQ 3和下游引物SEQ 4，以白蚁cDNA为模板进行PCR扩增、TA克隆或者平末端克隆、挑菌检测和质粒回收，获得含有目的基因Dicer-1片段的纯净质粒，含有目的基因Dicer-1片段长度为1698 bp，DNA序列如SEQ 2所示。
通过SEQ 2设计含“转录增强子”和“T7启动子”的特异性引物，上游引物为SEQ 6，下游引物为SEQ 7，以含有目的基因Dicer-1片段的纯净质粒为模板进行PCR扩增，通过醋酸钠结合异丙醇的方法浓缩Dicer-1 dsRNA模板，模板长度569 bp，DNA序列如SEQ 5所示。
Dicer-1 dsRNA模板通过体外转录系统获得Dicer-1 dsRNA，通过醋酸钠结合异丙醇的方法浓缩Dicer-1 dsRNA，产物长度519 bp，RNA序列如SEQ 8所示。
基于上述基因序列，本发明还提供一种含双链核酸Dicer-1 dsRNA的防治白蚁的产品。
一种含双链核酸Dicer-1 dsRNA为活性成分的防治白蚁的产品。
双链核酸Dicer-1 dsRNA协同生防真菌制备得到的防治白蚁的产品，所述的生防真菌包括绿僵菌、或白僵菌。
一种防治白蚁的方法，包含所述的双链核酸Dicer-1 dsRNA，步骤如下：
（1）将双链核酸Dicer-1 dsRNA与白蚁食物混合，放入白蚁群体中供白蚁取食，得到取食Dicer-1 dsRNA的白蚁；
（2）利用质量浓度是0.1-2 % Tween 80溶液收集生防真菌孢子，制备生防真菌孢子悬浮液；
（3）利用生防真菌孢子悬浮液感染取食Dicer-1 dsRNA的白蚁，进而防治白蚁。
白蚁食物包括纸片、木块、木屑、或木粉的含纤维素的物质，Dicer-1 dsRNA与白蚁食物混合方式为浸润、涂抹、或注入的混合方法。
所述的生防真菌包括绿僵菌、或白僵菌。
本发明通过上述合成的Dicer-1 dsRNA对黑胸散白蚁的干扰效果进行监测：将Dicer-1 dsRNA溶液浸湿滤纸片，随后放入饲养白蚁的培养皿中供白蚁取食。取食1天后，对培养皿中白蚁进行RT-qPCR检测。取食Dicer-1 dsRNA的白蚁为处理组，取食等量GFP dsRNA的白蚁为对照组。结果表明，取食1天Dicer-1 dsRNA的处理组白蚁体内Dicer-1基因表达量显著降低。
本发明提供的Dicer-1 dsRNA协同生防菌在白蚁生物防治中的应用：将Dicer-1dsRNA溶液浸湿滤纸片，随后放入饲养白蚁的培养皿中供白蚁取食。取食1天后，用金龟子绿僵菌孢子悬浮液（浓度108个孢子/毫升）滴加到白蚁体表，作为处理组；取食等量GFP dsRNA的染菌白蚁为对照组。通过摄像机记录上述处理组和对照组组内染菌白蚁的行为，记录时间15分钟。此外，染菌1天后，利用分光光度计检测上述处理组和对照组组内染菌白蚁的抗菌活性。最后，记录上述处理组和对照组组内染菌白蚁的死亡个数和死亡时间，记录时间为10天。结果显示，处理组染菌白蚁理毛行为强度显著低于对照组白蚁理毛行为强度；处理组染菌白蚁抗菌活性显著低于对照组染菌白蚁抗菌活性；处理组染菌白蚁死亡率显著高于对照组白蚁染菌白蚁死亡率。由此可见，RNAi介导的Dicer-1基因沉默能够削弱白蚁行为防御和生理免疫，提高白蚁感染死亡率，显著提高了生防真菌对白蚁的防治效果。
本发明有以下3个明显的优点：1．获得黑胸散白蚁Dicer-1的DNA序列，设计Dicer- 1 dsRNA，能够专一靶向目标白蚁以及近缘种白蚁，减少对非靶标生物的影响；2．Dicer-1dsRNA设计来源于白蚁体内一种关键miRNAs加工酶，其介导的miRNAs功能紊乱对白蚁的影响范围更大、程度更深——不仅可以抑制白蚁生理免疫，而且削弱了白蚁行为防御，从而提高了生防菌对白蚁的杀灭效果；3. Dicer-1 dsRNA属于一种双链RNA，制备方法简单，专一性强，对环境友好，能够通过喂食的简单操作方式削弱白蚁行为和生理防御能力，协同生防菌杀灭白蚁效果理想，具有良好的研究和应用前景。
附图说明
图1：白蚁取食Dicer-1 dsRNA 1天后体内Dicer-1基因表达量效果图。取食Dicer- 1 dsRNA的白蚁为处理组，取食GFP dsRNA的白蚁为对照组；β-actin作为内参；柱形图为平均值±标准误，* 表示P < 0.05。
图2：白蚁取食Dicer-1 dsRNA 1天后理毛行为的效果图。取食Dicer-1 dsRNA的白蚁为处理组，取食GFP dsRNA的白蚁为对照组；柱形图为平均值±标准误，* 表示P < 0.05。
图3：白蚁取食Dicer-1 dsRNA 1天后疾病防御相关基因表达量效果图。取食Dicer-1 dsRNA的白蚁为处理组，取食GFP dsRNA的白蚁为对照组；柱形图为平均值±标准误，* 表示P < 0.05，** 表示P < 0.01。
图4：白蚁取食Dicer-1 dsRNA 1天后抗真菌活性效果图。取食Dicer-1 dsRNA的白蚁为处理组，取食GFP dsRNA的白蚁为对照组；柱形图为平均值±标准误，* 表示P < 0.05。
图5：白蚁取食Dicer-1 dsRNA后感染死亡率效果图。取食Dicer-1 dsRNA的白蚁为处理组，取食GFP dsRNA的白蚁为对照组；*** 表示P< 0.0001。
具体实施方式
实施例1：Dicer-1 dsRNA的制备过程
1. 提取黑胸散白蚁体内总RNA，通过反转录获得白蚁cDNA库。
2. 以白蚁cDNA为模板，利用Dcier-1基因特异性引物SEQ 3（上游引物：5’-AGGCTG CGA TTG AGT CTG-3’）和SEQ 4（下游引物：5’-ACC AGC ACA CAT ATC AGA C-3’），通过PCR扩增获得Dcier-1基因片段，随后通过琼脂糖凝胶电泳分离、纯化Dcier-1基因片段，其DNA序列为SEQ 1。
3. 通过TA克隆将Dcier-1基因片段插入到PMD-18T质粒中，随后将含有目的基因Dicer-1片段的质粒转入到DH5α感受态细胞中，在摇床中37℃，200转/分钟培养1小时。
4. 取上述转化后的感受态细胞菌液，在氨苄抗性培养基中均匀涂抹，37℃培养24小时。
5. 挑取单个菌斑到氨苄抗性新培养基中，37℃培养培养4小时，随后进行菌液PCR，进行凝胶电泳，最后选取含目的基因Dicer-1片段的菌液进行PCR，并进行扩大培养。
6. 25℃ 4000转/分钟离心扩大培养的菌液，浓缩，随后用质粒回收试剂盒提取质粒，获得含目的基因Dicer-1片段的质粒，-20℃冻存待用。获得含有目的基因Dcier-1片段的纯净质粒，其DNA序列为SEQ 2。
7. 以上述质粒为模板，利用含有“转录增强子”和“T7启动子”的Dcier-1片段特异性引物SEQ 6（上游引物：5’-GGA TCC TAA TAC GAC TCA CTA TAG GGT GAT GCT GGA GTTGGG TTT-3’）和SEQ 7（下游引物：5’-GGA TCC TAA TAC GAC TCA CTA TAG GAG AAT GAGTCG CCC AAT GTC-3’），通过PCR扩增得到Dicer-1 dsRNA模板。收集Dicer-1 dsRNA模板的PCR反应体系，加水到300微升。随后加入30微升的醋酸钠溶液和300微升的酚/氯仿/异戊醇（体积比25：24：1）溶液，13200转/分钟离心15分钟，取上清液。再加入等体积的异丙醇，再次13200转/分钟离心15分钟，弃上清液。最后75%酒精洗涤沉淀，干燥，溶解沉淀，从而获得了高浓度的Dicer-1 dsRNA模板。
8. 利用上述Dicer-1 dsRNA模板和T7体外转录系统获得Dicer-1 dsRNA。收集反应体系，加无酶水到300微升。随后加入30微升的醋酸钠、300微升的水饱和酚和60微升的氯仿/异戊醇（体积比50：1）溶液，13200转/分钟离心15分钟，取上清液。再加入等体积的异丙醇，再次13200转/分钟离心15分钟，弃上清液。最后75%酒精洗涤沉淀，干燥，溶解沉淀，从而获得Dicer-1 dsRNA。
实施例2：检测Dicer-1 dsRNA对黑胸散白蚁Dicer-1基因的影响
将100微克上述Dicer-1 dsRNA湿润直径1.5厘米的圆形滤纸片，放入直径3.5厘米的培养皿中，供10头黑胸散白蚁取食，作为处理组。喂食1天后，提取白蚁总RNA，通过RT-qPCR检测白蚁体内Dicer-1基因表达量。采用相同操作，喂食100微克GFP dsRNA的白蚁为对照组。实验重复3次，利用配对T测验分析差异性。结果如图1所示，与对照组相比，处理组白蚁Dicer-1基因表达量下降42.2%，达到显著性差异，表明Dicer-1 dsRNA能够抑制白蚁体内Dicer-1基因的表达。
实施例3：检测Dicer-1 dsRNA对黑胸散白蚁抗菌相关基因表达的影响
将100微克上述Dicer-1 dsRNA湿润直径1.5厘米的圆形滤纸片，放入直径3.5厘米的培养皿中，供10头黑胸散白蚁取食，作为处理组。喂食1天后，提取白蚁总RNA，通过RT-qPCR检测白蚁体内免疫、解毒、抗氧化相关基因的表达。采用相同操作，喂食100微克GFPdsRNA的白蚁为对照组。实验重复3次，利用配对T测验分析差异性。结果如图3所示，与对照组相比，处理组白蚁部分抗菌相关基因（Apolipoprotein D, Cathepsin L, Peroxiredoxin-4）显著下调；部分抗菌相关基因（Defensin, Termicin, C-type lysozyme-2, Cytochrome P450 9e2）显著上调。这些异常表达的抗菌基因表明Dicer-1dsRNA能够引起白蚁体内疾病防御相关基因发生紊乱。
实施例4：检测Dicer-1 dsRNA对黑胸散白蚁抗菌活性的影响
利用马铃薯葡萄糖培养基（PDA）培养金龟子绿僵菌，培养2周后，用1% Tween 80溶液收集金龟子绿僵菌孢子，制备孢子悬浮液，4度冰箱保存待用。孢子悬浮液浓度为108个孢子/毫升。
将100微克上述Dicer-1 dsRNA湿润直径1.5厘米的圆形滤纸片，放入直径3.5厘米的培养皿中，供10头黑胸散白蚁取食，作为处理组。喂食1天后，提取白蚁组织液，-20℃冰箱冻存待用。利用96孔酶标板，通过检测以下混合液的吸光度计算抗菌活性：（1）样品混合液：每孔加入4微升组织液、50微升马铃薯葡萄糖培养液和2微升孢子悬浮液；（2）孢子培养液混合液：每孔加入4微升生理盐水，50微升马铃薯葡萄糖培养液和2微升孢子悬浮液；（3）空白混合液：每孔加入6微升生理盐水和50微升马铃薯葡萄糖培养液。喂食100微克GFP dsRNA的白蚁为对照组，采用相同方法提取组织液并进行检测。实验重复5次，利用配对T测验分析差异性。
通过计算公式计算白蚁抗菌活性：
抗菌活性=[(2)-(1)]/[(2)-(3)]*100%。
结果如图4所示，与对照组相比，处理组白蚁抗菌活性下降52.6%，达到显著性差异，表明Dicer-1 dsRNA能够抑制白蚁抗菌活性，即白蚁免疫力。
实施例5：检测Dicer-1 dsRNA对黑胸散白蚁理毛行为的影响
用1% Tween 80溶液收集金龟子绿僵菌孢子，制备孢子悬浮液，4度冰箱保存待用。孢子悬浮液浓度为108个孢子/毫升。
将100微克Dicer-1 dsRNA湿润直径1.5厘米的圆形滤纸片，放入直径3.5厘米的培养皿中，供10头黑胸散白蚁取食，作为处理组。喂食1天后，利用移液枪将0.35微升孢子悬浮液滴加到黑胸散白蚁腹部背面，随后随机挑选3头染菌的处理组白蚁，移入直径3.5厘米的新培养皿中，通过摄像机记录白蚁行为。记录时间15分钟，每隔10秒观察画面白蚁是否发生理毛行为。采用相同操作，喂食100微克GFP dsRNA的白蚁为对照组，利用移液枪将0.35微升孢子悬浮液滴加到黑胸散白蚁腹部背面，随后随机挑选3头染菌的对照组白蚁进行理毛行为统计。实验重复6次，利用配对T测验分析差异性。结果如图2所示，与对照组染菌白蚁相比，处理组染菌白蚁理毛行为次数下降86.3%，达到显著性差异，表明Dicer-1 dsRNA能够削弱白蚁理毛行为。
实施例6：检测Dicer-1 dsRNA对黑胸散白蚁感染死亡率的影响
用1% Tween 80溶液收集金龟子绿僵菌孢子，制备孢子悬浮液，4℃冰箱保存待用。孢子悬浮液浓度为108个孢子/毫升。
将100微克上述Dicer-1 dsRNA湿润直径1.5厘米的圆形滤纸片，放入直径3.5厘米的培养皿中，供10头黑胸散白蚁取食，作为处理组。同时，利用移液枪将0.35微升孢子悬浮液滴加到黑胸散白蚁腹部背面，将10头处理组染菌白蚁共同培养10天，每天记录死亡个体数量并及时移除死亡个体。采用相同操作，喂食100微克GFP dsRNA的白蚁为对照组，利用移液枪将0.35微升孢子悬浮液滴加到黑胸散白蚁腹部背面，将10头对照组染菌白蚁共同培养10天，每天记录死亡个体数量并及时移除死亡个体。实验重复4组，利用Kaplan-Meier方法分析数据差异性。结果如图5所示，与对照组染菌白蚁相比[LT50: 5.738 (5.486-5.989)]，处理组染菌白蚁死亡率[LT50: 2.418 (2.171-2.624)]显著上升，表明Dicer-1 dsRNA能够显著提高生防真菌杀灭白蚁的效果。
序列表
<110>河南农业大学
<120>专利名称：一种增强生防菌杀灭白蚁效果的双链核酸Dicer-1 dsRNA
<160>8
<210>1
<211>2775
<212>DNA
<213>SEQ 1
<400>1
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序列表
<110>河南农业大学
<120>专利名称：一种增强生防菌杀灭白蚁效果的双链核酸Dicer-1 dsRNA
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Claims (9)

1.Dicer-1基因，白蚁体内关键miRNAs加工酶基因，其特征在于，DNA序列来源于黑胸散白蚁转录组数据库，DNA序列为SEQ ID NO:1。
2.一种质粒，其特征在于，DNA序列为SEQ ID NO:2。
3.一种Dicer-1 dsRNA模板，其特征在于，Dicer-1 dsRNA模板的DNA序列为 SEQ IDNO:5。
4.一种双链核酸Dicer-1 dsRNA，其特征在于，RNA序列为SEQ ID NO:8。
5.一种含权利要求4所述的双链核酸Dicer-1 dsRNA的防治白蚁的产品。
6.一种以权利要求4所述的双链核酸Dicer-1 dsRNA为活性成分制备得到的防治白蚁的产品。
7.根据权利要求6所述的产品，其特征在于，双链核酸Dicer-1 dsRNA协同生防真菌制备得到的防治白蚁的产品，所述的生防真菌包括绿僵菌、或白僵菌。
8.一种防治白蚁的方法，其特征在于，步骤如下：
（1）将权利要求4所述的双链核酸Dicer-1 dsRNA与白蚁食物混合，放入白蚁群体中供白蚁取食，得到取食Dicer-1 dsRNA的白蚁；
（2）利用质量浓度是0.1-2% Tween 80溶液收集生防真菌孢子，制备生防真菌孢子悬浮液，所述的生防真菌包括绿僵菌、或白僵菌；
（3）利用生防真菌孢子悬浮液感染取食Dicer-1 dsRNA的白蚁，进而防治白蚁。
9.根据权利要求8所述的防治白蚁的方法，其特征在于，白蚁食物包括纸片、木块、木屑、或木粉的含纤维素的物质，Dicer-1 dsRNA与白蚁食物混合方式为浸润、涂抹、或注入的混合方法。
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CN113881679B (zh) * 2021-11-03 2023-07-18 河南农业大学 一种增强金龟子绿僵菌杀灭白蚁效果的miR-71-5模拟物
CN114561411A (zh) * 2022-03-14 2022-05-31 贵州大学 Dicer1基因及其dsRNA在害虫防治中的应用

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