CN113105526A - 多肽及其应用、包括该多肽的探针、试剂盒 - Google Patents

多肽及其应用、包括该多肽的探针、试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN113105526A
CN113105526A CN202010023068.7A CN202010023068A CN113105526A CN 113105526 A CN113105526 A CN 113105526A CN 202010023068 A CN202010023068 A CN 202010023068A CN 113105526 A CN113105526 A CN 113105526A
Authority
CN
China
Prior art keywords
probe
gaqgppgpagpagerger
polypeptide
amino acid
fitc
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010023068.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113105526B (zh
Inventor
韩晶
杨泽
郭玮
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Kundayu Technology Co ltd
Original Assignee
Beijing Kundayu Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Kundayu Technology Co ltd filed Critical Beijing Kundayu Technology Co ltd
Priority to CN202010023068.7A priority Critical patent/CN113105526B/zh
Publication of CN113105526A publication Critical patent/CN113105526A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113105526B publication Critical patent/CN113105526B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
    • C09K11/06—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing organic luminescent materials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/645—Specially adapted constructive features of fluorimeters
    • G01N21/6456—Spatial resolved fluorescence measurements; Imaging
    • G01N21/6458—Fluorescence microscopy
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/89—Inverse chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/96—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation using ion-exchange
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
    • C09K2211/14—Macromolecular compounds
    • C09K2211/1408—Carbocyclic compounds
    • C09K2211/1416—Condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
    • C09K2211/14—Macromolecular compounds
    • C09K2211/1441—Heterocyclic
    • C09K2211/145—Heterocyclic containing oxygen as the only heteroatom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2211/00—Chemical nature of organic luminescent or tenebrescent compounds
    • C09K2211/14—Macromolecular compounds
    • C09K2211/1441—Heterocyclic
    • C09K2211/1466—Heterocyclic containing nitrogen as the only heteroatom
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G01N2021/6432—Quenching
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G01N2021/6439—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes" with indicators, stains, dyes, tags, labels, marks
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
    • G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials
    • G01N2030/8831—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials involving peptides or proteins

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本申请涉及一种多肽及其应用、包括该多肽的探针、试剂盒。该多肽的序列如(ⅰ)或(ⅱ)所示：(ⅰ)SEQ ID NO：1；(ⅱ)将(ⅰ)的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由其衍生的多肽。本申请的多肽可特异性地滞留在细胞内的溶酶体，且稳定存在于细胞的溶酶体内。

Description

多肽及其应用、包括该多肽的探针、试剂盒
技术领域
本申请总地涉及生物试剂领域，具体涉及多肽及其应用、包括该多肽的探针、试剂盒。
背景技术
溶酶体是真核细胞内的一种酸性细胞器，负责细胞的消化、降解功能，溶酶体在细胞各种生命活动，包括物质代谢、细胞膜循环、细胞凋亡中发挥着重要作用。若溶酶体发生功能紊乱，将会引发诸如肿瘤、炎症、矽肺等多种疾病的产生。将溶酶体可视化，并对其消化活性、特定微环境及关键生理过程进行检测，不仅有助于理解溶酶体参与生命活动的分子机制，且对疾病的治疗具有重要的指导意义。
但现有商品化溶酶体荧光探针存在特异性不高、标记荧光强度较弱、在Confocal及ND-SIM超高分辨显微成像领域易猝灭且性质不稳定等缺点。例如，利用溶酶体内酸性生理环境定位的溶酶体探针对酸性细胞器都具有一定的着色能力。酸性细胞器除溶酶体外，还包括过氧化物酶体、晚期包涵体/自噬体、自噬溶酶体等。因此，该类溶酶体探针对前述细胞器都能染色，所以特异性不高。
发明内容
本申请的目的在于提供多肽及其应用、包括该多肽的探针、试剂盒。
本申请提供了一种多肽，所述多肽的序列如(ⅰ)或(ⅱ)所示：
(ⅰ)SEQ ID NO：1；
(ⅱ)将(ⅰ)的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由其衍生的多肽。
可选地，根据上述的多肽，所述多肽为将(ⅰ)的氨基酸序列至少一端经过至少一个氨基酸残基的缺失，且具有相同功能的由其衍生的多肽。
可选地，根据上述的多肽，所述氨基酸残基的缺失数量为1-5。
可选地，根据上述的多肽，所述多肽为将(ⅰ)的氨基酸序列至少一端经过至少一个氨基酸残基的添加，且具有相同功能的由其衍生的多肽。
可选地，根据上述的多肽，所述氨基酸残基的添加数量为1-18。
本申请还提供了一种上述多肽在制备探针中的应用。
可选地，根据上述的应用，所述探针为溶酶体探针。
可选地，根据上述的应用，所述探针为荧光探针。
本申请还提供了一种探针，其包括上述多肽。
可选地，根据上述的探针，其还包括荧光报告基团，与所述多肽连接。
可选地，根据上述的探针，所述荧光报告基团与所述多肽中氨基酸残基的氨基端或羧基端连接。
可选地，根据上述的探针，所述荧光报告基团选自FITC、FAM、TAMRA、Biotin、MCA、Rhodamine B、CY3、CY5和CY5.5中的一种或多种。
可选地，根据上述的探针，所述探针的结构为
FITC-GAQGPPGPAGPAGERGER，GAQGPPGPAGPAGERGER-FITC，
FAM-GAQGPPGPAGPAGERGER，GAQGPPGPAGPAGERGER-FAM，
Biotin-GAQGPPGPAGPAGERGER，GAQGPPGPAGPAGERGER-Biotin，
TAMRA-GAQGPPGPAGPAGERGER，GAQGPPGPAGPAGERGER-TAMRA，
MCA-GAQGPPGPAGPAGERGER，GAQGPPGPAGPAGERGER-MCA，
Rhodamine B-GAQGPPGPAGPAGERGER，GAQGPPGPAGPAGERGER-Rhodamine B，
CY3-GAQGPPGPAGPAGERGER，GAQGPPGPAGPAGERGER-CY3，
CY5-GAQGPPGPAGPAGERGER，GAQGPPGPAGPAGERGER-CY5，
CY5.5-GAQGPPGPAGPAGERGER，或GAQGPPGPAGPAGERGER-CY5.5。
可选地，根据上述的探针，其还包括连接体，所述荧光报告基团通过所述连接体连接所述多肽。
可选地，根据上述的探针，所述连接体选自6氨基乙酸、Lys、乙二胺、Cys中的一种或多种。
可选地，根据上述的探针，所述探针的结构式为
FITC-6氨基乙酸-GAQGPPGPAGPAGERGER，
FITC-Lys-GAQGPPGPAGPAGERGER，
GAQGPPGPAGPAGERGER-乙二胺-FITC，
GAQGPPGPAGPAGERGER-Lys-FITC，
FAM-6氨基乙酸-GAQGPPGPAGPAGERGER，
FAM-Lys-GAQGPPGPAGPAGERGER，
GAQGPPGPAGPAGERGER-乙二胺-FAM，
GAQGPPGPAGPAGERGER-Lys-FAM，GAQGPPGPAGPAGERGER-Lys-TAMRA，
GAQGPPGPAGPAGERGER-乙二胺-TAMRA，或
GAQGPPGPAGPAGERGER-Lys-Biotin。
本申请还包括了一种试剂盒，其包括上述的探针。
可选地，根据上述的试剂盒，其包括存储液，所述存储液为PBS缓冲液或DMSO溶解的溶酶体探针。
可选地，根据上述的试剂盒，其还包括其它探针，所述其它探针选自内质网探针、高尔基体探针、线粒体探针、自噬溶酶体探针中的一种或多种。
本申请的多肽可特异性地滞留在细胞内的溶酶体，且稳定存在于细胞的溶酶体内。
本申请的探针能对溶酶体进行特异性染色，且可以稳定存在溶酶体内，并对溶酶体起到示踪的作用。本申请所公开的探针适合超高分辨显微成像领域对亚细胞器形态观察及溶酶体自噬溶酶体等相关疾病的发生发展研究。
附图说明
图1为本申请中氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示多肽的质谱检测结果；
图2为本申请GAQGPPGPAGPAGERGER-乙二胺-TAMRA/GAQGPPGPAGPAGERGER-Lys-TAMRA探针的激发和发射光谱；
图3为本申请FITC-6氨基乙酸-GAQGPPGPAGPAGERGER/FAM-6氨基乙酸-GAQGPPGPAGPAGERGER的激发和发射光谱；
图4为实施例2溶酶体探针多色染色后的激光共聚焦显微成像结果；
图5A为实施例3本申请溶酶体探针与商品化Lyso-Sensor的3D-SIM超高分辨成像结果；
图5B为实施例3本申请溶酶体探针与商品化Lyso-Sensor的3D-SIM共定位分析结果；
图6为实施例4ATP检测结果；以及对RAW264.7细胞的毒副作用检测。
图7为实施例5溶酶体探针激光共聚焦显微成像的结果。
具体实施方式
以下结合附图和实施例，对本申请的具体实施方式进行更加详细的说明，以便能够更好地理解本申请的方案以及其各个方面的优点。然而，以下描述的具体实施方式和实施例仅是说明的目的，而不是对本申请的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为常规生化试剂商购买得到。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。下述实施例中如未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段和市售的常用仪器、试剂，可参见《分子克隆实验指南(第3版)》(科学出版社)、《细胞生物学实验(第4版)》(高等教育出版社)以及相应仪器和试剂的厂商说明书等参考。
本申请提及的方法中各步骤的执行顺序，除特别说明外，并不限于本文的文字所体现出来的顺序，也就是说，各个步骤的执行顺序是可以改变的，而且两个步骤之间根据需要可以插入其他步骤。
本申请中所述的“连接”，除非另有明确的规定或限定，应作广义理解，可以是直接相连，也可以是通过中间媒介相连。在本申请的描述中，需要理解的是，“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“顶端”、“底端”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本申请和简化描述，而不是指示或暗示所指的序列或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和合成，因此不能理解为对本申请的限制。
在本申请中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
下文的公开提供了许多不同的实施方式或例子用来实现本申请的不同结构。为了简化本申请的公开，下文中对特定例子的部件和设置进行描述。当然，它们仅仅为示例，并且目的不在于限制本申请。此外，本申请可以在不同例子中重复参考数字和/或参考字母，这种重复是为了简化和清楚的目的，其本身不指示所讨论各种实施方式和/或设置之间的关系。此外，本申请提供了的各种特定的工艺和材料的例子，但是本领域普通技术人员可以意识到其他工艺的应用和/或其他材料的使用。
本申请公开了一种多肽，其氨基酸序列如下(ⅰ)或(ⅱ)所示：
(ⅰ)SEQ ID NO：1；(ⅱ)将(ⅰ)的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由其衍生的多肽。
在一些实施例中，该多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，其质谱检测结果如图1所示。
在一些实施例中，该多肽为将SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列至少一端经过至少一个氨基酸残基的缺失，且具有相同功能的由其衍生的多肽。例如，氨基酸残基的缺失数量为1-5，则依据氨基酸残基的缺失数量，该多肽为十七肽、十六肽、十五肽、十四肽或十三肽。
例如，可以是在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的N端或者C端缺失氨基酸残基，也可以是在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的N端和C端两端同时缺失氨基酸残基，在此并不为限。
举例来说，N端缺失氨基酸的本申请多肽具体可为：AQGPPGPAGPAGERGER；QGPPGPAGPAGERGER；GPPGPAGPAGERGER；PPGPAGPAGERGER；PGPAGPAGERGER。
C端缺失氨基酸的本申请多肽具体可为：GAQGPPGPAGPAGERGE；GAQGPPGPAGPAGERG；GAQGPPGPAGPAGER；GAQGPPGPAGPAGE；GAQGPPGPAGPAG。
在一些实施例中，多肽为将SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列至少一端经过至少一个氨基酸残基的添加，且具有相同功能的由其衍生的多肽。例如，氨基酸残基的添加数量为1-18，则依据氨基酸残基的添加数量，该多肽为十九肽、二十肽、二十一肽、二十二肽，以此类推直至三十六肽。
例如，可以是在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的N端或者C端添加氨基酸残基，也可以是在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的N端和C端两端同时添加氨基酸残基，在此并不为限。
上述多肽可采用胶原蛋白酶解后质谱分析获得其氨基酸序列，也可通过工业化学合成获得肽粉末。上述多肽可通过肽自由扩散和细胞内吞的方式进入细胞内，并滞留在细胞的溶酶体内。而本文所公开的多肽功能之一即为可特异性地滞留在细胞内的溶酶体，且稳定存在于细胞的溶酶体内。例如，根据实验证明，本申请所公开的多肽进入细胞后95％以上特异地进入溶酶体内，不到5％会滞留在早期包涵体和晚期包涵体内，但由于外源蛋白肽进入细胞最终会在溶酶体内被消化降解，所以本申请所公开的多肽最终均会滞留在溶酶体中。且由于本申请所公开的多肽上没有目前已知消化酶的酶切位点，所以也能稳定存在于溶酶体内。
本申请还公开了上述多肽在制备探针中的应用以及相应的探针。由于上述多肽可选择性地滞留在细胞溶酶体内，因此可采用上述多肽制备溶酶体探针，特异性地标记动物细胞的溶酶体。
根据示例实施例，本申请的探针除了上述多肽，还包括连接多肽的荧光报告基团。荧光报告基团用于将探针与待测物结合所引起的化学或生物微环境变化等转变为人易感知(例如，颜色变化)或仪器易检测的信号。荧光报告基团可连接在多肽的N端、C端或多肽的中间。
举例来说，荧光报告基团可用MCA，FITC，FAM，TAMRA，Rhodamine B，CY3，CY5，CY5.5，Biotin等。荧光报告基团可直接连接在多肽氨基酸残基的氨基端或者羧基端。
表1示出了荧光报告基团的激发波长、发射波长以及相应颜色。
表1荧光报告基团
编号 荧光报告基团 激发Ex(nm) 发射Em(nm) 颜色
1 MCA 353 442 蓝色
2 FITC 494 518 绿光
3 5-FAM 494 522 绿光
4 TAMRA 560 582 黄光
5 Rhodamine B 555 580 红光
6 CY3 550 570 黄光
7 CY5 646 664 红光
8 CY5.5 673 692 红光
9 Biotin SA-链霉亲和素 DBA 有色底物
由于本申请的探针可具有多种荧光颜色，特别适合超高分辨领域的多色成像技术，如与线粒体示踪探针、自噬溶酶体探针等联合使用以进行多色显微成像，由此用于观察线粒体自噬及自噬溶酶体的发生发展。
根据示例实施例，本申请还包括连接体(linker)，荧光报告基团通过连接体连接多肽。例如，连接体一端可连接在多肽的N端、C端或多肽的中间，另一端连接荧光报告基团。连接体可选自6氨基乙酸LC、赖氨酸Lys，乙二胺ED，半胱氨酸Cys中的一种或多种。
表2示例性示出了本申请探针中荧光报告基团和多肽的连接方式。
表2荧光报告基团和多肽的连接方式
Figure BDA0002361484260000071
根据示例实施例，本申请所述探针包括本申请所公开的多肽、表1所示的荧光报告基团按照表2所示的连接方式进行组合。
举例来说，激发光波长为560nm探针的分子结构式可为GAQGPPGPAGPAGERGER-乙二胺-TAMRA或GAQGPPGPAGPAGERGER-Lys-TAMRA。该探针的最大的激发波长为560nm，最大的发射波长为582nm，其激发光谱和发射光谱如图2所示。
又例如，激发光波长为494nm探针的分子结构式可为FITC-6氨基乙酸-GAQGPPGPAGPAGERGER或FAM-6氨基乙酸-GAQGPPGPAGPAGERGER。该探针的最大的激发波长为494nm，最大的发射波长为520nm，其激发光谱和发射光谱如图3所示。
本申请所公开的探针分别与商品化Lyso-Sensor和ER-Tracker进行双染色，经Confocal实验结果分析表明本申请公开的探针能对溶酶体进行特异性染色而不是对内质网等其他亚细胞器染色。本申请公开的探针可以95％以上识别溶酶体，部分探针存在早期包涵体和晚期包涵体内，但由于包涵体内的外源探针肽最终会被细胞的溶酶体识别和消化，且由于本申请探针上不存在蛋白酶识别的氨基酸消化位点，所以本申请探针可以稳定存在溶酶体内，并对溶酶体起到示踪的作用。本申请所公开的探针适合超高分辨显微成像领域对亚细胞器形态观察及溶酶体自噬溶酶体等相关疾病的发生发展研究。
本申请探针可采用工业合成制得。探针可为冻干粉形式保存，也可为溶液形式保存，例如将冻干粉溶解于无水DMSO中。如采用溶液形式保存，则存储浓度可为30mg/ml。本申请探针溶液可-20℃避光保存6-12月，固体冻干粉可在-20℃避光保存1.5年；4℃避光保存可在6个月内有效。染色时，可用DMEM培养基或PBS按照1:1000至1:5000稀释使用，具体浓度和染色时间根据细胞种类进行调整，例如，在进行动物细胞染色时，采用染色工作浓度为10μg/ml，37℃染色30分钟至3小时。
本申请探针可应用于动物细胞溶酶体染色激光共聚焦显微成像、超高分辨ND-SIM活细胞超高分辨多色显微成像、激光共聚焦显微成像、细胞影像学、激光共聚焦和超高分辨ND-SIM细胞溶酶体成像。
本申请探针可特异性标记动物细胞的溶酶体，对细胞无毒副作用，不干扰正常细胞生理生化水平。对溶酶体具有极高特异性，可以选择性地滞留在溶酶体中，从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。实验证明，本申请示例性探针比商品化invitrogen溶酶体荧光探针染色力强，且在激光共聚焦显微成像和ND-SIM超高分辨成像过程中抗猝灭能力较强，便于获得高质量溶酶体多色成像结果。
本申请探针可单独使用(或与其他探针联合使用)用于研究溶酶体的酸化和细胞内溶酶体功能的改变及转运。例如,在一些肿瘤细胞溶酶体pH值低于正常的溶酶体,而其他肿瘤细胞含有较高的溶酶体pH值。此外,囊性纤维化和其他疾病导致一些胞内细胞器酸化出现缺陷，而本申请探针在研究这些畸变的发病过程可能有用。该探针对溶酶体具有较高的特异性，所以它可通过流式细胞术或激光共聚焦显微成像等技术对溶酶体数量进行定量分析。
本申请还公开了一种试剂盒，其包括上述探针。
可选地，该试剂盒还包括探针存储液。探针存储液例如可为无水DMSO配制的液体(例如，购自Sigma公司)。
可选地，每100ul探针存储液包括3mg探针粉末，则探针存储液中探针浓度30ug/ul。
如果采用本申请探针和其他探针联合使用，那么推荐与内质网探针、高尔基体探针、线粒体探针、自噬溶酶体探针等进行多色共定位分析使用，例如，ER-TrackerTM Dyes，
Figure BDA0002361484260000081
Golgi-Tracker Red，Mito-Tracker，PremoTM Autophagy Tandem SensorRFP-GFP-LC3B等。
材料和试剂：
RAW264.7细胞：购于国家实验细胞资源共享平台(北京协和医学院)
DMEM培养基：购于Gibco公司，为DMEM高糖培养基
DMEM完全培养基：DMEM培养基，10％FBS(Gibco公司胎牛血清)，1％PS(Penicillin-Streptomycin,青链霉素(双抗),Gibco)
0.6mM H2O2诱导细胞损伤的培养基：DMEM培养基，10％FBS，1％PS，终浓度0.6mMH2O2
ATP检测试剂：购于Promega公司(货号：G7571)
无水DMSO：购于Sigma公司(货号：D2650)
J774A.1细胞：购买于上海中乔新舟，此细胞株与ATCC上对J774A.1细胞形态和性质描述相一致。
GAQGPPGPAGPAGERGER-乙二胺-TAMRA、FITC-6氨基乙酸-GAQGPPGPAGPAGERGER由上海吉尔生化有限公司合成。
实施例1制备溶酶体探针
(1)首先将牛胶原蛋白1(Advanced Biomatrix公司货号：5005)溶解在50℃去离子水中得到胶原蛋白溶液，冷却至37℃，调节胶原蛋白溶液的pH值为2.0(建议用pH剂进行精确测定，并用1N的稀盐酸进行pH值的调节)，按照胃蛋白酶与胶原蛋白溶液的重量比1:250的比列加入胃蛋白酶(Sigma公司，货号EC3.4.23.1)，在37℃条件下，消化2小时；然后将所得混合液的pH值调节至6.8，在按照胰蛋白酶与胶原蛋白溶液的重量比1:250的比列加入胰蛋白酶(Sigma公司，货号EC3.4.21.4)同样在37℃度下消化2h。随后将胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后的胶原蛋白溶液加热到100℃灭酶活1小时待溶液自然冷却后，8000转/分离心10min去除沉淀杂质。
(2)随后经离子交换色谱和反相色谱进行色谱分析分离，最后所得溶液进行质谱检测。根据质谱检测Score值由高到低合成蛋白肽，分别连接下述荧光标签N-FITC/N-FAM：(激发波长490-494；发射波长520-525，绿色荧光)和乙二胺-TAMRA/Lys-TAMRA，制得溶酶体探针FITC-6氨基乙酸-GAQGPPGPAGPAGERGER；FAM-6氨基乙酸-GAQGPPGPAGPAGERGER；GAQGPPGPAGPAGERGER-Lys-TAMRA；GAQGPPGPAGPAGERGER-乙二胺-TAMRA。
制备的探针采用无水DMSO配成储存液30mg/ml保存。
实施例2溶酶体探针特异性分析
实施例1制备的溶酶体探针分别与内质网探针(ER-TrackerTM Green)和商品化溶酶体探针(Lyso-Sensor)对J774A.1细胞进行联合染色。
具体实验方法如下：
(1)将培养在37℃，5％CO2孵箱中的J774A.1细胞进行传代处理，此细胞培养在10％FBS(Gibco公司胎牛血清货号：10099-041),5％PS(Gibco公司青霉素链霉素双抗货号：15140122)高糖DMEM培养基(货号：11995-065)中，用完全的DMEM培养基进行吹打，将细胞制备成均一的细胞悬液。
(2)利用血细胞计数板进行计数，将J774A.1细胞，以15×104的细胞数种入Confocal皿中进行培养，24小时待细胞正常贴壁后将DMEM完全培养基分别更换成如下含有不同探针的染色液孵育，
18肽(乙二胺-TAMRA)溶酶体染色液配制：用高糖DMEM稀释GAQGPPGPAGPAGERGER-乙二胺-TAMRA 30mg/ml溶酶体探针存储液，按照1:1000稀释成30ug/ml的工作液，37℃，染色1h。
ER-TrackerTM Green(invitrogen公司货号：E34251)：每管100ug冻干粉，加入128ul的DMSO溶液，充分混匀进行溶解，配成1mM染色原液。用DMEM培养基按1:1000配成100uM的工作液37℃，染色30min。
商品化Lyso-Sensor(invitrogen公司货号：L7533)：将1mM的Lyso-Sensor染色储存液用高糖DMEM按照1:1000稀释成1uM的工作液，37℃，染色1h。
(3)当进行联合染色时以上染色液要分开进行染色，一种染色液染色后用PBS洗涤细胞三遍，每遍5min细胞去除未结合的染料在进行另一染色液染色。
(4)随后通过激光共聚焦显微镜(蔡司880)观察细胞。
结果参见图4。本申请所制备的探针(GAQGPPGPAGPAGERGER-乙二胺-TAMRA)与商品化的溶酶体示踪探针Lyso-Sensor均能对细胞中的溶酶体进行特异性染色。本申请所制备的探针(图4 18肽-TAMRA)分别与商品化Lyso-Sensor(图4商品化溶酶体探针)和ER-Tracker(图4内质网探针)进行双染色，经Confocal实验结果分析表明本申请开发的探针能对溶酶体进行特异性染色而不是对内质网等其他亚细胞进行染色。此外，本申请开发的探针与商品化Lyso-Sensor对溶酶体的染色原理不同，商品化的Lyso-Sensor是一种碱性荧光探针，因此对酸性细胞器都具有一定的着色能力，例如除溶酶体外其对过氧化物酶体、晚期包涵体/自噬体、自噬溶酶体等都能染色，所以特异性不高。而本申请开发的探针染料可以95％以上识别溶酶体，部分探针存在早期包涵体和晚期包涵体内，但由于包涵体内的外源探针肽最终会被细胞的溶酶体识别和消化，因此本申请探针最终均滞留在溶酶体内。且由于本申请肽探针上不存在蛋白酶识别的氨基酸消化位点所以肽探针可以稳定存在溶酶体内，并对溶酶体起到示踪的作用。
实施例3溶酶体探针染色强度及抗淬灭能力分析
实施例1制备的溶酶体探针与商品化溶酶体探针(Lyso-Sensor)对J774A.1细胞进行联合染色。
具体实验方法如下：
(1)将培养在37℃，5％CO2孵箱中的J774A.1细胞进行传代处理，此细胞培养在在10％FBS(Gibco公司胎牛血清货号：10099-041),5％PS(Gibco公司青霉素链霉素双抗货号：15140122)高糖DMEM培养基(货号：11995-065)中，用完全的DMEM培养基进行吹打，将细胞制备成均一的细胞悬液。
(2)利用血细胞计数板进行计数，将J774A.1细胞，以15×104的细胞数种入Confocal皿中进行培养，24小时待细胞正常贴壁后将细胞培养基更换成如下含有探针的染色液37℃孵育1h，
18肽(乙二胺-TAMRA)溶酶体染色液配制：用高糖DMEM稀释向GAQGPPGPAGPAGERGER-乙二胺-TAMRA 30mg/ml溶酶体探针存储液，按照1:1000稀释成30ug/ml的工作液，37℃，染色1h。用PBS洗涤3遍，每遍5min。
(3)步骤(2)PBS洗涤结束后，将细胞培养基更换成如下含有探针的染色液37℃孵育1h，
商品化Lyso-Sensor(invitrogen公司货号：L7533)：将1mM的Lyso-Sensor染色储存液用高糖DMEM按照1:1000稀释成1uM。
去除溶酶体探针染色液，用PBS洗涤细胞三遍，每遍5min。
(4)随后通过尼康A1-SIM-STORM对细胞进行超高分辨拍摄以及ND-SIM共定位分析。ND-SIM成像系统对染料抗淬灭能力较高，利于亚细胞器的超高分辨成像。
结果参见图5。参见图5A，本申请所制备的探针(GAQGPPGPAGPAGERGER-乙二胺-TAMRA，图5 18肽-TAMRA)对溶酶体具有较强的染色能力和特异性，相反商品化的溶酶体染色试剂Lyso-Sensor(图5商品化溶酶体探针)在超高分辨拍摄时容易猝灭且染色能力和溶酶体特异性较低。图5B示出了本申请的溶酶体探针与商品化溶酶体探针的ND-SIM共定位分析结果。本申请溶酶体探针的红色荧光强度是商品化绿色Lyso-Sensor(荧光强度的10倍，由共定位分析曲线的结果可以观察到本申请溶酶体探针在超高分辨成像领域的染色强度和抗猝灭能力都具有较大的优势。
实施例4体外溶酶体探针对RAW264.7细胞生长繁殖的影响
(1)将培养在37℃，5％CO2孵箱中的RAW264.7细胞进行传代处理，此细胞培养在DMEM完全培养基中，用DMEM培养基进行吹打，将细胞制备成均一的细胞悬液。
(2)利用血细胞计数板进行计数，将RAW264.7细胞，以5×104的细胞数种入24孔板中进行培养，24小时待细胞正常贴壁后将细胞培养基更换成含有下述不同培养基分别在37℃孵育30min，6h，12h，24h后进行ATP含量检测：
正常细胞培养组(Con)：使用DMEM完全培养基培养
氧化应激诱导的细胞损伤组(H2O2)：DMEM培养基，10％FBS，5％PS，终浓度0.6mMH2O2。
溶酶体探针培养组：DMEM培养基，10％FBS，5％PS，GAQGPPGPAGPAGERGER-乙二胺-TAMRA终浓度为30ug/ml。
(3)ATP检测试剂的配制，按照ATP检测说明书将10ml实验缓冲液加入到棕色冻干粉瓶中，轻轻混匀并在平衡至室温。随后向24孔板中分别加入100ul ATP的检测试剂，室温条件下将24孔细胞培养板至于摇床上避光孵育10min，进行细胞存活率的评估。
(4)将不同处理组不同时间点下(30min，6h，12h，24h)的培养孔，每孔分别吸出3份样品即3个重复，每份100ul到检测化学发光的白色96孔板中。利用酶标仪Infinite M200PRO Microplate reader(TECAN)对不同处理组，不同时间点下的ATP含量进行检测。
(5)该实验独立进行3次，利用GraphPad Prism 6.0进行统计，统计结果以mean±SEM表示。
实验结果参见图6。ATP检测结果，此结果表示在体外溶酶体探针对RAW264.7细胞无毒副作用。溶酶体探针对活细胞RAW264.7染色时间分别为30min，6h，12h，24h其为实验组；正常细胞培养组为对照组，与对照组相比各实验组ATP含量与对照组相当。说明本申请的溶酶体探针对细胞没有任何副作用。图6中，Con为正常细胞培养组12h ATP含量检测数据；H2O2为氧化应激诱导的细胞损伤组12h ATP含量检测数据；30min，6h，12h，24h为实验组。
实施例5溶酶体探针的细胞显微成像
实施例1制备的探针对RAW264.7细胞进行联合染色，具体实验方法如下：
(1)将培养在37℃，5％CO2孵箱中的RAW264.7细胞进行传代处理，此细胞培养在DMEM完全培养基中，用DMEM培养基进行吹打，将细胞制备成均一的细胞悬液。
(2)利用血细胞计数板进行计数，将RAW264.7细胞，以8×104的细胞数种入激光共聚焦培养皿中进行培养，24小时待细胞正常贴壁后将细胞培养基更换成下述溶酶体探针培养液，37℃孵育1h：
N-FITC/C-TAMRA：DMEM培养基，10％FBS，5％PS，(N-FITC-GAQGPPGPAGPAGERGER/GAQGPPGPAGPAGERGER-乙二胺-TAMRA)两种溶酶体探针终浓度为分别为30ug/ml。
(3)去除溶酶体探针染色液，用PBS洗涤三遍，每遍5min。
(4)商品化Lyso-Sensor(invitrogen公司货号：L7533)：将1mM的Lyso-Sensor染色储存液用高糖DMEM按照1:1000稀释成1uM。
去除溶酶体探针染色液，用PBS洗涤细胞三遍，每遍5min
(5)DAPI(Sigma公司)核酸染料按照1:1000室温染色10min后用PBS洗涤三遍，每遍5min。
(6)随后通过激光共聚焦显微镜(蔡司880)进行观察。此时可观察到溶酶体呈明亮的强荧光着色。
图7是溶酶体探针激光共聚焦显微成像的结果(蔡司880)，此结果表示本申请溶酶体探针能在孵育30min内自由进入细胞，并对溶酶体进行特异性染色。其中绿色FITC-18肽代表：FITC-6氨基乙酸-GAQGPPGPAGPAGERGER；红色18肽-TAMRA代表：GAQGPPGPAGPAGERGER-乙二胺-TAMRA；而FITC-18肽/18肽-TAMRA代表：溶酶体探针N-FITC与C-TAMRA按照1：1的比例加入细胞培养基中，其能同时对细胞溶酶体进行特异性染色且染色能力相同，说明不同的信号报告基团不影响本申请多肽对溶酶体的特异性。
最后应说明的是：显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明本申请所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本申请的保护范围之中。
序列表
<110> 北京鲲达宇科技有限公司
<120> 多肽及其应用、包括该多肽的探针、试剂盒
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 18
<212> PRT
<213> 牛(Bos taurus)
<400> 1
Gly Ala Gln Gly Pro Pro Gly Pro Ala Gly Pro Ala Gly Glu Arg Gly
1 5 10 15
Glu Arg

Claims (19)

1.一种多肽，其特征在于，所述多肽的序列如(ⅰ)或(ⅱ)所示：
(ⅰ)SEQ ID NO：1；
(ⅱ)将(ⅰ)的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由其衍生的多肽。
2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽为将(ⅰ)的氨基酸序列至少一端经过至少一个氨基酸残基的缺失，且具有相同功能的由其衍生的多肽。
3.根据权利要求2所述的多肽，其特征在于，所述氨基酸残基的缺失数量为1-5。
4.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽为将(ⅰ)的氨基酸序列至少一端经过至少一个氨基酸残基的添加，且具有相同功能的由其衍生的多肽。
5.根据权利要求4所述的多肽，其特征在于，所述氨基酸残基的添加数量为1-18。
6.权利要求1-5任一所述多肽在制备探针中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，所述探针为溶酶体探针。
8.根据权利要求6所述的应用，所述探针为荧光探针。
9.一种探针，其特征在于，包括权利要求1-5任一所述多肽。
10.根据权利要求9所述的探针，其特征在于，还包括荧光报告基团，与所述多肽连接。
11.根据权利要求10所述的探针，其特征在于，所述荧光报告基团与所述多肽中氨基酸残基的氨基端或羧基端连接。
12.根据权利要求10所述的探针，其特征在于，所述荧光报告基团选自FITC、FAM、TAMRA、Biotin、MCA、Rhodamine B、CY3、CY5和CY5.5中的一种或多种。
13.根据权利要求12所述的探针，其特征在于，所述探针的结构为
FITC-GAQGPPGPAGPAGERGER，GAQGPPGPAGPAGERGER-FITC，
FAM-GAQGPPGPAGPAGERGER，GAQGPPGPAGPAGERGER-FAM，
Biotin-GAQGPPGPAGPAGERGER，GAQGPPGPAGPAGERGER-Biotin，
TAMRA-GAQGPPGPAGPAGERGER，GAQGPPGPAGPAGERGER-TAMRA，
MCA-GAQGPPGPAGPAGERGER，GAQGPPGPAGPAGERGER-MCA，
Rhodamine B-GAQGPPGPAGPAGERGER，GAQGPPGPAGPAGERGER-Rhodamine B，
CY3-GAQGPPGPAGPAGERGER，GAQGPPGPAGPAGERGER-CY3，
CY5-GAQGPPGPAGPAGERGER，GAQGPPGPAGPAGERGER-CY5，
CY5.5-GAQGPPGPAGPAGERGER，或GAQGPPGPAGPAGERGER-CY5.5。
14.根据权利要求10所述的探针，其特征在于，还包括连接体，所述荧光报告基团通过所述连接体连接所述多肽。
15.根据权利要求14所述的探针，其特征在于，所述连接体选自6氨基乙酸、Lys、乙二胺、Cys中的一种或多种。
16.根据权利要求15所述的探针，其特征在于，所述探针的结构式为
FITC-6氨基乙酸-GAQGPPGPAGPAGERGER，
FITC-Lys-GAQGPPGPAGPAGERGER，
GAQGPPGPAGPAGERGER-乙二胺-FITC，
GAQGPPGPAGPAGERGER-Lys-FITC，
FAM-6氨基乙酸-GAQGPPGPAGPAGERGER，
FAM-Lys-GAQGPPGPAGPAGERGER，
GAQGPPGPAGPAGERGER-乙二胺-FAM，
GAQGPPGPAGPAGERGER-Lys-FAM，GAQGPPGPAGPAGERGER-Lys-TAMRA，
GAQGPPGPAGPAGERGER-乙二胺-TAMRA，或
GAQGPPGPAGPAGERGER-Lys-Biotin。
17.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求9-16任一所述探针。
18.权利要求17所述的试剂盒，其特征在于，包括存储液，所述存储液为PBS缓冲液或DMSO溶解的所述探针。
19.权利要求17的所述试剂盒，其特征在于，还包括其它探针，所述其它探针选自内质网探针、高尔基体探针、线粒体探针、自噬溶酶体探针中的一种或多种。
CN202010023068.7A 2020-01-09 2020-01-09 多肽及其应用、包括该多肽的探针、试剂盒 Active CN113105526B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010023068.7A CN113105526B (zh) 2020-01-09 2020-01-09 多肽及其应用、包括该多肽的探针、试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010023068.7A CN113105526B (zh) 2020-01-09 2020-01-09 多肽及其应用、包括该多肽的探针、试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113105526A true CN113105526A (zh) 2021-07-13
CN113105526B CN113105526B (zh) 2022-04-26

Family

ID=76708819

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010023068.7A Active CN113105526B (zh) 2020-01-09 2020-01-09 多肽及其应用、包括该多肽的探针、试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113105526B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114507278A (zh) * 2022-01-27 2022-05-17 苏州大学 一种犹素探针UFM1-Lys-TAMRA及其合成方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102066422A (zh) * 2008-05-07 2011-05-18 齐斯特治疗公司 溶酶体靶向肽及其应用
WO2014058535A1 (en) * 2012-08-19 2014-04-17 Michigan Technological University Lysosomal targeting probes
CN106588845A (zh) * 2016-12-05 2017-04-26 安徽大学 一种细胞自噬监测探针及其制备方法和用途
CN107417793A (zh) * 2017-04-28 2017-12-01 华中科技大学 一种短肽、荧光探针及其制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102066422A (zh) * 2008-05-07 2011-05-18 齐斯特治疗公司 溶酶体靶向肽及其应用
US20110223147A1 (en) * 2008-05-07 2011-09-15 Zystor Therapeutics, Inc. Lysosomal targeting peptides and uses thereof
WO2014058535A1 (en) * 2012-08-19 2014-04-17 Michigan Technological University Lysosomal targeting probes
CN106588845A (zh) * 2016-12-05 2017-04-26 安徽大学 一种细胞自噬监测探针及其制备方法和用途
CN107417793A (zh) * 2017-04-28 2017-12-01 华中科技大学 一种短肽、荧光探针及其制备方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114507278A (zh) * 2022-01-27 2022-05-17 苏州大学 一种犹素探针UFM1-Lys-TAMRA及其合成方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN113105526B (zh) 2022-04-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7410769B2 (en) Peptide biosensors for anthrax protease
CN107389636B (zh) 一种可检测内源性谷胱甘肽的荧光传感器的制备及应用
US8236523B2 (en) Camp reporters and high throughput assays
AU2009296442A1 (en) Profiling reactive oxygen, nitrogen and halogen species
JP6659546B2 (ja) 生細胞内への分子の送達のための組成物および方法
CN110062808A (zh) 用于正交用途的古细菌吡咯赖氨酰tRNA合成酶
US7135325B2 (en) Short enzyme donor fragment
JP2013528386A (ja) インビトロ診断、および、インビボ画像化、診断、ならびに、治療のための細菌β−ラクタマーゼの使用
CN113105526B (zh) 多肽及其应用、包括该多肽的探针、试剂盒
KR20220121816A (ko) 다분할 루시퍼라제 펩타이드 및 폴리펩타이드
US20130065267A1 (en) Conjugates and methods for measuring chaperone-mediated autophagy
US6787329B1 (en) Fluorogenic protease substrates based on dye-dimerization
Todorov et al. Synthesis of new modified with Rhodamine B peptides for antiviral protection of textile materials
US20160376629A1 (en) Use of Bacterial Beta-Lactamase for In Vitro Diagnostics and In Vivo Imaging, Diagnostics and Therapeutics
Ren et al. Long-term monitoring of capase-3 activity in living cells based on the FRET probe composed of quantum dot, nanogold and EGF
CN109136196A (zh) 铜绿假单胞菌噬菌体尾丝蛋白用于制备细菌检测试剂的用途
US9138490B2 (en) Use of bacterial beta-lactamase for in vitro diagnostics and in vivo imaging, diagnostics and therapeutics
EP3622292B1 (en) Genetically encoded potassium ion indicators
CN114031549B (zh) 一种同时可视化质膜和溶酶体的双靶向荧光探针及其应用
CN108732355B (zh) 一种测定bace1酶切nrg1活性的检测方法及其试剂盒
Xu et al. Protein proximity ligation probe with wide sensing range resolving dynamics of subcellular ph by super-resolution imaging
US10234459B2 (en) Sensors and assays for ubiquitin or ubiquitin-like proteins
CN110079300B (zh) 纳米磷光探针及其用途
CN112480271B (zh) 高性能红色cAMP荧光探针及其应用
KR20080021018A (ko) 단리된 광단백질 ａｑ디케이 및 그의 용도

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant