CN113073128A - 一种检测滤棒抑菌效果的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种检测滤棒抑菌效果的方法，包括如下步骤：活化测试菌株并制备菌悬液，制备测试及对照滤棒样品，加样并接触作用，洗脱菌并检测存活菌数，计算抑菌率。本技术方案的检测滤棒抑菌效果的方法可以快捷地检测滤棒的抑菌效果，操作简便，利于推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及抑菌效果评价领域，更具体地，涉及一种检测滤棒抑菌效果的方法。
背景技术
滤棒是采用丝束、滤棒成型纸等加工卷制而成，能够起到过滤卷烟烟气的作用。卷烟作为一种吸食用产品，其滤嘴端与消费者口腔直接接触，具有抑菌功能的卷烟滤嘴或滤棒的研发及应用受到广泛关注。例如，黄晓伟等公开了一种含有抑菌活性多糖的抗菌卷烟过滤嘴及其制备方法(CN201510222452.9)；孙绍彬等公开一种含有抗氧化抑菌剂的天然生物基质滤棒颗粒及其制法和用途(CN201911165344.7)；胡光敏等公开了一种具有广谱抗菌性能的壳聚糖纤维在制备香烟过滤嘴中的应用(CN201010612530.3)；李炜等公开了一种选择性降低卷烟烟气中氨兼具抑菌作用的滤嘴(CN202011040864.8)；齐富友等公开了一种含有天然中草药抗菌剂的卷烟过滤嘴的制备方法(CN201310279387.4)。具有抑菌功能的滤棒或滤嘴已被应用，但是关于该类材料的抑菌效果的检测方法未见公开报道。因此，如何提供一种适用于滤棒的抑菌效果的检测方法成为本领域亟需解决的技术问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种检测滤棒抑菌效果的方法，以解决现技术没有合适的抑菌效果检测方法的问题。
为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：
一种检测滤棒抑菌效果的方法，包括如下步骤：
步骤1)菌株活化：
制备培养基斜面，将测试菌株接种至培养基斜面上，置于36℃恒温培养箱中培养20-24h；重复步骤1)，至菌株活化至第3代；
步骤2)菌悬液制备：
取第3代培养基斜面的新鲜培养物，吸取0.03mol/L，pH 7.2的无菌磷酸缓冲液3.0mL加入斜面试管内，反复吹吸后将洗脱液移至无菌离心管中，涡旋混匀；再用无菌磷酸缓冲液稀释成1.0×105-5.0×105CFU/mL的菌悬液；
步骤3)样品制备：
采用无菌操作，选取由待测滤棒和对照滤棒制成的样片；其中，以未添加抑菌成分的同材质滤棒作为对照滤棒；
步骤4)加样及作用：
用无菌镊子各取2片待测滤棒的样片和对照滤棒的样片，分别置于无菌培养皿内，每个样片滴加0.1mL步骤1)的菌悬液，置于20℃恒温培养箱内，接触作用20-24h；
步骤5)菌落计数：
作用结束后，夹取染菌样片分别置于含5.0mL无菌磷酸缓冲液的无菌离心管中，振荡混匀后，收集洗脱液；用无菌磷酸缓冲液将洗脱液，制备成10倍系列稀释匀液；取10-2、10-3、10-4三个稀释度的样品匀液，每个稀释度各取1mL加入无菌培养皿中，每管洗脱液接种2个培养皿，再加入经过121℃高压灭菌15min后冷却至45℃的相应的琼脂培养基，混匀后置于36℃恒温培养箱中培养48h；计数存活菌落数。
步骤6)抑菌率计算：
按照公式①计算抑菌率：
式中：X为抑菌率，％；
C0为对照样品组的平均菌落数，单位为CFU/片；
C1—测试样品组的平均菌落数，单位为CFU/片。
进一步的，步骤1)中测试菌株为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌或变形链球菌；金黄色葡萄球菌和大肠杆菌采用营养琼脂培养基培养；白色念珠菌采用沙氏琼脂培养基培养；变形链球菌采用脑心浸出液琼脂培养基培养。
进一步的，所述步骤1)和步骤5)中金黄色葡萄球菌、大肠杆菌或白色念珠菌在需氧条件下培养；变形链球菌在厌氧条件下培养。
进一步的，步骤3)中的样片为直径5mm的圆形样片。
本发明的有益效果是：
本技术方案的检测滤棒的抑菌效果的方法可以快捷地检测滤棒的抑菌效果，操作简便，利于推广应用。
具体实施方式
现在将详细描述本发明的各种示例性实施例。应注意到：除非另外具体说明，否则在这些实施例中阐述的部件和步骤的相对布置、数字表达式和数值不限制本发明的范围。
以下对至少一个示例性实施例的描述实际上仅仅是说明性的，决不作为对本发明及其应用或使用的任何限制。
对于相关领域普通技术人员已知的技术、方法和设备可能不作详细讨论，但在适当情况下，所述技术、方法和设备应当被视为说明书的一部分。
在这里示出和讨论的所有例子中，任何具体值应被解释为仅仅是示例性的，而不是作为限制。因此，示例性实施例的其它例子可以具有不同的值。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所使用的材料和试剂，如无特殊说明，均可从商业途径得到，实验中使用的设备如无特殊说明，均为本领域技术人员熟知的设备。
实施例1
一种检测滤棒的抑菌效果的方法，包括如下步骤：
步骤1)菌株活化：
制备培养基斜面，将测试菌株接种至培养基斜面上，置于36℃恒温培养箱中培养20h；重复上述步骤，至菌株活化至第3代。
测试菌株为金黄色葡萄球菌，采用营养琼脂培养基培养在需氧条件下培养。
步骤2)菌悬液制备：
取第3代斜面新鲜培养物，吸取3.0mL无菌磷酸缓冲液(0.03mol/L，pH 7.2)加入斜面试管内，反复吹吸后将洗脱液移至无菌离心管中，涡旋混匀；再用无菌磷酸缓冲液稀释成1.0×105CFU/mL的菌悬液。
步骤3)样品制备：
采用无菌操作，将待测滤棒和对照滤棒均制成直径5mm的圆形样片；以未添加抑菌成分的同材质滤棒作为对照滤棒。
步骤4)加样及作用：
用无菌镊子各取2片待测和对照样品组样片，分别置于无菌培养皿内，每片滴加0.1mL菌悬液，置于20℃恒温培养箱内，接触作用20h。
步骤5)菌落计数：
作用结束后，夹取染菌样片分别置于含5.0mL无菌磷酸缓冲液的无菌离心管中，振荡混匀后，收集洗脱液；用无菌磷酸缓冲液将洗脱液，制备成10倍系列稀释匀液；取10-2、10-3、10-43个稀释度的样品匀液，每个稀释度各取1mL加入无菌培养皿中，每管洗脱液接种2个培养皿，再加入经过121℃高压灭菌15min后冷却至45℃的相应的琼脂培养基，混匀后置于36℃恒温培养箱中培养48h；计数存活菌落数。
为了更高效地实施本方法，本步骤中金黄色葡萄球菌在需氧条件下培养。
步骤6)抑菌率计算：
按照公式①计算抑菌率。
式中：
X—抑菌率，％；
C0—对照样品组的平均菌落数，单位为CFU/片；
C1—测试样品组的平均菌落数，单位为CFU/片。
实施例2
一种检测滤棒的抑菌效果的方法，包括如下步骤：
步骤1)菌株活化：
制备培养基斜面，将测试菌株接种至培养基斜面上，置于36℃恒温培养箱中培养24h；重复上述步骤，至菌株活化至第3代。
测试菌株为变形链球菌，采用脑心浸出液琼脂培养基(BHI)厌氧条件下培养。
步骤2)菌悬液制备：
取第3代斜面新鲜培养物，吸取3.0mL无菌磷酸缓冲液(0.03mol/L，pH 7.2)加入斜面试管内，反复吹吸后将洗脱液移至无菌离心管中，涡旋混匀；再用无菌磷酸缓冲液稀释成5.0×105CFU/mL的菌悬液。
步骤3)样品制备：
采用无菌操作，将待测滤棒和对照滤棒均制成直径5mm的圆形样片；以未添加抑菌成分的同材质滤棒作为对照滤棒。
步骤4)加样及作用：
用无菌镊子各取2片待测和对照样品组样片，分别置于无菌培养皿内，每片滴加0.1mL菌悬液，置于20℃恒温培养箱内，接触作用24h。
步骤5)菌落计数：
作用结束后，夹取染菌样片分别置于含5.0mL无菌磷酸缓冲液的无菌离心管中，振荡混匀后，收集洗脱液；用无菌磷酸缓冲液将洗脱液，制备成10倍系列稀释匀液；取10-2、10-3、10-43个稀释度的样品匀液，每个稀释度各取1mL加入无菌培养皿中，每管洗脱液接种2个培养皿，再加入经过121℃高压灭菌15min后冷却至45℃的相应的琼脂培养基，混匀后置于36℃恒温培养箱中培养48h；计数存活菌落数。
为了更高效地实施本方法，本步骤中变形链球菌在厌氧条件下培养。
步骤6)抑菌率计算：
按照公式①计算抑菌率。
式中：
X—抑菌率，％；
C0—对照样品组的平均菌落数，单位为CFU/片；
C1—测试样品组的平均菌落数，单位为CFU/片。
实施例3
一种检测滤棒的抑菌效果的方法，包括如下步骤：
步骤1)菌株活化：
制备培养基斜面，将测试菌株接种至培养基斜面上，置于36℃恒温培养箱中培养22h；重复上述步骤，至菌株活化至第3代。
测试菌株为白色念珠菌，采用沙氏琼脂培养基需氧条件下培养。
步骤2)菌悬液制备：
取第3代斜面新鲜培养物，吸取3.0mL无菌磷酸缓冲液(0.03mol/L，pH 7.2)加入斜面试管内，反复吹吸后将洗脱液移至无菌离心管中，涡旋混匀；再用无菌磷酸缓冲液稀释成3.0×105CFU/mL的菌悬液。
步骤3)样品制备：
采用无菌操作，将待测滤棒和对照滤棒均制成直径5mm的圆形样片；以未添加抑菌成分的同材质滤棒作为对照滤棒。
步骤4)加样及作用：
用无菌镊子各取2片待测和对照样品组样片，分别置于无菌培养皿内，每片滴加0.1mL菌悬液，置于20℃恒温培养箱内，接触作用22h。
步骤5)菌落计数：
作用结束后，夹取染菌样片分别置于含5.0mL无菌磷酸缓冲液的无菌离心管中，振荡混匀后，收集洗脱液；用无菌磷酸缓冲液将洗脱液，制备成10倍系列稀释匀液；取10-2、10-3、10-43个稀释度的样品匀液，每个稀释度各取1mL加入无菌培养皿中，每管洗脱液接种2个培养皿，再加入经过121℃高压灭菌15min后冷却至45℃的相应的琼脂培养基，混匀后置于36℃恒温培养箱中培养48h；计数存活菌落数。
为了更高效地实施本方法，本步骤中白色念珠菌在需氧条件下培养。
步骤6)抑菌率计算：
按照公式①计算抑菌率。
式中：
X—抑菌率，％；
C0—对照样品组的平均菌落数，单位为CFU/片；
C1—测试样品组的平均菌落数，单位为CFU/片。
实施例4
一种检测滤棒的抑菌效果的方法，包括如下步骤：
步骤1)菌株活化：
制备培养基斜面，将测试菌株接种至培养基斜面上，置于36℃恒温培养箱中培养22h；重复上述步骤，至菌株活化至第3代。
测试菌株为大肠杆菌，采用营养琼脂培养基在需氧条件下培养。
步骤2)菌悬液制备：
取第3代斜面新鲜培养物，吸取3.0mL无菌磷酸缓冲液(0.03mol/L，pH 7.2)加入斜面试管内，反复吹吸后将洗脱液移至无菌离心管中，涡旋混匀；再用无菌磷酸缓冲液稀释成2.5×105CFU/mL的菌悬液。
步骤3)样品制备：
采用无菌操作，将待测滤棒和对照滤棒均制成直径5mm的圆形样片；以未添加抑菌成分的同材质滤棒作为对照滤棒。
步骤4)加样及作用：
用无菌镊子各取2片待测和对照样品组样片，分别置于无菌培养皿内，每片滴加0.1mL菌悬液，置于20℃恒温培养箱内，接触作用22h。
步骤5)菌落计数：
作用结束后，夹取染菌样片分别置于含5.0mL无菌磷酸缓冲液的无菌离心管中，振荡混匀后，收集洗脱液；用无菌磷酸缓冲液将洗脱液，制备成10倍系列稀释匀液；取10-2、10-3、10-43个稀释度的样品匀液，每个稀释度各取1mL加入无菌培养皿中，每管洗脱液接种2个培养皿，再加入经过121℃高压灭菌15min后冷却至45℃的相应的琼脂培养基，混匀后置于36℃恒温培养箱中培养48h；计数存活菌落数。
为了更高效地实施本方法，本步骤中大肠杆菌在需氧条件下培养。
步骤6)抑菌率计算：
按照公式①计算抑菌率。
式中：
X—抑菌率，％；
C0—对照样品组的平均菌落数，单位为CFU/片；
C1—测试样品组的平均菌落数，单位为CFU/片。
虽然已经通过例子对本发明的一些特定实施例进行了详细说明，但是本领域的技术人员应该理解，以上例子仅是为了进行说明，而不是为了限制本发明的范围。本领域的技术人员应该理解，可在不脱离本发明的范围和精神的情况下，对以上实施例进行修改。本发明的范围由所附权利要求来限定。
Claims (4)
1.一种检测滤棒抑菌效果的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1)菌株活化：
制备培养基斜面，将测试菌株接种至培养基斜面上，置于36℃恒温培养箱中培养20-24h；重复步骤1)，至菌株活化至第3代；
步骤2)菌悬液制备：
取第3代培养基斜面的新鲜培养物，吸取0.03mol/L，pH 7.2的无菌磷酸缓冲液3.0mL加入斜面试管内，反复吹吸后将洗脱液移至无菌离心管中，涡旋混匀；再用无菌磷酸缓冲液稀释成1.0×105-5.0×105CFU/mL的菌悬液；
步骤3)样品制备：
采用无菌操作，选取由待测滤棒和对照滤棒制成的样片；其中，以未添加抑菌成分的同材质滤棒作为对照滤棒；
步骤4)加样及作用：
用无菌镊子各取2片待测滤棒的样片和对照滤棒的样片，分别置于无菌培养皿内，每个样片滴加0.1mL步骤1)的菌悬液，置于20℃恒温培养箱内，接触作用20-24h；
步骤5)菌落计数：
作用结束后，夹取染菌样片分别置于含5.0mL无菌磷酸缓冲液的无菌离心管中，振荡混匀后，收集洗脱液；用无菌磷酸缓冲液将洗脱液，制备成10倍系列稀释匀液；取10-2、10-3、10-4三个稀释度的样品匀液，每个稀释度各取1mL加入无菌培养皿中，每管洗脱液接种2个培养皿，再加入经过121℃高压灭菌15min后冷却至45℃的相应的琼脂培养基，混匀后置于36℃恒温培养箱中培养48h；计数存活菌落数；
步骤6)抑菌率计算：
按照公式①计算抑菌率：
式中：X为抑菌率，％；
C0为对照样品组的平均菌落数，单位为CFU/片；
C1—测试样品组的平均菌落数，单位为CFU/片。
2.根据权利要求1所述的检测滤棒抑菌效果的方法，其特征在于，步骤1)中测试菌株为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌或变形链球菌；金黄色葡萄球菌和大肠杆菌采用营养琼脂培养基培养；白色念珠菌采用沙氏琼脂培养基培养；变形链球菌采用脑心浸出液琼脂培养基培养。
3.根据权利要求2所述的检测滤棒抑菌效果的方法，其特征在于，所述步骤1)和步骤5)中金黄色葡萄球菌、大肠杆菌或白色念珠菌在需氧条件下培养；变形链球菌在厌氧条件下培养。
4.根据权利要求1所述的检测滤棒抑菌效果的方法，其特征在于，步骤3)中的样片为直径5mm的圆形样片。
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| CN107098879A (zh) * | 2017-06-02 | 2017-08-29 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种具有抗菌活性的异黄酮类化合物及其制备方法与应用 |
| CN109354919A (zh) * | 2018-10-22 | 2019-02-19 | 江苏泰格油墨有限公司 | 一种烟用接装纸抑菌上光调墨油及其制备方法 |
-
2021
- 2021-04-07 CN CN202110373074.XA patent/CN113073128A/zh active Pending
Patent Citations (4)
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