CN113073059B - 一株降解油的产表面活性剂植物促生菌及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株降解油的产表面活性剂植物促生菌及其应用，属于微生物与环境工程领域。本发明的菌株为保藏编号为CCTCC NO：M 2020761的不动杆菌(Acinetobacter sp.)S4。本发明的菌株在含油污水中发酵可将油类物质降解并产生生物表面活性剂，发酵液具有高乳化活性、优良驱油性能等优点。此外，此菌株还具有分泌植物生长激素、溶解磷酸盐矿物的能力，菌体可有效提高植物在油污环境中的各项生长指标。本发明菌株具有功能多样性，且其所使用的培养方法、发酵方法、表面活性剂提取方法及接种方法均简单易行，因此该菌株在含油污水的处理、表面活性剂生产以及生物肥料方面具有重要的应用价值。

Description

一株降解油的产表面活性剂植物促生菌及其应用

技术领域

本发明属于微生物与环境工程领域，具体涉及一株降解油的产表面活性剂植物促生菌及其应用。

背景技术

表面活性剂是一类同时具有固定的亲水基团和亲油基团的物质，它们具有抗粘、乳化、起泡、增溶、分散、洗涤等作用，其应用几乎可以覆盖所有的精细化工领域，因此又被称为“工业味精”。目前我国市场上使用的表面活性剂主要以石油基化学表面活性剂为主，这类表面活性剂在生产和利用过程中需要消耗大量石油和螯合剂。此外，这类表面活性剂通常还具有一定的生物毒害作用且难以被生物降解，所以容易对环境和人类健康造成危害，例如近年来洗涤剂工业生产污水中常含高浓度的阴离子表面活性剂以及磷脂、油类、三聚磷酸钠等污染物，目前已成为重要的水质污染源之一。因此，寻找可替代化学表面活性剂的新型表面活性剂是一项重要的绿色环保举措。

微生物发酵生产表面活性剂工艺是典型的绿色工艺，一方面其原料在自然界广泛存在、价廉且具有可持续生产的能力；另一方面生物表面活性剂是一类由微生物发酵代谢得到的活性物质，具有低毒性、可生物降解和环境友好性等特点，因此其应用价值高于一般化学合成的表面活性剂。然而，发酵所需要的底物与水是发酵企业所考虑的最重要生产成本之一。工业与生活中产生了大量的废弃含油污水且常因不合理的排放和处置而导致了大面积的环境污染，甚至还有不法商家回收利用地沟油重返餐厨，严重危害了人类健康。事实上，含油污水中含有的油类物质可作为微生物发酵工艺的营养和能源，因此利用含油污水进行发酵生产表面活性剂技术是一项具有应用前景的技术，它既可以降低发酵企业的生产成本又可以解决含油污水的污染问题。此外，发酵产生的微生物菌体处置方面很少进行后续关注，从微生物的生长周期来看，老化细胞在发酵罐中的不断堆积会导致代谢毒素积累从而影响微生物的生长和繁育能力，因此为了高效率的发酵生产以及资源的最大化利用，合理化的处置微生物菌体也应需要在实际生产中被更多的考虑。

高羊茅是一种常见的绿化植物，且作为长江流域唯一为数不多的能保持四季常长绿的草坪品种，由于其抗性好、适应性强和抗践踏能力强，因此在近几年的堤防绿化中广泛应用。目前还有研究显示根系发达的高羊茅在油污染土壤中也具有较好抗逆性和良好的植物修复能力，因此栽种高羊茅进行油污土壤的绿化与修复是一种新型的绿色处理方法。为了更好地提高高羊茅的植物修复能力，国内外一些学者发现使用一类细菌的菌悬液可以有效提高高羊茅在油污土壤中的萌发和生长能力，原因是这类细菌通常具有一些特殊功能(例如分泌植物生长激素IAA、溶解磷酸盐矿物等)。IAA是一类天然的植物生长激素，可以有效促进植物细胞的伸长和分裂。磷是植物生长所必须的营养元素之一，但在环境中通常以不溶形式存在因此难以被利用，而这些微生物可分泌有机酸将不溶性的磷转变为可溶性的磷，从而增强植物对磷的吸收，因此它们被称为植物促生菌(plant growth promotionbacteria,PGPB)用作新型的生物肥料。

目前，假单细胞菌作为工业生产糖脂类生物表面活性剂的优良菌种，有关不动杆菌及其在生产表面活性剂领域的应用报道较少，而同时具有油和烃降解能力、产表面活性剂能力、以及促进植物生长能力三种功能的不动杆菌菌株则更为罕见。

发明内容

本发明目的在于提供一株降解油的产表面活性剂植物促生菌，并提供该菌株利用含油污水制备表面活性剂的方法及其菌体作为生物肥料等方面的应用。

本发明所提供的降解油的产表面活性剂植物促生菌是从湖北省一废弃焦化厂受石油污染处的土壤中筛选获得的，其命名为不动杆菌(Acinetobacter sp.)S4。该菌株已保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：中国.武汉.武汉大学)，保藏号为CCTCCNO：M 2020761，保藏日期为2020年11月19日。

所述的不动杆菌S4的生理生化特征及遗传学特征：(1)菌体特征：单个细胞(0.7～0.8)×(0.8～0.9)μm，球状、无鞭毛，无芽孢，常呈双分布。(2)菌落特征：圆形、光滑、边缘整齐、表面湿润，淡黄色。(3)生理生化性质：革兰氏阴性菌，氧化酶阴性，动力阴性，硝酸盐阴性，明胶水解阳性。(4)遗传学特征：16S rDNA分析，表明其属于不动杆菌属，定名为S4，与嗜油不动杆菌相似但又有区别，其16sDNA序列如SEQ ID NO 1所示。

本发明的不动杆菌S4的降油、产表面活性剂的特性：适宜生长温度为20～40℃，在含油环境中抗逆能力强、生长速度快、稳定性较好，对石油烃类具有广谱降解性，可降解如：食物油、柴油、苯酚、正十六烷、原油，并能利用石油烃物质作为唯一碳源生产糖脂类生物表面活性剂。

本发明的不动杆菌S4的促植物生长特征：在LB液体培养基(胰蛋白胨8～10g/L、酵母提取物3～5g/L、NaCl 1～5g/L、加水至1L，pH 7.0～8.0)中可产生IAA；在磷酸三钙培养基(8～10g/L葡萄糖、3～5g/L Ca₃(PO₄)₂、3～5g/L MgCl₂、0.1～0.3g/L MgSO₄·7H₂O、0.1～0.3g/L KCl、0.1～0.3g/L(NH4)₂SO₄，加水至1L，pH 7.0～8.0)中可将磷酸三钙部分转化为溶解磷。

基于不动杆菌S4的降油、降烃、产表面活性剂的特性，其具有在治理或利用含油污水或含烃污水中的应用。

基于不动杆菌S4促植物生长的特性，其具有在促进植物生长或制备生物肥料中的应用。

本发明提供了所述不动杆菌S4在生产表面活性剂中的应用。利用所述的不动杆菌S4菌株生产生物表面活性剂的方法，包括如下步骤：将所述的菌株接种到含油脂的发酵培养基中进行培养，得到含表面活性剂的培养液。其中，所述的含油脂的发酵培养基的配方优选为：油脂0.5～5g/L，KH₂PO₄ 0.5～1g/L，K₂HPO₄ 1～2g/L，(NH₄)₂SO₄ 0.5～1.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1～0.2g/L，NaCl 0.5～1.5g/L，加水至1L，pH 6.0～8.0。进一步地，所述的方法具备包括以下步骤：(1)将保存在斜面或甘油中S4菌种通过划线的方式接种于LB固体培养基上(胰蛋白胨8～10g/L、酵母提取物3～5g/L、NaCl 1～5g/L、琼脂13～15g/L，加水至1L，pH7.0～8.0)，30～37℃培养0.5～2d。(2)将LB固体培养基上的单菌落接种于LB液体培养基(胰蛋白胨8～10g/L，酵母提取物3～5g/L，NaCl 1～5g/L，加水至1L，pH 7.0～8.0)，在30～37℃、150rpm下振荡培养1～4d，然后经过离心和无菌水重悬后得种子液。(3)将种子液按照2～5％的体积比接入到含油脂的发酵培养基中，在20～40℃、80～180rpm下振荡培养0.5～2d。

所述的利用含油污水制备的所述的不动杆菌S4菌株生产生物表面活性剂的方法还包括分离步骤：将含表面活性剂的培养液离心后去除油脂后，离心取上清液，上清液经有机溶剂萃取得到表面活性剂。具体包括以下步骤：首先将发酵液倒入分液漏斗中，去除上层不溶性的油脂。然后在离心机中以8000～10000rpm的转速离心10～20min去除菌体。再将用滤纸过滤后的上清液酸化，接着加入适量二氯甲烷和甲醇的混合溶剂(二氯甲烷和甲醇＝2:1)超声萃取15～30min。使用分液漏斗分离有机相并用旋转蒸发仪在60～80℃下旋转蒸发，最后蒸干得到棕褐色的表面活性剂粗品，冷凝回收的有机溶剂可重复用于提取新的发酵液中的表面活性剂。

本发明也提供了所述的不动杆菌S4在石油化工领域中的应用，如将不动杆菌S4发酵得到的发酵液用于石油化工领域中的油类乳化、表面活性剂驱油。本发明实施例中利用所述不动杆菌S4进行油类的乳化和驱油的方法为：将不动杆菌S4的发酵液在转速为5000～6000rpm下离心10min，取上清液3mL和等体积油类进行充分振荡，静置24h后得到稳定的乳化层。向装有20mL蒸馏水的玻璃皿中滴入100μL液体石蜡并待石蜡完全铺满整个液面，按上述方法离心并取10μL上清液滴入液体石蜡中心，排开的清晰区域为驱油圈范围。

本发明还提供了一种含不动杆菌S4的生物菌剂的制备方法及其使用方法，具体为：将在LB培养基或含油污水中培养了1～2d后的发酵液离心获得菌体，用无菌水清洗2～3遍后，加入温水中摇菌得到的菌悬液(含菌量约1.0×10⁹个)，该液体菌剂可在播种前用菌液浸种、育苗前浸泡植株根部或移植后浇于植物(如高羊茅等)根部土壤中，也可以将菌液混合菌体吸附材料例如硅藻土、木炭、高岭土等制成菌剂，移植前混施于土壤中。将菌液混合菌体吸附材料的混合比例优选10mL菌液/20g硅藻土、10mL菌液/15g木炭或10mL菌液/15g高岭土。

本发明的优点和有益效果：本发明的不动杆菌S4同时具有油和烃降解能力、产表面活性剂能力、以及促进植物生长能力，其在油污染处理、生物表面活性剂工业以及生物肥料制备方面具有广阔的应用前景与商业价值。

附图说明

图1是菌株S4的菌落图和革兰氏染色光学显微镜图。

图2是菌株S4的琼脂凝胶电泳图。

图3是菌株S4的系统发育树图。

图4是菌株S4在不同含油污水中生长曲线图。

图5是菌株S4对不同油类的降解动力曲线图。

图6是菌株S4的发酵液(第2天)与油类形成的乳化层对比图。

图7是菌株S4的发酵液在液体石蜡中的排油圈图。

图8是菌株S4产出的表面活性剂纯品的照片与FTIR图。

图9是施用S4微生物菌剂后高羊茅生长对比图。

具体实施方式

以下实施例用于进一步说明本发明，但不应理解为对本发明的限制。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1菌株S4的筛选与培养

(1)样品来源：湖北省某焦化厂中的油污土壤。

(2)菌株的初筛：将土壤浸提液用无菌水按浓度梯度稀释至10^-3～10^-8，然后取100～200μL均匀涂布至LB固体平板上，挑选不同颜色形状的菌体以平板划线法接种到新的LB固体平板上进行分离纯化。

(3)筛选具有植物促生特征的菌株：将纯化得到的单菌落分别接入含色氨酸的LB培养基(胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠5g、L-色氨酸0.1g，加水至1L，pH 7.0～8.0)和磷酸三钙培养基(葡萄糖10g、Ca₃(PO₄)₂ 5g、MgCl₂ 5g、MgSO₄·7H₂O 0.2g、KCl 0.2g、(NH₄)₂SO₄ 0.2g，加水至1L，pH 7.0～8.0)，在28℃、150rpm下进行培养并设置无菌空白对照组，采用Salkowski法测定了培养基中的IAA含量(若存在IAA，培养基显红)和钼锑抗比色法测试有效磷含量(若存在有效磷，培养基显蓝)，将任一培养基发生了显色反应的菌株确定为植物促生菌菌株。

(4)筛选具有产表面活性剂能力的菌株：将筛选到的植物促生菌菌株接入LB培养基中在28℃、150rpm下进行发酵，取发酵液3mL至干净试管中，并加入3mL柴油进行剧烈振荡，5分钟后观测是否具有稳定的乳化层，同时测定LB培养基发酵前后的表面张力是否降低，将具有稳定乳化层且培养基表面张力明显降低的菌株确定为产表面活性剂植物促生菌。

(5)筛选具有油降解能力的菌株：将上述筛选到的产表面活性剂植物促生菌接种到以柴油为唯一碳源的基础无机盐培养基(柴油5g，KH₂PO₄ 0.5g，K₂HPO₄ 1.5g，(NH₄)₂SO₄1.0g，MgSO₄·7H₂O 0.1g，NaCl 1.0g，加水至1L，pH 7.0)中在28℃、150rpm下培养1～3天，培养基明显浑浊的菌株确定为具有油降解能力的产表面活性剂植物促生菌。

经过多重筛选菌株S4表现出同时具有产IAA、溶解磷酸盐、产表面活性剂、降解柴油的能力，是一株少见的具有油降解能力的产表面活性剂植物促生菌，将纯化后的S4单菌落通过划线法接种至LB斜面培养基于-4℃下保存。待使用时，活化方法为从保存的斜面上接种一环菌体划线至无菌LB固体培养基上，置于恒温培养箱中在25～35℃，待1～2天长出单菌落后，接种一环菌体至无菌LB液体培养基中，在28℃、150rpm下培养0.5～1d，离心得到菌体，用无菌水清洗2～3遍后，再用无菌水重悬得到OD₆₀₀值为1的种子液。

实施例2菌株S4的鉴定与类别确定

按照以下方法对菌株S4的生理生化特征及遗传学特征进行了观察和鉴定。

(1)通过肉眼和光学显微镜观察，菌株S4单个细胞呈球状、无鞭毛，无芽孢，常呈双分布，菌落为圆形、边缘整齐、表面光滑湿润、淡黄色，如图1所示。

(2)生理生化性质：革兰氏阴性菌，氧化酶阴性，动力阴性，硝酸盐阴性，溶血阳性，明胶水解阳性。

(3)遗传学特征：为确定菌株S4的类别，使用了16S rDNA基因测序进行鉴定。首先使用D3350-01细菌DNA试剂盒(美国Omega Biotek公司)提取细菌DNA。利用两组16S rDNA细菌PCR通用引物：27F[5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3']和1492R[5'-GGTTACCTTGTTACGCTT-3']进行PCR扩增。

扩增产物在1.0％的琼脂糖凝胶电泳上检验结果见图2所示S4琼脂糖凝胶电泳图，扩增后的DNA纯化与测序由中国华大基因股份有限公司完成，其16sDNA序列如SEQ ID NO.1所示。最后利用NCBI BLASTN进行序列同源性检测，使用Clustal X软件进行多重序列比对，MEGA软件4.0版本构建共识邻接树。16S rDNA分析表明其属于不动杆菌属，定名为不动杆菌S4(Acinetobacter sp.S4)，与嗜油不动杆菌亲缘关系接近。系统发育树情况见图3。

不动杆菌S4(Acinetobacter sp.S4)已保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址中国湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学)，保藏编号为CCTCC NO：M 2020761，保藏日期为2020年11月19日。

实施例3菌株S4对不同含油污水的降解能力测定

按照实施例1中的菌株S4活化并制备种子液，然后按以下方法进行发酵。

(1)含柴油污水：加入5000mg/L的柴油于20mL灭菌后的发酵培养基(KH₂PO₄ 0.5g，K₂HPO₄ 1.5g，(NH₄)₂SO₄ 1.0g，MgSO₄·7H₂O 0.1g，NaCl 1.0g，加水至1L，pH 7.0)中，然后以5％(v/v)的接种量接入不动杆菌S4种子液；在28℃、150rpm下培养6天后，加入20mL石油醚超声萃取15min，经无水硫酸钠脱水后，在225nm的波长下比色。结果如表1所示，表明菌株S4在6天后能够将5000mg/L的高浓度含柴油污水降解至1864±200mg/L，降解率约为62.7％，表明菌株S4对含柴油污水有较好的处理效果。

(2)含食用油污水：加入5000mg/L的食用油(食用植物调和油，金龙鱼)于20mL灭菌后的发酵培养基中，然后以5％(v/v)的接种量接入不动杆菌S4种子液；在28℃、150rpm下培养6天后，加入20mL的石油醚超声萃取15min，经无水硫酸钠脱水后，在208nm的波长下比色。结果如表1所示，表明菌株S4能够将含5000mg/L的食用油污水的油含量降解至946±150mg/L，降解率约为81.1％，表明菌株S4对含食用油污水有极好的处理效果。

(3)含原油污水：加入2000mg/L的原油于20mL灭菌后的发酵培养基中，然后以5％(v/v)的接种量接入不动杆菌S4种子液；在28℃、150rpm下培养6天后，加入20ml的石油醚超声萃取15min，经无水硫酸钠脱水后，在430nm的波长下比色。结果如表1所示，表明菌株S4能够将2000mg/L的含原油污水降解至1032±100mg/L，降解率约为38.4％，表明菌株S4对含原油污水有一定的处理效果。

图4、5分别展示的是菌株S4在不同含油污水中随时间变化下的生长曲线和降解动力曲线。此外菌株S4在以500mg/L苯酚或0.5％(v/v)正十六烷为唯一碳源的基础无机盐培养基中生长良好，对于含苯系物和含烃废水也具有降解潜力。

表1不动杆菌S4在不同类型含油污水中发酵6天后的生物量与降解效率

实施例4菌株S4的发酵液乳化活性测试

将按照实例3方法培养2天后，离心去除菌体，取3mL上清液和3mL不同的油类混合，剧烈振荡2min后静置24h观测乳化层高度并计算24h后的稳定乳化活性效率(E₂₄)。E₂₄(％)＝He/H×100％，He代表乳化层高度，H代表总高度。对于不同油类的乳化层高度如图6所示，计算得到的乳化活性效率见表2。结果显示柴油发酵液对柴油、汽油、食物油的乳化性能均较好，但对原油乳化效果不佳；食物油发酵液对各种油类的乳化性能最好，E₂₄均高于80％；原油发酵液对各种油类的乳化效果较差。

表2不动杆菌S4的发酵液(发酵2天)对不同油类的乳化活性

实施例5菌株S4的发酵液驱油能力测定

按照实例3中的发酵方法连续发酵6天，每隔24小时取离心得到的上清液进行排油圈测定。先在干净的培养皿中加入20mL蒸馏水，然后在水面上加入100μL液体石蜡，取上清液10μL滴入石蜡中心，测量石蜡表面清液区直径，直径越大代表发酵液中表面活性剂含量越高。结果如图7所示，菌株S4在三种含油污水中均能进行发酵生产表面活性剂物质，其中在含食物油废水中发酵产生的发酵液的排油圈直径最大。发酵5天后排油圈直径大小见表3。

表3不动杆菌S4发酵5天后发酵液的排油圈大小

实施例6发酵液中表面活性物质提取与鉴定

按实施例3中发酵方法发酵0.5～3d后，在10000rpm、4℃下离心5min，去除菌体。用6mol/L的HCl将上清液pH调至3。然后加入适量有机溶剂(二氯甲烷∶甲醇＝2∶1，v/v)至上清液中，超声提取60min，随后将有机相分离并旋转干燥。这个过程产生了一种粘稠的棕色生物表面活性剂见图8。称取表面活性剂定量，定量结果见表4，并保存至-20℃。将1mg表面活性剂样品和150mg KBr放入玛瑙砂浆中，在红外光灯下轻轻研磨，压片机压成薄片，在400～4000cm^-1范围内用红外光谱仪扫描，红外光谱图见图8，经鉴定分析其成分为糖脂类表面活性剂。

表4不动杆菌S4在不同类型含油污水中发酵3天的表面活性剂产量

实施例7接种S4菌剂促进高羊茅生长试验

按照如下方法施用S4微生物菌剂。

(1)按实施例1中的培养方法，将生长到对数期的培养液进行离心，离心后的S4菌体用无菌水反复清洗4～6遍后，在无菌水中进行重悬得到OD₆₀₀值为1的菌悬液。

(2)将高羊茅种子浸泡在恒温为25℃的无菌水中吸水3h，然后在浓度为75％的酒精中浸泡30s，接着使用浓度为2％的戊二醛的浸泡30min，使用无菌水清洗4～8遍至种子清洗干净。

(3)将消毒后的种子放入装有菌悬液的三角瓶中，在恒温振荡器中以转速100rpm、温度28℃下处理30min。

(4)种子播种前，将自然风干后的油污土壤(油含量约10％)通过用20目筛子过筛，平铺在塑料箱中厚度约2cm，加入无菌水搅拌至水饱和状态，称量150g土壤装入试验盆中。

(5)将种子播入土壤中且上层再覆盖一层薄土，以200mL/kg(土壤)的量施加菌悬液，然后在20℃的自然条件下待高羊茅自然生长。

结果如图9所示，未处理组与施用S4微生物菌剂组盆中40天后的植物生长情况差异显著，施用S4微生物菌剂组中高羊茅的种子萌发率、根长和茎长(具体参数情况见表5)大大提高，说明该菌剂具有促进高羊茅生长的作用。

表5未处理组与施用S4微生物菌剂组的植物生长参数

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 武汉大学

<120> 一株降解油的产表面活性剂植物促生菌及其应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1405

<212> DNA

<213> Acinetobacter sp.

<400> 1

agtcgagcgg agagaggtag cttgctactg atcttagcgg cggacgggtg agtaatgctt 60

aggaatctgc ctattagtgg gggacaacat ttcgaaagga atgctaatac cgcatacgtc 120

ctacgggaga aagcagggga tcttcggacc ttgcgctaat agatgagcct aagtcggatt 180

agctagttgg tggggtaaag gcctaccaag gcgacgatct gtagcgggtc tgagaggatg 240

atccgccaca ctgggactga gacacggccc agactcctac gggaggcagc agtggggaat 300

attggacaat gggcggaagc ctgatccagc catgccgcgt gtgtgaagaa ggccttatgg 360

twgyawwkma mkykaagmrr rkrgswrryt wmwktwrwta wymymtagrr wtagtggacg 420

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atgtgaaatc cccgagctta acttgggaat tgcattcgat actggttagc tagagtgtgg 600

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atggcgaagg cagccatctg gcctaacact gacgctgagg tgcgaaagca tggggagcaa 720

acaggattag ataccctggt agtccatgcc gtaaacgatg tctactagcc gttggggcct 780

ttgaggcttt agtggcgcag ctaacgcgat aagtagaccg cctggggagt acggtcgcaa 840

gactaaaact caaatgawtt gacgggggcc cgcacaagcg gtggagcatg tggtttaatt 900

cgatgcaacg cgaagaacct tacctgggcc ttgacatagt aagaactttc cagagatgga 960

ttggtgcctt cgggaactta catacagkgc tgcatgctgy mkksmkstcg tswsyksrkr 1020

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gtaatgtcgg gaactttaag gatactgcca gtgacaaact ggaggaaggc ggggacgacg 1140

tcaagtcatc atggccctta cggccagggc tacacacgtg ctacaatggt cggtacaaag 1200

ggttgctacc tagcgatagg atgctaatct caaaaagccg atcgtagtcc ggattggagt 1260

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acaaggtacc cgtgcagttt gctcatggct catcaagtcg taacaaggta accatagagt 1380

ttgatcatgg ctcagtaagt cgtaa 1405

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

agagtttgat cctggctcag 20

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ggttaccttg ttacgctt 18

Claims (10)

1.一株降解油的产表面活性剂植物促生菌株，其特征在于：所述的菌株为保藏编号为CCTCC NO：M 2020761的不动杆菌(Acinetobacter sp.)S4。

2.权利要求1所述的菌株在生产表面活性剂中的应用。

3.一种利用权利要求1所述的菌株生产表面活性剂的方法，其特征在于：包括如下步骤：将权利要求1所述的菌株接种到含油脂的发酵培养基中进行培养，得到含表面活性剂的培养液。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述的发酵培养基的配方为：油脂0.5～5g/L，KH₂PO₄ 0.5～1g/L，K₂HPO₄ 1～2g/L，(NH₄)₂SO₄ 0.5～1.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1～0.2g/L，NaCl 0.5～1.5g/L，加水至1L，pH 6.0～8.0。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于：还包括分离步骤：将含表面活性剂的培养液离心后去除油脂后，离心取上清液，上清液经有机溶剂萃取得到表面活性剂。

6.权利要求1所述的菌株在石油化工领域中的应用，其特征在于：将所述的菌株发酵得到的发酵液用于石油化工领域中的油类乳化、表面活性剂驱油。

7.权利要求1所述的菌株在化妆品、食品领域中的应用，其特征在于：将所述的菌株产生的表面活性剂作为化妆品、食品领域中的添加剂。

8.权利要求1所述的菌株在治理或利用含油污水或含烃污水中的应用。

9.权利要求1所述的菌株在促进植物生长或制备生物肥料中的应用。

10.一种利用权利要求1所述的菌株促进植物生长的方法，其特征在于：包括如下步骤：将植物种子先浸泡于所述菌株的菌悬液中再播入土壤后或直接将植物种子播入土壤后，使用含所述菌株的菌悬液或菌剂施于土壤。

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