CN113045656A - 抗hla-g异构体分子hla-g5及hla-g6的单克隆抗体及其用途 - Google Patents

抗hla-g异构体分子hla-g5及hla-g6的单克隆抗体及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN113045656A
CN113045656A CN202010729416.2A CN202010729416A CN113045656A CN 113045656 A CN113045656 A CN 113045656A CN 202010729416 A CN202010729416 A CN 202010729416A CN 113045656 A CN113045656 A CN 113045656A
Authority
CN
China
Prior art keywords
hla
seq
sequence
amino acid
acid sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010729416.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113045656B (zh
Inventor
颜卫华
林爱芬
章霞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Taizhou Enze Medical Center Group
Original Assignee
Taizhou Enze Medical Center Group
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Taizhou Enze Medical Center Group filed Critical Taizhou Enze Medical Center Group
Priority to CN202010729416.2A priority Critical patent/CN113045656B/zh
Publication of CN113045656A publication Critical patent/CN113045656A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113045656B publication Critical patent/CN113045656B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2833—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57446—Specifically defined cancers of stomach or intestine
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
    • G01N2333/70539—MHC-molecules, e.g. HLA-molecules

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种抗HLA‑G异构体分子HLA‑G5及HLA‑G6的抗体(9Y5G6)及用途，所述抗体(9Y5G6)由保藏编号为CCTCC NO:C202045的杂交瘤细胞株9Y5G6产生，采用HLA‑G分子重链第229‑319位氨基酸序列的抗原肽为免疫原，编码本发明所述9Y5G6抗体的核酸分子及氨基酸序列,本发明还提供了所述9Y5G6抗体用于HLA‑G异构体分子HLA‑G5及HLA‑G6免疫组化及免疫印迹等检测的用途。

Description

抗HLA-G异构体分子HLA-G5及HLA-G6的单克隆抗体及其用途
技术领域
本发明属于生物医药领域，涉及抗HLA-G异构体抗体(9Y5G6)的以下方面：采用HLA-G分子重链第229-319位氨基酸序列的抗原肽为免疫原，制备抗HLA-G异构体HLA-G5及HLA-G6的抗体(9Y5G6)；编码本发明所述9Y5G6抗体的核酸分子及氨基酸序列，以及所述抗体(9Y5G6)用于HLA-G5及HLA-G6免疫组化及免疫印迹检测等用途。
背景技术
人类白细胞抗原-G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)基因，全长6.0kb，位于人类第6号染色体短臂远侧6p21.3。在蛋白质翻译过程中，HLA-G mRNA第 1外显子编码信号肽，第2、3和第4外显子分别编码细胞外区的α1、α2和α3 结构域，第5位外显子编码跨膜区；第6外显子编码仅含6个氨基酸残基的HLA-G 分子胞内段；由于外显子6内含有终止密码子，第7外显子不被转录；第8外显子对应于HLA-G基因的3′UTR。
HLA-G初始转录产物经选择性剪接，可产生7种成熟mRNA，分别编码7种不同分子量的异构体分子(HLA-G1、-G2、-G3、-G4、-G5、-G6及HLA-G7)。HLA-G1 是由全长HLA-G mRNA编码，结构上类似于HLA Ia抗原分子。HLA-G2缺乏α2 结构域；HLA-G3缺乏α2和α3结构域；HLA-G4缺乏α3结构域；HLA-G5及HLA-G6 胞外区结构域分别与HLA-G1及HLA-G2相同，但它们由含有内含子4的HLA-G mRNA编码，因内含子4中含有终止密码子，所编码的蛋白分子缺乏由外显子5 所编码的跨膜区，形成可溶性HLA-G分子。编码HLA-G7的mRNA由于内含子2 中含有终止密码子，胞外区仅含α1结构域及由内含子2所编码的2个氨基酸残基相连(图1)。HLA-G1～-G7异构体分子的分子量分别为39kD,31kD,22kD,30kD, 34kD,23kD及16kD。
生理情况下，HLA-G分子仅表达在母胎界面的绒毛外滋养层细胞，在维持母胎免疫耐受中起重要作用。病理情况下，HLA-G分子能在多种肿瘤细胞及病毒感染等组织细胞中诱导性表达，与疾病的发生及进展密切相关。HLA-G分子是体内一个重要的免疫致耐分子，其免疫抑制功能主要通过结合免疫抑制性受体免疫球蛋白样转录物-2(immunoglobulin-like transcript-2,ILT2/LILRB1/CD85j)、免疫球蛋白样转录物-4(ILT4/LILRB2/CD85d),传递抑制信号，诱导免疫耐受。具体作用机制有：①与表达在T细胞、NK细胞和B细胞上的ILT2结合，抑制T 细胞和NK细胞免疫杀伤活性，及B细胞增殖和抗体分泌等功能。②与树突状细胞(DC)上的ILT2、ILT4结合，抑制DC细胞的成熟和分化，诱导产生耐受性 DC细胞。③与骨髓来源抑制性细胞(MDSC)和巨噬细胞(Mφ)上的ILT2、ILT4 结合，诱导促炎抗肿瘤的M1向免疫致耐性M2细胞分化等，在机体的免疫调节中起到重要作用。HLA-G分子在免疫调解过程中，HLA-G与受体ILT2、ILT4结合，具有分子结构特异性。受体ILT2、ILT4与HLA-G结合的位点HLA-G胞外区α3 结构域。ILT2仅结合HLA-G/β2m复合物，而ILT4不仅可以与HLA-G/β2m结合，同时可以与不含β2m的游离HLA-G分子结合。由于HLA-G1、-G2、-G3、-G4、-G5、 -G6及HLA-G7在表达机制及分子结构上存在差异，如HLA-G3、-G4、及HLA-G7 异构体胞外区不含α3结构域，不能与ILT2和ILT4结合。因此，不同HLA-G异构体分子可在病理生理过程中发挥特定的免疫学效应。在不同病理状态下，尤其在肿瘤组织细胞中，HLA-G异构体表达存在广泛的异质性，不同HLA-G分子异构体的表达具有特定的临床意义。因此，分析特定HLA-G异构体分子表达及不同 HLA-G异构体分子表达谱，对于阐述特定HLA-G异构体分子的生物学功能及其临床意义具有重要意义。
HLA-G分子与其他HLA-I分子在胞外区80％氨基酸序列具有同源性。因此，目前已有HLA-G抗体可能与其他HLA-I分子存在交叉反应。但HLA-G与其他HLA-I 分子不同，其胞内区结构域显著小于其他HLA-I分子。因此，HLA-G与其他HLA-I 分子在分子量上有所不同。其他HLA-I分子的分子量为45Kda，而全长的HLA-G1 分子量为39Kda。除HLA-G1分子外，HLA-G其他异构体分子包括HLA-G2～-G7异构体分子量分别为31kD,23kD,30kD,37kD,27kD及16kD，可通过免疫印迹来鉴定HLA-G分子及其异构体的表达与否。
目前国内外用于HLA-G免疫组化和免疫印迹的抗体主要有4H84，MEM-G1， MEM-G2，2A12及5A6G7。其中抗体4H84，其识别位点位于7种HLA-G异构体分子均具有的胞外区α1结构域，特异性上能够检测含有α1结构域的7种HLA-G异构体分子，在免疫组化中不能区分具体特定HLA-G异构体分子的表达。抗体 MEM-G1及MEM-G2由全长HLA-G重链免疫小鼠得到，具体识别位点无法预测，这两种抗体理论上能够识别7种HLA-G异构体分子，不能区分具体特定HLA-G异构体分子的表达。抗体2A12及5A6G7，由位于HLA-G5和HLA-G6分子羧基端22个氨基酸残基免疫小鼠获得，能够识别HLA-G5和HLA-G6分子。但抗体2A12及5A6G7 同时还可以识别其他分子量在36-175kDa范围内的未知的其他非HLA-G5和 HLA-G6分子，在免疫组化的应用上可能存在交叉反应，出现假阳性，不能正确 HLA-G5和HLA-G6分子表达。
因此，在分析HLA-G分子表达及临床意义的判断中，现有的检测HLA-G分子的抗体不都是尽如人意，迫切需要更加特异的、新的抗HLA-G分子的单克隆抗体。
发明内容
鉴于现有HLA-G抗体存在上述不足，本发明的目的是提供一种抗HLA-G5及 HLA-G6异构体分子的特异性单克隆抗体(9Y5G6)、编码本发明所述抗体(9Y5G6) 的核酸分子及氨基酸序列；以及所述9Y5G6抗体用于HLA-G5及HLA-G6免疫组化及免疫印迹检测等用途。
本发明采用HLA-G分子重链第229-319位氨基酸序列的抗原肽为免疫原，其氨基酸序列为SEQ ID No.17所示氨基酸序列，并基于此制备抗HLA-G5及HLA-G6异构体分子的特异性单克隆抗体(9Y5G6)。
根据发明人的研究成果，本发明提供了一种抗HLA-G异构体分子HLA-G5及 HLA-G6的单克隆抗体(9Y5G6)，至少包括重链高变区CDR1、CDR2和CDR3中的一种或多种，或/和轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3中的一种或多种；
所述单克隆抗体(9Y5G6)抗体轻链的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.1所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述抗体轻链高变区CDR1的氨基酸序列为SEQ ID No.3所示的序列QSLLHSNGHTY或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.3所示的序列具有同等功能的氨基酸序列；所述轻链高变区CDR2的氨基酸序列为SEQ ID No.4所示的序列KVS或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.4所示的序列具有同等功能的氨基酸序列，和所述轻链高变区CDR3的氨基酸序列为SEQ ID No.5所示的序列SQSTHVPWT或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.5所示的序列具有同等功能的氨基酸序列；
所述单克隆抗体(9Y5G6)抗体重链的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.2所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述抗体重链高变区CDR1的氨基酸序列为SEQ ID No.6所示的序列GFTFRDFG或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.6所示的序列具有同等功能的氨基酸序列，所述重链高变区CDR2的氨基酸序列为SEQ ID No.7所示的序列ISNLARII或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.7所示序列具有同等功能的氨基酸序列，和所述重链高变区CDR3的氨基酸序列为SEQ ID No.8所示的序列ARVTTIVPDY或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.8所示的序列具有同等功能的氨基酸序列。
进一步地，所述单克隆抗体(9Y5G6)还包括轻链框架区(Framework region， FR)和重链框架区；其中，所述轻链框架区包括轻链FR1、FR2和FR3中的一种或多种，所述轻链FR1的氨基酸序列为SEQ ID No.9所示的序列或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.9所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述轻链FR2的氨基酸序列为SEQ ID No.10所示的序列或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ IDNo.10所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述轻链FR3的氨基酸序列为SEQ ID No.11所示的序列或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.11所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述重链框架区包括重链FR1、FR2和FR3中的一种或多种，其中：所述重链FR1的氨基酸序列为SEQ ID No.12所示的序列或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.12所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述重链FR2的氨基酸序列为SEQ ID No.13所示的序列或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有与SEQID No.13所示序列同等功能的氨基酸序列；所述重链FR3的氨基酸序列为SEQ ID No.14或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.14所示序列具有同等功能的氨基酸序列。
进一步地，所述单克隆抗体(9Y5G6)中编码轻链可变区的核苷酸序列为SEQ IDNo.15所示的序列或该序列经替换、缺失或添加一个或多个核苷酸形成的与 SEQ ID No.15所示序列具有同等功能的核苷酸序列，所述单克隆抗体(9Y5G6) 中编码重链可变区的核苷酸序列为SEQ ID No.16所示的序列或该序列经替换、缺失或添加一个或多个核苷酸形成的与SEQ ID No.16所示序列具有同等功能的核苷酸序列。
根据本发明的一个方面，本发明提供了一种优选的抗HLA-G异构体分子 HLA-G5及HLA-G6的单克隆抗体(9Y5G6)，所述单克隆抗体(9Y5G6)由保藏编号为CCTCC NO:C202045的杂交瘤细胞株9Y5G6产生，保藏机构为：中国典型培养物保藏中心，保藏时间为2020年5月27日，中国典型培养物保藏中心的地址是中国湖北省武汉市武汉大学，邮编430072。
本发明还提供了所述抗HLA-G5及HLA-G6异构体分子抗体(9Y5G6)用于HLA-G 异构体分子HLA-G5及HLA-G6免疫组化及免疫印迹等检测的用途，具有特异性高，亲和力强等特点。
为更清楚了解本申请的发明构思和技术方案，下文将通过具体实施例和附图进一步解释本申请，其中关于实施方式中的技术方案仅是优选的实施方式，不应被解释为限制本申请的范围。对于本领域技术人员来说，在不脱离本申请的技术原理的前提下，还可以做出若干改进和调整，这些改进和调整也应视为落入本申请的保护范围之中。
除非另有定义，本文使用的所有科技术语应视为具有本领域普通技术人员所理解的相同含义。氨基酸残基的缩写是本领域中所用的指代20个常用氨基酸的标准3字母和/或1字母代码。
本发明中提及的轻链高变区或重链高变区，其中“高变区”又被称之为互补决定区(complementarity determining region，CDR)。
本发明中提及的“序列”可以指包含某些生物学功能等同的氨基酸序列或“保守性替代”，“其它序列”可以包含功能非等同的氨基酸或“非保守性替代”，其经基因工程改造以改进CDR或含CDR抗体的特性。在不实质性地影响抗体活性的前提下，本领域技术人员可以对本申请中的序列进行操作，即替换、添加和/或缺失一个或多个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或多个)氨基酸，以获得所述抗体或其功能性片段序列的变体。它们应被视为包括在本申请保护的范围内。例如，在可变区将具有类似性质的氨基酸进行替换。本发明中提及的变体的序列可以与其来源序列有至少有95％、96％、97％、98％或99％的一致性。序列一致性可以使用序列分析软件测量。例如使用缺省参数的计算机程序BLAST，尤其是BLASTP或TBLASTN。本文所述的多种氨基酸序列详见序列表。
附图说明
图1是所述抗体(9Y5G6)重链和轻链亚类鉴定。
图2是所述抗体(9Y5G6)SDS-PAGE检测抗体纯度检测。
图3是所述抗体(9Y5G6)ELISA法抗体亲和常数测定
图4是所述抗体(9Y5G6)ELISA法HLA-G5分子识别特异性检测
图5是所述抗体(9Y5G6)免疫印迹检测HLA-G5及HLA-G6分子识别特异性。
图6是所述抗体(9Y5G6)应用于免疫组化检测不同组织中HLA-G5及HLA-G6分子表达。其中，6.1是蜕膜组织HLA-G5及HLA-G6表达(100X)；6.2是癌旁胃组织HLA-G5及HLA-G6表达(100X)；6.3,6.4是胃癌组织HLA-G5及HLA-G6表达(400X)。
具体实施方式
1.抗HLA-G单克隆抗体(9Y5G6)制备
①抗原肽合成
合成HLA-G分子重链第229-319位氨基酸序列的抗原肽，SEQ No.17SKEGDGGIMSVRESRSLSEDL。
②小鼠免疫
初次免疫4只SPF级BALB/c雌性小鼠，60ug/只。第一次加强免疫小鼠，30ug/ 只。第二次加强免疫小鼠，30ug/只。第三次加强免疫小鼠，30ug/只。眼眶取血，测血清效价。用“G5-pep2(299-319aa)，SEQ No.17SKEGDGGIMSVRESRSLSEDL”包板，ELISA测定免疫小鼠效价。用“G5-pep2(299-319aa)”，2ug/ml，4℃包被过夜；2％牛奶，37℃封闭2h；血清从200倍开始2倍梯度稀释，空白对照(blank) 为PBS，阴性对照(negative)为阴性血清200倍稀释。融合前，用“G5-pep2(299-319aa)，SEQ No.17SKEGDGGIMSVRESRSLSEDL”免疫原50ug，冲击免疫小鼠。融合实验，取小鼠脾细胞与SP2/0细胞，采用PEG法进行融合，融合完细胞用半固体培养基(含HAT)进行筛选培养。
③单克隆细胞筛选
挑10板×93个细胞单克隆，培养于96孔细胞培养板(事先用胸腺细胞铺板，100ul/孔)。用“G5-pep2(299-319aa)，SEQ No.17SKEGDGGIMSVRESRSLSEDL”包板，用包被液稀释“G5-pep2(299-319aa)”，终浓度为2ug/ml，100ul/孔，4℃，过夜；后用洗液洗涤3次。2％牛奶封闭液封闭，200ul/孔，37℃孵箱，2h；后用洗液洗涤3次。加入一抗(细胞培养上清)、阴性对照(SP2/0培养上清)、空白对照(PBS)、阳性对照(阳性血清PBS 1000倍稀释)，均为100ul/孔，37℃孵箱，1h；后用洗液洗涤3次。加入PBS稀释20000倍的二抗，100ul/孔，37℃孵箱， 1h；取出后用洗液洗涤3次。显色，显色液100ul/孔，显色时间为5min左右。每孔加入50ul终止液终止。双波长(450，630)测吸光值。对挑选的克隆采用ELISA 方法，做第一次筛选，得到阳性杂交瘤细胞株。将阳性的细胞株，用“G5-pep2(299-319aa)，SEQNo.17SKEGDGGIMSVRESRSLSEDL”再次包板，采用 ELISA方法，做第二次筛选，得到阳性杂交瘤细胞株。经多次筛选后得到一株抗 HLA-G G5-pep2(299-319aa)，SEQNo.17SKEGDGGIMSVRESRSLSEDL片段的单克隆抗体，命名为9Y5G6(保藏编号为CCTCC NO:C202045)。
④抗HLA-G单克隆抗体(9Y5G6)亚类鉴定
将筛选出来的10株阳性细胞株进行亚类鉴定，用100mM PBS(pH7.4)稀释包被抗体至0.5ug/ml,每孔加0.1ml,4℃，过夜。PBS-T洗2次,每孔加入200ul封闭液，37℃孵育2h。PBS-T洗3次；每孔加入100ul杂交瘤上清，37℃孵育1h。PBS-T 洗3次；用封闭液1：10000(κ,λ)或1：20000(其它的)稀释的HRP标记的抗体0.1ml 每孔，分别加入适当的孔中，37℃孵育1h。PBS-T洗3次；每孔加50ul底物溶液， 10-20min内于双波长(450，630)测吸光值。抗体亚型再次用Thermo公司的小鼠抗体亚型快速鉴定法(Pierce Rapid Isotyping Kits–Mouse，Catalog”#26178)确定该细胞株产生的单抗亚型为重链为IgG1型，轻链为kappa (κ)型(图1)。
⑤抗体纯化
样本预处理：用相应的偶联缓冲液以1:3稀释，12000rpm 4℃离心10min，0.22 μm滤膜过滤，除去脂肪、细胞残渣及小颗粒物质。平衡：用10倍柱体积的相应偶联缓冲液平衡柱子，保持流速为1ml/min。上样：把样品注入柱子上端接口，收集流出液，保持流速为1ml/min。洗杂：用5倍柱体积的偶联缓冲液过柱，保持流速为1ml/min。洗脱：用5倍柱体积洗脱缓冲液洗脱抗体，收集于上述EP管中，保持流速为1ml/min。立即用1M pH9.0的Tris-Hcl缓冲液调整p H值至7.0。平衡：用10柱体积的偶联缓冲液平衡柱子回pH7.0，保持流速为1ml/min。透析：使用0.01M PBS缓冲液将抗体透析过夜，换液3次。
⑥SDS-PAGE检测抗体纯度
配置SDS-PAGE胶，分离胶的浓度为12％。样品制备：样品加上样缓冲液后沸水煮浴10min。上样：每孔10ul。跑胶：浓缩胶80V，30min；分离胶120V，60min。溴酚蓝前沿到达玻璃板底部时停止电泳，取出凝胶。染色与脱色：将凝胶浸入考马斯亮蓝染色液中，置摇床上缓慢震荡30min以上(染色时间需根据凝胶厚度适当调整)。取出凝胶在水中漂洗数次，再加入考马斯亮蓝脱色液、震荡。凝胶脱色至大致看清条带1h，完全脱色则需更换脱色液2～3次，震荡达24h以上。凝胶脱色后可通过ECL凝胶成像系统扫描记录。纯化后得到的抗体9Y5G6纯度>90％ (图2)。
⑦ELISA检测抗体的亲和常数测定
用包被液稀释抗原，SEQ No.17SKEGDGGIMSVRESRSLSEDL，终浓度为2ug/ml，100ul/孔，4℃，过夜；后用洗液洗涤2次。封闭液封闭，200ul/孔，37℃孵箱， 2h；后用洗液洗涤1次。纯化抗体从200倍开始2倍梯度稀释(PBS)，空白对照 (blank)为PBS，均为100ul/孔，37℃孵箱，1h；后用洗液洗涤3次。加入PBS 稀释20000倍的二抗，100ul/孔，37℃孵箱，1h；取出后用洗液洗涤3次。显色，显色液100ul/孔，显色时间为5-15min。每孔加入50ul终止液终止。双波长(450， 630)测吸光值，作图分析。根据Logistic拟合方程，Y＝A2+(A1-A2)/(1+(X/X0)n)。相关系数R2＝0.99017；A1＝1.156±0.1161；A2＝-1.9106±0.9406； X0＝1563958.277±12265524.912；n＝0.45166±0.20069。亲和常数≈150000×A/抗体浓度(A为1/2OD值所对应的抗体稀释倍数)，抗体9Y5G6的亲和常数为 1.5×1011L/mol(图3)。
⑧ELISA检测抗体(9Y5G6)对HLA-G5分子识别特异性
用包被液(0.1M,pH＝9.6NaHCO3)2倍梯度稀释HLA-G5蛋白，配置终浓度为分别为2.5ug/ml，1.25ug/ml，0.625ug/ml，0.312ug/ml及0.156ug/ml，以包被液为空白对照。100ul/孔包板，4℃，过夜；后用洗液洗涤2次。200ul/孔1％BSA 封闭，37℃孵箱，2h；后用洗液洗涤3次。
洗涤后，加终浓度为1.0ug/ml的纯化抗体(9Y5G6)，100ul/孔，37℃孵箱， 1h；后用洗液洗涤3次。加入PBS稀释20000倍的HRP-标记抗小鼠IgG二抗，100ul/ 孔，37℃孵箱，1h；取出后用洗液洗涤3次。显色，TMB显色液100ul/孔，显色时间为5-15min。每孔加入50ul终止液终止。波长(450)测吸光值，作图分析。结果显示，抗体(9Y5G6)特异性识别HLA-G5，且与HLA-G5浓度具有显著相关性 (R2＝0.9963；图4)。
二、应用实施例
实施例2.1.所述抗体(9Y5G6)免疫印迹检测HLA-G5及HLA-G6分子识别特异性。
将HLA-G异构体标准蛋白HLA-G1，HLA-G2，HLA-G3，HLA-G4，HLA-G5，HLA-G6和HLA-G7分子标准蛋白电转膜后，用5％去脂奶粉室温封闭4h，0.2％TBS(Teween-20 PBS)洗涤。加入所述抗体(9Y5G6)，检测其识别特异性，4℃孵育过夜，洗涤；加入HRP标记兔抗鼠IgG抗体,室温孵育30min，洗涤后，用Dako REALTM EnVisionTM检测系统(DAKO)孵育1-3min。结果显示：结果说明所述抗体(9Y5G6) 能特异性识别HLA-G5及HLA-G6标准蛋白，与其他HLA-G异构体分子不存在交叉反应(图5)。
实施例2.2.所述抗体(9Y5G6)应用于免疫组化检测不同组织中HLA-G5及 HLA-G6分子表达。
所取组织于10％-12％中性福尔马林固定，石蜡包埋。组织切片经烤片，脱蜡，水化及抗原修复等常规制片流程。组织上滴加适量1％BSA，其覆盖组织及组织边缘2mm，室温孵育10min进行封闭。滴加抗HLA-G5及HLA-G6异构体分子抗体(9Y5G6) (1mg/mL，1:500稀释)，4℃冰箱湿盒过夜(16-20h)。TBS缓冲液冲洗，滴加二抗(TBS稀释抗体羊抗鼠比例1：300)，37℃恒温箱孵育30min。TBS缓冲液冲洗，滴加显色剂DAB工作液，待组织显色完全后，将玻片置于流水中冲洗5min，蒸馏水浸泡5min。HE复染、脱水、透明、封片后，光学显微镜观察组织切片各视野情况，计数各视野中总细胞数和棕褐色着色的细胞数。棕褐色着色的细胞为HLA-G5 及HLA-G6分子阳性表达，根据细胞棕褐色着色深浅，判别HLA-G5及HLA-G6分子阳性强度(图6)。
序列表
<110> 台州恩泽医疗中心（集团）
<120> 一种抗HLA-G异构体抗体（9Y5G6）及用途
<160> 17
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 124
<212> PRT
<213> 杂交瘤(9Y5G6Hybridoma)
<400> 1
Gly Asp Ile Val Ile Thr Gln Asp Glu Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu
1 5 10 15
Gly Asp His Thr Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His
20 25 30
Ser Asn Gly His Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys
65 70 75 80
Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln
85 90 95
Ser Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Gly Ser Ile Phe
115 120
<210> 2
<211> 129
<212> PRT
<213> 杂交瘤(9Y5G6Hybridoma)
<400> 2
Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Phe Gly
20 25 30
Met Ala Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Met Gly Pro Glu Trp Val Ala
35 40 45
Ser Ile Ser Asn Leu Ala Arg Ile Ile Asp Tyr Ala Asp Thr Val Thr
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Glu Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Thr Thr Ile Val Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Lys Leu Val Tyr Pro Leu Ala
115 120 125
Pro
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> 杂交瘤(9Y5G6Hybridoma)
<400> 3
Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly His Thr Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 3
<212> PRT
<213> 杂交瘤(9Y5G6Hybridoma)
<400> 4
Lys Val Ser
1
<210> 5
<211> 9
<212> PRT
<213> 杂交瘤(9Y5G6Hybridoma)
<400> 5
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> 杂交瘤(9Y5G6Hybridoma)
<400> 6
Gly Phe Thr Phe Arg Asp Phe Gly
1 5
<210> 7
<211> 8
<212> PRT
<213> 杂交瘤(9Y5G6Hybridoma)
<400> 7
Ile Ser Asn Leu Ala Arg Ile Ile
1 5
<210> 8
<211> 10
<212> PRT
<213> 杂交瘤(9Y5G6Hybridoma)
<400> 8
Ala Arg Val Thr Thr Ile Val Pro Asp Tyr
1 5 10
<210> 9
<211> 27
<212> PRT
<213> 杂交瘤(9Y5G6Hybridoma)
<400> 9
Gly Asp Ile Val Ile Thr Gln Asp Glu Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu
1 5 10 15
Gly Asp His Thr Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser
20 25
<210> 10
<211> 17
<212> PRT
<213> 杂交瘤(9Y5G6Hybridoma)
<400> 10
Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
1 5 10 15
Tyr
<210> 11
<211> 36
<212> PRT
<213> 杂交瘤(9Y5G6Hybridoma)
<400> 11
Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly
20 25 30
Val Tyr Phe Cys
35
<210> 12
<211> 24
<212> PRT
<213> 杂交瘤(9Y5G6Hybridoma)
<400> 12
Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20
<210> 13
<211> 17
<212> PRT
<213> 杂交瘤(9Y5G6Hybridoma)
<400> 13
Met Ala Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Met Gly Pro Glu Trp Val Ala
1 5 10 15
Ser
<210> 14
<211> 38
<212> PRT
<213> 杂交瘤(9Y5G6Hybridoma)
<400> 14
Asp Tyr Ala Asp Thr Val Thr Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn
1 5 10 15
Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp
20 25 30
Ser Ala Ile Tyr Tyr Cys
35
<210> 15
<211> 372
<212> DNA
<213> 杂交瘤(9Y5G6Hybridoma)
<400> 15
ggtgatatcg tgataaccca ggatgaactc tccctgcctg tcagtcttgg agatcatacc 60
tccatctcgt gcagatctag tcagagcctt ctacacagta atggccacac ctatttacat 120
tggtaccaca gaagccaggc cagtctccaa agctcctgat ctacaaagtt tccaaccgat 180
tttctggggt cccagacagg ttcagtggca gtggatcagg gacagatttc acactcaaga 240
tcagcagagt ggagctgagg atctgggagt ttatttctgc tctcaaagta cacatgttcc 300
gtggacgttc ggtgggggca ccaaggtgga aatcaaacgg gctgatgctg caccaactgg 360
atccatcttc cc 372
<210> 16
<211> 387
<212> DNA
<213> 杂交瘤(9Y5G6Hybridoma)
<400> 16
ggtgcagctg caggagtcag ggggaggctt agtgcagcct ggagggtccc ggaaactctc 60
ctgcgcagcc tctggattca ctttccgtga cttcggaatg gcgtgggttc gacaggttcc 120
agggatgggc ctgaatgggt tgcatccatt agtaatttgg caagaattat cgactatgca 180
gacactgtga cgggccgatt caccatctct cgagagaatg ccaagaacac cctgtacctg 240
gaaatgaaca gtctaggtct gaggactcag ccatatacta ctgtgcgagg gttactacga 300
tagtaccgga ctactggggc caaggcacct ctctcaccgt ctcctcagcc aaaacgacac 360
ccaagcttgt ctatccactg gccctgg 387
<210> 17
<211> 21
<212> PRT
<213> 杂交瘤(9Y5G6Hybridoma)
<400> 17
Ser Lys Glu Gly Asp Gly Gly Ile Met Ser Val Arg Glu Ser Arg Ser
1 5 10 15
Leu Ser Glu Asp Leu
20

Claims (5)

1.一种抗HLA-G异构体分子HLA-G5及HLA-G6的单克隆抗体(9Y5G6)，所述单克隆抗体(9Y5G6)由保藏编号为CCTCC NO:C202045的杂交瘤细胞株9Y5G6产生。
2.一种抗HLA-G异构体分子HLA-G5及HLA-G6的单克隆抗体(9Y5G6)，其特征在于，所述单克隆抗体(9Y5G6)至少包括重链高变区CDR1、CDR2和CDR3中的一种或多种，或/和轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3中的一种或多种；
所述单克隆抗体(9Y5G6)抗体轻链的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.1所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述抗体轻链高变区CDR1的氨基酸序列为SEQ ID No.3所示的序列QSLLHSNGHTY或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.3所示的序列具有同等功能的氨基酸序列；所述轻链高变区CDR2的氨基酸序列为SEQ ID No.4所示的序列KVS或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.4所示的序列具有同等功能的氨基酸序列，和所述轻链高变区CDR3的氨基酸序列为SEQ ID No.5所示的序列SQSTHVPWT或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.5所示的序列具有同等功能的氨基酸序列；
所述单克隆抗体(9Y5G6)抗体重链的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.2所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述抗体重链高变区CDR1的氨基酸序列为SEQ ID No.6所示的序列GFTFRDFG或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.6所示的序列具有同等功能的氨基酸序列，所述重链高变区CDR2的氨基酸序列为SEQ ID No.7所示的序列ISNLARII或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.7所示序列具有同等功能的氨基酸序列，和所述重链高变区CDR3的氨基酸序列为SEQ ID No.8所示的序列ARVTTIVPDY或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.8所示的序列具有同等功能的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的一种抗HLA-G异构体分子HLA-G5及HLA-G6的单克隆抗体(9Y5G6)，其特征在于，所述单克隆抗体(9Y5G6)还包括轻链框架区(Framework region，FR)和重链框架区；其中，所述轻链框架区包括轻链FR1、FR2和FR3中的一种或多种，所述轻链FR1的氨基酸序列为SEQ ID No.9所示的序列或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.9所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述轻链FR2的氨基酸序列为SEQ ID No.10所示的序列或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ IDNo.10所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述轻链FR3的氨基酸序列为SEQ ID No.11所示的序列或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.11所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述重链框架区包括重链FR1、FR2和FR3中的一种或多种，其中：所述重链FR1的氨基酸序列为SEQ ID No.12所示的序列或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.12所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述重链FR2的氨基酸序列为SEQ ID No.13所示的序列或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有与SEQID No.13所示序列同等功能的氨基酸序列；所述重链FR3的氨基酸序列为SEQ ID No.14或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.14所示序列具有同等功能的氨基酸序列。
4.根据权利要求2所述的一种抗HLA-G异构体分子HLA-G5及HLA-G6的单克隆抗体(9Y5G6)，其特征在于，所述单克隆抗体(9Y5G6)中编码轻链可变区的核苷酸序列为SEQ IDNo.15所示的序列或该序列经替换、缺失或添加一个或多个核苷酸形成的与SEQ ID No.15所示序列具有同等功能的核苷酸序列，所述单克隆抗体(9Y5G6)中编码重链可变区的核苷酸序列为SEQ ID No.16所示的序列或该序列经替换、缺失或添加一个或多个核苷酸形成的与SEQ ID No.16所示序列具有同等功能的核苷酸序列。
5.权利要求1-5中任一项所述的抗HLA-G异构体分子HLA-G5及HLA-G6的单克隆抗体(9Y5G6)用于HLA-G5及HLA-G6免疫组化和免疫印迹的用途。
CN202010729416.2A 2020-07-27 2020-07-27 抗hla-g异构体分子hla-g5及hla-g6的单克隆抗体及其用途 Active CN113045656B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010729416.2A CN113045656B (zh) 2020-07-27 2020-07-27 抗hla-g异构体分子hla-g5及hla-g6的单克隆抗体及其用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010729416.2A CN113045656B (zh) 2020-07-27 2020-07-27 抗hla-g异构体分子hla-g5及hla-g6的单克隆抗体及其用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113045656A true CN113045656A (zh) 2021-06-29
CN113045656B CN113045656B (zh) 2022-03-08

Family

ID=76507632

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010729416.2A Active CN113045656B (zh) 2020-07-27 2020-07-27 抗hla-g异构体分子hla-g5及hla-g6的单克隆抗体及其用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113045656B (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114605543A (zh) * 2021-12-17 2022-06-10 台州恩泽医疗中心(集团) 一种抗hla-g异构体分子hla-g5及hla-g6的单克隆抗体及其用途
CN115894687A (zh) * 2022-03-31 2023-04-04 台州恩泽医疗中心(集团) 一种抗hla-g1，-g2，-g5及hla-g6异构体分子的单克隆抗体及其用途
WO2023077733A1 (zh) * 2021-11-04 2023-05-11 台州恩泽医疗中心(集团) 一种抗hla-g1、hla-g4及hla-g5异构体分子的单克隆抗体及其用途
WO2023184733A1 (zh) * 2022-03-31 2023-10-05 台州恩泽医疗中心(集团) 一种抗hla-g分子的单克隆抗体及其用途
WO2024011774A1 (zh) * 2022-07-15 2024-01-18 台州恩泽医疗中心(集团) 一种抗hla-g2及hla-g6分子的单克隆抗体及用途

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1224465A2 (en) * 1999-09-27 2002-07-24 Clifford L. Librach Detection of hla-g
CN1718588A (zh) * 2004-10-26 2006-01-11 四川新创生物科技有限公司 抗hla－g的单克隆抗体及分泌它的杂交瘤细胞株、癌症诊断方法、诊断试剂盒及其应用
EP2730588A1 (en) * 2012-11-12 2014-05-14 Intelectys Antibodies and fragments thereof raised against the alpha-3 domain of HLA-G protein, methods and means for their preparation, and uses thereof
CN109563169A (zh) * 2016-06-03 2019-04-02 英韦克泰斯公司 抗hla-g特异性抗体
CN109952318A (zh) * 2016-11-18 2019-06-28 豪夫迈·罗氏有限公司 抗hla-g抗体及其用途

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1224465A2 (en) * 1999-09-27 2002-07-24 Clifford L. Librach Detection of hla-g
CN1718588A (zh) * 2004-10-26 2006-01-11 四川新创生物科技有限公司 抗hla－g的单克隆抗体及分泌它的杂交瘤细胞株、癌症诊断方法、诊断试剂盒及其应用
EP2730588A1 (en) * 2012-11-12 2014-05-14 Intelectys Antibodies and fragments thereof raised against the alpha-3 domain of HLA-G protein, methods and means for their preparation, and uses thereof
CN109563169A (zh) * 2016-06-03 2019-04-02 英韦克泰斯公司 抗hla-g特异性抗体
CN109952318A (zh) * 2016-11-18 2019-06-28 豪夫迈·罗氏有限公司 抗hla-g抗体及其用途

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023077733A1 (zh) * 2021-11-04 2023-05-11 台州恩泽医疗中心(集团) 一种抗hla-g1、hla-g4及hla-g5异构体分子的单克隆抗体及其用途
CN114605543A (zh) * 2021-12-17 2022-06-10 台州恩泽医疗中心(集团) 一种抗hla-g异构体分子hla-g5及hla-g6的单克隆抗体及其用途
CN114605543B (zh) * 2021-12-17 2023-11-07 台州恩泽医疗中心(集团) 一种抗hla-g异构体分子hla-g5及hla-g6的单克隆抗体及其用途
CN115894687A (zh) * 2022-03-31 2023-04-04 台州恩泽医疗中心(集团) 一种抗hla-g1，-g2，-g5及hla-g6异构体分子的单克隆抗体及其用途
WO2023184733A1 (zh) * 2022-03-31 2023-10-05 台州恩泽医疗中心(集团) 一种抗hla-g分子的单克隆抗体及其用途
WO2023184734A1 (zh) * 2022-03-31 2023-10-05 台州恩泽医疗中心(集团) 一种抗hla-g1，-g2，-g5及hla-g6异构体分子的单克隆抗体及其用途
CN115894687B (zh) * 2022-03-31 2024-06-07 台州恩泽医疗中心(集团) 一种抗hla-g1，-g2，-g5及hla-g6异构体分子的单克隆抗体及其用途
WO2024011774A1 (zh) * 2022-07-15 2024-01-18 台州恩泽医疗中心(集团) 一种抗hla-g2及hla-g6分子的单克隆抗体及用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN113045656B (zh) 2022-03-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113045656B (zh) 抗hla-g异构体分子hla-g5及hla-g6的单克隆抗体及其用途
JP7215759B2 (ja) ４－１ｂｂ抗体およびその製造方法と使用
CN110914304B (zh) Cd96抗体、其抗原结合片段及医药用途
CN111378043B (zh) 一种具有中和作用的人鼠嵌合抗Siglec-15全分子IgG及其制备方法和应用
CN112661842B (zh) 一种抗Ki-67特异性单克隆抗体及其应用
CN111995682B (zh) 抗人SIRPα单克隆抗体及其用途
WO2023109061A1 (zh) 一种抗hla-g异构体分子hla-g5及hla-g6的单克隆抗体及其用途
CN112442123B (zh) 抗cd47的单克隆抗体及其用途
CN112010979B (zh) 一种抗人SIRPα单克隆抗体及其用途
CN113444181B (zh) 抗kl-6双特异性抗体及基因、重组载体、药物、试剂盒
CN112480250B (zh) 一种抗人骨桥蛋白的抗体及其应用
CN112646037B (zh) 一种抗cd105特异性单克隆抗体及其应用
CN110606892B (zh) 一种高亲和力高生物活性的lag-3抗体及其应用
CN114656566B (zh) 一种靶向cd47的抗体及其应用
CN113480646B (zh) 特异性结合h1.4移码突变蛋白的单克隆抗体制备及其应用
CN115894687B (zh) 一种抗hla-g1，-g2，-g5及hla-g6异构体分子的单克隆抗体及其用途
EP4428152A1 (en) Monoclonal antibody against hla-g1, hla-g4 and hla-g5 isomer molecules and use thereof
CN113004406B (zh) 抗cd47抗体及其应用
WO2024011774A1 (zh) 一种抗hla-g2及hla-g6分子的单克隆抗体及用途
WO2023184733A1 (zh) 一种抗hla-g分子的单克隆抗体及其用途
CN111434686B (zh) 一种抗人pbx1单克隆抗体，其制备方法及其在复发性流产临床诊断中的用途
CN114957468A (zh) 一种抗Siglec15抗体及其用途
CN110540591A (zh) 一种抗糖蛋白A33（Glycoprotein A33）单克隆抗体及其免疫检测应用
CN117088981B (zh) 抗b7-h3的单链抗体
CN117567625A (zh) 一种抗Claudin18.2单克隆抗体及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant