CN113040271A - 一种卵黄抗体饲料添加粉剂的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种卵黄抗体饲料添加粉剂的制备方法及其应用，特点是包括以下步骤：(1)将高免蛋洗干净消毒后，用鸡蛋分离器将蛋清蛋黄分离，卵黄搅拌均匀后制得卵黄液；(2)将卵黄液与酸性白土按重量比1:2‑8或者卵黄液与玉米粉按重量比1:2‑8进行混合，充分混匀；(3)在步骤(2)的得到的混合液中添加山梨酸钾搅拌均匀；(4)将步骤(3)得到的混合物置于烘箱中，于50℃干燥3‑5h，即得到卵黄抗体饲料添加粉剂，优点是水分含量低、抗体效价保持不变且制备方法简便易行。
Description
技术领域
本发明涉及一种卵黄抗体的制备方法，尤其是涉及一种卵黄抗体饲料添加粉剂的制备方法及其应用。
背景技术
卵黄免疫球蛋白(Immunoglobulin of Yolk，简称IgY)，又称卵黄抗体。当用特定抗原免疫产蛋母鸡后，鸡血清中可产生并迅速转移和积累(15d左右)于卵黄大量相应的特异性多克隆抗体IgY。IgY分子结构独特，性质稳定，功能多样，已被广泛应用于免疫检测、生化检测以及人类食品(主婴幼儿食品)、化妆品等领域。此外，IgY还是一种新型饲料添加剂，已用作促进畜禽生长、繁殖和防治疾病(主消化道疾病)，克服了饲料中添加抗生素或某些化学合成药物所引起的药物残留和耐药性问题。IgY因价廉，见效快，生产工艺简便，具有绿色、安全、环保价值，极具社会、经济、环保意义，作为一种理想的绿色饲料添加剂已被广大畜牧工作者接受，并得到了广泛的应用，取得了较好的效果。目前食品工业领域使用的蛋黄粉或全蛋粉，均是采用简单的加工稀释或添加环糊精、酪蛋白钠等被覆剂，经冷冻干燥或喷雾干燥制得，其制品因磷脂和类脂蛋白极易氧化，致使配制的食品很容易劣化变质。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种水分含量低、抗体效价保持不变且制备方法简便易行的卵黄抗体饲料添加粉剂的制备方法及其应用。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种卵黄抗体饲料添加粉剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将高免蛋洗干净消毒后，用鸡蛋分离器将蛋清蛋黄分离，卵黄搅拌均匀后制得卵黄液；
(2)将卵黄液与酸性白土按重量比1:2-8或者卵黄液与玉米粉按重量比1:2-8进行混合，充分混匀；
(3)在步骤(2)的得到的混合液中添加山梨酸钾搅拌均匀；
(4)将步骤(3)得到的混合物置于烘箱中，于50℃干燥3-5h，即得到卵黄抗体饲料添加粉剂。
优选的，所述的山梨酸钾的添加剂量为0.2～1.0g/kg酸性白土重量或玉米粉重量。
上述卵黄抗体饲料添加粉剂在饲料中的添加量为1％-3％。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明一种卵黄抗体饲料添加粉剂的制备方法，采用的酸性白土为天然漂白土，主要化学成分是三氧化二铝、二氧化硅、水及少量铁、镁、钙等，无可塑性，有较高吸附性，用于吸附蛋黄中的水分，通过一步即得到卵黄抗体饲料添加粉剂，经烘箱50℃干燥3、4、5h，分别测水分，水分含量均小于10％；与冷冻干燥的粉中的抗体准效价进行比较，效价基本不变，说明该方法简便易行。
附图说明
图1为间接ELISA法检测抗草鱼IL-1β卵黄抗体与不同比例玉米粉预混并干燥5h后的混合物中抗体效价检测结果；注：A为抗草鱼IL-1β高免鸡蛋的蛋黄液，作阳性对照；B-E为抗草鱼IL-1β高免鸡蛋的蛋黄液与不同比例玉米粉的混合物溶解液，稀释度B为1:2，C为1:4，D为1:6，E为1:8；F为抗草鱼IL-1β高免鸡蛋蛋黄冻干粉溶解液，作阳性对照；G为PBS，作空白对照；H为玉米粉溶解液，作阴性对照；
图2为间接ELISA法检测抗草鱼IL-1β卵黄抗体与不同比例酸性白土预混并干燥5h后的混合物中抗体效价检测结果。注：A为抗草鱼IL-1β高免鸡蛋的蛋黄液，作阳性对照；B-E为抗草鱼IL-1β高免鸡蛋的蛋黄液与不同比例酸性白土的混合物溶解液，稀释度B为1:2，C为1:4，D为1:6，E为1:8；F为抗草鱼IL-1β高免鸡蛋蛋黄冻干粉溶解液，作阳性对照；G为PBS，作空白对照；H为酸性白土粉溶解液，作阴性对照；
图3为间接ELISA法检测抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)卵黄抗体与不同比例玉米粉预混并干燥5h后的混合物中抗体效价检测结果。注：A为抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)高免鸡蛋的蛋黄液，作阳性对照；B-E为抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)高免鸡蛋的蛋黄液与不同比例玉米粉的混合物溶解液，稀释度B为1:2，C为1:4，D为1:6，E为1:8；F为抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)高免鸡蛋的蛋黄液蛋黄冻干粉溶解液，作阳性对照；G为PBS，作空白对照；H为玉米粉溶解液，作阴性对照；
图4为间接ELISA法检测抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)卵黄抗体与不同比例酸性白土粉预混并干燥5h后的混合物中抗体效价检测结果；注：A为抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)高免鸡蛋的蛋黄液，作阳性对照；B-E为抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)高免鸡蛋的蛋黄液与不同比例玉酸性白土粉的混合物溶解液，稀释度B为1:2，C为1:4，D为1:6，E为1:8；F为抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)高免鸡蛋的蛋黄液蛋黄冻干粉溶解液，作阳性对照；G为PBS，作空白对照；H为酸性白土粉溶解液，作阴性对照。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
具体实施例一
实施例1
一种卵黄抗体饲料添加粉剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将高免蛋洗干净消毒后，用鸡蛋分离器将蛋清蛋黄分离，卵黄搅拌均匀后制得卵黄液；
2)将卵黄液与玉米粉按重量比1:2进行混合，充分混匀；
3)按照酸性白土重量或玉米粉重量添加山梨酸钾，剂量为0.2～1.0g/kg，搅拌均匀；
4)将步骤3)得到的混合物置于烘箱中，于50℃干燥3-5h，即得到卵黄抗体饲料添加粉剂。
实施例2
同上述实施例1，其区别在于：将卵黄液与玉米粉按重量比1:4进行混合。
实施例3
同上述实施例1，其区别在于：将卵黄液与玉米粉按重量比1:6进行混合。
实施例4
同上述实施例1，其区别在于：将卵黄液与玉米粉按重量比1:8进行混合。
实施例5
同上述实施例1，其区别在于：将卵黄液与酸性白土按重量比1:2进行混合。
实施例6
同上述实施例1，其区别在于：将卵黄液与酸性白土按重量比1:4进行混合。
实施例7
同上述实施例1，其区别在于：将卵黄液与酸性白土按重量比1:6进行混合。
实施例8
同上述实施例1，其区别在于：将卵黄液与酸性白土按重量比1:8进行混合。
具体实施例二
将上述各实施例制备得到的卵黄抗体饲料添加粉剂放入烘箱50℃干燥，分别在干燥2h、3h、4h、5h后取出，分别检测其水分含量。结果见表1-表2，结果是各组混合物50℃干燥3-5h，符合预混合添加剂的生产要求。
表1蛋黄液与不同比例玉米粉混合干燥后的水分含量
表2蛋黄液与不同比例酸性白土粉混合干燥后的水分含量
具体实施例三
将上述具体实施例二中水分含量<10％，同时干燥时间最长组混合物采用间接ELISA方法检测抗体效价。
1、抗体的处理：
1)取抗草鱼IL-1β高免鸡蛋、抗鲫鱼鳃出血病病毒CyHV-2(ORF72、ORF66、ORF81、ORF82)串联基因的卵黄抗体高免鸡蛋和普通鸡蛋，将鸡蛋清洗消毒，用蛋黄蛋清分离器分离蛋黄，充分混匀；称取一定量的卵黄抗体液加入含1％脱脂奶粉的TBS(pH 7.4)，涡旋振荡充分混匀，使卵黄抗体液稀释倍数为1：100。
2)取少量冷冻干燥后的抗草鱼IL-1β、抗鲫鱼鳃出血病病毒CyHV-2(ORF72、ORF66、ORF81、ORF82)串联基因的高免卵黄抗体粉加入含1％脱脂奶粉的TBS(pH 7.4)中，涡旋振荡充分混匀，使此溶液的稀释倍数等同于卵黄抗体液1：100的稀释倍数。
3)将干燥5h(最长)的卵黄抗体预混合粉剂按照混入的卵黄抗体液量用含1％脱脂奶粉的TBS(pH 7.4)稀释成等同于卵黄抗体液1：100的稀释倍数。
4)将上述各组溶液用含1％脱脂奶粉的TBS(pH 7.4)按照1:2000、1:4000、1:8000、1:16000、1:32000倍比稀释，作为一抗。
2、间接ELISA法检测
饲料添加剂级的卵黄抗体预混合粉剂中抗体效价采用间接ELISA法测定，即分别抗草鱼IL-1β重组蛋白、鲫鱼鳃出血病病毒CyHV-2串联基因的重组蛋白为包被抗原。分别以1:2000、1:4000、1:8000、1:16000、1:32000等不同稀释度的抗草鱼IL-1β、抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)的卵黄抗体预混合粉的溶解液作为一抗，以1：2000稀释的HRP羊抗鸡IgY为二抗进行抗体效价的检测。并以抗草鱼IL-1β高免鸡蛋、抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)的高免蛋黄液及其冻干粉溶解液倍比稀释液为阳性对照，以普通蛋黄液(1:2000稀释)作为阴性对照，并以玉米粉或酸性白土溶解液作阴性对照，以PBS为空白对照。使用酶标仪测定波长490nm处吸光值。判定标准为：P/N＝(待测OD值-空白对照OD值)/(阴性对照OD值-空白对照OD值)，当P/N≥2.1时抗体最大稀释度即为抗体效价。结果分别见图1-图4。
图1为间接ELISA法检测抗草鱼IL-1β卵黄抗体与不同比例玉米粉预混并干燥5h后的混合物中抗体效价检测结果；注：A为抗草鱼IL-1β高免鸡蛋的蛋黄液，作阳性对照；B-E为抗草鱼IL-1β高免鸡蛋的蛋黄液与不同比例玉米粉的混合物溶解液，稀释度B为1:2，C为1:4，D为1:6，E为1:8；F为抗草鱼IL-1β高免鸡蛋蛋黄冻干粉溶解液，作阳性对照；G为PBS，作空白对照；H为玉米粉溶解液，作阴性对照。图1结果说明以1:2-1:8的比例混合至玉米粉，50℃干燥5h后的添加剂中的抗草鱼IL-1β卵黄抗体的效价与卵黄抗体原液、冻干粉的完全一致，均为1:16000，没有损耗，证明这种方法可靠。
图2为间接ELISA法检测抗草鱼IL-1β卵黄抗体与不同比例酸性白土预混并干燥5h后的混合物中抗体效价检测结果。注：A为抗草鱼IL-1β高免鸡蛋的蛋黄液，作阳性对照；B-E为抗草鱼IL-1β高免鸡蛋的蛋黄液与不同比例酸性白土的混合物溶解液，稀释度B为1:2，C为1:4，D为1:6，E为1:8；F为抗草鱼IL-1β高免鸡蛋蛋黄冻干粉溶解液，作阳性对照；G为PBS，作空白对照；H为酸性白土溶解液，作阴性对照。图2结果说明以1:2-1:8的比例混合至酸性白土，50℃干燥5h后混合物中的抗草鱼IL-1β的卵黄抗体的效价与卵黄抗体原液、冻干粉的完全一致，均为1:16000，没有损耗，证明这种方法可靠。
图3为间接ELISA法检测抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)卵黄抗体与不同比例玉米粉预混并干燥5h后的混合物中抗体效价检测结果。注：A为抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)高免鸡蛋的蛋黄液，作阳性对照；B-E为抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)高免鸡蛋的蛋黄液与不同比例玉米粉的混合物溶解液，稀释度B为1:2，C为1:4，D为1:6，E为1:8；F为抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)高免鸡蛋的蛋黄液蛋黄冻干粉溶解液，作阳性对照；G为PBS，作空白对照；H为玉米粉溶解液，作阴性对照。图3结果说明结果以1:2-1:8的比例混合至酸性白土或玉米粉，50℃干燥5h后的混合物中的抗鲫鱼鳃出血病病毒的卵黄抗体效价与卵黄抗体原液、冻干粉的完全一致，均为1:16000，没有损耗，证明这种方法可靠。
图4为间接ELISA法检测抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)卵黄抗体与不同比例酸性白土粉预混并干燥5h后的混合物中抗体效价检测结果；注：A为抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)高免鸡蛋的蛋黄液，作阳性对照；B-E为抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)高免鸡蛋的蛋黄液与不同比例玉酸性白土粉的混合物溶解液，稀释度B为1:2，C为1:4，D为1:6，E为1:8；F为抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)高免鸡蛋的蛋黄液蛋黄冻干粉溶解液，作阳性对照；G为PBS，作空白对照；H为酸性白土溶解液，作阴性对照。图4结果说明以1:2-1:8的比例混合至酸性白土，50℃干燥5h后的混合物中的抗鲫鱼鳃出血病病毒(CyHV-2)的效价与卵黄抗体原液、冻干粉的完全一致，均为1:16000，没有损耗，证明这种方法可靠。
综上所述，以1:2-1:8的比例混合至酸性白土或玉米粉，50℃干燥5h后，抗草鱼IL-1β、抗鲫鱼鳃出血病病毒的卵黄抗体的效价与卵黄抗体原液、冻干粉的完全一致，均为1:16000，没有损耗，证明这种方法可靠。
上述说明并非对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例。本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内，做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围。
Claims (3)
1.一种卵黄抗体饲料添加粉剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将高免蛋洗干净消毒后，用鸡蛋分离器将蛋清蛋黄分离，卵黄搅拌均匀后制得卵黄液；
(2)将卵黄液与酸性白土按重量比1:2-8或者卵黄液与玉米粉按重量比1:2-8进行混合，充分混匀；
(3)在步骤(2)的得到的混合液中添加山梨酸钾搅拌均匀；
(4)将步骤(3)得到的混合物置于烘箱中，于50℃干燥3-5h，即得到卵黄抗体饲料添加粉剂。
2.根据权利要求1所述的一种卵黄抗体饲料添加粉剂的制备方法，其特征在于：所述的山梨酸钾的添加剂量为0.2～1.0g/kg酸性白土重量或玉米粉重量。
3.一种根据权利要求1所述的卵黄抗体饲料添加粉剂的应用，其特征在于：权利要求1-2中任一项制备的卵黄抗体饲料添加粉剂在饲料中的添加量为1％-3％。
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