CN113023902A - 一种通过脱氮副球菌和希瓦氏菌共培养促进六价铬去除的方法 - Google Patents

一种通过脱氮副球菌和希瓦氏菌共培养促进六价铬去除的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种通过脱氮副球菌和希瓦氏菌共培养促进六价铬去除的方法。所述方法包括预先在有氧条件下用灭菌LB培养基分别培养脱氮副球菌和希瓦氏菌到OD600为2～4；并配置反硝化培养基；向厌氧瓶中加入50～100mL的所述反硝化培养基，接着向所述厌氧瓶中加入待处理的六价铬溶液、灭过菌的50μl10～100g/L的CaCl2母液，再将预先培养好的脱氮副球菌接种到所述厌氧瓶中，确定初始接菌量为OD600＝0.02～0.08；再接种希瓦氏菌，确定初始接菌量为OD600＝0.04～0.20；氮气吹扫5～10min去除氧气；密封所述厌氧瓶，以还原所述待处理的六价铬溶液得到铬金属。本方法具有操作条件操作简单、绿色环保无二次污染、成本低廉、对重金属离子的降解效率高等优点。

Description

一种通过脱氮副球菌和希瓦氏菌共培养促进六价铬去除的 方法
技术领域
本发明属于生物降解重金属的技术领域，具体涉及一种通过脱氮副球菌和希瓦氏菌共培养促进六价铬去除的方法。
背景技术
铬以多种价态形式存在，最常见的是三价和六价化合物，三价化合物是人体必需微量元素，六价铬活性高，溶解度大，有毒，其毒性是三价铬的100倍。六价铬为吞入性毒物/吸入性毒物，皮肤接触可能导致敏感，不仅易在体内蓄积，更可能造成遗传性基因缺陷，对环境有持久危险性。摄入超大剂量的铬会导致肾脏和肝脏的损伤、恶心、胃肠道刺激、胃溃疡、痉挛甚至死亡，长期接触可引发癌症，六价铬是已知的肺癌发病率相关的人类致癌物。铬作为重要的工业原料，它在工业废水中广泛存在，因此废水六价铬去除问题备受关注。针对化学法去除六价铬存在成本高及二次污染严重、常见的微生物还原去除六价铬方法效率低等问题。针对这些问题，提供一种安全环保，降解效率高的微生物促进微生物还原六价铬的方法十分重要。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种通过脱氮副球菌和希瓦氏菌共培养促进六价铬去除的方法，该方法利用向脱氮副球菌生物还原六价铬的系统加入希瓦氏菌，并通过控制两种微生物比例、碳氮比、温度及pH，显著提高六价铬的微生物还原效率。
为实现上述目的，本发明提供一种通过脱氮副球菌和希瓦氏菌共培养促进六价铬去除的方法，所述方法包括以下步骤：预先在有氧条件下用灭菌LB培养基分别培养脱氮副球菌和希瓦氏菌到OD600为2～4；并配置反硝化培养基：0.5～0.8g/L NH4Cl，0.1～0.8g/LMgSO4，2.0～3.2g/L KH2PO4，4.0～5.6g/L Na2HPO4，2.0～2.8g/L KNO3，7～13mg/L六价铬离子溶液，微量元素1～3mL；加入4.0～6.0mL/L乳酸钠，用NaOH和HCl调节体系的pH；110～150℃下灭菌15～30min；向厌氧瓶中加入50～100mL的所述反硝化培养基，接着向所述厌氧瓶中加入待处理的六价铬溶液、灭过菌的50μl 10～100g/L的CaCl2母液，再将预先培养好的脱氮副球菌接种到所述厌氧瓶中，确定初始接菌量为OD600＝0.02～0.08；再接种希瓦氏菌，确定初始接菌量为OD600＝0.04～0.20；氮气吹扫5～10min去除氧气；密封所述厌氧瓶，以还原所述待处理的六价铬溶液得到铬金属；其中，所述微量元素的构成为：2.0～3.0g/LFeSO4·7H2O、6.5～7.6g/L Na2-EDTA、0.2～0.4g/L Na2MoO4·2H2O、0.01～0.03g/LMnCl2·4H2O、0.3～0.5g/L ZnCl2、0.01～0.03g/L CaCl2和0.1～0.4g/L CuCl2·2H2O。
在本发明公开的一具体实施例中，所述反硝化培养基为：0.5g/L NH4Cl 0.1g/LMgSO4，2.44g/L KH2PO4，4.65g/L Na2HPO4，2.16g/L KNO3，10mg/L六价铬离子溶液，微量元素1mL，微量元素构成:2.50g/L FeSO4·7H2O、7.30g/L Na2-EDTA、0.242g/L Na2MoO4·2H2O、0.02g/L MnCl2·4H2O、0.34g/L ZnCl2、0.02g/L CaCl2和0.135g/L CuCl2·2H2O；加入4.85mL/L乳酸钠。
在本发明公开的一具体实施例中，所述脱氮副球菌和希瓦氏菌的接种比为1:(1～5)。
在本发明公开的一具体实施例中，用所述NaOH和HCl调节体系的pH为7.0～8.0。
在本发明公开的一具体实施例中，所述脱氮副球菌和希瓦氏菌的接种比为1:2、体系中的碳氮比为5、pH为7.4、培养的温度为30℃。
在本发明公开的一具体实施例中，所述乳酸钠是所述脱氮副球菌和希瓦氏菌的碳源。
在本发明公开的一具体实施例中，所述待处理的六价铬溶液为无菌膜过滤后的六价铬溶液。
在本发明公开的一具体实施例中，所述待处理的六价铬溶液的溶液浓度为8～30mg/L。
如上所述，本发明提供了一种通过脱氮副球菌和希瓦氏菌共培养促进六价铬去除的方法，利用脱氮副球菌(S.oneidensis MR-1)和希瓦氏菌(P.denitrificans)微生物之间的相互作用，并控制厌氧反应体系中两种微生物的接种比、碳氮比、温度和pH，显著提高六价铬微生物还原功能，降低六价铬的毒性且成本低，无二次污染。此外，本发明通过优化厌氧反应体系，可以进一步提高重金属高价态还原以及厌氧反应效率，其中，当厌氧反应体系中P.denitrificans和S.oneidensis MR-1的接种比为1:2、碳氮比为5、温度为30℃、pH 7.4时，六价铬还原效率最高。本发明提供的方法制备过程操作简单、绿色环保无二次污染、成本低廉、对重金属离子的降解效率高，广泛的运用在重金属污染的水体环境中。
附图说明
图1是S.oneidensis MR-1、P.denitrificans，以及S.oneidensis MR-1、P.denitrificans混合菌还原六价铬的溶液外观视图。
图2是实施例1中六价铬浓度随时间变化曲线图。
具体实施方式
以下通过特定的具体实施例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。需说明的是，在不冲突的情况下，以下实施例及实施例中的特征可以相互组合。还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或者按照各制造商所建议的条件。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
本发明提供了本发明提供了一种通过脱氮副球菌和希瓦氏菌共培养促进六价铬去除的方法，利用脱氮副球菌(S.oneidensis MR-1)和希瓦氏菌(P.denitrificans)微生物之间的相互作用，并控制厌氧反应体系中两种微生物的接种比、碳氮比、温度和pH，显著提高六价铬微生物还原功能，降低六价铬的毒性且成本低，无二次污染。
六价铬还原形成的沉淀物分布于细胞的内、外部，通过本发明中提供的两种微生物在混合培养体系中较单独培养体系细胞膜完整度更高、细胞表面更平滑、畸形细胞更少、亲水性增加，且微生物胞外聚合物中蛋白质、多糖等含量有所增加，使得细胞更容易与水环境中的物质发生反应，且蛋白质和多糖对细胞产生的保护作用增强。此外，本发明中的混菌体系中具备Cr(VI)还原能力的亚硝酸盐还原酶活性较单菌体系有所提高，以单独培养的脱氮副球菌体系作为对照，两种菌混合培养时，NADH/NAD+值是对照组的293.6％，总电子传递活力是对照组的2.37倍，细胞色素C的产生量为脱氮副球菌纯培养体系4.576nmol/g、希瓦氏菌纯培养体系6.387nmol/g、共培养体系9.958nmol/g。当两种菌共培养时，体系内的细胞色素C含量是对照组的2.18倍，提高了118.0％。通过核黄素的检测，发现在混合培养的体系中，脱氮副球菌的存在对希瓦氏菌产核黄素也产生了促进作用，由于希瓦氏菌的量少，产生的促进作用对六价铬的去除贡献量小于脱氮副球菌，混菌体系仍然主要是脱氮副球菌起主要作用。
下面通过实施例子，进一步阐述本发明的特点，但不对本发明的权利要求做任何限定。
实施例1：
预先在有氧条件下用灭菌的LB培养基分别培养反应微生物P.denitrificans(美国模式培养物集存库，菌种编号为ATCC 19367，下同)和S.oneidensis MR-1(美国模式培养物集存库，菌种编号为ATCC 700550，下同)到OD600为2；配制反硝化培养基0.5g/L NH4Cl，0.1g/L MgSO4，2.44g/L KH2PO4，4.65g/L Na2HPO4，2.16g/L KNO3，10mg/L Cr(VI)，微量元素1mL，微量元素构成:2.50g/L FeSO4·7H2O、7.30g/L Na2-EDTA、0.242g/L Na2MoO4·2H2O、0.02g/L MnCl2·4H2O、0.34g/L ZnCl2、0.02g/L CaCl2和0.135CuCl2·2H2O；加入4.85mL/L乳酸钠，设置碳氮比为5，用NaOH和HCl调节体系的pH为7.4；121℃下灭菌15min；
设置3组体系，分别为单独的脱氮副球菌(空白组)，单独的希瓦氏菌(空白组)，两种菌混合培养(实验组)，且每一组中设置3个平行试验，每个试验通过厌氧瓶进行。向厌氧瓶中加入50mL的所述反硝化培养基，接着将经过0.22μm无菌膜过滤后的配置好的六价铬溶液加入厌氧瓶中，并使反硝化培养基内六价铬初始浓度为10mg/L，向每个厌氧瓶中加入灭过菌的50μl 20g/L的CaCl2母液。将预先培养好的反应微生物P.denitrificans接种到上述厌氧反应培养基中，确定初始接菌量为OD600＝0.04；再接种S.oneidensis MR-1，确定初始接菌量为OD600＝0.08，使P.denitrificans和S.oneidensis MR-1的接种量比为1:2；反应微生物P.denitrificans和S.oneidensis MR-1单独接种到反应培养基作为对照，鼓吹N25min去除氧气，采用丁基橡胶隔膜和铝盖密封，将厌氧瓶置于摇床上，在30℃下进行厌氧反应培养，如图1所示。
实验组和空白组中硝酸盐浓度随时间的变化如图2所示、结果表明，相比P.denitrificans和S.oneidensis MR-1单独培养的厌氧反应体系，S.oneidensis MR-1和P.denitrificans共同培养的厌氧反应体系的重金属六价铬还原效率提高了50％。
实施例2：
设置碳氮比为8，用NaOH和HCl调节体系的pH为8.0，使P.denitrificans和S.oneidensis MR-1的接种体积比为1：3。其它操作同实施例1，在28℃下进行厌氧反应培养。
结果表明，相比P.denitrificans和S.oneidensis MR-1单独培养的厌氧反应体系，S.oneidensis MR-1和P.denitrificans共同培养的厌氧反应体系的重金属六价铬还原效率提高了39％。
实施例3：
设置碳氮比为1，用NaOH和HCl调节体系的pH为6.0，使P.denitrificans和S.oneidensis MR-1的接种体积比为1：4。其它操作同实施例1，在35℃下进行厌氧反应培养。
结果表明，相比P.denitrificans和S.oneidensis MR-1单独培养的厌氧反应体系，S.oneidensis MR-1和P.denitrificans共同培养的厌氧反应体系的重金属六价铬还原效率提高了28％。
实施例4：
设置碳氮比为6，用NaOH和HCl调节体系的pH为9.0，使P.denitrificans和S.oneidensis MR-1的接种体积比为1：2。其它操作同实施例1，将厌氧瓶置于摇床上，在33℃下进行厌氧反应培养。
结果表明，相比P.denitrificans和S.oneidensis MR-1单独培养的厌氧反应体系，S.oneidensis MR-1和P.denitrificans共同培养的厌氧反应体系的重金属六价铬还原效率提高了32％。
实施例5：
设置碳氮比为9，用NaOH和HCl调节体系的pH为7.4，使P.denitrificans和S.oneidensis MR-1的接种体积比为1：5。其它操作同实施例1，在28℃下进行厌氧反应培养。
结果表明，相比P.denitrificans和S.oneidensis MR-1单独培养的厌氧反应体系，S.oneidensis MR-1和P.denitrificans共同培养的厌氧反应体系的重金属六价铬还原效率提高了27％。
对比例1：
预先在有氧条件下用灭菌的LB培养基分别培养反应微生物P.denitrificans(美国模式培养物集存库，菌种编号为ATCC 19367)和G.sulfurrenducens(国模式培养物集存库，菌种编号为ATCC51573)到OD600为2；配制培养基0.5g/L NH4Cl，0.1g/L MgSO4，2.44g/LKH2PO4，4.65g/L Na2HPO4，2.16g/L KNO3，10mg/L Cr(VI)，微量元素1mL，微量元素构成(g/L):FeSO4·7H2O(2.50)、Na2-EDTA(7.30)、Na2MoO4·2H2O(0.242)、MnCl2·4H2O(0.02)、ZnCl2(0.34)、CaCl2(0.02)和CuCl2·2H2O(0.135)；加入乳酸钠，设置碳氮比为1:8，用NaOH和HCl调节体系的pH为7.4；121℃下灭菌15min；
将经过0.22μm无菌膜过滤后的配置好的六价铬溶液加入培养基中，使培养基内六价铬初始浓度为10mg/L，向每个厌氧瓶中加入灭过菌的50μl 20g/L的CaCl2母液。将预先培养好的反应微生物P.denitrificans接种到上述厌氧反应培养基中，确定初始接菌量为OD600＝0.04；再接种S.oneidensis MR-1，确定初始接菌量为OD600＝0.08，使P.denitrificans和S.oneidensis MR-1的接种量比为1:2；反应微生物P.denitrificans和S.oneidensis MR-1单独接种到反应培养基作为对照，鼓吹N2 5min去除氧气，采用丁基橡胶隔膜和铝盖密封，将厌氧瓶置于摇床上，在30℃下进行厌氧反应培养。
结果表明，相比P.denitrificans和S.oneidensis MR-1单独培养的厌氧反应体系，S.oneidensis MR-1和P.denitrificans共同培养的厌氧反应体系的重金属六价铬还原效率提高了8.2％。
对比例2：
预先在有氧条件下用灭菌的LB分别培养反应微生物P.denitrificans(美国模式培养物集存库，菌种编号为ATCC 19367)和S.oneidensis MR-1(国模式培养物集存库，菌种编号为ATCC 700550)到OD600为2；反应体系培养选用的容器为无菌厌氧瓶，培养基成分为：21.36mM KNO3,10.66mM NH4Cl,0.41mM MgSO4·7H2O,17.93mM KH2PO4,32.76mM Na2HPO4,微量元素1mL/L；所述微量元素成分为：0.0217mM Na2-EDTA、0.0090mM FeSO4·7H2O、0.001mM MnCl2·4H2O、0.0010mM Na2MoO4·2H2O、0.0008mM CuCl2·2H2O和0.0025mMZnCl2；加入乳酸钠，设置碳氮比为0.5，用NaOH和HCl调节体系的pH为7.4；121℃下灭菌15min；
设置3组体系，分别为单独的脱氮副球菌(空白组)，单独的希瓦氏菌(空白组)，两种菌混合培养(实验组)，且每一组中设置3个平行试验，每个试验通过厌氧瓶进行。向厌氧瓶中加入50mL的所述反硝化培养基，接着将经过0.22μm无菌膜过滤后的配置好的六价铬溶液加入厌氧瓶中，并使反硝化培养基内六价铬初始浓度为10mg/L，向每个厌氧瓶中加入灭过菌的50μl 20g/L的CaCl2母液。将预先培养好的反应微生物P.denitrificans接种到上述厌氧反应培养基中，确定初始接菌量为OD600＝0.04；再接种S.oneidensis MR-1，确定初始接菌量为OD600＝0.08，使P.denitrificans和S.oneidensis MR-1的接种量比为1:2；反应微生物P.denitrificans和S.oneidensis MR-1单独接种到反应培养基作为对照，鼓吹N25min去除氧气，采用丁基橡胶隔膜和铝盖密封，将厌氧瓶置于摇床上，在28℃下进行厌氧反应培养。
结果表明，相比P.denitrificans和S.oneidensis MR-1单独培养的厌氧反应体系，S.oneidensis MR-1和P.denitrificans共同培养的厌氧反应体系的重金属六价铬还原效率提高了15％。
对比例3：
预先在有氧条件下用灭菌的LB分别培养反应微生物P.denitrificans(美国模式培养物集存库，菌种编号为ATCC 19367)和S.oneidensis MR-1(国模式培养物集存库，菌种编号为ATCC 700550)到OD600为2；反应体系培养选用的容器为无菌厌氧瓶，培养基成分为：21.36mM KNO3,10.66mM NH4Cl,0.41mM MgSO4·7H2O,17.93mM KH2PO4,32.76mM Na2HPO4,微量元素1mL/L；所述微量元素成分为：0.0217mM Na2-EDTA、0.0090mM FeSO4·7H2O、0.001mM MnCl2·4H2O、0.0010mM Na2MoO4·2H2O、0.0008mM CuCl2·2H2O和0.0025mMZnCl2；加入乳酸钠，设置碳氮比为4，用NaOH和HCl调节体系的pH为7.5；121℃下灭菌15min；
向厌氧瓶中加入50mL的所述反硝化培养基，接着将经过0.22μm无菌膜过滤后的配置好的六价铬溶液加入厌氧瓶中，并使反硝化培养基内六价铬初始浓度为10mg/L，向每个厌氧瓶中加入灭过菌的50μl 20g/L的CaCl2母液。将预先培养好的反应微生物P.denitrificans接种到上述厌氧反应培养基中，确定初始接菌量为OD600＝0.04；再接种S.oneidensis MR-1，确定初始接菌量为OD600＝0.4，使P.denitrificans和S.oneidensisMR-1的接种量比为1:10；反应微生物P.denitrificans和S.oneidensis MR-1单独接种到反应培养基作为对照，鼓吹N2 5min去除氧气，采用丁基橡胶隔膜和铝盖密封，将厌氧瓶置于摇床上，在35℃下进行厌氧反应培养。
结果表明，相比P.denitrificans和S.oneidensis MR-1单独培养的厌氧反应体系，S.oneidensis MR-1和P.denitrificans共同培养的厌氧反应体系的重金属六价铬还原效率提高了20％。
对比例4：
预先在有氧条件下用灭菌的LB分别培养反应微生物P.denitrificans(美国模式培养物集存库，菌种编号为ATCC 19367)和S.oneidensis MR-1(国模式培养物集存库，菌种编号为ATCC 700550)到OD600为2；反应体系培养选用的容器为无菌厌氧瓶，培养基成分为：21.36mM KNO3,10.66mM NH4Cl,0.41mM MgSO4·7H2O,17.93mM KH2PO4,32.76mM Na2HPO4,微量元素1mL/L；所述微量元素成分为：0.0217mM Na2-EDTA、0.0090mM FeSO4·7H2O、0.001mM MnCl2·4H2O、0.0010mM Na2MoO4·2H2O、0.0008mM CuCl2·2H2O和0.0025mMZnCl2；加入乳酸钠，设置碳氮比为5，用NaOH和HCl调节体系的pH为10.0；121℃下灭菌15min；
向厌氧瓶中加入50mL的所述反硝化培养基，接着将经过0.22μm无菌膜过滤后的配置好的六价铬溶液加入厌氧瓶中，并使反硝化培养基内六价铬初始浓度为10mg/L，向每个厌氧瓶中加入灭过菌的50μl 20g/L的CaCl2母液。将预先培养好的反应微生物P.denitrificans接种到上述厌氧反应培养基中，确定初始接菌量为OD600＝0.04；再接种S.oneidensis MR-1，确定初始接菌量为OD600＝0.08，使P.denitrificans和S.oneidensisMR-1的接种量比为1:2；反应微生物P.denitrificans和S.oneidensis MR-1单独接种到反应培养基作为对照，鼓吹N2 5min去除氧气，采用丁基橡胶隔膜和铝盖密封，将厌氧瓶置于摇床上，在30℃下进行厌氧反应培养。
结果表明，相比P.denitrificans和S.oneidensis MR-1单独培养的厌氧反应体系，S.oneidensis MR-1和P.denitrificans共同培养的厌氧反应体系的重金属六价铬还原效率提高了9.7％。
对比例5：
预先在有氧条件下用灭菌的LB分别培养反应微生物P.denitrificans(美国模式培养物集存库，菌种编号为ATCC 19367)和S.oneidensis MR-1(国模式培养物集存库，菌种编号为ATCC 700550)到OD600为2；反应体系培养选用的容器为无菌厌氧瓶，培养基成分为：21.36mM KNO3,10.66mM NH4Cl，0.41mM MgSO4·7H2O,17.93mM KH2PO4,32.76mM Na2HPO4,微量元素1mL/L；所述微量元素成分为：0.0217mM Na2-EDTA、0.0090mM FeSO4·7H2O、0.001mM MnCl2·4H2O、0.0010mM Na2MoO4·2H2O、0.0008mM CuCl2·2H2O和0.0025mMZnCl2；加入乳酸钠，设置碳氮比为5，用NaOH和HCl调节体系的pH为7.0；121℃下灭菌15min；
向厌氧瓶中加入50mL的所述反硝化培养基，接着将经过0.22μm无菌膜过滤后的配置好的六价铬溶液加入厌氧瓶中，并使反硝化培养基内六价铬初始浓度为10mg/L，向每个厌氧瓶中加入灭过菌的50μl 20g/L的CaCl2母液。将预先培养好的反应微生物P.denitrificans接种到上述厌氧反应培养基中，确定初始接菌量为OD600＝0.04；再接种S.oneidensis MR-1，确定初始接菌量为OD600＝0.08，使P.denitrificans和S.oneidensisMR-1的接种量比为1:2；反应微生物P.denitrificans和S.oneidensis MR-1单独接种到反应培养基作为对照，鼓吹N2 5min去除氧气，采用丁基橡胶隔膜和铝盖密封，将厌氧瓶置于摇床上，在45℃下进行厌氧反应培养。
结果表明，相比P.denitrificans和S.oneidensis MR-1单独培养的厌氧反应体系，S.oneidensis MR-1和P.denitrificans共同培养的厌氧反应体系的重金属六价铬还原效率提高了2％。
可以理解的是，以上关于本发明的具体描述，仅用于说明本发明而并非受限于本发明实施例所描述的技术方案。本领域的普通技术人员应当理解，仍然可以对本发明进行修改或等同替换，以达到相同的技术效果；只要满足使用需要，都在本发明的保护范围之内。
综上所述，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (8)

1.一种通过脱氮副球菌和希瓦氏菌共培养促进六价铬去除的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
预先在有氧条件下用灭菌LB培养基分别培养脱氮副球菌和希瓦氏菌到OD600为2～4；并配置反硝化培养基：0.5～0.8g/L NH4Cl，0.1～0.8g/L MgSO4，2.0～3.2g/L KH2PO4，4.0～5.6g/L Na2HPO4，2.0～2.8g/L KNO3，7～13mg/L六价铬离子溶液，微量元素1～3mL；加入4.0～6.0mL/L乳酸钠，用NaOH和HCl调节体系的pH；110～150℃下灭菌15～30min；
向厌氧瓶中加入50～100mL的所述反硝化培养基，接着向所述厌氧瓶中加入待处理的六价铬溶液、灭过菌的50μl10～100g/L的CaCl2母液，再将预先培养好的脱氮副球菌接种到所述厌氧瓶中，确定初始接菌量为OD600＝0.02～0.08；再接种希瓦氏菌，确定初始接菌量为OD600＝0.04～0.20；氮气吹扫5～10min去除氧气；密封所述厌氧瓶，以还原所述待处理的六价铬溶液得到铬金属；
其中，所述微量元素的构成为：2.0～3.0g/LFeSO4·7H2O、6.5～7.6g/L Na2-EDTA、0.2～0.4g/LNa2MoO4·2H2O、0.01～0.03g/L MnCl2·4H2O、0.3～0.5g/L ZnCl2、0.01～0.03g/LCaCl2和0.1～0.4g/L CuCl2·2H2O。
2.如权利要求1所述的通过脱氮副球菌和希瓦氏菌共培养促进六价铬去除的方法，其特征在于，所述反硝化培养基为：0.5g/L NH4Cl 0.1g/L MgSO4，2.44g/L KH2PO4，4.65g/LNa2HPO4，2.16g/L KNO3，10mg/L六价铬离子溶液，微量元素1mL，微量元素构成:2.50g/LFeSO4·7H2O、7.30g/LNa2-EDTA、0.242g/LNa2MoO4·2H2O、0.02g/LMnCl2·4H2O、0.34g/LZnCl2、0.02g/L CaCl2和0.135g/LCuCl2·2H2O；加入4.85mL/L乳酸钠。
3.如权利要求1所述的通过脱氮副球菌和希瓦氏菌共培养促进六价铬去除的方法，其特征在于，所述脱氮副球菌和希瓦氏菌的接种比为1:(1～5)。
4.如权利要求1所述的通过脱氮副球菌和希瓦氏菌共培养促进六价铬去除的方法，其特征在于，用所述NaOH和HCl调节体系的pH为7.0～8.0。
5.如权利要求1～4任意一项所述的通过脱氮副球菌和希瓦氏菌共培养促进六价铬去除的方法，其特征在于，所述脱氮副球菌和希瓦氏菌的接种比为1:2、体系中的碳氮比为5、pH为7.4、培养的温度为30℃。
6.如权利要求1所述的通过脱氮副球菌和希瓦氏菌共培养促进六价铬去除的方法，其特征在于，所述乳酸钠是所述脱氮副球菌和希瓦氏菌的碳源。
7.如权利要求1所述的通过脱氮副球菌和希瓦氏菌共培养促进六价铬去除的方法，其特征在于，所述待处理的六价铬溶液为无菌膜过滤后的六价铬溶液。
8.如权利要求1所述的通过脱氮副球菌和希瓦氏菌共培养促进六价铬去除的方法，其特征在于，所述待处理的六价铬溶液的溶液浓度为8～30mg/L。
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