CN113009014B - 一种2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法 - Google Patents

一种2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种2‑甲氧基‑5‑氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法。本发明的方法包括以下步骤：将样品分析溶液进行高效液相色谱分析，其中色谱柱为反相色谱柱，流动相为酸铵盐溶液与有机相的混合液，酸铵盐溶液的pH值为4.0～8.0。本发明的检测方法通过利用反相色谱柱，并使用酸铵盐溶液和有机相的混合溶剂进行洗脱，能够一次性检测多个潜在杂质，提高检测分离度和检测效率。

Description

一种2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，特别是涉及一种2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法。
背景技术
2-甲氧基-5-氟尿嘧啶，化学名为5-氟-2-甲氧基-4-嘧啶酮，其结构式为：
Figure BDA0002950351870000011
2-甲氧基-5-氟尿嘧啶是一种重要的医药化学中间体，是合成氟尿嘧啶和氟胞嘧啶的重要原料。氟尿嘧啶，是一种重要的抗肿瘤药物，也是合成氟代嘧啶类抗肿瘤药物的关键中间体。2-甲氧基-5-氟尿嘧啶在酸性条件下水解即生成氟尿嘧啶，因此，2-甲氧基-5-氟尿嘧啶的杂质水平很大程度地影响了氟尿嘧啶及其后续产物的质量。
2-甲氧基-5-氟尿嘧啶鲜有杂质研究的相关资料，杂质谱尚不明确，质量控制指标单一。
发明内容
本发明为了克服现有技术中的缺陷，而提供一种2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法。
为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案。
本发明提供了一种2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法，其包括以下步骤：将样品分析溶液进行高效液相色谱分析，其中色谱柱为反相色谱柱，流动相为酸铵盐溶液与有机相的混合液，酸铵盐溶液的pH值为4.0～8.0；
采用以下洗脱方式进行洗脱：在运行时间的0～15分钟范围内等度洗脱，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为介于90～100％中的某一值；在运行时间的15～30分钟范围内梯度洗脱，30分钟时所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为介于89％～70％中的某一值；在运行时间的30～35分钟范围内等度洗脱；在运行时间的35～35.1分钟范围内梯度洗脱，35.1分钟时所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为介于90～100％中的某一值；在运行时间的35.1～45分钟范围内等度洗脱。
在本发明的某些实施方案中，所述的样品分析溶液中的溶剂为甲醇、水、乙腈、甲醇-水混合溶剂或乙腈-水混合溶剂，例如水。
在本发明的某些实施方案中，所述的样品分析溶液的样品浓度为0.1-1mg/ml，例如0.5mg/ml。
在本发明的某些实施方案中，样品为2-甲氧基-5-氟尿嘧啶原料药或其制剂、氟尿嘧啶原料药或其制剂、或者氟胞嘧啶原料药或其制剂；样品也可为2-甲氧基-5-氟尿嘧啶原料药。所述的2-甲氧基-5-氟尿嘧啶原料药可来源于上海旭东海普药业有限公司，批号为KFZ0061908001。
在本发明的某些实施方案中，酸铵盐溶液的浓度为0.005～0.1mol/L(例如0.04mol/L、0.05mol/L)，所述酸铵盐溶液可为甲酸铵溶液、乙酸铵溶液、碳酸铵溶液和碳酸氢铵溶液中的一种或多种；所述的酸铵盐溶液可为乙酸铵溶液。
在本发明的某些实施方案中，有机相为乙腈和/或甲醇，优选为乙腈。
在本发明的某些实施方案中，所述的酸铵盐溶液的pH值为5.5～6.5(例如5.5、5.7、6.5)。pH值可通过冰醋酸进行调节。
在本发明的某些实施方案中，反相色谱柱为苯基硅烷键合硅胶色谱柱、氰基键合硅胶色谱柱、氨基键合硅胶色谱柱、十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱或八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，优选十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱或八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；所述的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱可以为Waters XBridge C18(4.6mm×250mm，3.5μm)或Agilent SB-C18(4.6mm×250mm，4μm)的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；所述的八烷基硅烷键合硅胶色谱柱可以为Waters XBridge C8(4.6mm×250mm，5μm)的八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。
在本发明的某些实施方案中，反相色谱柱的柱长为100mm～300mm(例如250mm)，内径可为1mm～10mm(例如4.6mm)，粒径可为1μm～10μm(例如3.5μm、4.0μm、5μm)。
在本发明的某些实施方案中，流动相的流速为0.5～1.5ml/min(例如0.6ml/min、0.8ml/min、1.0ml/min)；色谱柱的柱温可为25～50℃(例如30℃)；检测波长可为205～300nm(例如260nm、270nm、275nm)。
在本发明的某些实施方案中，高效液相色谱仪为e2965高效液相色谱系统及工作站。
在本发明的某些实施方案中，在运行时间的0～15分钟范围内，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为介于96～98％中的某一值(例如96％、98％)。
在本发明的某些实施方案中，在运行时间的30分钟时，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为介于80～86％中的某一值(例如83％或85％)。
在本发明的某些实施方案中，在运行时间的35.1分钟时，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为介于96～98％中的某一值(例如96％、98％)。
在本发明的某些实施方案中，在运行时间的35.1～45分钟范围内，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比和在运行时间的0～15分钟范围内的所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比一致。
在本发明的某些实施方案中，洗脱方式为：在运行时间的0～15分钟范围内，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为96％；在运行时间的15～30分钟范围内梯度洗脱，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为96～85％；在运行时间的30～35分钟范围内，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为85％；在运行时间的35～35.1分钟范围内梯度洗脱，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为85～96％；在运行时间的35.1～40分钟范围内，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为96％。
在本发明的某些实施方案中，洗脱方式为：在运行时间的0～15分钟范围内，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为98％；在运行时间的15～30分钟范围内梯度洗脱，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为98～83％；在运行时间的30～35分钟范围内，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为83％；在运行时间的35～35.1分钟范围内梯度洗脱，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为83～98％；在运行时间的35.1～40分钟范围内，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为98％。
在本发明的某些实施方案中，所述的2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法检测得到的杂质为
Figure BDA0002950351870000041
Figure BDA0002950351870000042
中的一种或多种。
本发明还提供了上述2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法在2-甲氧基-5-氟尿嘧啶原料药或其制剂、氟尿嘧啶原料药或其制剂、或者氟胞嘧啶原料药或其制剂质量控制中的应用。
本发明还提供了一种5-甲氧基-尿嘧啶、2,4-二甲氧基-5-氟嘧啶、2,5-二甲氧基-6-羟基-嘧啶、2-甲氧基-5-氯-6-羟基嘧啶和2-乙氧基-5-氟尿嘧啶中的一种或多种在2-甲氧基-5-氟尿嘧啶原料药或其制剂、氟尿嘧啶原料药或其制剂、或者氟胞嘧啶原料药或其制剂质量控制中的应用。
本发明的发明人经多批次样品的质量剖析，2-甲氧基-5-氟尿嘧啶在合成过程中至少生成5个杂质，杂质结构如下：
Figure BDA0002950351870000043
Figure BDA0002950351870000051
a.分析Imp1可能产生的途径为：
Figure BDA0002950351870000052
杂质Imp3在酸的作用下，2位的甲氧基水解为羟基，再通过烯醇式的转化，生成杂质Imp1。
b.分析Imp2可能产生的途径为：
Figure BDA0002950351870000053
2-甲氧基-5-氟尿嘧啶在甲醇钠的作用下，羟基转化为甲氧基，生成杂质Imp2。
c.分析Imp3可能产生的途径为：
Figure BDA0002950351870000054
杂质Imp3有两条可能产生的途径：(1)2-甲氧基-5-氟尿嘧啶的F基团在甲醇钠作用下被取代为甲氧基，再与甲基异尿素硫酸单甲酯盐发生环合反应生成杂质Imp3；(2)2-甲氧基-5-氟尿嘧啶的F基团在甲醇钠作用下被取代而生成杂质Imp3。
d.分析Imp4可能产生的途径为：
Figure BDA0002950351870000061
氯乙酸与甲酸乙酯发生缩合反应，再与甲基异尿素硫酸单甲酯盐环合，生成杂质Imp4。
e.分析Imp5可能产生的途径为：
Figure BDA0002950351870000062
2-甲氧基-5-氟尿嘧啶在乙醇钠的作用下，2位甲氧基转化为乙氧基，生成杂质Imp5。
在本发明的某些实施方案中，Imp1的m/z为142.1；Imp2的m/z为158.1；Imp3的m/z为156.1；Imp4的m/z为160.6；Imp5的m/z为158.1。
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：本发明提供一种2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法，通过利用反相色谱柱，并使用酸铵盐溶液和有机相的混合溶剂进行洗脱，能够一次性检测多个潜在杂质，提高检测分离度和检测效率。
附图说明
图1是本发明2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法第一实施方式的流程示意图；
图2是本发明实验例1的检测色谱图；
图3是本发明实验例2的检测色谱图；
图4是本发明实验例3的检测色谱图。
具体实施方式
请参阅图1，图1是本发明2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法第一实施方式的流程示意图。在该实施方式中，检测方法包括如下步骤：
S101：提供样品分析溶液。
其中，在制备样品分析溶液时，考虑到检测限问题，应控制样品分析溶液中杂质的含量在适当范围内，如杂质含量可以是10～80ng。
S102：将样品分析溶液注入高效液相色谱仪进行色谱分析，并记录色谱图；其中色谱柱为反相色谱柱，流动相为酸铵盐溶液与有机相的混合液。
其中，根据色谱仪的规格要求，先设定检测条件，待仪器运行稳定后，进样，利用流动相进行洗脱，并记录色谱图，对色谱图进行分析，得出杂质含量。
在该实施方式中，通过利用反相色谱柱，并使用酸铵盐溶液和有机相的混合溶剂进行洗脱，能够提高杂质的检测分离度。
其中，在一实施方式中，利用甲醇、水、乙腈单一溶剂，或甲醇-水的混合溶剂，或乙腈-水的混合溶剂作为溶剂溶解样品，进而制得样品分析溶液。
在其他实施方式中，该方法也可以适用于检测2-甲氧基-5-氟尿嘧啶原料药或其制剂、氟尿嘧啶原料药或其制剂、氟胞嘧啶原料药或其制剂的杂质，即样品分析溶液中，样品可以是2-甲氧基-5-氟尿嘧啶原料药或其制剂、氟尿嘧啶原料药或其制剂、氟胞嘧啶原料药或其制剂。其中2-甲氧基-5-氟尿嘧啶、氟尿嘧啶、氟胞嘧啶的制剂可以是片剂、胶囊剂、颗粒剂、眼用制剂、鼻用制剂、栓剂、丸剂、软膏剂、乳膏剂、糊剂、吸入制剂、喷雾剂、气雾剂、凝胶剂、散剂、糖浆剂、涂剂、涂膜剂、酊剂、贴剂、口服溶液剂、植入剂、膜剂、洗剂、冲洗剂、煎膏剂、膏药、露剂、搽剂等。
其中，在一实施方式中，利用反相高效液相色谱法进行检测，反相高效液相色谱法是由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系，该方法适于分离非极性、极性或离子型化合物。因此所用色谱柱为反相色谱柱，反相色谱柱为苯基硅烷键合硅胶色谱柱、氰基键合硅胶色谱柱、氨基键合硅胶色谱柱、十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱或八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。
反相色谱柱的具体规格为：柱长100mm～300mm，例如100mm、150mm、250mm等；内径1mm～10mm，例如2.5mm、4.0mm、4.6mm等；粒径1μm～10μm，例如2.7μm、3.5μm、5μm、7μm。例如可以是Waters XBridge C18(4.6mm×250mm，3.5μm)的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。
流动相为酸铵盐溶液和有机相的混合液，有机相为甲醇或乙腈；酸铵盐溶液可以是甲酸铵溶液、乙酸铵溶液、碳酸铵和碳酸氢铵溶液中的一种或多种；酸铵盐溶液的浓度为0.005～0.1mol/L，例如0.005mol/L、0.01mol/L、0.02mol/L、0.04mol/L、0.05mol/L；pH值为4.0～8.0，例如pH值为4.0、5.0、5.5、5.7、6.0、7.0等。
其中，酸铵盐溶液-有机相的体积比为100:0～70:30，具体为98:2～70:30，例如85:15、83:17、75:25、70:30等。
具体地，设置色谱条件，其中流动相的流速为0.5～1.5ml/min，例如0.6ml/min、0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min等；色谱柱的柱温为25～50℃，例如25℃、30℃、35℃、40℃等；检测器的检测波长为205～300nm，例如210nm、256nm、266nm、280nm等。
其中，在一实施方式中，采用以下方法进行洗脱，具体地，在运行时间的0～15分钟范围内等度洗脱，流动相中酸铵盐溶液的体积占比为介于90～100％中的某一值，在运行时间的15～30分钟范围内梯度洗脱，30分钟时流动相中酸铵盐溶液的体积占比为介于89～70％中的某一值，在运行时间的30～35分钟范围内等度洗脱，在运行时间的35～35.1分钟范围内梯度洗脱，35.1分钟时所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为介于90～100％中的某一值，在运行时间的35.1～45分钟范围内等度洗脱。通过利用上述方式洗脱，配合相应的色谱柱，能够调整杂质和样品的保留时间，提高分离度。
下面，将通过几组具体实验例对本发明的方案进行说明、解释，但这些实验例仅是一些示例性方案，不应用来限制本发明的范围。其中，实验例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术人员所熟知的意义相同。其中，2-甲氧基-5-氟尿嘧啶来源于上海旭东海普药业有限公司，批号为KFZ0061908001。
实验例1
(1)仪器与色谱条件
高效液相色谱仪：e2965高效液相色谱系统及工作站。
色谱柱：Waters XBridge C8(4.6mm×250mm，5μm)的八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。
流动相：配制40mmol/L乙酸铵盐缓冲溶液(用冰醋酸调节pH值至6.5)为流动相A，甲醇为流动相B，按照以下洗脱程序进行洗脱；其中，0～15min，流动相A体积为96％；15～30min，流动相A体积为96％～85％；30～35min，流动相A体积为85％；35～35.1min，流动相A体积为85％～96％，35.1～40min，流动相A体积为96％。
检测条件：设置流动相流速为0.6ml/min，检测波长为275nm，柱温30℃。
(2)实验步骤
制备样品分析溶液：
取2-甲氧基-5-氟尿嘧啶适量，加水溶解并稀释制成每1ml约含0.5mg的溶液。
样品分析溶液的测试：
精密量取上述分析溶液10μl，注入高效液相色谱仪，利用上述洗脱程度洗脱，并记录色谱图，具体色谱图见附图2。由色谱图可以看出，该条件下2-甲氧基-5-氟尿嘧啶主峰和杂质峰能够分离，能够精确测得杂质含量。谱图中各物质的保留时间以及各杂质的质谱数据如下表所示：
Figure BDA0002950351870000101
实验例2
(1)仪器与色谱条件
高效液相色谱仪：e2965高效液相色谱系统及工作站。
色谱柱：Agilent SB-C18(4.6mm×250mm，4μm)的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。
流动相：配制40mmol/L乙酸铵盐缓冲溶液(用冰醋酸调节pH值至5.5)为流动相A，乙腈为流动相B，按照以下洗脱程序进行洗脱；其中，0～15min，流动相A体积为96％；15～30min，流动相A体积为96％～85％；30～35min，流动相A体积为85％；35～35.1min，流动相A体积为85％～96％，35.1～40min，流动相A体积为96％。
检测条件：设置流动相流速为1.0ml/min，检测波长为270nm，柱温30℃。
(2)实验步骤
制备样品分析溶液：
取2-甲氧基-5-氟尿嘧啶适量，加水溶解并稀释制成每1ml约含0.5mg的溶液。
样品分析溶液的测试：
精密量取上述分析溶液10μl，注入高效液相色谱仪，利用上述洗脱程序洗脱，并记录色谱图，具体色谱图见附图3。由色谱图可以看出，该条件下2-甲氧基-5-氟尿嘧啶主峰和杂质峰能够分离，能够精确测得杂质含量。谱图中各物质的保留时间以及各杂质的质谱数据如下表所示：
Figure BDA0002950351870000111
实验例3
(1)仪器与色谱条件
高效液相色谱仪：e2965高效液相色谱系统及工作站。
色谱柱：Waters XBridge C18(4.6mm×250mm，3.5μm)的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。
流动相：配制50mmol/L乙酸铵盐缓冲溶液(乙酸铵盐溶液，用冰醋酸调节pH值至5.7)为流动相A，乙腈为流动相B，按照以下洗脱程序进行洗脱；其中，0～15min，流动相A体积为98％；15～30min，流动相A体积为98％～83％；30～35min，流动相A体积为83％；35～35.1min，流动相A体积为83％～98％，35.1～40min，流动相A体积为98％。
检测条件：设置流动相流速为0.8ml/min，检测波长为260nm，柱温30℃。
(2)实验步骤
制备样品分析溶液：
取2-甲氧基-5-氟尿嘧啶适量，加水溶解并稀释制成每1ml约含0.5mg的溶液。
样品分析溶液的测试：
精密量取上述分析溶液10μl，注入高效液相色谱仪，利用上述洗脱程序洗脱，并记录色谱图，具体色谱图见附图4。由色谱图可以看出，该条件下2-甲氧基-5-氟尿嘧啶主峰和杂质峰能够分离，能够精确测得杂质含量。谱图中各物质的保留时间以及各杂质的质谱数据如下表所示：
Figure BDA0002950351870000121
以上实验例，本发明所提供的检测方法，在预定的色谱柱和检测条件下都能够很好的分离2-甲氧基-5-氟尿嘧啶中各杂质，实现对其进行定量控制。
以上所述仅为本发明的实施方式，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (9)

1.一种2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法，其特征在于，其包括以下步骤：将样品分析溶液进行高效液相色谱分析，其中色谱柱为反相色谱柱，流动相为酸铵盐溶液与有机相的混合液，酸铵盐溶液的pH值为4.0～8.0；其中，所述样品分析溶液中的样品为2-甲氧基-5-氟尿嘧啶原料药或其制剂、氟尿嘧啶原料药或其制剂、或者氟胞嘧啶原料药或其制剂；所述杂质为
Figure FDA0004040376000000011
Figure FDA0004040376000000012
中的一种或多种；
所述的样品分析溶液中的溶剂为甲醇、水、乙腈、甲醇-水混合溶剂或乙腈-水混合溶剂；所述样品分析溶液的样品浓度为0.1-1mg/ml；
所述酸铵盐溶液的浓度为0.005～0.1mol/L；所述酸铵盐溶液为甲酸铵溶液、乙酸铵溶液、碳酸铵溶液和碳酸氢铵溶液中的一种或多种；所述有机相为乙腈和/或甲醇；
所述反相色谱柱为苯基硅烷键合硅胶色谱柱、氰基键合硅胶色谱柱、氨基键合硅胶色谱柱、十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱或八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；所述反相色谱柱的柱长为100mm～300mm，内径为1mm～10mm，粒径为1μm～10μm；流动相的流速为0.5～1.5ml/min，色谱柱的柱温为25～50℃，检测波长为260～300nm；
采用以下洗脱方式进行洗脱：在运行时间的0～15分钟范围内等度洗脱，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为介于90～100％中的某一值；在运行时间的15～30分钟范围内梯度洗脱，30分钟时所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为介于89％～70％中的某一值；在运行时间的30～35分钟范围内等度洗脱；在运行时间的35～35.1分钟范围内梯度洗脱，35.1分钟时所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为介于90～100％中的某一值；在运行时间的35.1～45分钟范围内等度洗脱。
2.根据权利要求1所述的2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法，其特征在于，所述的样品分析溶液中的溶剂为水，样品浓度为0.5mg/ml，样品为2-甲氧基-5-氟尿嘧啶原料药。
3.根据权利要求1所述的2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法，其特征在于，所述酸铵盐溶液的pH值为5.5～6.5。
4.根据权利要求1所述的2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法，其特征在于，所述酸铵盐溶液为乙酸铵溶液，浓度为0.04mol/L或0.05mol/L，pH值为5.5、5.7或6.5；所述有机相为乙腈。
5.根据权利要求1所述的2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法，其特征在于，
所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱为Waters XBridge C184.6mm×250mm，3.5μm十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；或AgilentSB-C18 4.6mm×250mm，4μm十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；所述八烷基硅烷键合硅胶色谱柱为Waters XBridge C8 4.6mm×250mm，5μm八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；
其中，采用的高效液相色谱仪为e2965高效液相色谱系统及工作站。
6.根据权利要求1所述的2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法，其特征在于，所述反相色谱柱的柱长为250mm，内径为4.6mm；粒径为3.5μm、4.0μm或5μm；
所述流动相的流速为0.6ml/min、0.8ml/min或1.0ml/min；色谱柱的柱温为30℃；检测波长为260nm、270nm或275nm。
7.根据权利要求1所述的2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法，其特征在于，
在运行时间的0～15分钟范围内，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为介于96～98％中的某一值；
在运行时间的30分钟时，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为介于80～86％中的某一值；
在运行时间的35.1分钟时，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为介于96～98％中的某一值；
在运行时间的35.1～45分钟范围内，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比和在运行时间的0～15分钟范围内的所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比一致。
8.根据权利要求1所述的2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法，其特征在于，
洗脱方式为：在运行时间的0～15分钟范围内，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为96％；在运行时间的15～30分钟范围内梯度洗脱，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为96～85％；在运行时间的30～35分钟范围内，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为85％；在运行时间的35～35.1分钟范围内梯度洗脱，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为85～96％；在运行时间的35.1～40分钟范围内，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为96％；
或，洗脱方式为：在运行时间的0～15分钟范围内，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为98％；在运行时间的15～30分钟范围内梯度洗脱，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为98～83％；在运行时间的30～35分钟范围内，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为83％；在运行时间的35～35.1分钟范围内梯度洗脱，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为83～98％；在运行时间的35.1～40分钟范围内，所述流动相中酸铵盐溶液的体积占比为98％。
9.一种如权利要求1～8任一项所述的2-甲氧基-5-氟尿嘧啶杂质的高效液相检测方法在2-甲氧基-5-氟尿嘧啶原料药或其制剂、氟尿嘧啶原料药或其制剂、或者氟胞嘧啶原料药或其制剂质量控制中的应用。
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