CN113005086A - 埃博霉素D和Apol8在调控神经干细胞定向神经元分化中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及神经学技术领域，具体涉及埃博霉素D和Apol8在调控神经干细胞定向神经元分化中的应用。本发明发现埃博霉素D能够促进神经干细胞定向神经元分化，抑制神经干细胞向星形胶质细胞分化。在脊髓损伤区移植经埃博霉素D处理的神经干细胞，能够促进移植的神经干细胞定向分化为神经元并参与功能结构relay的形成。埃博霉素D通过上调Apol8基因调控神经干细胞定向神经元分化。Apol8基因能够调控神经干细胞定向神经元分化。Epothilone D和Apol8在调控脊髓神经干细胞定向神经元分化等新功能的发现为脊髓损伤修复的治疗提供了新的靶点。

Description

埃博霉素D和Apol8在调控神经干细胞定向神经元分化中的 应用

技术领域

本发明涉及神经学技术领域，具体涉及埃博霉素D和Apol8在调控神经干细胞定向神经元分化中的应用。

背景技术

神经干细胞(neural stem cell)存在于神经系统中，具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的潜能。神经元在中枢神经系统疾病的功能重建和神经再生中具有重要作用。神经干细胞向神经元的分化受到多种因素的调控，增强神经干细胞向神经元的定向调控对于中枢神经损伤的修复具有重要意义。

脊髓损伤(SCI)修复是再生医学领域面临的巨大挑战。脊髓损伤后在损伤部位形成的抑制性微环境阻碍神经再生，因此，促进轴突再生和神经元分化是脊髓损伤修复的关键。早期的研究表明，微管稳定剂具有促进轴突延伸的作用，被用于脊髓损伤修复的治疗。最新研究表明，具有微管稳定作用的埃博霉素D(Epothilone D)结构简单，具有较好的水溶性以及较低的细胞毒性，易于通过血脑屏障，不易扩散，在脊髓损伤研究中，可以促进轴突出芽，抑制纤维化瘢痕形成，改善运动功能。但是，其对于脊髓神经干细胞(NSCs)分化的调控作用并不清楚。

发明内容

本发明的目的是提供埃博霉素D在调控神经干细胞定向神经元分化中的应用，本发明还提供Apol8在调控神经干细胞定向神经元分化中的应用。

本发明在对脊髓神经干细胞的定向分化研究过程中发现，在体外分化培养中，埃博霉素D能够促进神经干细胞定向神经元分化；不仅如此，经埃博霉素D处理的脊髓神经干细胞移植至脊髓损伤区后，其定向分化神经元的能力显著增强，并可参与功能结构relay的形成，同时，埃博霉素D也能够抑制脊髓神经干细胞向星形胶质细胞分化。通过进一步的RNA-seq研究发现，埃博霉素D处理可以上调Apol8基因的表达。进一步对Apol8基因进行功能验证实验发现，过表达Apol8基因能够促进脊髓神经干细胞向神经元的定向分化，而抑制Apol8基因的表达则会抑制脊髓神经干细胞向神经元的定向分化。

基于上述发现，本发明具体提供以下技术方案：

本发明提供埃博霉素D在调控神经干细胞定向神经元分化中的应用。

优选地，所述神经干细胞为脊髓神经干细胞。

具体地，所述调控神经干细胞定向神经元分化为促进脊髓神经干细胞定向神经元分化。

以上所述的调控可为体外培养或体内调控。

本发明提供埃博霉素D在抑制脊髓神经干细胞向星形胶质细胞分化中的应用。

本发明还提供埃博霉素D在促进脊髓损伤区神经干细胞定向神经元分化或功能结构relay形成中的应用。

优选地，所述神经干细胞为移植的脊髓神经干细胞。

具体地，以上所述的应用可为：在体外利用埃博霉素D处理脊髓神经干细胞，再将处理后的脊髓神经干细胞移植至脊髓损伤区。

本发明提供埃博霉素D在制备用于促进脊髓损伤区神经干细胞定向神经元分化或功能结构relay形成的产品中的应用。

具体地，所述产品在使用时可为：在体外先利用埃博霉素D处理脊髓神经干细胞，再将处理后的脊髓神经干细胞移植至脊髓损伤区。

以上所述利用埃博霉素D处理脊髓神经干细胞具体可为在脊髓干细胞的体外培养基中添加终浓度为0.5～5nM的埃博霉素D。

本发明还提供埃博霉素D在调控Apol8基因表达中的应用。

本发明还提供埃博霉素D通过上调Apol8基因调控神经干细胞定向神经元分化的应用。

本发明还提供埃博霉素D通过上调Apol8基因调控脊髓损伤区神经干细胞定向神经元分化的应用。

优选地，所述神经干细胞为移植的脊髓神经干细胞。

本发明通过利用埃博霉素D处理脊髓损伤小鼠后，取脊髓组织的 RNA-seq分析发现了Apol8基因的新功能，Apol8基因能够在体内外调控神经干细胞定向神经元分化，促进脊髓损伤的修复和运动功能的恢复。

本发明提供Apol8蛋白、其编码基因或含有其编码基因的生物材料在调控神经干细胞定向神经元分化中的应用。

优选地，所述神经干细胞为脊髓神经干细胞。

以上所述的调控神经干细胞定向神经元分化为体外调控或体内调控。

本发明提供Apol8蛋白、其编码基因或含有其编码基因的生物材料在制备促进脊髓损伤修复的产品中的应用。

本发明提供Apol8蛋白、其编码基因或含有其编码基因的生物材料在制备用于促进脊髓损伤区突触结构形成的产品中的应用。

本发明提供Apol8蛋白、其编码基因或含有其编码基因的生物材料在制备用于促进脊髓损伤后运动功能恢复的产品中的应用。

本发明还提供Apol8蛋白或其编码基因的抑制剂或含有所述抑制剂的生物材料在抑制脊髓神经干细胞定向神经元分化中的应用。

本发明中，所述生物材料为重组DNA、载体或宿主细胞。

所述重组DNA为表达盒、Apol8融合蛋白的编码基因等。

所述载体为质粒载体、病毒载体等。

所述宿主细胞为微生物细胞或动物细胞。

本发明中，所述Apol8基因的抑制剂能够抑制Apol8蛋白的编码基因转录或表达，包括但不限于Apol8基因的干扰RNA等。

本发明还提供一种体外调控神经干细胞定向神经元分化的方法，该方法包括：利用埃博霉素D处理所述神经干细胞，或者，调控所述神经干细胞中Apol8基因的表达量。

优选地，所述神经干细胞为脊髓神经干细胞。

优选地，通过利用埃博霉素D处理所述神经干细胞，或者，通过提高所述神经干细胞中Apol8基因的表达量，促进神经干细胞体外定向神经元分化。

优选地，所述埃博霉素D处理为采用0.5～5nM浓度的埃博霉素D 处理神经干细胞。所述处理优选为在神经干细胞体外培养基中添加 0.5～5nM的埃博霉素D。

埃博霉素D可添加至任何适用于神经干细胞的体外分化培养基中，例如：加入B27的DMEM/F12培养基等。

本发明中，所述神经干细胞可为来源于任何哺乳动物的神经干细胞，所述哺乳动物包括但不限于小鼠、大鼠、豚鼠、沙土鼠、兔、猫、狗、牛、马、猪、羊和人等。

本发明中，所述Apol8蛋白优选为小鼠(Mus musculus)Apol8蛋白，小鼠的Apol8蛋白的序列如SEQ ID NO.1所示，Apol8基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明的有益效果在于：本发明发现埃博霉素D能够促进神经干细胞定向神经元分化，抑制脊髓神经干细胞向星形胶质细胞分化，在脊髓损伤区能够诱导移植的脊髓神经干细胞定向分化神经元并参与功能结构relay的形成。本发明进一步发现，埃博霉素D通过上调Apol8 基因调控神经干细胞定向神经元分化。对Apol8基因进行功能验证实验发现，Apol8基因能够调控神经干细胞定向神经元分化，过表达Apol8基因能够促进脊髓神经干细胞向神经元的定向分化，而抑制 Apol8基因的表达则会抑制脊髓神经干细胞向神经元的定向分化。埃博霉素D和Apol8在调控脊髓神经干细胞定向神经元分化等新功能的发现为脊髓损伤修复的治疗提供了新的靶点。

附图说明

图1为本发明实施例1中埃博霉素D促进神经干细胞定向神经元分化以及realy的形成，其中，A为免疫荧光实验表明埃博霉素D促进脊髓神经干细胞向神经元分化，抑制其向星形胶质细胞分化；B和C 为A中神经元和星形胶质细胞分化比例统计图；D和E为定量PCR检测脊髓神经干细胞分化过程中埃博霉素D对脊髓神经干细胞分化的影响；F和G为Western-blot检测脊髓神经干细胞分化过程中埃博霉素D 对脊髓神经干细胞分化的影响；H为伪狂犬病毒示踪实验表明埃博霉素D定向驯化后的脊髓神经干细胞移植后可以分化为成熟神经元并参与功能结构relay的形成；I和J分别为H中正常组织和损伤区的突触传递比例统计结果，图中Control代表对照组，Epothilone D代表埃博霉素D处理组，NSCs代表未经埃博霉素D处理的神经干细胞移植， Epothilone D-NSCs代表经埃博霉素D处理的神经干细胞移植。

图2为本发明实施例2中埃博霉素D通过Apol8促进脊髓神经干细胞定向神经元分化，其中，A为RNA-Seq结果寻找埃博霉素D调控的上调表达基因；B为在脊髓神经干细胞中过表达Apol8或通过RNAi干扰Apol8观察其对脊髓神经干细胞分化的影响，图中，CD511B代表感染不携带Apol8的慢病毒CD511B载体的对照脊髓神经干细胞， CD511B-Apol8代表Apol8过表达的脊髓神经干细胞，Apol8-RNAi代表 RNAi干扰Apol8的脊髓神经干细胞；C为在脊髓神经干细胞中将Apol8 干扰后，进一步观察埃博霉素D对其分化的影响，图中，Control代表正常分化组，Epothilone D代表埃博霉素D处理组， Apol8-RNAi+Epothilone D代表RNAi干扰Apol8后埃博霉素D处理组。

图3为本发明实施例2中Apol8过表达的神经干细胞移植后分化为成熟神经元参与脊髓损伤后的功能重建，其中，A为Apol8-NSC移植后在损伤区分化为神经元；B为Apol8-NSC移植可以促进突触结构的形成，其中箭头指示为移植的细胞(GFP标记)周围有突触结构形成； C为功能生物材料LOCS搭载Apol8-NSC移植后可以有效改善脊髓全横断损伤小鼠的运动功能；图中，Apol8-NSCs代表移植Apol8基因过表达脊髓神经干细胞，NSCs代表移植Apol8基因未过表达脊髓神经干细胞，LOCS+NSCs代表功能生物材料LOCS搭载正常NSC移植，LOCS+Apol8-NSCs代表功能生物材料LOCS搭载Apol8-NSC移植，Normal 代表正常小鼠，SCI代表脊髓全横断损伤小鼠。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1埃博霉素D促进脊髓神经干细胞定向神经元分化

本实施例分别通过体外神经干细胞分化实验和体内移植实验分析埃博霉素D的功能，具体方法如下：

1、体外神经干细胞分化实验

(1)分离C57BL/6N出生12小时以内的乳鼠的原代脊髓神经干细胞并在体外进行成球增殖培养(100mL DMEM/F12培养基中添加：1mL非必需氨基酸，1mL丙酮酸钠，1mLPenicillin-streptomycin 双抗，2mL B27，2mL 30％葡萄糖，2μL 1mg/mL EGF，2μL 1mg/mLbFGF，7.32μL浓度为0.05g/2mL的肝素)；

(2)将步骤(1)得到的神经干细胞球消化成单细胞后利用贴壁培养基进行贴壁培养过夜，次日更换培养基为去除EGF、bFGF 的分化培养基(100mL DMEM/F12培养基中添加：1mL非必需氨基酸，1mL丙酮酸钠，1mL双抗，2mL B27，2mL 30％葡萄糖，1 mL 3％谷氨酰胺)，分化培养基中加入DMSO稀释后的埃博霉素D (终浓度为1nM)，分化培养6天和12天，隔天换液，收集细胞分别进行Tuj-1染色和MAP2染色。

试验组：培养基为加入埃博霉素D终浓度为1nM的分化培养基。

对照组：培养基为加入等量体积DMSO的分化培养基。

试验组和对照组均隔天换液，埃博霉素D现用现加。

免疫荧光实验检测小鼠乳鼠脊髓来源的神经干细胞在埃博霉素 D作用下的分化情况。结果显示：加入埃博霉素D的分化培养条件下，神经元的分化比例显著提高，而星形胶质细胞的比例显著降低 (图1的A-C，B和C为A的统计结果)；定量PCR检测神经元标志物Tuj-1和MAP2的基因表达情况发现，埃博霉素D可以显著提高Tuj-1和MAP2的mRNA水平(图1中的D-E)，表明埃博霉素D 促进脊髓神经干细胞向神经元分化，抑制其向星形胶质细胞分化；Western-blot检测脊髓神经干细胞分化过程中Tuj-1、MAP2、GFAP 蛋白的水平，结果显示Tuj-1、MAP2的蛋白水平显著提高，而GFAP 蛋白水平显著降低(图1的F-G，G为F的灰度统计结果)，表明埃博霉素D能够促进脊髓神经干细胞定向神经元分化。

2、经埃博霉素D处理的脊髓神经干细胞的移植

将脊髓神经干细胞贴壁过夜后换上增殖培养基进行增殖培养2 天，然后用伪狂犬病毒示踪实验中使用的逆转录病毒标记细胞，标记第3天加入埃博霉素D进行体外驯化培养处理，后将细胞接种在 LOCS生物材料上孵育过夜，次日，将细胞移植物移植到脊髓全横断损伤部位。然后，在脊髓损伤后到第7周，在脊髓损伤部位尾端注射伪狂犬病毒示踪技术中使用的第二种病毒——伪狂犬病毒，最后在一周后取材染色。

利用伪狂犬病毒示踪实验检测移植的神经干细胞是否在脊髓损伤区分化成成熟神经元并参与功能结构relay的形成，结果显示：埃博霉素D定向驯化后的脊髓神经干细胞移植后可以分化为成熟神经元并参与功能结构relay的形成(图1的H-J)。

综上，通过体外分化实验发现埃博霉素D可以促进脊髓神经干细胞定向神经元分化；通过脊髓神经干细胞的体内移植实验发现，经埃博霉素D定向驯化的脊髓神经干细胞移植后可以在脊髓损伤区分化为成熟神经元并参与功能结构relay的形成。

实施例2埃博霉素D通过上调Apol8调控脊髓神经干细胞定向神经元分化

对C57BL/6N小鼠进行1mm的全横断脊髓损伤，然后按照0.75 mg/kg的埃博霉素D的剂量，每天进行一次腹腔注射给药，持续5 天，然后取损伤区前后共2mm的脊髓组织进行RNA-seq，分析 RNA-seq结果中差异表达基因，发现响应埃博霉素D调控的上调表达差异显著的基因共计11个(图2的A)，其中，Apol8基因的转录水平显著提高，表明埃博霉素D可以上调Apol8的表达。

为进一步分析Apol8是否具有调控脊髓神经干细胞定向神经元分化的功能，分别构建Apol8过表达和RNAi干扰脊髓神经干细胞，具体方法如下：

1、Apol8过表达脊髓神经干细胞的构建

将小鼠Apol8(氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，基因序列如 SEQ ID NO.2所示)的CDS区构建到慢病毒载体CD511B载体上，然后获得Apol8过表达的慢病毒。再利用慢病毒感染贴壁后的小鼠脊髓神经干细胞，获得Apol8过表达脊髓神经干细胞。

2、RNAi干扰Apol8脊髓神经干细胞的构建

将小鼠Apol8基因序列提交给公司设计siRNA序列(SEQ ID NO.3：CGTGCTTCAATATGTCTAA)，然后转染贴壁后的小鼠脊髓神经干细胞。

参考实施例1的方法对Apol8过表达和RNAi干扰的脊髓神经干细胞进行体外分化培养，以未进行Apol8过表达和RNAi干扰的正常脊髓神经干细胞作为对照。采用免疫荧光染色的方法检测神经干细胞向神经元分化的比例，结果显示，在脊髓神经干细胞中过表达Apol8能够显著提高神经元的分化比例，Tuj-1阳性细胞的比例由正常分化组的7.44％±0.6％提高到21.83±2.68％，而通过RNAi干扰Apol8，其比例降低到4.40±2.25％。同时，MAP2成熟神经元的比例由正常分化组的8.94±1.45％提高到Apol8过表达组的23.72±3.16％，而一旦通过RNAi干扰Apol8，其比例降低到3.13±1.45％ (图2的B)，表明Apol8能够调控脊髓神经干细胞定向分化神经元。

进一步利用埃博霉素D对RNAi干扰Apol8脊髓神经干细胞进行处理，实验分为三组，正常分化组(不进行埃博霉素D处理)，埃博霉素D处理组(正常脊髓神经干细胞进行埃博霉素D处理)，RNAi 干扰Apol8后埃博霉素D处理组(RNAi干扰Apol8脊髓神经干细胞进行埃博霉素D处理)。

其中，RNAi干扰Apol8后埃博霉素D处理组为：将Apol8-siRNA 转染贴壁后的小鼠脊髓神经干细胞，然后更换含有1nM埃博霉素D 的分化培养基进行分化培养。

正常分化组为采用不含埃博霉素D的分化培养基进行分化培养。

埃博霉素D处理组为采用含有1nM埃博霉素D的分化培养基进行分化培养。

分化培养方法参考实施例1。

对上述各组利用免疫荧光染色的方法检测神经干细胞分化的情况，结果显示，与正常分化组相比，埃博霉素D处理组的Tuj-1和 MAP2阳性细胞的比例显著提高，GFAP星形胶质细胞的比例显著下降，而一旦将脊髓神经干细胞中Apol8干扰之后，埃博霉素D则不能提高神经元的分化比例，同时也不会降低星形胶质细胞的比例(图2的C)，表明埃博霉素D是通过Apol8促进脊髓神经干细胞向神经元分化。

综上，Apol8基因的过表达实验和RNAi实验证明Epothilone D 通过Apol8促进脊髓神经干细胞定向神经元分化，Apol8基因具有调控脊髓神经干细胞定向神经元分化的功能。

进一步地，将以上构建的Apol8过表达的神经干细胞 (Apol8-NSC)移植到小鼠脊髓全横断损伤区。利用组织免疫荧光染色和BBB功能评分的方法检测移植神经干细胞在脊髓损伤区的分化情况以及对小鼠运动功能恢复的改善情况，结果显示，移植的正常的脊髓神经干细胞(Apol8基因未过表达的脊髓神经干细胞)在脊髓损伤区向Tuj-1阳性细胞分化的比例要明显低于移植Apol8-NSC (Apol8基因过表达的脊髓神经干细胞)向Tuj-1分化的比例，同时，移植正常的NSCs在损伤区无法分化为成熟的神经元，而Apol8-NSC 移植后可以向成熟神经元NeuN分化(图3的A)，表明Apol8-NSC 移植后在损伤区更多的分化为神经元，且部分可以成为成熟的神经元。

利用神经丝和突触标志物进行免疫荧光染色，结果显示，移植的Apol8-NSC周围有一些突触结构的出现(图3的B)，表明 Apol8-NSC移植可以促进突触结构的形成。同时利用功能生物材料 LOCS(有序胶原材料，Linear ordered collagen scaffold)搭载 Apol8-NSC移植，并利用BBB功能评分方法检测小鼠运动功能的恢复情况，结果显示Apol8-NSC移植组小鼠较正常NSC移植组小鼠有明显的运动功能改善(图3的C)，表明Apol8-NSC的移植可以有效改善脊髓全横断损伤小鼠的运动功能。

综上，在脊髓损伤区移植的Apol8过表达的神经干细胞可以分化为成熟神经元并促进突触结构的形成，改善脊髓全横断损伤小鼠运动功能的恢复。

综上所述，本发明首次发现埃博霉素D可以促进脊髓神经干细胞定向神经元分化，且通过Apol8调控神经元的分化过程。Apol8 过表达的神经干细胞在脊髓损伤移植后更倾向于向成熟神经元分化，促进突触结构的形成，改善小鼠的运动功能。本发明探究了埃博霉素D和Apol8在调控脊髓神经干细胞分化中的功能和作用机制，并为将来脊髓损伤修复的治疗提供了新的靶点。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

序列表

<110> 中国科学院遗传与发育生物学研究所

<120> 埃博霉素D和Apol8在调控神经干细胞定向神经元分化中的应用

<130> KHP211110165.8

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 339

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Met Asp Pro Ser Asp Cys Glu Asp Ala Pro Gly Asp Arg Thr Phe Ile

1 5 10 15

Glu Glu Ala Ala Glu Tyr Leu Gln His Thr Ser Gly Arg Glu Asp Leu

20 25 30

Arg Leu Leu Leu Thr Glu Asp Gly Ala Trp Glu Ala Phe Val Ala Glu

35 40 45

Ala Glu Leu Ser Arg Ala Asp Ala Asp Thr Leu Arg Asp Ala Leu His

50 55 60

Ala Leu Thr Ala Asn Leu Ala Val Glu Asp Gln Glu Arg Leu Gln Arg

65 70 75 80

Asp Leu Gln Asp Met Glu Arg Phe Met Asp Ala Phe Pro Gln Val Lys

85 90 95

Leu Glu Leu Glu Gly His Ile Gly Lys Leu Arg Thr Leu Ala Asp Lys

100 105 110

Val Asp Lys Val His Arg Asp Cys Thr Ile Ser Lys Leu Val Ala Gly

115 120 125

Ser Thr Ser Thr Val Ser Gly Ile Leu Thr Leu Leu Gly Leu Thr Leu

130 135 140

Val Pro Val Thr Ala Gly Ile Ser Leu Val Leu Leu Ala Thr Gly Met

145 150 155 160

Gly Leu Gly Ala Ala Ala Ala Val Thr Ser Val Ser Ser Gly Ile Val

165 170 175

Asp Tyr Thr Ser Arg Ser Leu Ala Lys Thr Glu Ala Ser His Leu Val

180 185 190

Ser Thr Gly Met Ala Lys Val Lys Met Val Ala Asp Ala Val Val His

195 200 205

Ser Gly Pro Gln Val Leu Ser Leu Ser Glu Asn Cys Cys Arg Val Leu

210 215 220

Arg Cys Ile Glu Gln Ser Ile Tyr Ala Ile Lys Leu Thr Lys Ala Asn

225 230 235 240

Pro Ala Leu Ala Ala Ser Ala Met Gly Ser Thr Ser Ala Gln Ser Gly

245 250 255

Lys His Val Lys Lys Ala Phe Lys Gly Thr Ala Leu Ala Ile Ser Arg

260 265 270

Arg Ala Arg Ile Met Gly Ile Ala Thr Ala Gly Val Ser Leu Val Gly

275 280 285

Asp Val Ile Ser Leu Val Lys Gln Ser Lys Asn Leu His Lys Gly Thr

290 295 300

Lys Ala Lys Ser Ala Glu Glu Leu Arg Gln Gln Ala Arg Glu Leu Glu

305 310 315 320

Glu Lys Leu Glu Ala Leu Ile Gln Met Tyr Glu Gly Leu Gln Ala Gly

325 330 335

Ser Arg Arg

<210> 2

<211> 1020

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

atggaccctt cagactgcga ggatgcccca ggagacagaa ccttcattga ggaagccgct 60

gagtacctgc agcacacatc gggcagggaa gacctgaggc tgctgctgac cgaagatgga 120

gcctgggagg cctttgtggc ggaagctgag ttgtccagag ctgatgcaga cactttacgc 180

gacgccctcc atgcactcac agcaaacctg gctgtggaag accaggaaag gctccaacgt 240

gacctgcagg acatggagag gtttatggat gcgtttcccc aggtgaaact ggagctggag 300

ggacacatcg ggaagctccg caccctggca gacaaggttg acaaggtgca cagggactgt 360

accatctcca agcttgtggc cggctccacc agcactgtgt ctggcatcct gaccctcctt 420

ggcctcactc tggtacccgt gacagctggg atcagtctgg tactcttggc aacagggatg 480

ggcctgggag cagcagcggc tgtgactagt gtctcctctg ggatcgtgga ctacacaagt 540

aggtcattag ccaaaacgga agccagccac ctggtgtcaa ccggcatggc caaagtgaag 600

atggttgcag acgctgtggt tcattcagga ccccaggtct tgtccttatc tgagaattgc 660

tgccgtgtcc tacggtgcat tgagcagagc atctatgcca tcaagctcac caaagccaac 720

cctgccttag cagctagtgc catggggagc acctctgccc aaagtggtaa gcacgtgaag 780

aaggccttta aaggcactgc cctggcaata agcagaagag cccggatcat gggtatagcc 840

accgcaggtg tgtccctcgt tggggatgtg atcagccttg tgaaacagtc caagaatttg 900

cacaagggca caaaagcaaa gtctgccgag gagttgaggc agcaggctcg ggagctggag 960

gagaaactgg aggcgctcat ccagatgtat gaaggtttgc aggcaggctc aaggcggtaa 1020

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

cgtgcttcaa tatgtctaa 19

Claims (10)

1.埃博霉素D在调控神经干细胞定向神经元分化中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述调控神经干细胞定向神经元分化为促进脊髓神经干细胞定向神经元分化。

3.埃博霉素D在抑制脊髓神经干细胞向星形胶质细胞分化中的应用。

4.埃博霉素D在促进脊髓损伤区神经干细胞定向神经元分化或relay结构形成中的应用。

5.Apol8蛋白、其编码基因或含有其编码基因的生物材料在调控神经干细胞定向神经元分化中的应用；

优选地，所述神经干细胞为脊髓神经干细胞。

6.Apol8蛋白、其编码基因或含有其编码基因的生物材料在制备促进脊髓损伤修复的产品中的应用。

7.Apol8蛋白、其编码基因或含有其编码基因的生物材料在制备用于促进脊髓损伤区突触结构形成的产品中的应用。

8.Apol8蛋白、其编码基因或含有其编码基因的生物材料在制备用于促进脊髓损伤后运动功能恢复的产品中的应用。

9.Apol8蛋白或其编码基因的抑制剂或含有所述抑制剂的生物材料在抑制脊髓神经干细胞定向神经元分化中的应用。

10.一种体外调控神经干细胞定向神经元分化的方法，其特征在于，利用埃博霉素D处理所述神经干细胞，或者，调控所述神经干细胞中Apol8基因的表达量。

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