CN112999316A - 采用cf活化细胞提取方法制备的活化细胞冷敷贴 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种活化冷敷贴，原料为纯化水、卡波姆、人参、大黄、覆盆子、茯苓、木贼、乌药、桂枝、艾叶、巴戟天、白芥子、苏子、红景天、黄精、石斛、燕窝、泽兰、泽贝母、乌梅、五味子、苦参、白芷、刺蒺藜、王不留行、胆南星、三棱、当归、黄芪、桔梗、火炭母草、白僵蚕、牛黄、珍珠。该活化冷敷贴内包含有白僵蚕干细胞以及人参、燕窝和红景天小分子活化肽，采用上述配方制得活化冷敷贴，本发明的活化冷敷贴用于修复皮肤、创伤及痔疮肛瘘等疾病，且该中药制剂使用操作便捷，无任何不良反应；各种中药成分合用起到协同作用，从而修复作用大大提高；同时该活化冷敷贴配方原料常见、成本低廉、适合大规模生产、使用方便、疗效突出。

Description

采用CF活化细胞提取方法制备的活化细胞冷敷贴
技术领域
本发明涉及一种中药复方制剂技术领域，尤其是涉及一种用于修复皮肤创伤褥疮，关节及软组织损伤，暖宫贴等的活化冷敷贴及其制备方法。
背景技术
皮肤是保护机体与自然界之间的第一道屏障，能够防止环境致病微生物的入侵以及自身体液的丢失。皮肤也是机体的一个非常重要的器官，健康的皮肤屏障能够抵御外界有害物、刺激物和日光等进入，其物理屏障受损将引起皮肤干燥、皮肤老化、色素沉着异位性皮炎、湿疹、银屑病、鱼磷病、日光性皮炎等皮肤敏感、刺激性皮炎等疾病。当今社会很多人的皮肤由于种种原因处于亚健康状态，原因一般在于：化浓妆、熬夜、空气污染、天气湿热、电子设备等辐射、工作压力大、情绪不稳定等，上述诸多不利因素都会对皮肤造成一定损伤，使得正常的表皮细胞受到损害，外在表现为肌肤的生理年龄比实际年龄大很多，即不正常的衰老，为解决上述问题，需要采用专门的用于修复受损皮肤的护肤品作日常护理；另一方面，目前通过医学美容改善外貌的人越来越多，很多医学美容的项目，如微雕、线雕、果酸去角质、磨砂膏去角质、光子嫩肤、水光针、微晶磨削、激光祛斑等，上述项目都会对对皮肤造成一定程度的损伤，医美项目完成后，必须采用医用级别的护肤品以使受损皮肤尽快修复。
医用冷敷贴是根据传统的冷敷方式(如:冷水、冰水、酒精)改良而成，以高分子凝
胶为基础制备的不含有发挥药理学、免疫学或者代谢作用的成份，由背衬层、凝胶层、覆盖层组成。通过高分子凝胶的水分和天然清凉成份的汽化带走热量，起到物理降温、冷敷理疗作用，通过水凝胶涂布在背衬层上贴合皮肤，水凝胶作用于体表皮肤，在体表皮肤表面形成一层透气的薄膜保护层，阻隔外来细菌、灰尘、紫外线等异物侵入，保护体表皮肤免受侵害。冷敷贴可促使局部毛细管收缩，减轻局部充血，可使神经末梢的敏感性降低，而减轻疼痛，降温降热，可减少局部血流，防止炎症和化脓扩散。冷敷适用于早期局部软组织损伤、高热病人及中暑者、牙痛等需要冷敷的人群。周期性使用冷敷贴，对闭合性软组织起物理屏障保护作用，加强皮肤自身防御能力，提升皮肤的免疫力。
冷敷贴与传统冷敷方式相比，具有以下优点：(1)方便：医用冷敷贴每贴独立单包装，易贴易揭，可贴至人体各部位，无污染无残留且方便携带，也可根据人体不同部位，剪成合适大小使用。(2)舒缓：亲水性高分子凝胶涂布在无纺布上，借助高分子凝胶的蓄冷作用和水分的挥发，缓解局部皮肤的灼热感、肿痛感、瘙痒感和敏感，对闭合性软组织起到冷敷理疗作用。(3)物理屏障:医用冷敷贴采用透气性良好的无纺布做基布，水凝胶涂布在无纺布上，冷敷在体表皮肤，水凝胶作用于体表皮肤，在体表皮肤表面形成一层透气的薄膜保护层，保护皮肤水分过度蒸发，预防干燥性皮肤瘙痒症，同时对微生物的侵害具有防御作用。(4)安全：医用冷敷贴依据GB/T16886.5-2017体外细胞毒性试验、GB/T16886.10-2017刺激与皮肤致敏试验标准进行了生物学评价，医用冷敷贴无细胞毒性、无致敏反应、无皮肤刺激。
现有医用冷敷贴的不足之处在于：蒸发率过高、含水率不足，致使保水性能欠佳；对皮肤护理能力差，无法使皮肤恢复自身的保湿锁水能力和健康的状态。因此，有必要提供一种采用CF活化细胞提取方法制备的活化细胞冷敷贴，使该冷敷贴中含有白僵蚕干细胞以及人参、燕窝和红景天小分子活化肽，能够促进皮肤更快的修复。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，针对现有的不足，提供一种采用CF活化细胞提取方法制备的活化细胞冷敷贴，使该冷敷贴中含有白僵蚕干细胞以及人参、燕窝和红景天小分子活化肽，能够促进皮肤更快的修复。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是，该活化冷敷贴的原料为纯化水、卡波姆、人参、大黄、覆盆子、茯苓、木贼、乌药、桂枝、艾叶、巴戟天、白芥子、苏子、红景天、黄精、石斛、燕窝、泽兰、泽贝母、乌梅、五味子、苦参、白芷、刺蒺藜、王不留行、胆南星、三棱、当归、黄芪、桔梗、火炭母草、白僵蚕、牛黄、珍珠，其中所述纯化水90～120份，所述卡波姆0.5～2份，所述人参0.5～5份，所述大黄0.5～2份，所述覆盆子0.5～2份，所述土茯苓0.5～5份，所述木贼0.5～2份，所述乌药0.5～2份，所述桂枝0.1～2份，所述艾叶1～8份，所述巴戟天1～5份、所述白芥子1～5份，所述苏子1～5份，所述红景天0.5～3份，所述黄精0.5～2份，所述石斛1～5份，所述燕窝1～5份，所述泽兰1～3份，所述泽贝母1～3份，所述乌梅1～5份，所述五味子1～3份，所述苦参0.1～3份，所述白芷0.1～3份，所述刺蒺藜0.1～3份，所述王不留行0.5～2份，所述胆南星0.5～2份，所述三棱0.5～2份，所述当归0.5～2份，所述黄芪0.5～2份，所述桔梗0.5～2份，所述火炭母草0.5～2份，所述白僵蚕0.5～1份，所述牛黄0.1～2份，所述珍珠0.1～2份；辅料0.1～2份。
作为本发明的优选技术方案，所述纯化水110份，所述卡波姆1份，所述人参3份，所述大黄1份，所述覆盆子3份，所述土茯苓4份，所述木贼1份，所述乌药1份，所述桂枝3份，所述艾叶1份，所述巴戟天2份，所述白芥子3份，所述苏子2份，所述红景天2份，所述黄精1份，所述石斛3份，所述燕窝3份，所述泽兰2份，所述泽贝母2份，所述乌梅3份，所述五味子2份，所述苦参3份，所述白芷2份，所述刺蒺藜2份，所述王不留行1份，所述胆南星1份，所述三棱1份，所述当归1份，所述黄芪1份，所述桔梗1份，所述火炭母草1份，所述白僵蚕1份，所述牛黄1份，所述珍珠2份，辅料2份。
发明人经过多次研究发现，采用上述配方制得活化冷敷贴，本发明的活化冷敷贴用于修复皮肤、创伤及痔疮肛瘘等疾病，且该中药制剂使用操作便捷，无任何不良反应；各种中药成分合用起到协同作用，从而修复作用大大提高；同时该活化冷敷贴配方原料常见、成本低廉、适合大规模生产、使用方便、疗效突出；该活化冷敷贴是质量体系稳定、有效成份明确。
其中，卡波姆具有保护肌肤的作用，它对人类的皮肤有一定的亲和力，平时人们把它加入的化妆品中，以后使用，可以保护肌肤，而且能减少刺激性物质，对人类皮肤和皮肤粘膜的刺激与伤害，能防止多种过敏症状发生；同时具有抗紫外线的作用，因为卡波姆具有一定的活性，它涂抹在人体皮肤表层以后，能增强人类皮肤对紫外线的抵抗能力，可以减少紫外线对人体皮肤的伤害，在夏天使用，加入了卡波姆的防晒用品，会起到特别理想的防晒作用，能防止皮肤变黑也能防止皮肤被紫外线灼伤。
人参的主要功效为：大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津，安神；可以用于治疗体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少，肺虚喘咳，津伤口渴，内热消渴，久病虚羸，惊悸失眠，阳痿宫冷；心力衰竭，心原性休克。用于气短喘促，心悸健忘，口渴多汗，食少无力，一切急慢性疾病及失血后引起的休克、虚脱。大补元气，固脱生津，安神。治劳伤虚损，食少，倦怠，反胃吐食，大便滑泄，虚咳喘促，自汗暴脱，惊悸，健忘，眩晕头痛，阳痿，尿频，消渴，妇女崩漏，小儿慢惊，及久虚不复，一切气血津液不足之证
大黄的主要功效为积滞、清湿热、泻火、凉血、祛瘀、解毒；实热便秘、热结胸痞、湿热泻痢、黄疸、淋病、水肿腹满、小便不利、目赤、咽喉肿痛、口舌生疮、胃热呕吐、吐血、咯血、衄血、便血、尿血、蓄血、经闭、产后瘀滞腹痛、癥瘕积聚、跌打损伤、热毒痈疡、丹毒、烫伤。
土茯苓，善治湿热疮毒。阴痒是妇女常见的多发病，症见外阴及阴道瘙痒，甚则痒痛难忍，坐卧不宁，或伴带下增多者，亦称“阴门瘙痒”。因肝肾阴虚，精血亏损，外阴失养而致阴痒，属虚证；因肝经湿热下注，带下浸渍阴部，或湿热生虫，虫蚀阴中以致阴痒，为实证。临床上以后者多见。余常用燥湿止痒汤治之，多获立竿见影之效。
木贼的主要功效为：疏风散热、退翳、止血。属解表药下分类的辛凉解表药；主要用于目赤肿痛、目生云翳、迎风流泪、喉痛、痈肿、便血、血痢、脱肛、崩漏。其具有持久性的降压作用；有明显增强戊巴比妥钠的中枢抑制作用。可提高电击惊厥的阈值，制止癫痫样发作；能显著降低血清总胆固醇、甘油三酯含量，对实验性高脂血症有防治作用；抑制血小板聚集，缩短血凝及出血时间；在体外有广泛的抑菌作用，并有抗病毒活性。抗疟。木贼有扩张外周血管作用和降低毛细血管通透性作用；所含脂肪酸及酯有镇痛作用；醇提物低浓度兴奋回肠，高浓度抑制。
乌药的主要功效为性温，味辛。归肺经、脾经、肾经、膀胱经；顺气、开郁、散寒、止痛。属理气药；具有增强胃肠活动、止痛、止血、保肝、抗菌、平喘、抗组胺、止血、抗单纯疱疹病毒、抗癌等药理作用，对离体平滑肌有兴奋和抑制的双重作用；其主要含挥发油成分，含多种倍半萜类成分，有一些属于桉烷的生物碱，有一些属于乌药烷的衍生物；此外，还含有生物碱、乌药醚内酯、乌药内酯、新乌药内酯、乌药烯、α-姜黄烯、乌药醚、双香樟内酯等。
桂枝具有的功效：1、发汗解肌：用于表虚感冒，可与白芍同用，如桂枝汤。2、温经通脉：用于宫寒闭经及寒凝血脉引起的肢麻身冷血痹症，可与黄芪、附子、白术、桂枝同用；3、温阳化气：用于慢性浮肿病人。此类病人皆痰饮水湿为患，肺脾肾三脏功能失调，上中下三焦道路壅塞，营卫运行不畅，膀胱气化失司，蒸化无权，水不化气，滞而为水，停而为痰，留而为饮，皆为阴邪，得阳则化，故用桂枝辛温振奋阳气，开发腠理，通调水道，助三焦之阳，为痰饮水湿必用之品。4、温经除痹：痹乃为风寒湿三气合而为之，即相当现在风湿性关节炎；因本品温通经络，外可辛散祛风胜湿，内可温通散寒止痛，更能领祛风湿诸药直达病所，收一举三得之效；5.温通胸阳：胸为上焦，内藏心肺，为阳气升发之地，肺主气，心主血脉，气血运行赖以阳气推动，胸阳不振，则气血无力推动而成心廊痹阻，即现在的冠心病之类；桂枝辛可通行，温能助阳，为温通胸阳之佳品。
白芥子具有利气燥痰，散结消肿的功效。属利水渗湿药下属分类的利水消肿药；①镇咳作用：炒白芥子醇提取物灌胃在浓氨水致咳实验中使小鼠的咳嗽次数明显减少，咳嗽的潜伏期明显的延长，镇咳效果明显。②祛痰作用：毛细玻管法中，白芥子水提取物、炒白芥子水提取物都有明显的祛痰作用，尤以白芥子水提取物大剂最组祛痰效果明显。③平喘作用：喷雾致喘法中，炒白芥子醚提取物对4％氯化乙酰胆碱诱发豚鼠哮喘有明显预防作用。④抗雄激素作用：以60％乙醇提取制得的白芥子总提取物和分段提取物Ⅰ、Ⅱ以及分离得到的白芥子苷给由丙酸睾酮诱发的去势小鼠灌胃，均能显著抑制去势小鼠的前列腺增生，降低小鼠血清酸性磷酸酶活性。⑤抗炎作用：白芥子苷能明显降低滤纸片埋藏引起的大鼠肉芽肿增生；其化学成分主要为：种子含芥子油苷，内有白芥子苷。还含脂肪油，芥子酶，芥子碱和赖氨酸、精氨酸、组氨酸等氨基酸。又含4-羟基苯甲酰胆碱，4-羟基苯甲胺。
巴戟天具有补肾阳，强筋骨，祛风湿之功效。常用于用于阳痿遗精，宫冷不孕，月经不调，少腹冷痛，风湿痹痛，筋骨痿软。巴戟天，主大风邪气，及头面游风者，风力阳邪，势多走上，《经》曰，邪之所凑，其气必虚，巴戟天性能补助元阳，而兼散邪，况真元得补，邪安所留，此所以愈大风邪气也。主阴痿不起，强筋骨，安五脏，补中增志益气者，是脾、肾二经得所养，而诸虚自愈矣。其能疗少腹及阴中引痛，下气，并补五劳，益精，利男子者，五脏之劳，肾为之主，下气则火降，火降则水升，阴阳互宅，精神内守，故主肾气滋长，元阳益盛，诸虚为病者，不求其退而退矣。
苏子即紫苏，具有降气化痰，止咳平喘，润肠通便的功效；属泻下药下分类的润下药。其化学成分为：紫苏种子含蛋白质17％、油51.7％，油中富含不饱和脂肪酸和亚麻酸56.8％，亚油酸17.6％、甘油三亚油酸酯、α-亚麻酸、甘油三棕榈酸酯、左旋紫苏醛等成分。
红景天的主要功效为益气活血，通脉平喘；属补益药下分类的补气药；用于气虚血瘀，胸痹心痛，中风偏瘫，倦怠气喘；其提取物能提高大鼠红细胞、肝脏SOD活性，降低血浆、心肌、脑组织内LPO的含量；其化学成分主要含红景天苷、苷元酪醇、黑蚁素、臧红花醛、咖啡酸、山柰酚、没食子酸乙酯、β-谷固醇、邻苯二甲酸二丁酯、棕榈酸、香豆素、大花红景天苷、人体需要的17种氨基酸、21种微量元素及多种维生素、挥发油、黄酮、甾醇，有机酸等成分。
石斛的功效与作用：1、降低血糖：石斛这种食材滋阴清热润燥，它早在古代年前就是治疗人类糖尿病的常用药，现代医学也已证明石斛可以促进人体内胰岛素的活性，也能降低血液中糖分的含量，能让人的血糖快速恢复到正常状态；2、抑制肿瘤：石斛还有超强的抗病毒性，它能有效抑制人体内癌细胞的活性，能预防细胞癌变，减少肿瘤发生，平时它可以用于人类恶性肿瘤的辅助治疗技能，提高患者的身体免疫力，又能抑制病情恶化，能有效延长癌症患者生命；3、保护眼睛：滋阴明目也是石斛的重要作用，它在中国传统医学中就是保护眼睛特有保健品，是人们多食用石斛不单能预防视力下降，而且能减少白内障青光眼以及近视眼等多种眼科疾病发生。另外石斛还能保护心脏，可以提高心脏功能，也能预防心血管疾病发生；4、延缓皮肤衰老：石斛中含有大量天然粘液，这种物质对人类的肌肤有明显滋养作用，能延缓皮肤衰老，增加皮肤弹性，而且能抑制皮肤表层黑色素生成，平时经常食用，既能细嫩美白肌肤，又能延缓肌肤衰老。
燕窝指雨燕目雨燕科的部分雨燕和金丝燕属的几种金丝燕分泌出来的唾液，再混合其他物质所筑成的巢穴；燕窝中的主要营养成分是蛋白质，其中有1种必需氨基酸(赖氨酸)，3种条件性必需氨基酸，而人体需要的必需氨基酸有8种，条件性必需氨基酸有13种。燕窝中的水解氨基酸含量达42.272％，且必需氨基酸含量占氨基酸总量的42％；同时，呈鲜味特征的氨基酸(天门冬氨酸和谷氨酸)和呈芳香味特征的氨基酸(酪氨酸和苯丙氨酸)含量较高，表明燕窝的味道鲜美.食物营养价值的优劣主要取决于所含氨基酸的种类、数量和比例.联合国粮农组织和世界卫生组织提出了食品中必需氨基酸参考模式谱，规定了人体必需氨基酸占总氨基酸的质量比以及必需氨基酸与非必需氨基酸的质量比分别为40％和60％。
泽兰为唇形科植物毛叶地瓜儿苗Lycopus lucidus Turcz.var.hirtus Regel的地上部分。野生。全国大部分地区均产，主产于黑龙江、辽宁、浙江、湖北等地。夏、秋两季茎叶茂盛时采割，晒干。除去杂质泥土，润透，切段，干燥后生用。功效是活血祛瘀，利水消肿。主治于治血瘀经闭，通经，症瘕，产后瘀滞腹痛，身面浮肿，跌扑损伤，金疮，疮痈肿毒，水肿，腹水(淤血阻滞、水瘀互阻之水肿尤宜。跌打损伤，瘀肿疼痛及疮痈肿毒。本品能活血祛瘀以消肿止痛。治跌打损伤，瘀肿疼痛，可单用捣碎，亦可配伍当归、红花、桃仁等药用，如《医学心悟》泽兰汤；治胸胁损伤疼痛，常配丹参、郁金、延胡索等；治疮痈肿毒，可单用捣碎，亦可配伍银花、黄连、赤芍等用。
火炭母草具有清热解毒，利湿消滞，凉血止痒，明目退翳等功效。主治痢疾，肠炎，消化不良，肝炎，感冒，扁桃体炎，咽喉炎，白喉，百日咳，角膜云翳，霉菌性阴道炎，白带，乳腺炎，疖肿，小儿脓疱疮，湿疹，毒蛇咬伤。
白僵蚕蚕体中含有激素羟基促脱皮甾酮(Ecdysterone)及一种色素——3-羟基犬尿素(3-Hydrcxykynurenine)。体表的白粉中含有草酸铵、蛋白质和脂肪。
白僵菌的培养能合成大量草酸，吡啶-2，6-二羧酸，大量脂肪。脂肪中的脂肪酸组成主要是棕榈酸、油酸、亚油酸、少量硬脂酸、棕桐油酸和α-亚麻酸。纤维蛋白酶。白僵菌除感染家蚕外，还侵袭玉米螟、蜡蛾幼虫；并从中分离出高分子量的昆虫毒素和环肽类昆虫毒物质白僵菌素，白僵菌还含甾体11α-羟基化酶系，用于合成类皮质激素；具有抗惊厥作用和催眠作用。
作为本发明的优选技术方案，制备该活化冷敷贴的方法具体包括以下步骤：
(1)按照份数配比称取原材料；
(2)将步骤(1)中的原材料中的白僵蚕进行活细胞提取，得到蚕干细胞，备用；
(3)将步骤(1)中的人参、红景天和燕窝进行小分子活性肽提取，得到人参小分子活性肽、红景天小分子活性肽和燕窝小分子活性肽，进行冻干，得到冻干粉，备用；
(4)将步骤(1)中称好的其他原材料除去辅料外混合磨粉，再将磨好的原材料，加水熬煮30～60min；
(5)将步骤(4)熬煮原材料进行离心，取上层清液，再将上层清液放置于100℃的水浴上进行浓缩，浓缩至呈粘稠状的浓缩液，备用；
(6)将步骤(2)蚕干细胞冻干粉和步骤(3)的冻干粉以及辅料加入步骤(5)的浓缩液中，搅拌均匀，得到凝胶；
(7)将凝胶均匀涂布于背衬层上，压上覆盖层，采用20N的压力进行压制，经过裁剪、固化和包装得到活化冷敷贴。
作为本发明的优选技术方案，所述步骤(2)的蚕干细胞的活细胞提取的方法的具体步骤为：
S21：取白僵蚕的表皮，将表皮切碎，置于细胞培养基中进行表皮干细胞传代培养，细胞培养基为85％DMEM+13％FBS+2％双抗的干细胞培养基，培养条件为37℃，5％CO2培养；
S22：选择对数生长期的白僵蚕表皮干细胞，经1500～2000r/min，10分钟离心处理去除离心清液以去除细胞培养基，获取经离心分离后的白僵蚕表皮干细胞；
S23：将离心收集到的白僵蚕表皮干细胞放置在-18℃条件下冻结8～12h，然后取出放置在低于6℃的条件下进行解冻，待完全融化后再次冻结，循环操作4～5次直至细胞完全破碎，采用孔径为200nm的过滤膜过滤，除去杂质，得到白僵蚕表皮干细胞提取物；
S24：将白僵蚕表皮细胞提取物，按1ml/支分装冻干，冻干温度为-36℃，真空度为300Pa，冻干时间为32h，即制得白僵蚕表皮干细胞冻干粉。
作为本发明的优选技术方案，所述步骤(3)中的红景天小分子活性肽的提取方法的具体步骤为：
S31-1将新鲜红景天的花和叶打碎成泥浆；
S31-2将粉碎的泥浆以5000r/min转速离心20min，得到第一次红景天上清液；
S31-3将第一次红景天上清液以9000r/min转速离心15min，得到含有红景天活性肽的第二次红景天上清液；
S31-3将第二次红景天上清液进行酶解，酶解的温度为50℃，时间为2h，所采用的红景天酶解液为羧酸酯水解酶、蛋白酶和脂肪酶，酶解完毕后得到红景天酶解液；
S31-4采用透析膜透析红景天酶解液，取红景天透析液，并向红景天滤液中加入脱色剂进行脱色，脱色完毕后，再过滤取滤液，得到脱色红景天滤液；
S31-5真空浓缩脱色红景天滤液，得到红景天提取物粗品；
S31-6冷冻干燥所述提取物粗品得到红景天小分子活性肽。
作为本发明的优选技术方案，所述步骤(3)中的人参小分子活性肽和燕窝小分子活性肽的提取方法均包括以下步骤：
S32-1将人参、燕窝分别洗净，再加纯水并熬煮8～10h，得到粘稠混合物；
S32-2将步骤S32-1熬煮后的粘稠混合物采用破壁机打成糊状；
S32-3将糊状以5000r/min转速离心20min，得到第一次混合上清液；
S32-4将第一次混合上清液以9000r/min转速离心15min，得到含有混合活性肽的第二次混合上清液；
S32-5将第二次混合上清液进行酶解，酶解的温度为50℃，时间为2h，所采用的混合酶解液为蛋白酶和脂肪酶，酶解完毕后得到燕窝酶解液；
S32-6将混合酶解液以9000r/min转速离心15min，取上层混合酶解清液；再采用透析膜透析上层混合酶解清液，得到混合透析液，将混合透析液按1ml/支分装冻干，冻干温度为冻干温度为-36℃，真空度为300Pa，冻干时间为38h，即制得人参和燕窝混合冻干粉。
作为本发明的优选技术方案，所述步骤S31-3中的酶解的具体过程包括以下步骤：
S31-31：使用质量分数为10％的氢氧化钠水溶液将第二次红景天上清液的pH值调整为9，再加入碱性蛋白酶，50℃条件下酶解1h；
S31-32：向所述步骤S31-31中加入质量分数为10％的盐酸，使第二次红景天上清液的pH调整为7，加入羧酸酯水解酶，在50℃条件下酶解30min；
S31-33：向所述步骤S31-32中加入质量分数为10％的盐酸，使第二次红景天上清液的pH调整为3.5，加入脂肪酶，在50℃条件下酶解30min，酶解结束。
作为本发明的优选技术方案，所述步骤S32-5中的酶解的具体过程包括以下步骤：S32-51：使用质量分数为10％的氢氧化钠水溶液将第二次红景天上清液的pH值调整为9，再加入碱性蛋白酶，50℃条件下酶解1h；
S32-52：向所述步骤S32-52中加入质量分数为10％的盐酸，使第二次红景天上清液的pH调整为3.5，加入脂肪酶，在50℃条件下酶解1h，酶解结束。
作为本发明的优选技术方案，所述红景天酶解液的量为红景天的重量的5％，其中羧酸酯水解酶、蛋白酶和脂肪酶的重量比为1：1.2：1.5；所述人参和燕窝所使用的混合酶解液的量为人参和燕窝的总重量的4％，其中蛋白酶和脂肪酶的重量比为1：1。
作为本发明的优选技术方案，所述原材料中的辅料为防腐剂和乳化剂，所述防腐剂为苯氧乙醇或山梨酸钾；所述乳化剂为十二烧基硫酸钠或脂肪醇聚氧乙稀醚。
采用本发明生产活化冷敷贴可用于：
1.面部术后及问题皮肤修复(产品：医用面膜冷敷贴)；
2.创伤及伤口修复、褥疮等(产品：医用伤口冷敷贴)；
3.眼睛问题：疲劳问题(眼干、眼涩、眼胀、畏光)、白内障、外障、祛眼袋、玻璃体混浊、青光眼、黄斑病变等(产品：医用眼膜贴、眼药水)；
4.关节及软组织损伤(产品：关节身体膜贴)；
5.妇科领域如调经、痛经、暖宫、乳房问题、生殖系统问题(产品：暖宫膜贴、胸贴、阴部私护膜贴)；
6.小儿预防疾病如呼吸道疾病(感冒、咳嗽、肺炎、发烧等)、胃肠问题等(产品：小儿穴位膜贴)；
7.痔疮及肛周问题(产品：肛部医用冷敷膜、外用制剂等)；
8.男性领域如回阳固本、温经通络、腰膝酸软、腰痛、手脚畏寒怕冷、前列腺增生、小便不利、小便淋漓、糖尿病、高血压等(产品：关元、命门、肾俞等穴位膜贴)。
附图说明
下面结合附图和本发明的实施方式进一步详细说明：
图1是典型病例1的患者治疗过程的照片；其中(a)为治疗前；(b)为治疗时；(c)为治疗后；
图2是典型病例2患者治疗时的照片；
图3是典型病例3患者治疗时的照片；
图4是典型病例4患者治疗时的照片；
图5是典型病例5患者治疗时的照片。
具体实施方式
实施例1：该活化冷敷贴的原料为纯化水、卡波姆、人参、大黄、覆盆子、茯苓、木贼、乌药、桂枝、艾叶、巴戟天、白芥子、苏子、红景天、黄精、石斛、燕窝、泽兰、泽贝母、乌梅、五味子、苦参、白芷、刺蒺藜、王不留行、胆南星、三棱、当归、黄芪、桔梗、火炭母草、白僵蚕、牛黄、珍珠，其中所述纯化水120份，所述卡波姆2份，所述人参5份，所述大黄2份，所述覆盆子2份，所述土茯苓5份，所述木贼2份，所述乌药2份，所述桂枝2份，所述艾叶8份，所述巴戟天2份，所述白芥子5份，所述苏子5份，所述红景天3份，所述黄精2份，所述石斛5份，所述燕窝5份，所述泽兰3份，所述泽贝母3份，所述乌梅5份，所述五味子3份，所述苦参3份，所述白芷3份，所述刺蒺藜3份，所述王不留行2份，所述胆南星2份，所述三棱2份，所述当归2份，所述黄芪2份，所述桔梗2份，所述火炭母草2份，所述白僵蚕1份，所述牛黄2份，所述珍珠2份；辅料2份。
实施例2：该活化冷敷贴的原料为纯化水、卡波姆、人参、大黄、覆盆子、茯苓、木贼、乌药、桂枝、艾叶、巴戟天、白芥子、苏子、红景天、黄精、石斛、燕窝、泽兰、泽贝母、乌梅、五味子、苦参、白芷、刺蒺藜、王不留行、胆南星、三棱、当归、黄芪、桔梗、火炭母草、白僵蚕、牛黄、珍珠，所述纯化水110份，所述卡波姆1份，所述人参3份，所述大黄1份，所述覆盆子3份，所述土茯苓4份，所述木贼1份，所述乌药1份，所述桂枝3份，所述艾叶1份，所述巴戟天2份，所述白芥子3份，所述苏子2份，所述红景天2份，所述黄精1份，所述石斛3份，所述燕窝3份，所述泽兰2份，所述泽贝母2份，所述乌梅3份，所述五味子2份，所述苦参3份，所述白芷2份，所述刺蒺藜2份，所述王不留行1份，所述胆南星1份，所述三棱1份，所述当归1份，所述黄芪1份，所述桔梗1份，所述火炭母草1份，所述白僵蚕1份，所述牛黄1份，所述珍珠2份，辅料2份。
实施例3：该活化冷敷贴的原料为纯化水、卡波姆、人参、大黄、覆盆子、茯苓、木贼、乌药、桂枝、艾叶、巴戟天、白芥子、苏子、红景天、黄精、石斛、燕窝、泽兰、泽贝母、乌梅、五味子、苦参、白芷、刺蒺藜、王不留行、胆南星、三棱、当归、黄芪、桔梗、火炭母草、白僵蚕、牛黄、珍珠，其中所述纯化水90份，所述卡波姆0.5份，所述人参0.5份，所述大黄0.5份，所述覆盆子0.5份，所述土茯苓0.5份，所述木贼0.5份，所述乌药0.5份，所述桂枝0.1份，所述艾叶1份，所述巴戟天0.5份、所述白芥子1份，所述苏子1份，所述红景天0.5份，所述黄精0.5份，所述石斛1份，所述燕窝1份，所述泽兰1份，所述泽贝母1份，所述乌梅1份，所述五味子1份，所述苦参0.1份，所述白芷0.1份，所述刺蒺藜0.1份，所述王不留行0.5份，所述胆南星0.5份，所述三棱0.5份，所述当归0.5份，所述黄芪0.5份，所述桔梗0.5份，所述火炭母草0.5份，所述白僵蚕0.5份，所述牛黄0.1份，所述珍珠0.1份；辅料0.1份。
实施例4：实施例1～3均采用该活化冷敷贴的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)按照份数配比称取原材料；
(2)将步骤(1)中的原材料中的白僵蚕进行活细胞提取，得到蚕干细胞，备用；
(3)将步骤(1)中的人参、红景天和燕窝进行小分子活性肽提取，得到人参小分子活性肽、红景天小分子活性肽和燕窝小分子活性肽，进行冻干，得到冻干粉，备用；
(4)将步骤(1)中称好的其他原材料除去辅料外混合磨粉，再将磨好的原材料，加水熬煮30～60min；
(5)将步骤(4)熬煮原材料进行离心，取上层清液，再将上层清液放置于100℃的水浴上进行浓缩，浓缩至呈粘稠状的浓缩液，备用；
(6)将步骤(2)蚕干细胞冻干粉和步骤(3)的冻干粉以及辅料加入步骤(5)的浓缩液中，搅拌均匀，得到凝胶；
(7)将凝胶均匀涂布于背衬层上，压上覆盖层，采用20N的压力进行压制，经过裁剪、固化和包装得到活化冷敷贴。
所述步骤(2)的蚕干细胞的活细胞提取的方法的具体步骤为：
S21：取白僵蚕的表皮，将表皮切碎，置于细胞培养基中进行表皮干细胞传代培养，细胞培养基为85％DMEM+13％FBS+2％双抗的干细胞培养基，培养条件为37℃，5％CO2培养；
S22：选择对数生长期的白僵蚕表皮干细胞，经1500～2000r/min，10分钟离心处理去除离心清液以去除细胞培养基，获取经离心分离后的白僵蚕表皮干细胞；
S23：将离心收集到的白僵蚕表皮干细胞放置在-18℃条件下冻结8～12h，然后取出放置在低于6℃的条件下进行解冻，待完全融化后再次冻结，循环操作4～5次直至细胞完全破碎，采用孔径为200nm的过滤膜过滤，除去杂质，得到白僵蚕表皮干细胞提取物；
S24：将白僵蚕表皮细胞提取物，按1ml/支分装冻干，冻干温度为-36℃，真空度为300Pa，冻干时间为32h，即制得白僵蚕表皮干细胞冻干粉。
所述步骤(3)中的红景天小分子活性肽的提取方法的具体步骤为：
S31-1将新鲜红景天的花和叶打碎成泥浆；
S31-2将粉碎的泥浆以5000r/min转速离心20min，得到第一次红景天上清液；
S31-3将第一次红景天上清液以9000r/min转速离心15min，得到含有红景天活性肽的第二次红景天上清液；
S31-3将第二次红景天上清液进行酶解，酶解的温度为50℃，时间为2h，所采用的红景天酶解液为羧酸酯水解酶、蛋白酶和脂肪酶，酶解完毕后得到红景天酶解液；
S31-4采用透析膜透析红景天酶解液，取红景天透析液，并向红景天滤液中加入脱色剂进行脱色，脱色完毕后，再过滤取滤液，得到脱色红景天滤液；
S31-5真空浓缩脱色红景天滤液，得到红景天提取物粗品；
S31-6冷冻干燥所述提取物粗品得到红景天小分子活性肽。
所述步骤(3)中的人参小分子活性肽和燕窝小分子活性肽的提取方法均包括以下步骤：
S32-1将人参、燕窝分别洗净，再加纯水并熬煮8～10h，得到粘稠混合物；
S32-2将步骤S32-1熬煮后的粘稠混合物采用破壁机打成糊状；
S32-3将糊状以5000r/min转速离心20min，得到第一次混合上清液；
S32-4将第一次混合上清液以9000r/min转速离心15min，得到含有混合活性肽的第二次混合上清液；
S32-5将第二次混合上清液进行酶解，酶解的温度为50℃，时间为2h，所采用的混合酶解液为蛋白酶和脂肪酶，酶解完毕后得到燕窝酶解液；
S32-6将混合酶解液以9000r/min转速离心15min，取上层混合酶解清液；再采用透析膜透析上层混合酶解清液，得到混合透析液，将混合透析液按1ml/支分装冻干，冻干温度为冻干温度为-36℃，真空度为300Pa，冻干时间为38h，即制得人参和燕窝混合冻干粉。
所述步骤S31-3中的酶解的具体过程包括以下步骤：
S31-31：使用质量分数为10％的氢氧化钠水溶液将第二次红景天上清液的pH值调整为9，再加入碱性蛋白酶，50℃条件下酶解1h；
S31-32：向所述步骤S31-31中加入质量分数为10％的盐酸，使第二次红景天上清液的pH调整为7，加入羧酸酯水解酶，在50℃条件下酶解30min；
S31-33：向所述步骤S31-32中加入质量分数为10％的盐酸，使第二次红景天上清液的pH调整为3.5，加入脂肪酶，在50℃条件下酶解30min，酶解结束。
所述步骤S32-5中的酶解的具体过程包括以下步骤：S32-51：使用质量分数为10％的氢氧化钠水溶液将第二次红景天上清液的pH值调整为9，再加入碱性蛋白酶，50℃条件下酶解1h；
S32-52：向所述步骤S32-52中加入质量分数为10％的盐酸，使第二次红景天上清液的pH调整为3.5，加入脂肪酶，在50℃条件下酶解1h，酶解结束。
所述红景天酶解液的量为红景天的重量的5％，其中羧酸酯水解酶、蛋白酶和脂肪酶的重量比为1：1.2：1.5；所述人参和燕窝所使用的混合酶解液的量为人参和燕窝的总重量的4％，其中蛋白酶和脂肪酶的重量比为1：1。
所述原材料中的辅料为防腐剂和乳化剂，所述防腐剂为苯氧乙醇或山梨酸钾；所述乳化剂为十二烧基硫酸钠或脂肪醇聚氧乙稀醚。
典型病例1：金某：10岁。伤口修复10天效果图如图1；从图中可以看出，经过每天换一贴冷敷贴后，10天伤口已经修复，只留下了疤痕。
典型病例2：龙某：8岁，扁桃体肥大，免疫力低下，晚上睡觉不老实，经常感冒，经过三天的冷敷贴后，完全康复，如图2。
典型病例3：如图3所示，陈某：7岁，咳嗽发烧38.7度，还便秘，用上冷敷贴后一个小时，就退烧了，经过每天一贴冷敷贴后，第二天早上反馈咳嗽减轻，第四天大便了，第五天完全康复了。
典型病例4：如图4所示，刘某：5岁，扁桃体发炎且平均二十多天复发一次，家长说每次都发烧且必须挂水才能解决，经过四天的每天一贴冷敷贴康复后，现2个多月没有复了过。
典型病例5：如图5所示，李某：6岁，呕吐咳嗽，发烧39.8度没有胃口，肚子不舒服，第一天贴了冷敷贴后呕吐好了，不发烧了，第二天咳嗽加重，无其他症状了，经继续贴冷敷贴，第四天完全康复。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种采用CF活化细胞提取方法制备的活化细胞冷敷贴，其特征在于，该活化细胞冷敷贴的原料为纯化水、卡波姆、人参、大黄、覆盆子、茯苓、木贼、乌药、桂枝、艾叶、巴戟天、白芥子、苏子、红景天、黄精、石斛、燕窝、泽兰、泽贝母、乌梅、五味子、苦参、白芷、刺蒺藜、王不留行、胆南星、三棱、当归、黄芪、桔梗、火炭母草、白僵蚕、牛黄、珍珠，其中所述纯化水90～120份，所述卡波姆0.5～2份，所述人参0.5～5份，所述大黄0.5～2份，所述覆盆子0.5～2份，所述土茯苓0.5～5份，所述木贼0.5～2份，所述乌药0.5～2份，所述桂枝0.1～2份，所述艾叶1～8份，所述巴戟天1～5份，所述白芥子1～5份，所述苏子1～5份，所述红景天0.5～3份，所述黄精0.5～2份，所述石斛1～5份，所述燕窝1～5份，所述泽兰1～3份，所述泽贝母1～3份，所述乌梅1～5份，所述五味子1～3份，所述苦参0.1～3份，所述白芷0.1～3份，所述刺蒺藜0.1～3份，所述王不留行0.5～2份，所述胆南星0.5～2份，所述三棱0.5～2份，所述当归0.5～2份，所述黄芪0.5～2份，所述桔梗0.5～2份，所述火炭母草0.5～2份，所述白僵蚕0.5～1份，所述牛黄0.1～2份，所述珍珠0.1～2份；辅料0.1～2份。
2.如权利要求1所述的采用CF活化细胞提取方法制备的活化细胞冷敷贴，其特征在于，所述纯化水110份，所述卡波姆1份，所述人参3份，所述大黄1份，所述覆盆子3份，所述土茯苓4份，所述木贼1份，所述乌药1份，所述桂枝3份，所述艾叶1份，所述巴戟天2份，所述白芥子3份，所述苏子2份，所述红景天2份，所述黄精1份，所述石斛3份，所述燕窝3份，所述泽兰2份，所述泽贝母2份，所述乌梅3份，所述五味子2份，所述苦参3份，所述白芷2份，所述刺蒺藜2份，所述王不留行1份，所述胆南星1份，所述三棱1份，所述当归1份，所述黄芪1份，所述桔梗1份，所述火炭母草1份，所述白僵蚕1份，所述牛黄1份，所述珍珠2份，辅料2份。
3.一种活化冷敷贴的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)按照份数配比称取原材料；
(2)将步骤(1)中的原材料中的白僵蚕进行活细胞提取，得到蚕干细胞，备用；
(3)将步骤(1)中的人参、红景天和燕窝进行小分子活性肽提取，得到人参小分子活性肽、红景天小分子活性肽和燕窝小分子活性肽，进行冻干，得到冻干粉，备用；
(4)将步骤(1)中称好的其他原材料除去辅料外混合磨粉，再将磨好的原材料，加水熬煮30～60min；
(5)将步骤(4)熬煮原材料进行离心，取上层清液，再将上层清液放置于100℃的水浴上进行浓缩，浓缩至呈粘稠状的浓缩液，备用；
(6)将步骤(2)蚕干细胞冻干粉和步骤(3)的冻干粉以及辅料加入步骤(5)的浓缩液中，搅拌均匀，得到凝胶；
(7)将凝胶均匀涂布于背衬层上，压上覆盖层，采用20N的压力进行压制，经过裁剪、固化和包装得到活化冷敷贴。
4.根据权利要求3所述的活化冷敷贴的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)的蚕干细胞的活细胞提取的方法的具体步骤为：
S21：取白僵蚕的表皮，将表皮切碎，置于细胞培养基中进行表皮干细胞传代培养，细胞培养基为85％DMEM+13％FBS+2％双抗的干细胞培养基，培养条件为37℃，5％CO2培养；
S22：选择对数生长期的白僵蚕表皮干细胞，经1500～2000r/min，10分钟离心处理去除离心清液以去除细胞培养基，获取经离心分离后的白僵蚕表皮干细胞；
S23：将离心收集到的白僵蚕表皮干细胞放置在-18℃条件下冻结8～12h，然后取出放置在低于6℃的条件下进行解冻，待完全融化后再次冻结，循环操作4～5次直至细胞完全破碎，采用孔径为200nm的过滤膜过滤，除去杂质，得到白僵蚕表皮干细胞提取物；
S24：将白僵蚕表皮细胞提取物，按1ml/支分装冻干，冻干温度为-36℃，真空度为300Pa，冻干时间为32h，即制得白僵蚕表皮干细胞冻干粉。
5.根据权利要求3所述的活化冷敷贴的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中的红景天小分子活性肽的提取方法的具体步骤为：
S31-1将新鲜红景天的花和叶打碎成泥浆；
S31-2将粉碎的泥浆以5000r/min转速离心20min，得到第一次红景天上清液；
S31-3将第一次红景天上清液以9000r/min转速离心15min，得到含有红景天活性肽的第二次红景天上清液；
S31-3将第二次红景天上清液进行酶解，酶解的温度为50℃，时间为2h，所采用的红景天酶解液为羧酸酯水解酶、蛋白酶和脂肪酶，酶解完毕后得到红景天酶解液；
S31-4采用透析膜透析红景天酶解液，取红景天透析液，并向红景天滤液中加入脱色剂进行脱色，脱色完毕后，再过滤取滤液，得到脱色红景天滤液；
S31-5真空浓缩脱色红景天滤液，得到红景天提取物粗品；
S31-6冷冻干燥所述提取物粗品得到红景天小分子活性肽。
6.根据权利要求5所述的活化冷敷贴的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中的人参小分子活性肽和燕窝小分子活性肽的提取方法均包括以下步骤：
S32-1将人参、燕窝分别洗净，再加纯水并熬煮8～10h，得到粘稠混合物；
S32-2将步骤S32-1熬煮后的粘稠混合物采用破壁机打成糊状；
S32-3将糊状以5000r/min转速离心20min，得到第一次混合上清液；
S32-4将第一次混合上清液以9000r/min转速离心15min，得到含有混合活性肽的第二次混合上清液；
S32-5将第二次混合上清液进行酶解，酶解的温度为50℃，时间为2h，所采用的混合酶解液为蛋白酶和脂肪酶，酶解完毕后得到燕窝酶解液；
S32-6将混合酶解液以9000r/min转速离心15min，取上层混合酶解清液；再采用透析膜透析上层混合酶解清液，得到混合透析液，将混合透析液按1ml/支分装冻干，冻干温度为冻干温度为-36℃，真空度为300Pa，冻干时间为38h，即制得人参和燕窝混合冻干粉。
7.根据权利要求6所述的活化冷敷贴的制备方法，其特征在于，所述步骤S31-3中的酶解的具体过程包括以下步骤：
S31-31：使用质量分数为10％的氢氧化钠水溶液将第二次红景天上清液的pH值调整为9，再加入碱性蛋白酶，50℃条件下酶解1h；
S31-32：向所述步骤S31-31中加入质量分数为10％的盐酸，使第二次红景天上清液的pH调整为7，加入羧酸酯水解酶，在50℃条件下酶解30min；
S31-33：向所述步骤S31-32中加入质量分数为10％的盐酸，使第二次红景天上清液的pH调整为3.5，加入脂肪酶，在50℃条件下酶解30min，酶解结束。
8.根据权利要求7所述的活化冷敷贴的制备方法，其特征在于，所述步骤S32-5中的酶解的具体过程包括以下步骤：S32-51：使用质量分数为10％的氢氧化钠水溶液将第二次红景天上清液的pH值调整为9，再加入碱性蛋白酶，50℃条件下酶解1h；
S32-52：向所述步骤S32-52中加入质量分数为10％的盐酸，使第二次红景天上清液的pH调整为3.5，加入脂肪酶，在50℃条件下酶解1h，酶解结束。
9.根据权利要求8所述的活化冷敷贴的制备方法，其特征在于，所述红景天酶解液的量为红景天的重量的5％，其中羧酸酯水解酶、蛋白酶和脂肪酶的重量比为1：1.2：1.5；所述人参和燕窝所使用的混合酶解液的量为人参和燕窝的总重量的4％，其中蛋白酶和脂肪酶的重量比为1：1。
10.根据权利要求8所述的活化冷敷贴的制备方法，其特征在于，所述原材料中的辅料为防腐剂和乳化剂，所述防腐剂为苯氧乙醇或山梨酸钾；所述乳化剂为十二烧基硫酸钠或脂肪醇聚氧乙稀醚。
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