CN108434087A - 一种包含干细胞提取物及芦荟小分子活性肽的化妆品 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种化妆品，该化妆品主要由表皮干细胞提取物和芦荟小分子活性肽组成，提供的人表皮干细胞提取物含有多种生命活性物质，可活化皮肤细胞，激活人体自身的"自愈功能"，对衰老的细胞进行补充与调控，激活细胞功能，增加细胞数量，提高细胞活性，改善细胞质量，提高细胞膜物质运输功能和物质交换能力，恢复细胞的正常生理功能，促进真皮层细胞分泌合成胶原纤维、多糖、糖蛋白等功能分子。本发明提供的芦荟小分子多肽，能够显著提高人表皮干细胞提取物对于人体皮肤损伤的修复功能，延缓细胞衰老的功能。

Description

一种包含干细胞提取物及芦荟小分子活性肽的化妆品
技术领域
本发明涉及化妆品领域，具体涉及一种包含干细胞提取物及芦荟小分子活性肽的化妆品。
背景技术
在现代城市之中，日晒、雾霾、辐射、彩妆等对皮肤的伤害无处不在，引发各种皮肤问题，如皮肤黯淡无光，皮肤弹性降低，色斑，皱纹，痤疮等。皮肤由于非遗传因素造成的敏感现象越来越多，人们对防护性化妆品的需求也就应运而生，比如护肤乳液、化妆水、粉底液、防晒霜或者隔离霜已成为现代女性必备的化妆品之一。
化妆品按照使用部位可以分为以下四类：
1.肤用化妆品，指面部及皮肤用化妆品。这类化妆品如各种面霜、浴剂。
2.发用化妆品，指头发专用化妆品。这类化妆品如香波、摩丝、喷雾发胶等。
3.美容化妆品，主要指面部美容产品，也包括指甲头发的美容品。
4.特殊功能化妆品，指添加有特殊作用药物的化妆品。
对于上述的化妆品，尤其是身体、面部等使用化妆品，现在市场上大力宣传的各类功能性化妆品对改善皮肤干燥、起皮、皱纹、亮度、弹性等方面的实际功效并不十分明显，有的对皮肤还有刺激性易引起过敏。
目前，从市售的各类化妆品的成分来看，大多数化妆品的功效仍比较单一，传统的化妆品只是对皮肤外在营养的补给和对衰老皮肤进行遮盖，无法阻止皮肤的衰老。而且一般方法制造的营养物和活性物化妆品实际效果不大，因为营养物和活性物不易渗入到皮肤深层，正常皮肤只能吸收一些小分子及脂溶性物质，对大分子蛋白质是不能吸收的，更难进入细胞内，活性物由于易受外界条件影响，在使用时也往往早巳失活了，而随着化妆品被越来越多的女性所接纳和使用，继续研发化妆品的新用途成为化妆品发展的新趋势。
在化妆品中添加干细胞或者干细胞裂解物已经有相关的报道。干细胞种类繁多，对于运用干细胞研究抗衰老，最初，人们关注于胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES),因其具有无限增殖并且向三个胚层分化的能力,但ES移植存在伦理学争议、且移植后有成瘤性和排斥反应。近来研究发现，成体干细胞也具有向三个胚层分化的能力，其中研究最多的是来源于骨髓的间充质干细胞(bonemarrow-mesenchymal stem cells,BM-MSCs),但是BM-MSCs必须通过有创途径获得,而且随着年龄的增长，细胞的数量显著下降，分化能力降低，所以这些类型的干细胞都因各自存在的问题而较难推广使用。
因此，开发一种添加有干细胞的化妆品从而在皮肤损伤或者晒伤的消费者身上应用，变得迫在眉睫。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种含有人表皮干细胞提取物以及芦荟小分子肽的化妆品。
本发明的化妆品能很好改善皮肤晒伤损害、瘙痒、起皮、皱纹，提亮肤色、增强弹性，修复皮肤损伤。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
-种芦荟小分子活性肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
将新鲜芦荟叶打碎形成泥浆；
将粉碎混合物以4000r/min的转速离心15min，得到第一上清液；
将第一上清液以8000r/min的转速离心10min，得到含有芦荟活性肽的第二上清液；
将第二上清液酶解，酶解的温度为27℃，时间为3h，酶解液为羧酸酯水解酶、蛋白酶、脂肪酶和3-肌醇六磷酸酶；
以第二上清液的重量计，羧酸酯水解酶为糖酶，糖酶的添加量为第二上清液的0.4％；蛋白酶的添加量为第二上清液的0.5％；脂肪酶的添加量为第二上清液的0.6％；3-肌醇六磷酸酶的添加量为所述第二上清液的0.3％；
将酶解液体10000r/min的转速离心10min，采用80％体积比的冰丙酮液沉淀多肽，在-20℃的条件下，采用冰丙酮液5次反复洗脱多肽，然后于4℃下透析12h，透析采用3500道尔顿的透析膜进行，得到透析液。将透析液，按1ml/支分装冻干(冻干温度为-35℃，真空度为50-200Pa，冻干时间为24-36小时)，即制得表皮干细胞提取物冻干粉。
以上述提取方法得到的芦荟小分子活性肽采用凝胶渗透色谱(GPC)对其分子量分布及其相对含量进行测定。
本发明另外提供如下技术方案：
本发明另外提供-种表皮干细胞的培养及使用方法，其中ESC人表皮干细胞(培养基：89％DMEM+10％FBS+1％双抗)，购买自华拓生物，货号：HT-X2729。
所述美容用表皮干细胞细胞提取物的制备方法包括以下步骤：步骤A:将表皮干细胞置于细胞培养基进行传代培养，细胞培养基为89％DMEM+10％FBS+1％双抗或者为常规的干细胞培养基，培养条件为37℃，5％CO2培养；步骤B:选择对数生长期的表皮干细胞，经1000rpm，5分钟离心处理以去处细胞培养基，获得经离心分离的表皮干细胞；步骤C:将离心收集的表皮干细胞冻结，然后在不高于8℃的温度下解冻，如此冻融，反复操作2-3次至细胞完全破碎，采用孔径为0.22μm的过滤膜过滤，除去杂质，得到表皮干细胞提取物。步骤D：将表皮干细胞提取物，按1ml/支分装冻干(冻干温度为-35℃，真空度为50-200Pa，冻干时间为24-36小时)，即制得表皮干细胞提取物冻干粉。
本发明另外提供一种用于皮肤损伤修复的化妆品，所述化妆品活性成分为芦荟小分子活性肽、乳酸钠、表皮干细胞细胞提取物、D-泛醇、增稠剂、保湿剂、乳化剂和防腐剂以及油脂组成，各组分的的重量百分比为：
芦荟小分子活性肽冻干粉1％，乳酸钠10％-20％，表皮干细胞细胞提取物1％，D-泛醇10％-20％，增稠剂0.1％-0.25％、保湿剂15-20％、乳化剂4-8％、防腐剂0-0.5％，余量为去离子水组成。
上述中的增稠剂选用指卡波980、汉生胶、丙烯酸酯类中的一种或几种组合。
上述的保湿剂选用小分子透明质酸钠、海藻糖、葡聚糖、银耳多糖中一种或几种组合。
上述的乳化剂选用十二烧基硫酸钠、脂肪醇聚氧乙稀醚、Oliver 1000中的一种或几种组合。
上述防腐剂选用苯氧乙醇、山梨酸钾中的一种。
本发明相对于现有技术具有如下有益效果：
(1)本发明提供的人表皮干细胞提取物含有多种生命活性物质，可活化皮肤细胞，激活人体自身的"自愈功能"，对衰老的细胞进行补充与调控，激活细胞功能，增加细胞数量，提高细胞活性，改善细胞质量，提高细胞膜物质运输功能和物质交换能力，防止和延缓细胞病变，恢复细胞的正常生理功能，促进真皮层细胞分泌合成胶原纤维、多糖、糖蛋白等功能分子，增强细胞新陈代谢，肌纤维排列整齐紧密，从而减少消除皱纹，延缓细胞衰老，淡化色斑暗疮，美白肌肤。
(2)本发明提供的芦荟小分子多肽，能够显著提高人表皮干细胞提取物对于人体皮肤损伤的修复功能，延缓细胞衰老的功能。
(3)本发明提供的化妆品，对皮肤无副作用，安全性高，能够显著提高皮肤损伤的修复程度，同时能够美白皮肤。
具体实施方式
下面结合具体的实施方式对本发明作进一步的说明，从而更好地理解本发明。
实施例1芦荟小分子肽的制备
(1)将新鲜芦荟叶打碎形成泥浆；
(2)将粉碎混合物以4000r/min的转速离心15min，得到第一上清液；
(3)将第一上清液以8000r/min的转速离心10min，得到含有芦荟活性肽的第二上清液；
(4)将第二上清液酶解，酶解的温度为27℃，时间为3h，酶解液为羧酸酯水解酶、蛋白酶、脂肪酶和3-肌醇六磷酸酶；
(5)以第二上清液的重量计，羧酸酯水解酶为糖酶，糖酶的添加量为第二上清液的0.4％；蛋白酶的添加量为第二上清液的0.5％；脂肪酶的添加量为第二上清液的0.6％；3-肌醇六磷酸酶的添加量为所述第二上清液的0.3％；
(6)将酶解液体10000r/min的转速离心10min，采用80％体积比的冰丙酮液沉淀多肽，在-20℃的条件下，采用冰丙酮液5次反复洗脱多肽，然后于4℃下透析12h，透析采用3500道尔顿的透析膜进行，得到透析液。将透析液，按1ml/支分装冻干(冻干温度为-35℃，真空度为50-200Pa，冻干时间为24-36小时)，即制得表皮干细胞提取物冻干粉。
(7)以上述提取方法得到的芦荟小分子活性肽采用凝胶渗透色谱(GPC)对其分子量分布及其相对含量进行测定，实验结果见表1,采用凯氏定氮法测定芦荟小分子活性肽的多肽含量，其多肽的含量为95.3％；
表1本发明生产的芦荟小分子活性肽的分子量分布结果
分子量范围(Mr，道尔顿) 面积百分比(％)
Mr≤200 20.5％
200＜Mr≤500 37.3％
500＜Mr＜2000 30.8％
2000≤Mr＜3500 11.4％
实施例2表皮干细胞提取物制备
准备表皮干细胞，购买自华拓生物，货号：HT-X2729。
表皮干细胞细胞提取物的制备方法如下：
步骤A:将表皮干细胞置于细胞培养基进行传代培养，细胞培养基为89％DMEM+10％FBS+1％双抗的干细胞培养基，培养条件为37℃，5％CO2培养；
步骤B:选择对数生长期的表皮干细胞，经1000rpm，5分钟离心处理以去处细胞培养基，获得经离心分离的表皮干细胞；
步骤C:将离心收集的表皮干细胞冻结，然后在不高于8℃的温度下解冻，如此冻融，反复操作2-3次至细胞完全破碎，采用孔径为0.22μm的过滤膜过滤，除去杂质，得到表皮干细胞提取物。
步骤D：将表皮干细胞提取物，按1ml/支分装冻干，冻干温度为-35℃，真空度为200Pa，冻干时间为36小时，即制得表皮干细胞提取物冻干粉。
实施例3化妆品的制备
按照如下重量份的各个组分：实施例1的芦荟小分子活性肽冻干粉1％，乳酸钠20％，实施例2的表皮干细胞细胞提取物1％，D-泛醇10％，汉生胶0.25％、海藻糖15％、脂肪醇聚氧乙稀醚4％、山梨酸钾0.5％，余量为去离子水组成。
实施例4对照1化妆品的制备
按照如下重量份的各个组分：乳酸钠20％，实施例2的表皮干细胞细胞提取物1％，D-泛醇10％，汉生胶0.25％、海藻糖15％、脂肪醇聚氧乙稀醚4％、山梨酸钾0.5％，余量为去离子水组成。
实施例5对照2化妆品的制备
按照如下重量份的各个组分：实施例1的芦荟小分子活性肽冻干粉1％，乳酸钠20％，D-泛醇10％，汉生胶0.25％、海藻糖15％、脂肪醇聚氧乙稀醚4％、山梨酸钾0.5％，余量为去离子水组成。
实施例6对照3化妆品的制备
按照如下重量份的各个组分：乳酸钠20％，D-泛醇10％，汉生胶0.25％、海藻糖15％、脂肪醇聚氧乙稀醚4％、山梨酸钾0.5％，余量为去离子水组成。
实施例7大鼠皮肤创伤愈合率试验
取200g左右的SD大鼠，麻醉后背部剃毛，以手术刀在背部制造一个直径1cm的创面。将制模型成功的大鼠，随机分为6组，每组10只，依次对应实施例3至实施例6。化妆品使用方法是取化妆品适量直接敷于SD大鼠背部，对照组使用生理盐水，分别于3天、7天、14天记录大鼠的创伤愈合率，其中，创伤愈合率的计算公式如下：创伤愈合率％＝100×(初始创面面积-目前创面面积)/初始创面面积。统计结果见表2。
表2不同时间点大鼠的创伤愈合率
由表2可知，实施例3的化妆品具有较好的促进皮肤愈合的效果，而实施例4比实施例5的效果也较好，但是实施例3-5均比实施例6的要好，这说明，本发明提供的干细胞提取物以及芦荟小分子肽都能够促进伤口愈合的效果。而且，小分子肽能够促进干细胞提取物的修复皮肤损伤的效果，当实施例的配方中同时含有干细胞提取物以及芦荟小分子肽时，产生了协同效应，皮肤创伤愈率最高，使受损的肌肤能够快速修复。
实施例7人体测试
选择100个脸上有痘痘和痘斑的20-30岁的青少年，均分为5组，每组20人，实施例组3-6和对照组，其中实施例组3-6分别使用对应数字实施例制得的化妆品，对照组使用市售的雅诗兰黛完美零瑕聚焦亮肌修护精华露；各组均为早晚涂抹使用，涂抹后正常使用其他护肤产品，使用2个月。其中，皮肤变化效果标准：
显效:痘痘很明显缩小或消失，痘疤很明显缩小或消失；
有效:痘痘较明显的缩小，痘疤较明显的缩小；
无效:使用后皮肤无改善。
其肤质改善情况如表3所示。
表3肤质改善情况
组别 显效 有效 无效
实施例3 18 1 1
实施例4 12 7 1
实施例5 10 6 4
实施例6 0 1 19
对照组 5 10 5
从表3可以看出，本发明提供的芦荟小分子肽以及表皮干细胞提取物作为乳液使用易于被皮肤吸收，提取液中的小分子活性成分相互配合，激活细胞的活性，提升细胞对自身的修复能力，使痘痘或痘疤逐渐消失，具有非常显著的效果。
对于本领域的技术人员而言，依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种化妆品，其特征在于：含有人表皮干细胞提取物以及芦荟小分子肽。
2.如权利要求1所述的化妆品，其特征在于：所述人表皮干细胞提取物采用如下方法制备获得：
步骤A:将表皮干细胞置于细胞培养基进行传代培养，细胞培养基为89％DMEM+10％FBS+1％双抗的干细胞培养基，培养条件为37℃，5％CO2培养；
步骤B:选择对数生长期的表皮干细胞，经1000rpm，5分钟离心处理以去处细胞培养基，获得经离心分离的表皮干细胞；
步骤C:将离心收集的表皮干细胞冻结，然后在不高于8℃的温度下解冻，如此冻融，反复操作2-3次至细胞完全破碎，采用孔径为0.22μm的过滤膜过滤，除去杂质，得到表皮干细胞提取物。
步骤D：将表皮干细胞提取物，按1ml/支分装冻干，冻干温度为-35℃，真空度为200Pa，冻干时间为36小时，即制得表皮干细胞提取物冻干粉。
3.如权利要求1-2任一项所述的化妆品，其特征在于：所述芦荟小分子肽采用如下方法制备得到：
(1)将新鲜芦荟叶打碎形成泥浆；
(2)将粉碎混合物以4000r/min的转速离心15min，得到第一上清液；
(3)将第一上清液以8000r/min的转速离心10min，得到含有芦荟活性肽的第二上清液；
(4)将第二上清液酶解，酶解的温度为27℃，时间为3h，酶解液为羧酸酯水解酶、蛋白酶、脂肪酶和3-肌醇六磷酸酶；
(5)以第二上清液的重量计，羧酸酯水解酶为糖酶，糖酶的添加量为第二上清液的0.4％；蛋白酶的添加量为第二上清液的0.5％；脂肪酶的添加量为第二上清液的0.6％；3-肌醇六磷酸酶的添加量为所述第二上清液的0.3％；
(6)将酶解液体10000r/min的转速离心10min，采用80％体积比的冰丙酮液沉淀多肽，在-20℃的条件下，采用冰丙酮液5次反复洗脱多肽，然后于4℃下透析12h，透析采用3500道尔顿的透析膜进行，得到透析液。将透析液，按1ml/支分装冻干，冻干温度为-35℃，真空度为50-200Pa，冻干时间为24-36小时，即制得表皮干细胞提取物冻干粉。
4.如权利要求1-3任一项所述的化妆品，其特征在于：所述化妆品活性成分为芦荟小分子活性肽、乳酸钠、表皮干细胞细胞提取物、D-泛醇、增稠剂、保湿剂、乳化剂和防腐剂以及油脂组成，各组分的的重量百分比为：
芦荟小分子活性肽1％，乳酸钠10％-20％，表皮干细胞细胞提取物1％，D-泛醇10％-20％，增稠剂0.1％-0.25％、保湿剂15-20％、乳化剂4-8％、防腐剂0-0.5％，余量为去离子水组成。
5.如权利要求4所述的化妆品，其中上述中的增稠剂选用指卡波980、汉生胶、丙烯酸酯类中的一种或几种组合。
6.如权利要求4所述的化妆品，其中上述的保湿剂选用小分子透明质酸钠、海藻糖、葡聚糖、银耳多糖中一种或几种组合。
7.如权利要求4所述的化妆品，其中上述的乳化剂选用十二烧基硫酸钠、脂肪醇聚氧乙稀醚、Oliver 1000中的一种或几种组合。
8.如权利要求4所述的化妆品，其中上述防腐剂选用苯氧乙醇、山梨酸钾中的一种。
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