CN112986166A - 一种莪术油注射液质量波动的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种莪术油注射液质量波动的检测方法，属于中药质量控制领域。所述检测方法包括以下步骤：(1)血红蛋白溶液配制；(2)将血红蛋白溶液加入96孔板中，测定吸光度；(3)将莪术油注射液加入步骤(2)的血红蛋白溶液中，测定吸光度；(4)对步骤(2)和步骤(3)得到的吸光度进行数据处理，采用均值‑空白对莪术油注射液的质量波动进行判断。本发明具有灵敏度高、特异性强、重现性好、简便快速的技术优势，从而为莪术油注射液的质量波动提供一种检测方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种莪术油注射液质量波动的检测方法，属于中药质量控制领域。
背景技术
中药注射剂成分复杂，因产品质量波动问题引起的不良反应，已严重阻碍中药注射液的发展。以目前的质量标准，很难做到全面的质量波动检测。因此，建立中药注射剂质量波动的早期快速预警评价的有效防范，减少中药注射剂不良反应的发生，保证临床用药安全，已经成为目前急需解决的问题。
莪术油注射液对呼吸道病毒及流感病毒有直接抑制或杀灭作用，对金葡菌、大肠杆菌及伤寒杆菌等也有抑制作用。临床用于病毒引起的上呼吸道感染、肺炎、肠炎、心肌炎、脑炎、肿瘤以及抗血栓等症状的治疗。临床中主要的不良反应有变态反应、呼吸及循环系统反应、消化系统反应。
莪术油是温莪术经水蒸气蒸馏提取的挥发油，主要成分有莪术二酮、牻牛儿酮、莪术烯、呋喃二烯。已经收进2020版《中国药典》。莪术油注射液为莪术油与适宜的助溶剂制成的灭菌水溶液，现执行的质量标准为2005版《中国药典》。检测项目为性状、鉴别、pH值、其他注射剂项下常规检测、含量。仅仅检测这些项目，难以做到全面、客观、准确的质量评价与控制。
发明内容
本发明针对莪术油注射液现有质量标准控制项目不全面的情况，克服上述现有技术的不足之处而提供一种能够高效、灵敏、快速的检测莪术油注射液质量波动的方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种莪术油注射液质量波动的检测方法，所述检测方法采用血红蛋白作为检测试剂，所述检测方法采用酶联免疫法。
作为本发明所述检测方法的优选实施方式，所述检测方法包括以下步骤：
(1)血红蛋白溶液配制；
(2)将血红蛋白溶液加入96孔板中，测定吸光度；
(3)将莪术油注射液加入步骤(2)的血红蛋白溶液中，测定吸光度；
(4)对步骤(2)和步骤(3)得到的吸光度进行数据处理，采用均值-空白对莪术油注射液的质量波动进行判断。
本发明的检测方法是用酶联免疫法(ELISA)检测莪术油注射液质量波动。ELISA检测的原理是莪术油中部分氧化物质与血红蛋白反应，使吸光度增加。通过累积30批合格样品的吸光度值制定酶联免疫法ELISA吸光度值的控制范围。若样品的吸光度值在控制范围内，则所述莪术油注射液质量波动正常。若样品溶液的吸光度值不在控制范围内，则所述莪术油注射液样品的质量波动异常。
本发明血红蛋白溶液与莪术油注射液的浓度和加入量为最优配比，从生物学角度建立莪术油注射液的质量波动方法，用于莪术油注射液内控。
本发明的检测方法是根据多批次检测结果，建立基于生物活性检测的莪术油注射液质量波动的评判方法和标准，弥补现行质量标准的缺陷，以提升莪术油注射质量波动早期预警能力，减少临床不良反应的发生。
作为本发明所述检测方法的优选实施方式，所述步骤(1)的具体操作为：取血红蛋白，加生理盐水制成1.0-4.0mg/ml血红蛋白溶液，超声溶解，离心，备用。
作为本发明所述检测方法的优选实施方式，所述步骤(2)的具体操作为：将50-250uL血红蛋白溶液加入96孔板中，除去气泡，放置在酶标仪中，在200-320nm下，间隔5nm，测定吸光度。
作为本发明所述检测方法的优选实施方式，所述步骤(3)的具体操作为：将20-200uL莪术油注射液加至血红蛋白溶液中，得到含有莪术油注射液的血红蛋白溶液，在10-60℃条件下震摇10-120min，在200-320nm下，间隔5nm，测定吸光度。
研究发现，血红蛋白的浓度、体积；莪术油注射液的体积；莪术油注射液与血红蛋白的作用温度、时间；酶标仪的检测波长等对检测精度、准确性、重复性、合格样品与不合格样品的区分力影响非常明显。
作为本发明所述检测方法的优选实施方式，所述血红蛋白为人血红蛋白或牛血红蛋白，加生理盐水制成1.5-3.0mg/ml血红蛋白溶液。
作为本发明所述检测方法的优选实施方式，所述加入血红蛋白溶液的体积为50-150uL，酶标仪的检测波长为270-320nm。
作为本发明所述检测方法的优选实施方式，所述莪术油注射液的体积为50-100uL，在10-40℃条件下震摇10-60min，酶标仪的检测波长为270-320nm。
作为本发明所述检测方法的优选实施方式，所述步骤(4)中，步骤(3)得到的吸光度值减去步骤(2)得到的吸光度值，即为莪术油注射液的吸光度值；质量波动的判断方法为：若莪术油注射液的吸光度值在控制范围内，则莪术油注射液的质量波动正常，若莪术油注射液的吸光度值不在控制范围内，则莪术油注射液的质量波动异常。
作为本发明所述检测方法的优选实施方式，所述控制范围为通过累积30批合格莪术油注射液样品的吸光度值范围制定得到。即，累积30批以上合格样品的吸光度值范围制定为莪术油注射液的吸光度值的控制范围，优选0.93-0.98。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明以莪术油注射液为研究对象，采用酶标仪检测其与血红蛋白反应后吸光度值的动态变化，通过吸光度值评价其质量波动范围，以体现样品的差异，从而实现对莪术油注射液质量波动的检测，具有灵敏度高、特异性强、重现性好，简便迅速的技术优势，为莪术油注射液临床不良反应早期预警提供技术支持。本发明无需对待测样品进行处理，避免了样品信息的丢失和偏离，成本低。
具体实施方式
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
本发明实施例中所使用的实验方法如无特殊说，均为常规方法。本发明实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。酶标仪采用的是TECAN SPARK20M多功能酶标仪。
实施例1
一种莪术油注射液质量波动的检测方法，步骤如下：
(1)血红蛋白溶液配制：取血红蛋白，加生理盐水制成1.5mg/ml血红蛋白溶液，超声溶解，离心，备用；
(2)加血红蛋白溶液：将50uL血红蛋白溶液加入96孔板中，除去气泡，放置在酶标仪中，在270-320nm下，间隔5nm，测定吸光度；
(3)加样品：将50uL莪术油注射液加至血红蛋白溶液中，得到含有莪术油注射液的血红蛋白溶液，在10℃条件下震摇30min，在270-320nm下，间隔5nm，测定吸光度；
(4)计算：步骤(3)得到的吸光度值减去步骤(2)得到的吸光度值，即为莪术油注射液的吸光度值，共检测30批合格样品，酶标仪吸光度值范围为0.93-0.97。
实施例2
一种莪术油注射液质量波动的检测方法，步骤如下：
(1)血红蛋白溶液配制：取血红蛋白，加生理盐水制成2.5mg/ml血红蛋白溶液，超声溶解，离心，备用；
(2)加血红蛋白溶液：将50uL血红蛋白溶液加入96孔板中，除去气泡，放置在酶标仪中，在270-320nm下，间隔5nm，测定吸光度；
(3)加样品：将50uL莪术油注射液加至血红蛋白溶液中，得到含有莪术油注射液的血红蛋白溶液，在25℃条件下震摇30min，在270-320nm下，间隔5nm，测定吸光度；
(4)计算：步骤(3)得到的吸光度值减去步骤(2)得到的吸光度值，即为莪术油注射液的吸光度值，共检测30批合格样品，酶标仪吸光度值范围为0.93-0.98。
实施例3
一种莪术油注射液质量波动的检测方法，步骤如下：
(1)血红蛋白溶液配制：取血红蛋白，加生理盐水制成1.5mg/ml血红蛋白溶液，超声溶解，离心，备用；
(2)加血红蛋白溶液：将50uL血红蛋白溶液加入96孔板中，除去气泡，放置在酶标仪中，在270-320nm下，间隔5nm，测定吸光度；
(3)加样品：将100uL莪术油注射液加至血红蛋白溶液中，得到含有莪术油注射液的血红蛋白溶液，在25℃条件下震摇30min，在270-320nm下，间隔5nm，测定吸光度；
(4)计算：步骤(3)得到的吸光度值减去步骤(2)得到的吸光度值，即为莪术油注射液的吸光度值，共检测30批合格样品，酶标仪吸光度值范围为0.93-0.97。
实施例4
一种莪术油注射液质量波动的检测方法，步骤如下：
(1)血红蛋白溶液配制：取血红蛋白，加生理盐水制成4.0mg/ml血红蛋白溶液，超声溶解，离心，备用；
(2)加血红蛋白溶液：将250uL血红蛋白溶液加入96孔板中，除去气泡，放置在酶标仪中，在200-320nm下，间隔5nm，测定吸光度；
(3)加样品：将100uL莪术油注射液加至血红蛋白溶液中，得到含有莪术油注射液的血红蛋白溶液，在60℃条件下震摇50min，在200-320nm下，间隔5nm，测定吸光度；
(4)计算：步骤(3)得到的吸光度值减去步骤(2)得到的吸光度值，即为莪术油注射液的吸光度值，共检测30批合格样品，酶标仪吸光度值范围为0.93-0.99。
实施例5
一种莪术油注射液质量波动的检测方法，步骤如下：
(1)血红蛋白溶液配制：取血红蛋白，加生理盐水制成1.0mg/ml血红蛋白溶液，超声溶解，离心，备用；
(2)加血红蛋白溶液：将150uL血红蛋白溶液加入96孔板中，除去气泡，放置在酶标仪中，在200-320nm下，间隔5nm，测定吸光度；
(3)加样品：将200uL莪术油注射液加至血红蛋白溶液中，得到含有莪术油注射液的血红蛋白溶液，在25℃条件下震摇30min，在200-320nm下，间隔5nm，测定吸光度；
(4)计算：步骤(3)得到的吸光度值减去步骤(2)得到的吸光度值，即为莪术油注射液的吸光度值，共检测30批合格样品，酶标仪吸光度值范围为0.94-1.10。
实施例6
一种莪术油注射液质量波动的检测方法，步骤如下：
(1)血红蛋白溶液配制：取血红蛋白，加生理盐水制成1.5mg/ml血红蛋白溶液，超声溶解，离心，备用；
(2)加血红蛋白溶液：将75uL血红蛋白溶液加入96孔板中，除去气泡，放置在酶标仪中，在270-320nm下，间隔5nm，测定吸光度；
(3)加样品：将100uL莪术油注射液加至血红蛋白溶液中，得到含有莪术油注射液的血红蛋白溶液，在40℃条件下震摇60min，在270-320nm下，间隔5nm，测定吸光度；
(4)计算：步骤(3)得到的吸光度值减去步骤(2)得到的吸光度值，即为莪术油注射液的吸光度值，共检测30批合格样品，酶标仪吸光度值范围为0.93-0.97。
实施例7
一种莪术油注射液质量波动的检测方法，步骤如下：
(1)血红蛋白溶液配制：取血红蛋白，加生理盐水制成3.0mg/ml血红蛋白溶液，超声溶解，离心，备用；
(2)加血红蛋白溶液：将50uL血红蛋白溶液加入96孔板中，除去气泡，放置在酶标仪中，在200-320nm下，间隔5nm，测定吸光度；
(3)加样品：将20uL莪术油注射液加至血红蛋白溶液中，得到含有莪术油注射液的血红蛋白溶液，在10℃条件下震摇120min，在200-320nm下，间隔5nm，测定吸光度；
(4)计算：步骤(3)得到的吸光度值减去步骤(2)得到的吸光度值，即为莪术油注射液的吸光度值，共检测30批合格样品，酶标仪吸光度平均值为0.90-1.05。
实施例8莪术油变质样品检测验证
取一批莪术油注射液分别采用开瓶和不开瓶两种方式放样，分别在2-8℃、25℃、40℃、60℃考察稳定性，在放置后的5天、10天、30天取样检测，检测项目为性状、含量。按实施例1的方法检测酶标值。结果如表1，性状的结果如表2，主要成分结果如表3。酶标值的结果与性状的变化和主要成分的变化一致。如在2-8℃性状和主要成分无明显变化，酶标值结果无明显变化。与2-8℃不开瓶5天相比，在60℃不开瓶放置30天时，溶液颜色无变化，溶液变浑浊，主要成分发生变化，酶标值由0.965增加至1.233。在60℃开瓶放置30天时，溶液颜色变为黄色，主要成分发生极大降解，相应的酶标值也发生很大变化，由0.965增至4.526。
表1酶标值检测结果
表2性状检测结果
表3主要成分检测结果
实施例9
对莪术油注射液进行质量控制。按照实施例1～7的方法，检测莪术油注射液过期样品、变色样品和有效期内合格样品，酶标值如表4。可知过期样品、破损变黄样品酶标值均高于正常样品，且合格样品的酶标值均在控制范围内。酶标法可以作为莪术油注射液的一种质量波动的早期预警监测手段。
表4莪术油注射液酶标值检测结果
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.一种莪术油注射液质量波动的检测方法，其特征在于，所述检测方法采用血红蛋白作为检测试剂，所述检测方法采用酶联免疫法。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
(1)血红蛋白溶液配制；
(2)将血红蛋白溶液加入96孔板中，测定吸光度；
(3)将莪术油注射液加入步骤(2)的血红蛋白溶液中，测定吸光度；
(4)对步骤(2)和步骤(3)得到的吸光度进行数据处理，采用均值-空白对莪术油注射液的质量波动进行判断。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)的具体操作为：取血红蛋白，加生理盐水制成1.0-4.0mg/ml血红蛋白溶液，超声溶解，离心，备用。
4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)的具体操作为：将50-250uL血红蛋白溶液加入96孔板中，除去气泡，放置在酶标仪中，在200-320nm下，间隔5nm，测定吸光度。
5.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)的具体操作为：将20-200uL莪术油注射液加至血红蛋白溶液中，得到含有莪术油注射液的血红蛋白溶液，在10-60℃条件下震摇10-120min，在200-320nm下，间隔5nm，测定吸光度。
6.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述血红蛋白为人血红蛋白或牛血红蛋白，加生理盐水制成1.5-3.0mg/ml血红蛋白溶液。
7.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述加入血红蛋白溶液的体积为50-150uL，酶标仪的检测波长为270-320nm。
8.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述莪术油注射液的体积为50-100uL，在10-40℃条件下震摇10-60min，酶标仪的检测波长为270-320nm。
9.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(4)中，步骤(3)得到的吸光度值减去步骤(2)得到的吸光度值，即为莪术油注射液的吸光度值；质量波动的判断方法为：若莪术油注射液的吸光度值在控制范围内，则莪术油注射液的质量波动正常，若莪术油注射液的吸光度值不在控制范围内，则莪术油注射液的质量波动异常。
10.如权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述控制范围通过累积30批合格莪术油注射液样品的吸光度值范围制定。
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