CN112979744B

CN112979744B - 具有抗肿瘤活性的薯蓣皂苷元拼合氮芥衍生物及其制备方法和用途

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Publication number: CN112979744B
Application number: CN202110189893.9A
Authority: CN
Inventors: 王文豹
Original assignee: Qiqihar Medical University
Current assignee: Qiqihar Medical University
Priority date: 2021-02-18
Filing date: 2021-02-18
Publication date: 2022-02-15
Anticipated expiration: 2041-02-18
Also published as: CN112979744A

Abstract

本发明属于天然药物及药物化学领域，涉及一类薯蓣皂苷元拼合氮芥类衍生物及其制备方法和用途。具体涉及在薯蓣皂苷元母核结构的3‑OH或26‑OH位点引入苯甲酸氮芥衍生物的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的用途。本发明的薯蓣皂苷元拼合氮芥衍生物具有良好的抗肿瘤作用，可以用于进一步制备抗肿瘤药物。

Description

具有抗肿瘤活性的薯蓣皂苷元拼合氮芥衍生物及其制备方法和用途

技术领域

本发明属于天然药物及药物化学领域，涉及一类薯蓣皂苷元拼合氮芥类衍生物及其制备方法和用途。具体涉及在薯蓣皂苷元母核结构的3-OH或26-OH位点引入苯甲酸氮芥衍生物的制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的用途。

背景技术

近年来，全球癌症发病率和死亡率持续攀升，目前癌症已成为仅次于心脑血管疾病的第二大死因。尽管随着科学技术的进步，涌现出了大量新的抗肿瘤靶点和抗肿瘤药物，但是这些新药通常价格非常昂贵，并非工薪阶层所能负担，且由于临床数据有限使得其用药安全难以得到保证。现在在临床上使用的抗肿瘤药物还是以传统的化疗药物为主，以新型抗肿瘤药物(如靶向激酶抑制剂、抗癌抗体等)为辅。然而，已上市的很多经典抗肿瘤化疗药物治疗效果虽好，抗瘤谱较广，但选择性差，毒副作用大，这极大程度限制了其使用。为此，如何降低经典抗肿瘤化疗药物的全身毒性、增加其在肿瘤部位的浓度和亲和性，使这些老药重新焕发青春，成为了众多科研工作者除了研发抗肿瘤新药以外的另一个工作重点。

氮芥类药物，也称为DNA烷化剂，是临床肿瘤治疗中使用最早、最广泛的一类抗肿瘤药物，其主要作用机制是在体内能形成缺电子的高度活泼中间体或其他具有活泼的亲电性基团的化合物，进而与富含电子基团的生物大分子发生共价不可逆结合，使DNA分子丧失活性或发生断裂。这类药物在临床上被广泛使用，然而其对正常细胞和癌细胞缺乏特异性，毒副作用比较大，而且随着近年来肿瘤耐药的发生，治疗效果并不理想，因此，对氮芥类药物进行化学修饰，改善其疗效有着很重要的价值。为了提高氮芥类药物的活性并降低其毒性，在此前的研究中就已经考虑使用天然存在的小分子化合物如氨基酸、嘧啶等作为其载体，这样可以增加药物在肿瘤部位的浓度和亲和性，从而增加药物的疗效。例如，使用苯丙氨酸为载体发展的美法仑(melphalan)，对卵巢癌、乳腺癌、淋巴瘤和多发性骨髓瘤等恶性肿瘤均有较好的疗效，但是该药物的缺点是必须注射给药。

可见，将天然产物与氮芥类药物进行拼合是一种对氮芥类药物进行改造以增加其疗效并降低其毒副作用的很好的策略，尽管有很多药物学家依照这种策略对氮芥进行了研究，但是目前已知的成功案例却是极为有限的。也就是说，通过这种方式对诸如氮芥等经典化疗药物的改造，并未能满足目前庞大的临床需要，仍然需要寻找更多的适于通过拼合的方式对氮芥类药物进行改造的天然产物。

薯蓣皂苷元(diosgenin，DSG)是从薯蓣科植物盾叶薯蓣、穿龙薯蓣等根茎中分离出来的一种甾体皂苷元。薯蓣皂苷元是合成甾体激素类药物与甾体避孕药的重要原料，世界各国生产的甾体激素类药物60％以其为原料，如孕烯醇酮、孕酮、可的松等。多项药理研究结果表明薯蓣皂苷元具有抗癌、抗炎、免疫调节、降糖、保肝以及抗氧化等生物活性。体内外研究结果表明，薯蓣皂苷元还对宫颈癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、黑色素瘤、肝癌、胆管癌和骨肉瘤等多种肿瘤细胞表现出一定的广谱抗肿瘤活性。由此可见，薯蓣皂苷元无论是作为药物合成前体，还是其所具备的抗肿瘤药理活性都具有广泛的应用价值，这使得非常适于将其作为对氮芥类药物进行改造的药物载体。

本发明以薯蓣皂苷元为先导化合物，利用拼合原理，选择活性较好的芳香氮芥化合物，将其通过连接基团连接到薯蓣皂苷元分子结构的3-OH或26-OH位上，设计并合成了式Ⅰ或式Ⅱ所示的新型薯蓣皂苷元拼合氮芥类衍生物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是制备了一系列具有较高抗肿瘤活性的新型薯蓣皂苷元拼合氮芥衍生物，并进一步提供包含所述衍生物的药物组合物，以及所述衍生物的制备方法。此外，还提供了所述的衍生物或药物组合物在制备治疗肿瘤疾病的药物中的用途。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

在第一个方面中，本发明提供了式Ⅰ或Ⅱ所示的薯蓣皂苷元拼合氮芥衍生物或其药学上可接受的盐，所述衍生物的结构式为

其中，R选自下述基团中的一种：

在一个具体的实施方式中，所述衍生物选自以下：

在第二个方面中，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含上述衍生物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

在一个优选的实施方式中，所述药物组合物的剂型为口服剂型或注射剂型。

更优选地，所述口服剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液、缓释制剂或控释制剂。

在第三个方面中，本发明提供了上述衍生物或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括下述步骤：

(1)薯蓣皂苷元1在DCC/DMAP条件下与Boc保护的氨基酸反应得到薯蓣皂苷元中间体5a-5f，然后薯蓣皂苷元中间体5a-5f在CF₃COOH的作用下，脱保护，得到薯蓣皂苷元氨基酸衍生物中间体6a-6f；

(2)将对氨基苯甲酸乙酯2在环氧乙烷和乙酸反应的条件下得到中间体3，中间体3在三氯氧磷和盐酸的条件下得到苯甲酸氮芥4；

(3)薯蓣皂苷元中间体6a-6f与苯甲酸氮芥4在EDCI/DMAP条件下室温反应得到目标化合物7a-7f；

其中，步骤(1)至步骤(3)的反应路线如下所示：

或者，本发明还提供了上述衍生物或其药学上可接受的盐的制备方法，所述制备方法包括下述步骤：

(1)薯蓣皂苷元1在乙酸酐和吡啶反应的条件下得到中间体8，中间体8在NaBH₃CN和冰乙酸反应的条件下得到中间体9；

(2)中间体9在DCC/DMAP条件下与Boc保护的氨基酸反应缩合成酯，得到薯蓣皂苷元中间体10a-10f，然后薯蓣皂苷元中间体10a-10f在CF₃COOH作用下，脱保护，得到薯蓣皂苷元氨基酸衍生物中间体11a-11f；

(3)薯蓣皂苷元氨基酸衍生物中间体11a-11f与苯甲酸氮芥4在EDCI/DMAP条件下室温反应得到目标化合物12a-12f；

其中，步骤(1)至步骤(3)的反应路线如下所示：

在第四个方面中，本发明提供了上述衍生物或其药学上可接受的盐或者上述药物组合物在制备治疗肿瘤疾病的药物中的用途。

在一个优选的实施方式中，所述肿瘤为实体瘤或血液系统癌症。

在一个更优选的实施方式中，所述肿瘤为白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤、骨肉瘤、神经母细胞瘤、胰腺癌、肺癌、Wilms肿瘤、横纹肌肉瘤、尤因肉瘤、膀胱癌、结肠癌、肝癌、卵巢癌、宫颈癌、鼻咽癌、喉癌、胃癌或甲状腺癌。

在一个最优选的实施方式中，所述肿瘤为膀胱癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌或肝癌。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一赘述。

本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：

本发明的薯蓣皂苷元拼合氮芥衍生物或其药学上可接受的盐是以薯蓣皂苷元为先导化合物，利用拼合原理，选择活性较好的芳香氮芥化合物，将其通过连接基团连接到薯蓣皂苷元分子结构的3-OH或26-OH上，设计并合成了式I或式Ⅱ所示的新型薯蓣皂苷元拼合氮芥衍生物。

在人类癌细胞株和正常细胞株上进行的药效学实验表明，这些新型薯蓣皂苷元拼合氮芥衍生物针对多种人类肿瘤具有良好的细胞毒作用，且对正常人细胞株未表现出毒性。由此可见，本发明制备得到的新型薯蓣皂苷元拼合氮芥衍生物适于开发成新型抗肿瘤药物，具有非常高的潜在研究价值和临床应用前景。

具体实施方式

本发明人长期致力于对薯蓣皂苷元衍生物的研究和开发，通过大量筛选，意外地发现了通过将薯蓣皂苷元与芳香氮芥化合物进行拼合，能够制备得到一系列具有良好抗肿瘤活性和较低毒性的新型薯蓣皂苷元拼合氮芥衍生物。在此基础上完成了本发明。

为了便于更好地阅读本说明书，下面提供了说明书中使用的主要缩略词。

此外，如本文所使用的，术语“药学上可接受的载体”选自稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、稳定剂或溶剂中的一种或多种。

本发明所述稀释剂包括但不限于淀粉、微晶纤维素、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖等；所述润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、氯化钠、油酸钠、月桂醇硫酸钠、泊洛沙姆等；所述粘合剂包括但不限于水、乙醇、淀粉浆、糖浆、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮等；所述崩解剂包括但不限于淀粉泡腾混合物即碳酸氢钠和枸橼酸、酒石酸、低取代羟丙基纤维素等；所述稳定剂包括但不限于多糖如金合欢胶、琼脂、藻酸、纤维素醚和羧甲基甲壳酯等；所述溶剂包括但不限于水、平衡的盐溶液等。

本发明治疗的肿瘤的非限制性实例包括但不限于：胆道癌(例如，胆管癌)、膀胱癌、乳腺癌(例如，乳腺腺癌、乳腺乳头状癌、乳腺癌、乳腺髓样癌、三阴乳腺癌、HER2阴性乳腺癌、HER2阳性乳腺癌、男性乳腺癌、晚期转移性乳腺癌、孕激素受体阴性乳腺癌、孕激素受体阳性乳腺癌、复发性乳腺癌)、脑癌(例如，脑膜瘤；神经胶质瘤，例如星形细胞瘤、少突胶质瘤；髓母细胞瘤)、支气管癌、宫颈癌(例如，宫颈腺癌)、绒毛膜癌、结直肠癌(例如，结肠癌、直肠癌、结直肠腺癌)、上皮癌、子宫内膜癌(例如，子宫癌、子宫肉瘤)、食道癌(例如，食道腺癌、巴雷特氏腺癌)、尤因氏肉瘤、眼癌(例如，眼内黑色素瘤、视网膜母细胞瘤)、胆囊癌、胃癌(例如，胃腺癌)、胃肠道间质肿瘤(GIST)、多形胶质母细胞瘤、头颈癌(例如，头颈鳞状细胞癌、口腔癌(例如，口腔鳞状细胞癌(OSCC))、咽喉癌(例如，喉癌、咽癌、鼻咽咽、口咽癌))、肾癌(例如，肾母细胞瘤，又称Wilms肿瘤，肾细胞癌)、肝癌(例如，肝细胞癌(HCC)、恶性肝癌)、肺癌(例如，支气管癌、小细胞癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌)、平滑肌肉瘤(LMS)、骨髓增生异常综合征(MDS)、间皮瘤、神经内分泌癌(例如，胃肠胰腺神经内分泌肿瘤(GEP-NET)、类癌肿瘤)、骨肉瘤、卵巢癌(例如，囊腺癌、卵巢胚胎癌、卵巢腺癌)、乳头状腺癌、胰腺癌(例如，胰腺腺癌、导管内乳头状粘液性肿瘤(IPMN)、胰岛细胞肿瘤)、阴茎癌(例如，阴茎和阴囊的佩吉特氏病)、前列腺癌(例如，前列腺腺癌)、直肠癌、横纹肌肉瘤、皮肤癌(例如，鳞状细胞癌(SCC)、角膜棘皮瘤(KA)、黑色素瘤、基底细胞癌(BCC))、小肠癌(例如，阑尾癌)、软组织肉瘤(例如，恶性纤维组织细胞瘤(MFH)、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、纤维肉瘤)、皮脂腺癌、汗腺癌、滑膜瘤、睾丸癌(例如，精原细胞瘤、睾丸胚胎癌)、甲状腺癌(例如，甲状腺乳头状癌、乳头状甲状腺癌(PTC)、甲状腺髓样癌)、尿道癌、阴道癌和外阴癌(例如，外阴佩吉特氏病)。

下面参照具体的实施例对本发明做进一步说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用于限定本发明的范围。

实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。

下面实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。

制备实施例：

实施例1：

于25mL干燥的茄形瓶中加入中间体6a(60mg，0.12mmol)和5mL CH₂Cl₂，搅拌溶解后加入DMAP(22.0mg，0.18mmol)、EDCI(33.4mg，0.18mmol)和苯甲酸氮芥4(36.5mg，0.14mmol)，室温搅拌8h，薄层色谱(石油醚：乙酸乙酯的体积比＝1.5:1)监测反应，原料基本反应完全，向反应液中加入10mL水，用5mL二氯甲烷萃取三次，饱和食盐水洗，无水Na₂SO₄干燥、过滤、浓缩，经硅胶柱色谱分离纯化得目标化合物7a，白色粉末，产率81.2％。

¹H NMR(600MHz,CDCl₃,δ):7.74(d,J＝8.5Hz,2H,Ph-H),6.68(d,J＝8.5Hz,2H,Ph-H),5.38(d,J＝4.3Hz,1H,H-6),4.70(m,1H,H-3),4.41(dd,J＝14.9,7.3Hz,1H,H-16),4.19(d,J＝4.1Hz,2H,Gly-α-CH₂),3.79(t,J＝6.9Hz,4H,NCH₂CH₂Cl,×2),3.65(t,J＝6.9Hz,4H,NCH₂CH₂Cl,×2),3.47(dd,J＝11.0,3.8Hz,1H,H-26),3.37(t,J＝11.0Hz,1H,H-26),1.04(s,3H,19-CH₃),0.97(d,J＝7.1Hz,3H,21-CH₃),0.79(s,3H,18-CH₃),0.78(d,J＝4.1Hz,3H,27-CH₃)。

¹³C NMR(150MHz,CDCl₃,δ):169.9(Gly-COO),166.9(-CONH),148.9(Ph-C),139.5(C-5),129.3(Ph-C,×2),122.8(C-6),122.5(Ph-C),111.3(Ph-C,×2),109.4(C-22),80.9(C-16),75.5(C-3),67.0(C-26),62.2(C-17),56.6(C-14),53.5(NCH₂CH₂Cl,×2),50.1(C-9),42.2(Gly-α-CH₂),41.7(C-20),40.4(C-12),40.3(NCH₂CH₂Cl,×2),39.8(C-13),38.1(C-4),37.0(C-1),36.9(C-10),32.2(C-7),32.0(C-15),31.5(C-8),31.5(C-23),30.4(C-25),28.9(C-24),27.8(C-2),21.0(C-11),19.5(C-19),17.3(C-27),16.4(C-18),14.7(C-21)。

ESI-HRMS:m/z 737.3453[M+Na]⁺(计算值：C₄₀H₅₆Cl₂N₂NaO₅,737.3458)。

实施例2：

参照实施例1的合成方法制备得目标化合物7f。白色粉末，产率79.3％。

¹H NMR(600MHz,CDCl₃,δ):8.22(br s,1H,Try-NH),7.61(d,J＝8.7Hz,2H,Ph-H),7.59(d,J＝8.3Hz,1H,Try-Ph),7.35(d,J＝8.3Hz,1H,Try-Ph),7.18(t,J＝7.7Hz,1H,Try-Ph),7.08(t,J＝7.7Hz,1H,Try-Ph),7.03(s,1H,Try-δ-CH),6.61(d,J＝8.7Hz,2H,Ph-H),5.33(d,J＝4.4Hz,1H,H-6),5.08(dd,J＝12.8,5.6Hz,1H,Try-α-CH),4.59(m,1H,H-3),4.41(dd,J＝15.0,7.5Hz,1H,H-16),3.76(t,J＝7.2Hz,4H,NCH₂CH₂Cl,×2),3.62(t,J＝7.2Hz,4H,NCH₂CH₂Cl,×2),3.47(dd,J＝11.1,3.4Hz,1H,H-26),3.41(d,J＝5.3Hz,2H,Try-β-CH₂),3.38(t,J＝11.1Hz,1H,H-26),1.00(s,3H,19-CH₃),0.97(d,J＝7.1Hz,3H,21-CH₃),0.79(s,3H,18-CH₃),0.78(d,J＝1.8Hz,3H,27-CH₃)。

¹³C NMR(150MHz,CDCl₃,δ):171.8(Try-COO),166.5(-CONH),148.8(Ph-C),139.7(C-5),136.2(Try-Ph),129.3(Ph-C,×2),128.0(Try-Ph),122.9(C-6),122.7(Try-δ-C),122.6(Ph-C),122.3(Ph-C),119.8(Try-Ph),119.1(Try-Ph),111.3(Try-Ph),111.2(Ph-C,×2),110.5(Try-γ-C),109.4(C-22),80.9(C-16),75.4(C-3),67.0(C-26),62.2(C-17),56.6(C-14),53.6(Try-α-CH),53.4(NCH₂CH₂Cl,×2),50.0(C-9),41.7(C-20),40.4(C-12),40.3(NCH₂CH₂Cl,×2),39.8(C-13),38.0(C-4),37.0(C-1),36.8(C-10),32.2(C-7),32.0(C-15),31.5(C-8),31.5(C-23),30.4(C-25),28.9(C-24),28.1(Try-β-CH₂),27.8(C-2),20.9(C-11),19.5(C-19),17.3(C-27),16.4(C-18),14.7(C-21)。

ESI-HRMS:m/z 866.4032[M+Na]⁺(计算值：C₄₄H₆₃Cl₂N₅NaO₇,866.4037)。

实施例3：

参照实施例1的合成方法制备得目标化合物12a。白色粉末，产率84.7％。

¹H NMR(600MHz,CDCl₃,δ):7.74(d,J＝8.8Hz,2H,Ph-H),6.65(d,J＝8.8Hz,2H,Ph-H),5.37(d,J＝5.0Hz,1H,H-6),4.59(m,1H,H-3),4.30(m,1H,H-16),4.23(d,J＝4.7Hz,2H,Gly-α-CH₂),4.09(dd,J＝10.6,5.7Hz,1H,H-26),3.99(dd,J＝10.6,6.8Hz,1H,H-26),3.79(t,J＝7.0Hz,4H,NCH₂CH₂Cl,×2),3.65(t,J＝7.0Hz,4H,NCH₂CH₂Cl,×2),3.30(m,1H,H-22),2.03(s,3H,Ac-CH₃),1.03(s,3H,19-CH₃),0.99(d,J＝6.8Hz,3H,21-CH₃),0.95(d,J＝6.8Hz,3H,27-CH₃),0.80(s,3H,18-CH₃)。

¹³C NMR(150MHz,CDCl₃,δ):170.7(Ac-COO),170.6(Gly-COO),166.9(-CONH),148.9(Ph-C),139.8(C-5),129.3(Ph-C,×2),122.5(C-6),111.3(Ph-C,×2),90.2(C-22),83.4(C-16),74.0(C-3),70.4(C-26),65.2(C-17),57.0(C-14),53.5(NCH₂CH₂Cl,×2),50.1(C-9),42.0(Gly-α-CH₂),40.8(C-12),40.3(NCH₂CH₂Cl,×2),39.5(C-13),38.2(C-4),38.1(C-20),37.1(C-1),36.8(C-10),32.9(C-24),32.4(C-7),32.1(C-15),31.7(C-8),30.8(C-23),30.5(C-25),27.9(C-2),21.6(Ac-CH₃),20.8(C-11),19.5(C-19),19.1(C-21),16.9(C-27),16.6(C-18)。

ESI-HRMS:m/z 781.3719[M+Na]⁺(计算值：C₄₂H₅₉Cl₂N₂NaO₆,781.3721)。

实施例4：

参照实施例1的合成方法制备得目标化合物12d。白色粉末，产率81.1％。

¹H NMR(600MHz,CDCl₃,δ):7.73(d,J＝8.6Hz,2H,Ph-H),6.67(d,J＝8.6Hz,2H,Ph-H),5.37(d,J＝4.5Hz,1H,H-6),4.85(m,1H,Leu-α-CH),4.60(m,1H,H-3),4.30(m,1H,H-16),4.04(dd,J＝10.8,5.9Hz,1H,H-26),3.96(dd,J＝10.8,6.8Hz,1H,H-26),3.79(t,J＝7.1Hz,4H,NCH₂CH₂Cl,×2),3.65(t,J＝7.1Hz,4H,NCH₂CH₂Cl,×2),3.30(m,1H,H-22),2.03(s,3H,Ac-CH₃),1.03(s,3H,19-CH₃),0.99(d,J＝6.7Hz,3H,21-CH₃),0.98(d,J＝5.9Hz,3H,Leu-CH₃),0.96(d,J＝5.9Hz,3H,Leu-CH₃),0.95(d,J＝6.6Hz,3H,27-CH₃),0.80(s,3H,18-CH₃)。

¹³C NMR(150MHz,CDCl₃,δ):173.7(Leu-COO),170.7(Ac-COO),166.5(-CONH),148.8(Ph-C),139.8(C-5),129.3(Ph-C,×2),122.7(C-6),122.5(Ph-C),111.2(Ph-C,×2),90.2(C-22),83.3(C-16),74.0(C-3),70.2(C-26),65.3(C-17),57.0(C-14),53.5(NCH₂CH₂Cl,×2),51.2(Leu-α-CH),50.1(C-9),42.4(Leu-β-CH₂),40.8(C-12),40.3(NCH₂CH₂Cl,×2),39.5(C-13),38.2(C-4),38.1(C-20),37.1(C-1),36.8(C-10),32.9(C-24),32.4(C-7),32.1(C-15),31.7(C-8),30.9(C-23),30.5(C-25),27.9(C-2),25.1(Leu-γ-CH),23.0(Leu-CH₃),22.4(Leu-CH₃),21.6(Ac-CH₃),20.8(C-11),19.5(C-19),19.1(C-21),17.0(C-27),16.6(C-18)。

ESI-HRMS:m/z 837.4322[M+Na]⁺(计算值：C₄₆H₆₈Cl₂N₂NaO₆,837.4347)。

实施例5：

参照实施例1的合成方法制备得目标化合物12e。白色粉末，产率84.4％。

¹H NMR(600MHz,CDCl₃,δ):7.65(d,J＝8.9Hz,2H,Ph-H),7.27(t,J＝7.0Hz,2H,Phe-Ph),7.23(t,J＝7.2Hz,1H,Phe-Ph),7.13(d,J＝7.2Hz,2H,Phe-Ph),6.67(d,J＝8.8Hz,2H,Ph-H),5.37(d,J＝4.4Hz,1H,H-6),5.08(dd,J＝12.7,5.7Hz,1H,Phe-α-CH),4.60(m,1H,H-3),4.30(m,1H,H-16),3.98(d,J＝5.9Hz,2H,H-26),3.78(t,J＝6.9Hz,4H,NCH₂CH₂Cl,×2),3.65(t,J＝6.9Hz,4H,NCH₂CH₂Cl,×2),3.30(m,1H,H-22),3.27(dd,J＝6.1,13.8Hz,1H,Phe-β-CH₂),3.21(dd,J＝5.3,13.8Hz,1H,Phe-β-CH₂),2.03(s,3H,Ac-CH₃),1.03(s,3H,19-CH₃),1.00(d,J＝6.9Hz,3H,21-CH₃),0.92(d,J＝6.8Hz,3H,27-CH₃),0.80(s,3H,18-CH₃)。

¹³C NMR(150MHz,CDCl₃,δ):172.1(Phe-COO),170.7(Ac-COO),166.3(-CONH),148.8(Ph-C),139.8(C-5),136.2(Phe-Ph),129.5(Phe-Ph,×2),129.2(Ph-C,×2),128.7(Phe-Ph,×2),127.2(Phe-Ph),122.8(C-6),122.5(Ph-C),111.3(Ph-C,×2),90.2(C-22),83.4(C-16),74.0(C-3),70.5(C-26),65.2(C-17),57.0(C-14),53.5(Phe-α-CH),53.4(NCH₂CH₂Cl,×2),50.1(C-9),40.8(C-12),40.2(NCH₂CH₂Cl,×2),39.5(C-13),38.3(Phe-β-CH₂),38.2(C-4),38.1(C-20),37.1(C-1),36.8(C-10),32.9(C-24),32.4(C-7),32.1(C-15),31.7(C-8),30.9(C-23),30.5(C-25),27.9(C-2),21.6(Ac-CH₃),20.8(C-11),19.5(C-19),19.1(C-21),16.9(C-27),16.6(C-18)。

ESI-HRMS:m/z 849.4370[M+H]⁺(计算值：C₄₉H₆₇Cl₂N₂O₆,849.4371)。

实施例6：

参照实施例1的合成方法制备得目标化合物12f。淡黄色粉末，产率77.0％。

¹H NMR(600MHz,CDCl₃,δ):8.29(br s,1H,Try-NH),7.61(d,J＝8.8Hz,2H,Ph-H),7.57(d,J＝7.9Hz,1H,Try-Ph),7.34(d,J＝8.1Hz,1H,Try-Ph),7.17(t,J＝7.4Hz,1H,Try-Ph),7.07(t,J＝7.9Hz,1H,Try-Ph),7.00(d,J＝1.6Hz,1H,Try-δ-CH),6.62(d,J＝8.9Hz,2H,Ph-H),5.36(d,J＝5.0Hz,1H,H-6),5.14(dd,J＝12.4,5.5Hz,1H,Try-α-CH),4.60(m,1H,H-3),4.32(m,1H,H-16),3.92(m,2H,H-26),3.76(t,J＝7.0Hz,4H,NCH₂CH₂Cl,×2),3.63(t,J＝7.0Hz,4H,NCH₂CH₂Cl,×2),3.41(d,J＝5.4Hz,2H,Try-β-CH₂),3.29(m,1H,H-22),2.03(s,3H,Ac-CH₃),1.03(s,3H,19-CH₃),0.99(d,J＝6.8Hz,3H,21-CH₃),0.86(d,J＝6.8Hz,3H,27-CH₃),0.80(s,3H,18-CH₃)。

¹³C NMR(150MHz,CDCl₃,δ):172.5(Try-COO),170.7(Ac-COO),166.4(-CONH),148.8(Ph-C),139.8(C-5),136.3(Try-Ph),129.3(Ph-C,×2),127.9(Try-Ph),123.0(C-6),122.7(Try-δ-C),122.5(Ph-C),122.3(Try-Ph),119.8(Try-Ph),119.0(Try-Ph),111.4(Try-Ph),111.2(Ph-C,×2),110.4(Try-γ-C),90.3(C-22),83.4(C-16),74.0(C-3),70.4(C-26),65.2(C-17),57.0(C-14),53.6(Try-α-CH),53.4(NCH₂CH₂Cl,×2),50.1(C-9),40.8(C-12),40.3(NCH₂CH₂Cl,×2),39.5(C-13),38.2(C-4),38.1(C-20),37.1(C-1),36.8(C-10),32.8(C-24),32.4(C-7),32.1(C-15),31.7(C-8),30.8(C-23),30.5(C-25),28.2(Try-β-CH₂),27.9(C-2),21.6(Ac-CH₃),20.8(C-11),19.5(C-19),19.0(C-21),16.8(C-27),16.6(C-18)。

ESI-HRMS:m/z 888.4479[M+H]⁺(计算值：C₅₁H₆₈Cl₂N₃O₆,888.4480)。

药效学实施例：

1.主要实验设备、实验试剂和实验材料

仪器超净工作台(中国苏净安泰仪器厂)

恒温培养箱(美国Thermo Fisher公司)

酶联免疫检测仪(瑞士Tecan公司)

倒置相差显微镜(日本OLYMPUS公司)

试剂细胞培养基RPMI-1640、DMEM(高糖)(美国HyClone公司)

胎牛血清(美国HyClone公司)

PBS(中国南京凯基生物科技发展有限公司)

四甲基偶氮唑蓝(MTT)(美国Sigma公司)

DMSO(美国Sigma公司)

细胞株：人膀胱癌细胞T24、人乳腺癌细胞MCF-7、人肝癌细胞HepG2和人外周血单核细胞PMBC。

2.实验方法：细胞抑制活性实验方法

取对数生长期的肿瘤细胞，经胰酶消化后以5,000个/孔细胞密度接种于96孔培养板，置于37℃、5％CO₂培养箱中培养，待贴壁稳定后，每孔对应加入不同浓度的含药完全培养基200μL，对照组加等体积的空白培养基，每组设3个复孔。置于37℃、5％CO₂培养箱中培养48h后加MTT 20μL/孔，继续培养4h，小心吸弃孔内上清液，每孔加入DMSO 150μL来溶解甲瓒结晶，室温振荡使结晶充分溶解。用酶标仪检测492nm处吸光度值，实验重复3次。抑制率计算方法：

药敏孔相对OD值＝药敏孔绝对OD值-空白对照孔绝对OD值3.实验结果

如表1所示，药理实验结果表明，本发明的薯蓣皂苷元氮芥类衍生物对多种肿瘤细胞株具有抗增殖活性和肿瘤细胞特异性，并且对正常细胞株PMBC在高达200μM的浓度下也未表现出毒性。

可见，本发明的薯蓣皂苷元氮芥类衍生物在肿瘤细胞和正常细胞之间具有较好的选择性，可以用于进一步制备抗肿瘤药物。

表1：实施例1-6对3种人类癌细胞株和1种人类正常细胞的细胞毒活性的IC₅₀值(μM)

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。