CN112957947A - 一种用于核酸物质提取的磁珠混合液分装装置及分装方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于核酸物质提取的磁珠混合液分装装置及分装方法,包括壳体,所述壳体内设置有搅拌装置,所述搅拌装置包括用于搅拌的搅拌部,所述搅拌部设置在壳体内腔的中下部位置,搅拌部的上端与具有管状结构的吸力管的下端固定连接,所述吸力管的上端通过输送管与负压装置接通,吸力管上设置有用于提供旋转力动力的旋转装置,所述负压装置和旋转装置设置在壳体的外部,所述旋转装置通过吸力管带动搅拌部转动,所述吸力管用于排出壳体内的磁珠混合液。通过使用本发明的分装装置和分装方法,既可以实现磁珠混合液的自动混匀和自动分装,又能在低温条件下保证磁珠的吸附性能,省时省力,操作标准,成本低廉,尤其适用于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及磁珠混合液生产技术领域,特别涉及一种用于核酸物质提取的磁珠混合液分装装置及分装方法。
背景技术
随着时代的发展,分子生物学检测手段的应用日益广泛,与之相配套的核酸提取与纯化也越来越被重视和关注,磁珠法核酸提取技术因为其简便性、快速性和易于实现自动化而被迅速推广。这种方法的核心便是磁珠,它是一种由二氧化硅包被在四氧化三铁外而形成的圆球形生物纳米材料,粒径通常在几十纳米到几百纳米,磁珠表面具有羟基功能基团,在高浓度离液盐及低PH条件下,该磁珠可以和核酸非特异可逆性结合,在低浓度盐及高PH条件下,磁珠和核酸分离,而磁珠本身具有一定的超顺磁性,在外加磁场的作用下,磁珠或者吸附有核酸的磁珠可以随磁场任意移动。利用这一种特性可实现核酸DNA/RNA的快速自动化提取,为分子生物学的自动化检测奠定了基础。
磁珠因为其特殊的壳核结构导致了它在温度比较低的环境下会不可逆丧失吸附功能,这就需要在磁珠法核酸提取试剂生产、存储、运输、客户暂存等各个环节中要对温度进行严格保持和监控。同时,磁珠因具有快速沉降特点,静止状态下导致磁珠溶液及磁珠混合液中磁珠微球分布不均匀,故而影响提取试剂性能,因此在磁珠混合液分装时需保证溶液中磁珠微球分布高度均匀。
现有的磁珠混合液在低温度条件下磁珠表面基团容易被破坏,进而导致磁珠产生沉降,使得磁珠混合液中磁珠微球分布不均匀,故而影响提取试剂性能。另外,在分装过程中,都是通过人力搅拌来达到混合均匀的目,其不仅费时费力,而且在静置分装时,很难保证溶液中磁珠微球分布高度均匀,操作不能标准化。
国际专利WO 2018/157844 A1公开了一种利用磁珠提取核酸物质的方法以及试剂,提取核酸的试剂包括裂解试剂和纳米磁珠,所述裂解试剂包括磁珠和金属化合物,所述金属化合包括NaCl、KCl中的一种或两种,其中,裂解试剂还可以包括表面活性剂和Triton-X。该提取核酸物质的试剂主要解决提取和检测时间过长,过程过于复杂的问题,得到的试剂具有快速、简便、高效、实用的特点。然而,该专利技术没有提到低温下磁珠本身所存在的沉降问题,以及在现有人力静置分装过程中不能保证磁珠分布高度均匀的问题,而根据其技术方案的记载,明显不能解决这些问题,因此,该专利技术也没有给出解决这些技术问题的技术手段。
中国专利CN111996113A公开了一种磁珠法核酸提取装置及其核酸提取方法,其中提到了使用高频振荡搅拌的方式,可以使磁珠混合物混合均匀,降低了气溶胶的挥发,可保证提取产物中核酸片段长度及完整度,然而当将制造成提取试剂进行分装时,依然不能保证磁珠分布高度均匀的问题。
中国专利CN208694883U公开了一种全自动磁珠混匀器,该全自动磁珠混匀器既可以保证分装瓶内的液体持续混合的均匀性,又不妨碍分装瓶的分装取样工作,但是该装置无法克服低温下磁珠本身所存在的沉降问题。
发明内容
本发明的发明目的在于:针对上述存在的问题,提供一种用于核酸物质提取的磁珠混合液分装装置及分装方法,以解决现有磁珠混合液在低温条件下不可逆丧失吸附功能的问题,同时解决现有磁珠在分装过程中容易沉降导致磁珠微球分布不均匀的问题。
本发明采用的技术方案如下:一种用于核酸物质提取的磁珠混合液分装装置,包括顶部开口的壳体,所述壳体内设置有搅拌装置,所述搅拌装置包括用于搅拌的搅拌部,所述搅拌部设置在壳体内腔的中下部位置,搅拌部的上端与具有管状结构的吸力管的下端固定连接,所述吸力管的上端通过输送管与负压装置接通,吸力管上设置有用于提供旋转力动力的旋转装置,所述负压装置和旋转装置设置在壳体的外部,所述旋转装置通过吸力管带动搅拌部转动,所述吸力管用于排出壳体内的磁珠混合液。
进一步,所述搅拌部为上下端均开口的环形件,搅拌部的下端开口构成混合入口。
进一步,所述吸力管通过混合出口与搅拌部的上端固定连接,所述混合出口的横截面为上部开口小、下部开口大的锥形或梯形结构。
进一步,所述环形件的横截面为弧形、锥形或梯形,环形件的侧壁上设置有多个湍流孔。
进一步,所述湍流孔绕环形件一周且靠近环形件的下部设置。
进一步,所述吸力管上还套设有混匀机构,所述混匀机构为小口在上、大口在下的棱状体或圆锥体,所述搅拌部被包裹在混匀机构内并相互不接触,混匀机构包括多根搅拌棒,所述多根搅拌棒间隙排列形成混匀机构的侧面,搅拌棒的上端与上固定环固定连接,并通过上固定环与吸力管固定连接,搅拌棒的下端与下固定环固定连接,所述下固定环与所述搅拌部的下端面相对。
进一步,所述搅拌棒均匀排列形成混匀机构镂空的侧面。
本发明还包括一种用于核酸物质提取的磁珠混合液分装方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1、配制磁珠溶液(磁珠溶液并无特殊的配比关系,根据需要可自行决定配比量),将磁珠溶液与保护液进行混合(可按照1:30(V/V)体积比例进行混合,当然也可在该比例关系上进行合理调整,例如可以是1:27、1:28、1:29、1:31、1:32、1:33等)得到磁珠混合液;
S2、将磁珠混合液通过上述的分装装置进行混匀后,分装至深孔板或试剂瓶内,完成分装;
其中,所述保护液的pH值为6.0-8.0,保护液包括以下组分:适量的缓冲液,组分A的含量为0.1-5mol,组分B的含量为5%-50%,组分C的含量为1%-10%,%表示体积分数;所述组分A为NaCl、KCl或LiCl中的一种或多种,所述组分B为AEO、TritonX-100或PEG6000中的一种或多种,所述组分C为无水乙醇、异丙醇或丙三醇中的一种或多种。
进一步,所述缓冲液为Tris缓冲液或者TE缓冲液。
本发明还包括一种用于核酸物质提取的磁珠混合液的保护液,其特征在于,所述保护液包括以下组分:组分A的含量为0.1-5mol,组分B的含量为5%-50%,组分C的含量为1%-10%,%表示体积分数;所述组分A为NaCl、KCl或LiCl中的一种或多种,所述组分B为AEO、TritonX-100或PEG6000中的一种或多种,所述组分C为无水乙醇、异丙醇或丙三醇中的一种或多种,所述缓冲液为Tris缓冲液或者TE缓冲液,所述保护液的pH值为6.0-8.0。
综上所述,由于采用了上述技术方案,本发明的有益效果是:
1、本发明用于核酸物质提取的磁珠混合液分装装置既可实现磁珠溶液与保护液混匀,又可实现磁珠混合液自动分装,能保证磁珠混合液中磁珠微球分布均匀,解决了现有通过人力搅拌而存在的人力成本高、操作不规范、混匀和分装效果差的问题;
2、通过引入本发明的保护液,能够保证磁珠混合液中的磁珠在低温度条件下,其表面基团不会被破坏,吸附功能不丧失,其配合分装装置的混匀效果,分装得到的磁珠混合液即使在低温条件下也能保证磁珠微球分布均匀,提取试剂的性能得到了充分保障;
3、通过使用本发明的分装装置和分装方法,既可以实现磁珠混合液的自动混匀和自动分装,又能在低温条件下保证磁珠的吸附性能,磁珠微球分布均匀,省时省力,操作标准,成本低廉,实用性强,尤其适用于工业化生产。
附图说明
图1是本发明的一种用于核酸物质提取的磁珠混合液分装装置结构示意图;
图中标记:1为壳体,2为搅拌部,3为吸力管,4为输送管,5为环形件,6为混合出口,7为混合入口,8为湍流孔,9为混匀机构,10为上固定环,11为搅拌棒,12为下固定环,13为旋转装置,14为负压装置。
具体实施方式
下面结合附图,对本发明作详细的说明。
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合附图及实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
如图1所示,一种用于核酸物质提取的磁珠混合液分装装置,包括壳体1,壳体1具有内腔结构,其可以是圆筒形结构,也可以是多边形筒形结构,壳体1的顶部开口,形成一面敞口的封闭容器,壳体1内设置有搅拌装置,所述搅拌装置包括用于搅拌的搅拌部2,所述搅拌部2设置在壳体1内腔的中下部位置,优选设置在壳体1内腔的中下部中心位置,搅拌部2的上端与具有管状结构的吸力管3的下端固定连接,所述吸力管3的上端通过输送管4与负压装置14接通,吸力管3用于将经过搅拌部2搅拌混匀的磁珠混合液自下而上排出,吸力管3上设置有用于提供旋转力动力的旋转装置13,所述负压装置14和旋转装置13设置在壳体1的外部,所述旋转装置13通过吸力管3带动搅拌部2转动,使得搅拌部2对磁珠混合液进行搅拌,负压装置14用于对吸力管3产生负压,便于磁珠混合液被吸出,负压装置14可以选择自吸泵。
上述旋转装置13可以选择自动定心型转子自动平衡装置,自动定心型转子自动平衡装置具有结构简单、工作可靠、成本低廉、不需提供外部能源,并且能够对转子不平衡进行自动调节等优点,但具有在亚临界状态会加大转子的不平衡量的特性,使得这类自动平衡装置当必须在过临界转速的状态下运行时,才能起到自动平衡的作用,因此存在不能在全转速下进行平衡调节的缺点,应用中具有一定的局限性,目前多应用于高速旋转机械中,在本发明中对于旋转装置13的要求不高,只要能满足将磁珠溶液与保护液进行混匀,并且保证磁珠不沉降即可。
上述用于核酸物质提取的磁珠混合液分装装置既可实现磁珠溶液与保护液混匀,又可实现磁珠混合液自动分装,能保证磁珠混合液中磁珠微球分布均匀,省时省力,操作标准,成本低廉。
在本发明的一些实施例中,所述搅拌部2为上下端均开口的环形件,搅拌部2的下端开口构成混合入口7,所述吸力管3通过混合出口6与搅拌部2的上端固定连接并接通,所述混合出口6的横截面为上部开口小、下部开口大的锥形或梯形结构。即将吸力管3靠近搅拌部2的一端设置成喇叭状,可以方便位于搅拌部2内的磁珠混合液被吸出,也即是说,通过增大吸力管3与搅拌部2之间的接触面积进而增大吸力管3内的流速,避免吸力管3空吸而无法将搅拌部2内腔的磁珠混合液吸出的问题。
作为一种改进地实施方式,所述环形件5的横截面为弧形、锥形或梯形,优选为弧形,如图1所示,环形件5的侧壁上设置有多个湍流孔8。湍流孔8用于磁珠混合液从环形件5的内腔向环形件5的外腔流动,进而对磁珠混合液充分混匀。作为优选,所述湍流孔8绕环形件5一周且靠近环形件5的下部设置。通过设置湍流孔8,便于搅拌部2内的磁珠混合液无法容纳时,从湍流孔8流出,进而加速磁珠溶液和保护液混匀的速度。
在本发明的一些实施例中,所述吸力管3上还套设有混匀机构9,如图1所示,所述混匀机构9为小口在上、大口在下的棱状体或圆锥体,所述搅拌部2被包裹在混匀机构9内并相互不接触,混匀机构9包括多根搅拌棒11,所述多根搅拌棒11间隙排列形成混匀机构9的侧面,搅拌棒11的上端与上固定环10固定连接,并通过上固定环10与吸力管3固定连接,搅拌棒11的下端与下固定环12固定连接,所述下固定环12与所述搅拌部2的下端面相对。
混匀机构用于对壳体1内的磁珠混合液进行初步混匀,在搅拌部2自转的情况下,会对壳体1内腔的磁珠混合液进行搅拌并且混匀,由于磁珠的沉降原因,所以设置混匀机构9,方便对搅拌部2外腔壳体1内腔的磁珠混合液进行搅拌,加速磁珠溶液与保护液的混匀速度,进而避免磁珠沉降,使得磁珠在磁珠混合液中分布均匀,提高磁珠混合液的合格率。
进一步地,所述搅拌棒11均匀排列形成混匀机构9镂空的侧面。混匀机构镂空部分用于磁珠混合液流动,而多个搅拌棒11用于对壳体1内腔的磁珠混合液进行搅拌,进而提高磁珠溶液与保护液的混匀速度。
在上述中,上固定环10用于使搅拌棒11与吸力管3固定连接,便于吸力管3转动时,能够带动搅拌棒11转动。下固定环12用于固定连接搅拌棒11的自由端,由于搅拌棒11的作用是对壳体1内腔的磁珠溶液和保护液进行搅拌混匀,而搅拌棒11的上端与上固定环10固定连接,其下端如果设置成自由端的话,在长期使用后,搅拌棒11容易由于着力点小产生折断的情况发生,一旦发生折断就会导致整个装置无法运转,因此通过设置下固定环12,对多个搅拌棒11进行固定,避免搅拌棒11出现折断的现象。
进一步地,在上述设置混匀机构9的实施例中,环形件5的高度是高于下固定环12的高度,且环形件5与下固定环12均位于壳体1内腔的下部,由于搅拌棒11的长度较长,而环形件5所处的位置较低,因此,将下固定环12设置在偏下的位置,环形件5设置在偏上的位置,使得混匀机构9从对壳体1内的磁珠溶液和保护液进行初步的搅拌,而搅拌部2对进入其内腔的磁珠混合液进行二次搅拌混匀,进而保证磁珠溶液和保护液充分的混匀,并分装至深孔板或试剂瓶内,以提高磁珠混合液中磁珠固含量的一致性。
本发明还包括一种用于核酸物质提取的磁珠混合液分装方法,包括以下步骤:
S1、配制磁珠溶液,将磁珠溶液与保护液进行混合得到磁珠混合液;
S2、将磁珠混合液通过上述的分装装置进行混匀后,分装至深孔板或试剂瓶内,完成分装。
在上述的分装方法中,磁珠混合液的磁珠含量不是影响最终结果的主要影响因子,因此磁珠含量适量即可,可直接采用常规的添加量。所述保护液的pH值为6.0-8.0,保护液与磁珠混合液的体积比为1:30,保护液包括以下组分:适量的缓冲液,组分A的含量为0.1-5mol,组分B的含量为5%-50%(V/V),组分C的含量为1%-10%(V/V),%表示体积分数;所述组分A为NaCl、KCl或LiCl中的一种或多种,所述组分B为AEO、TritonX-100或PEG6000中的一种或多种,所述组分C为无水乙醇、异丙醇或丙三醇中的一种或多种。
在上述保护液的配方中,所述保护液是通过缓冲液来调节其pH值至6.0-8.0,因此,对缓冲液的添加量并无特殊要求,适量即可。进一步,所述缓冲液为Tris缓冲液或者TE缓冲液。
在上述分装方法中,通过引入本发明的保护液,能够保证磁珠混合液中的磁珠在低温度条件下,其表面基团不会被破坏,吸附功能不丧失,其配合分装装置的混匀效果,分装得到的磁珠混合液即使在低温条件下也能保证磁珠微球分布均匀,提取试剂的性能得到了充分保障。通过使用本发明的分装装置和分装方法,既可以实现磁珠混合液的自动混匀和自动分装,在低温条件下也能够保证磁珠微球分布均匀,省时省力,操作标准,成本低廉,实用性强,尤其适用于工业化生产。
进一步,为了更好地实施本发明的保护液,以下列举几个具体的保护液配方:
实施例1
保护液的配方及制备方法为:
取0.1mol的NaCl、5%(V/V)的AEO、1%(V/V)无水乙醇,在室温条件下搅拌至充分溶解,然后用Tris缓冲液调节pH值为6即可。
实施例2
保护液的配方及制备方法为:
取2mol的KCl、15%(V/V)的TritonX-100、5%(V/V)异丙醇,在室温条件下搅拌至充分溶解,然后用Tris缓冲液调节pH值为6即可。
实施例3
保护液的配方及制备方法为:
取5mol的LiCl、50%(V/V)的PEG6000、10%(V/V)丙三醇,在室温条件下搅拌至充分溶解,然后用Tris缓冲液调节pH值为6即可。
为了进一步证明本发明的保护液能够改善磁珠混合液的低温性能,发明人做了对比试验,试验数据如表1所示:
实验设计:设置空白组、对照组1、对照组2和试验组,每组分别设置8个样本,编号相同的样本磁珠浓度相同,其中对照组2和试验组中加入等量的实施例2的保护液;
空白组:测试室温条件下磁珠溶液的测试结果;
对照组1:-20℃条件下磁珠溶液的测试结果;
对照组2:室温条件下加入有保护液的磁珠混合液中磁珠的测试结果;
试验组:-20℃条件下加入有保护液的磁珠混合液中磁珠的测试结果;
检测方法:实时荧光PCR方法
表1不同条件的磁珠提取核酸效率的测试结果(Ct值)
样本序号 | 空白组 | 对照组1 | 对照组2 | 试验组 |
1 | 30.97 | 38.13 | 30.97 | 30.94 |
2 | 23.51 | 30.50 | 23.59 | 23.32 |
3 | 32.36 | 39.03 | 32.02 | 32.02 |
4 | 17.58 | 23.51 | 17.79 | 17.65 |
5 | 22.26 | 28.29 | 22.26 | 22.40 |
6 | 18.74 | 24.91 | 18.51 | 18.45 |
7 | 27.55 | 33.86 | 27.37 | 27.57 |
8 | 26.68 | 33.21 | 26.72 | 26.59 |
在表1中,通过将空白组与对照组1向对比可以得到,在-20℃条件下的磁珠溶液的Ct值高于室温条件下的Ct值,由此说明,-20℃条件下的磁珠溶液提取吸附核酸性能下降,也即是说,-20℃条件下磁珠的吸附性能下降;通过将空白组与对照组2对比可以得到,在室温条件下,加入有本发明的保护液的磁珠混合液,其磁珠的Ct值并无明显变化,由此说明本发明的保护液在室温条件下不会影响磁珠的吸附性能;通过将对照组2和试验组进行对比得到,由室温条件变为-20℃条件后,磁珠的Ct值无明显变化,由此说明,含有本发明保护液的磁珠混合液能够保证磁珠在低温条件下的吸附性能。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种用于核酸物质提取的磁珠混合液分装装置,包括顶部开口的壳体(1),其特征在于,所述壳体(1)内设置有搅拌装置,所述搅拌装置包括用于搅拌的搅拌部(2),所述搅拌部(2)设置在壳体(1)内腔的中下部位置,搅拌部(2)的上端与具有管状结构的吸力管(3)的下端固定连接,所述吸力管(3)的上端通过输送管(4)与负压装置(14)接通,吸力管(3)上设置有用于提供旋转力动力的旋转装置(13),所述负压装置(14)和旋转装置(13)设置在壳体(1)的外部,所述旋转装置(13)通过吸力管(3)带动搅拌部(2)转动,所述吸力管(3)用于排出壳体(1)内的磁珠混合液。
2.如权利要求1所述的用于核酸物质提取的磁珠混合液分装装置,其特征在于,所述搅拌部(2)为上下端均开口的环形件(5),搅拌部(2)的下端开口构成混合入口(7)。
3.如权利要求2所述的用于核酸物质提取的磁珠混合液分装装置,其特征在于,所述吸力管(3)通过混合出口(6)与搅拌部(2)的上端固定连接,所述混合出口(6)的横截面为上部开口小、下部开口大的锥形或梯形结构。
4.如权利要求3所述的用于核酸物质提取的磁珠混合液分装装置,其特征在于,所述环形件(5)的横截面为弧形、锥形或梯形,环形件(5)的侧壁上设置有多个湍流孔(8)。
5.如权利要求4所述的用于核酸物质提取的磁珠混合液分装装置,其特征在于,所述湍流孔(8)绕环形件(5)一周且靠近环形件(5)的下部设置。
6.如权利要求1或2或3或4或5所述的用于核酸物质提取的磁珠混合液分装装置,其特征在于,所述吸力管(3)上还套设有混匀机构(9),所述混匀机构(9)为小口在上、大口在下的棱状体或圆锥体,所述搅拌部(2)被包裹在混匀机构(9)内并相互不接触,混匀机构(9)包括多根搅拌棒(11),所述多根搅拌棒(11)间隙排列形成混匀机构(9)的侧面,搅拌棒(11)的上端与上固定环(10)固定连接,并通过上固定环(10)与吸力管(3)固定连接,搅拌棒(11)的下端与下固定环(12)固定连接,所述下固定环(12)与所述搅拌部(2)的下端面相对。
7.如权利要求6所述的用于核酸物质提取的磁珠混合液分装装置,其特征在于,所述搅拌棒(11)均匀排列形成混匀机构(9)镂空的侧面。
8.一种用于核酸物质提取的磁珠混合液分装方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1、配制磁珠溶液,将磁珠溶液与保护液进行混合得到磁珠混合液;
S2、将磁珠混合液通过上述权利要求1-7所述的分装装置进行混匀后,分装至深孔板或试剂瓶内,完成分装;
其中,所述保护液的pH值为6.0-8.0,保护液包括以下组分:适量的缓冲液,组分A的含量为0.1-5mol,组分B的含量为5%-50%,组分C的含量为1%-10%,%表示体积分数;所述组分A为NaCl、KCl或LiCl中的一种或多种,所述组分B为AEO、TritonX-100或PEG6000中的一种或多种,所述组分C为无水乙醇、异丙醇或丙三醇中的一种或多种。
9.如权利要求8所述的用于核酸物质提取的磁珠混合液分装方法,其特征在于,所述缓冲液为Tris缓冲液或者TE缓冲液。
10.一种用于核酸物质提取的磁珠混合液的保护液,其特征在于,所述保护液包括以下组分:组分A的含量为0.1-5mol,组分B的含量为5%-50%,组分C的含量为1%-10%,%表示体积分数;所述组分A为NaCl、KCl或LiCl中的一种或多种,所述组分B为AEO、TritonX-100或PEG6000中的一种或多种,所述组分C为无水乙醇、异丙醇或丙三醇中的一种或多种,所述缓冲液为Tris缓冲液或者TE缓冲液,所述保护液的pH值为6.0-8.0。
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