CN112941042B - 苹果柱型候选基因Co38及其编码蛋白与应用 - Google Patents

苹果柱型候选基因Co38及其编码蛋白与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及基因工程领域，提供了苹果柱型候选基因Co38及其编码蛋白与应用。蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，基因的核苷酸编码区序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示。本发明鉴定出一个新的柱型相关基因，为揭示柱型苹果表型机制提供了证据。此基因过表达模式植物，明显促进腋芽萌发生长，不改变其株高和花期等其他性状。本发明可应用于苹果或其它木本植物的遗传改良，对于培育理想树型具有重要理论价值。同时可减少果园管理成本，增加果园生产效率，提高果农收入。

Description

苹果柱型候选基因Co38及其编码蛋白与应用
技术领域
本发明涉及基因工程领域，特别涉及苹果柱型候选基因Co38及其编码蛋白与应用。
背景技术
苹果(Malus domestica Borkh.)，是蔷薇科苹果亚科苹果属植物，其树为落叶乔木。苹果的果实富含矿物质和维生素，是我国三大水果之一。随着人们生活水平的提高，对于果实的需求量和品质更加重视，因此苹果树的种植面积逐渐饱和的趋势下，提高单产量以及质量是当下主要待解决的问题。研究显示苹果树的树型不仅对产量和品质有很大的影响，而且对苹果产业的投入也有很大影响。因此，理想的苹果树型将十分有利于苹果产业的发展。鉴于此，深入研究苹果柱型控制的机理，对培育理想苹果树型具有十分重要的意义。
苹果树型不仅影响果园管理投入，而且对苹果产量也有很大的影响。合理密植，普及机械化作业将是果树产业的大势所趋。苹果柱型品种‘威赛克’(McIntoshWijcik)源自于非柱型苹果‘旭’(McIntosh)的芽变(Lapins,1974)，1961年在加拿大British Columbia省的一个苹果园中由Anthony Wijcik发现，并以发现者的名字命名。自此将‘威赛克’及其杂交后代成为柱型苹果。柱型苹果的生长特点表现为“枝条粗壮、节间短、萌芽率高，主干上短枝多、长侧枝少、分枝角度小”。杂交群体的遗传分析显示符合孟德尔质量性状遗传规律，是由显性基因Co控制的(Dai et al.,2003)。苹果柱型基因Co定位于苹果10号染色体上的18.51～19.1Mb的区域内(Moriya et al.,2012,Bai et al.,2012；Baldi et al.,2013；Otto et al.,2014,Morimoto et al.,2015；Otto et al.,2012；Wolters et al.,2013)。
发明人在课题组通过SRA/EST数据库检索Co区域得到64个预测基因；以柱型苹果‘威赛克’和非柱型苹果‘旭’的茎尖为试材，利用实时荧光定量PCR分析获得29个差异基因；15个在柱型苹果茎尖中差异表达显著(仇占南等，2017)。克隆15个差异表达显著基因编码区，发现了编码区序列的一致性。其中，MdCo26通过过表达模式植物和苹果鉴定与柱型苹果节间缩短相关，其他表型特征机制并未报道。
MdCo38基因差异表达显著，此基因含有ACC-like和2OG-FeII_Oxy两个结构域，与乙烯合成基因ACC氧化酶(ACO)高度同源。ACO是乙烯生物合成过程中的关键酶。在拟南芥、桃、苹果、绿豆以及各类瓜类等物种中，ACO与根发育、花发育、果实的成熟以及植株衰老有关(Ayub et al.1996；Chen et al.2016；Park et al.2018和Wang et al2017)；此外，ACO应答各种逆境比如涝害、干旱、重力胁迫以及伤害等(Zhang et al.2016；Park etal.2019；Singh et al.2018)。至今未有报道此基因及其同源基因促进腋芽萌发生长。
苹果基因异源表达模式植物研究其功能已有很多报道。比如将转录因子MdDREB76过表达到烟草中来验证其对于干旱和盐害的应答(Sharma et al.2019)；将MdMYB1和MdbHLH3过表达烟草中验证其与花青素合成相关(Xie et al.2017)；将MdSUP11过表达烟草验证其与花发育相关(Xu et al.2018)。推及将苹果Co区域候选基因过表达模式植物烟草的可行性。
苹果的基因组在2010年已经公布，但很多基因的功能还不清楚，利用过表达技术研究基因功能已成为一种有效快捷的方法。通过超量表达基因到烟草中，已经使转基因植物获得了一定的表型，具有一定的可行性，耗时短，操作方便。因此，寻找新的功能基因并阐明其功能，具有重要的理论及实践意义。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一个苹果柱型候选基因Co38及其编码蛋白与应用。本发明对于培育理想树型具有重要理论价值。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种苹果柱型候选基因Co38编码蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
本发明还提供了一种苹果柱型候选基因Co38，其核苷酸编码区序列如SEQ ID NO:2所示。该基因获自柱型苹果‘McintoshWijcik’。
优选地，当基因用于构建重组载体、工程菌、转基因植株系或表达盒时，可根据本领域常规技术在其末端添加酶切位点。
在本发明的一个具体实施方式中，本发明提供一个5’末端的第1-6位核苷酸是NcoI酶切位点，第1090-1095位核苷酸是BsteII的酶切位点的核苷酸序列，该核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
本发明还提供了用于SEQ ID NO:2所示基因的引物对，引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5所示。
本发明还提供了含有如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示基因的表达盒。
本发明还提供了含有如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示基因的重组表达载体。
本发明还提供了含有如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示基因的重组菌。
本发明还提供了如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示基因在培育具有多分枝性状的转基因植物中的应用。
在本发明中，多分枝包括促进腋芽萌发生长。
本发明还提供了一种培育具有多分枝性状的转基因植物的方法，在出发植物中过表达如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示基因。
在本发明中，培育具有多分枝性状的转基因植物的方法包括如下步骤：
在植物表达载体中插入如SEQ ID NO:2所示序列，得到过表达载体；
将过表达载体导入出发植物。
在苹果上，基因的直接功能验证技术是成熟的，一般采用农杆菌介导的‘Gala’叶盘法过表达苹果自身基因，因其木本植物特性，周期较模式植物要久，转化效率比模式植物低，但按照试验流程是可以拿到苹果后期表型的。
在本发明中，出发植物为模式植物或木本植物。在本发明提供的具体实施例中，出发植物为本氏烟草。本氏烟草为模式植物。但出发植物并非限定于此，可以为苹果、梨、桃等木本植物。
在本发明提供的具体实施例中，过表达载体为pCAMBIA1305。
本发明还提供了SEQ ID NO:1所示编码蛋白在调控植物多分枝性状中的应用。
本发明提供了苹果柱型候选基因Co38及其编码蛋白与应用。蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，基因的核苷酸编码区序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示。本发明具有如下技术效果：
本发明的实验证明，本发明从柱型苹果‘Mcintosh Wijcik’中筛选到一个柱型相关的Co38基因，通过农杆菌转化法将Co38基因导入本氏烟草，经过潮霉素初筛、分子检测，筛选出明显促进腋芽萌发生长的转基因株系。本发明鉴定出一个新的柱型相关基因，为揭示柱型苹果表型机制提供了证据。此基因过表达后在模式植物中，明显促进腋芽萌发生长，不改变其株高和花期等其他性状。本发明可应用于基因工程和苹果或其它木本植物的遗传改良，对于培育理想树型具有重要理论价值。同时可减少果园管理成本，增加果园生产效率，提高果农收入。
附图说明
图1为29个预测基因在柱型与非柱型苹果茎尖中的表达分析；注：Xu代表‘旭’茎尖组织，WSK代表‘威赛克’茎尖组织；同一图中相同字母表示差异不显著，不同字母表示差异显著(P<0.05)；
图2为本发明所述载体pCAMBIA1305-Co38构建流程图；
图3为T1代转基因烟草的PCR检测结果；其中，M：2kb DNA ladder，由下到上分别为100bp，250bp，500bp，750bp，1000bp，2000bp；1：2kb DNA ladder；2：阳性对照，pCAMBIA1305-Co38载体；3-22：转Co38植株；23：pCAMBIA1305空载体；24：阴性对照，野生型烟草；25：阴性对照，H2O；
图4为T1代转基因烟草生长30天图片；其中c～e转基因烟草，b转空载体对照，a野生型对照；标尺＝1cm；
图5为T1代转基因烟草生长90天节间长统计图；其中，CK-代表野生未转化株系；CK+代表1305空载转化株系；TS1-3代表转化Co38后分枝株系。
具体实施方式
本发明公开了柱型候选基因Co38及编码蛋白与应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
以下实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
以下实施例中的定量实验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
柱型苹果‘McintoshWijcik’栽种于中国农业大学上庄实验站，本氏烟草在中国农业大学玻璃温室栽种。
本氏烟草为实验室留种。
农杆菌株EHA105，本实验室保存。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
本研究以中国农业大学上庄试验站生长的非柱型苹果‘旭’及柱型苹果‘威赛克’一年生新梢的茎尖、展开幼叶和芽为试材，取下后迅速置于液氮中冷冻，于-80℃保存。
在GDR中选择Malus×domesticav1.0对Co区域内预测基因和可选基因进行检索，选择在苹果10号染色体18.51～19.1Mb区域内的基因，剔除区域外的基因，记录预测基因的功能、大小及相应位置。
苹果SRA/EST数据库筛查：在NCBI中选择SRA BLAST，输入预测序列后选取苹果茎尖、叶片、根及果的转录组数据库进行电子检索，将有检索结果的预测基因作为初筛基因。将有检索结果的序列输入GDR的NCBI BLAST中选择blastn后，选择Apple Genome V1.0contigs进行筛查，确认为目标序列后保留该序列后设计特异引物用于cDNA片段扩增。
在NCBI中选择EST BLAST，输入预测序列后选择apple(taxid:3750)进行搜索，将有检索结果的序列输入GDR的NCBI BLAST中选择blastn后，选择Apple Genome V1.0contigs进行筛查，确认为目标序列后保留该序列后设计特异引物用于cDNA片段扩增。
根据GDR中的Malus×domesticav1.0选项对Co区域内(18.51～19.1Mb)预测基因和可选基因进行检索，选择在苹果10号染色体18.51～19.1Mb区域内的基因，剔除区域外的基因，共获得64个预测基因(编号1～64)。对初步获取的64个预测基因进行转录水平上的分析。通过苹果SRA(茎尖、叶片、根及果)和EST(taxid:3750)数据库进行检索，检索结果序列与基因组进行比对分析，共检索到32个基因，预测基因功能多样，在苹果不同的组织和器官中有表达。其中，56、60号基因仅在根中表达；1号和20号基因在果、叶和根中表达；4号、43号、62号基因在果、根和茎尖中表达；33号、41号、51号基因在果、叶和茎尖中表达；26号基因在根和茎尖中表达；31号基因在叶和茎尖中表达；40号基因在叶和根中表达；在果、叶、根和茎尖中都有表达的有6号、9号、10号、11号、12号、13号、14号、27号、28号、30号、32号、36号、37号、38号、44号、48号、52号、54号、64号基因(表1)。将检索到的32个预测基因作为初筛基因进行后续研究。
表1 苹果Co区域(18.51～19.1Mb)预测基因的初步筛查
Figure BDA0002969416760000061
Figure BDA0002969416760000071
Figure BDA0002969416760000081
Figure BDA0002969416760000091
在现有扩增到cDNA序列的29个预测基因中，利用克隆到的基因序列设计qRT-PCR特异引物(表2)，分析这些基因在柱型苹果‘威赛克’和非柱型苹果‘旭’的茎尖组织中的表达差异。结果表明，29个复筛基因在柱型苹果‘威赛克’和非柱型苹果‘旭’的茎尖组织中均有表达。在柱型苹果‘威赛克’茎尖组织中，10个预测基因表达上调，19个基因表达下调(图1)。
表2 29个预测基因qRT-PCR引物序列
Figure BDA0002969416760000092
Figure BDA0002969416760000101
在表达上调的基因中，6个基因上调显著，包括26号(RNA指导的DNA聚合酶活性)、41号(PPR家族)、33号(参与碳水化合物合成)、38号(含有2OG-Fe(Ⅱ)加氧酶结构域)、28号(自噬蛋白9家族)和32号(功能未知)基因。上调倍数依次为62倍、34.8倍、4.7倍、14倍、2.1倍和2倍。
在表达下调的基因中，9个基因下调显著，包括30号(功能未知)、9号(磷酸盐跨膜转运蛋白活性)、37号(转移酶活性)、6号(功能未知)、44号(含有2OG-Fe(Ⅱ)加氧酶结构域)、10号(肌动蛋白结合功能)、27号(功能未知)、11号(DUF647蛋白家族)和4号(MYB转录因子家族)基因。下调倍数依次为18倍、4.1倍、2.9倍、2.8倍、2.3倍、2.1倍、1.8倍、1.6倍和1.6倍。
通过对烟草转基因分析后，筛选出三个有表型的基因Co26、Co38、Co41，其功能分别为植株缩短节间长度、促进分枝、促进叶片生长，Co26已有报道，而Co38、Co41还未见报道。
实施例2：Co38基因的克隆
1、设计特异性引物对(F和R)，由生工生物工程公司合成：
Co38F:5’-ATGGAAGACGAATCCTCGTATTACG-3’(序列4)；
Co38R:5’-TTAGGCTAATTTAAAATGAGAAAGGGCA-3’(序列5)。
2、本实验室改良的CTAB的方法提取苹果‘Wijcik’茎尖的RNA，反转录为cDNA。
3、以步骤2的cDNA为模板，用步骤1的特异性引物对F和R进行PCR扩增，回收PCR扩增产物。
4、将步骤3的PCR扩增产物测序。
测序结果为序列表中的序列3，编码区为序列3的自5’末端的第7-1089位核苷酸(序列2)，序列3的5’末端的第1-6位核苷酸是NcoI酶切位点，第1090-1095位核苷酸是BsteII的酶切位点的核苷酸序列。将该基因命名为Co38基因，该基因编码的蛋白命名为2OG-Fe(II)双加氧酶，该蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列1所示，序列1由360个氨基酸残基组成。
序列1
MEDESSYYDRTKEVKEFDETKAGVKGLVDSGITKVPKFLIHPPHSLSNSET
TNVDFKVPVIDFYGFDQDFRRAQIVKEICEASETWGFFQMVNHGVPERVIE
NmLEGIRGFHEQPKEVKMEWYSRDSKHRVRYYCNGDLLVSKTANWRDTI
GFDFQDGPLDPETFPFVCREAVQEYIDHLKNLREmLSGLLSEALGLSTDYL
ENIECMETENLVCHYYPSCPEPELTLGTTKHSDPSSLTVLLQDNLGGLQVL
HQGHWVDVPPTPGALVANVGDLMQLITNDKFRSVEHRVLARRVGPRISA
ACFFYPSATQRFKPYGPIKEFLSDNLPIYRETHFGEYLAYYRSKGLDGNSAL
SHFKLA
序列2
Figure BDA0002969416760000111
NcoI：5’CCATGG 3’
BsteII：5’GGTACC 3’
序列3
Figure BDA0002969416760000112
Figure BDA0002969416760000121
5、将上述PCR产物插入pMD18T-simple载体(购自TaKaRa生物工程公司)，得到载体pMD18T-simple-Co38，测序，结果为载体pMD18T-simple-Co38为将序列表中的序列2插入pMD18T-simple载体得到的克隆载体。
实施例3：转基因烟草的获得和功能研究
一、转基因烟草获得
1、重组载体(pCAMBIA1305-Co38)的构建
构建过程如图2所示。
(1)用限制性内切酶NcoI和BsteII双酶切载体pMD18T-simple-Co38，回收小片段。
(2)用限制性内切酶NcoI和BsteII双酶切载体pCAMBIA1305(实验室保存)，回收载体骨架。
(3)将步骤(1)的小片段与步骤(2)的载体骨架用T4连接酶连接，得到连接产物，将该连接产物转化大肠杆菌DH5α，得到转化子，提取转化子的质粒，送去测序，结果为该质粒为将序列表中的序列2插入pCAMBIA1305的NcoI和BsteII酶切位点之间得到的重组载体，将该质粒命名为pCAMBIA1305-Co38。
2、转基因阳性苗的获得
(1)农杆菌感受态细胞的制备
挑取农杆菌EHA105单菌落接种于100mL YEB液体培养基中，220rpm、28℃振荡培养至OD600＝0.5；转入无菌离心管，5000rpm离心5min，去上清，加入10mL预冷的0.15M的CaCl2水溶液，轻轻悬浮细胞，冰上放置20min；4℃、5000rpm离心5min，去上清，加入4mL预冷的含10％甘油(体积百分含量)和0.15M CaCl2的水溶液，轻轻悬浮；得到农杆菌悬浮液(EHA105感受态细胞)，分装于无菌eppendorf管中，每管200μL，于液氮中速冻1min，冻存于-70℃。
(2)pCAMBIA1305-Co38转化农杆菌EHA105
取1μg上述得到的pCAMBIA1305-Co38加入200μL EHA105感受态细胞中，混匀，静止5min；液氮中速冻1min，37℃水浴5min，加入1mL YEB液体培养基，28℃、150rpm振荡培养4h；5000rpm离心3min，弃上清，加入0.1mL YEB液体培养基，重新悬浮细胞；涂布于含50μg/mL卡那霉素和50μg/mL利福平的YEB固体平板上，28℃培养约48h，得到转化子。将转化子进行菌液PCR鉴定，鉴定所用引物如下：
Co38F:5’-ATGGAAGACGAATCCTCGTATTACG-3’；
Co38R:5’-TTAGGCTAATTTAAAATGAGAAAGGGCA-3’。
结果显示得到约1083bp的片段，证明pCAMBIA1305-Co38已经成功转入EHA105中。再将PCR鉴定阳性的转化子提取质粒，送去测序，结果为该质粒为pCAMBIA1305-Co38，进一步证明，pCAMBIA1305-Co38已经成功转入EHA105中，将含有pCAMBIA1305-Co38的转化子命名为重组农杆菌EHA105/pCAMBIA1305-Co38。
(3)转化烟草
①将重组农杆菌EHA105/pCAMBIA1305-Co38接种于10mL含50μg/mL卡那霉素和50μg/mL利福平的YEB液体培养基中，28℃、200rpm振荡培养过夜；
②转化前一天以1:100比例(体积比)接种于100mL含相同抗生素的YEB培养基中，扩大培养至OD600为0.7-0.8，7000rpm、5min离心集菌，重悬于渗入缓冲液(由蔗糖、MS粉和乙酰丁香酮；蔗糖的质量百分含量为3％蔗糖，MS粉4.404g/L和乙酰丁香酮100μmol/L)，使OD600为0.5到0.6，即为重组农杆EHA105/pCAMBIA1305-Co38菌液；
③采用叶盘法将农杆菌转化烟草叶片：
1)烟草的遗传转化需要在超净中进行，用镊子夹取较幼嫩的烟草叶片，剪去叶边缘、烟草叶片主叶脉，将叶片剪成边长约1cm左右的小块，备用侵染。
2)在共培养基上提前铺一层无菌滤纸，将剪好的烟草叶盘用无菌镊子夹取，放入盛有适量农杆菌侵染液的平皿或锥形瓶中，振荡侵染10分钟左右，无菌滤纸吸干残液，转入含有AS的共培养基上黑暗3天。
3)暗培养3天后，将烟草叶片转入含有Hyg的培养基上，进行黑暗筛选培养三周左右，后转移到光下筛选培养。
4)每隔15天左右更换一次筛选培养基，直至外植体伤口处的愈伤组织长出抗性芽(2～3cm)，切下并插入生根培养基，生根培养。
5)烟草转化所用培养基如下：
共培养基：MS基本培养基+2.5mg/L 6-BA+0.2mg/L IAA+50μM AS
筛选培养基：MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L IAA+20mg/LHyg+250mg/L Cef
生根培养基：MS基本培养基+0.1mg/L IAA+20mg/LHyg+250mg/L Cef
(4)转基因阳性抗性芽的分子鉴定
①DNA水平检测
将生根的抗性植株采集叶片，提取其DNA和RNA，以质粒pCAMBIA1305-Co38为阳性对照，转空载和野生型的烟草的DNA为阴性对照，用如下引物进行PCR扩增：
Co38F:5’-ATGGAAGACGAATCCTCGTATTACG-3’；
Co38R:5’-TTAGGCTAATTTAAAATGAGAAAGGGCA-3’。
PCR体系(25.0μL)：
Figure BDA0002969416760000141
Figure BDA0002969416760000151
PCR程序为：第一轮：94℃变性5min；第二轮：94℃变性50sec，52℃复性50sec，72℃延伸70s，30个循环；第三轮：72℃延伸10min。
反应结束后，1.0％琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，结果见图3所示的PCR扩增产物电泳图，M：2kb DNA ladder，由下到上分别为100bp，250bp，500bp，750bp，1000bp，2000bp；1：2kb DNA ladder；2：阳性对照，pCAMBIA1305-Co38载体；3-22：转Co38植株；23：pCAMBIA1305空载体；24：阴性对照，野生型烟草；25：阴性对照，H2O；可以看出，能扩增出Co38基因特异条带(约1083bp,如图3所示)的植株为PCR鉴定阳性转化植株。
将转基因植株根据表型表现的明显程度分为三个株系，每个株系12株(如图4所示)。
统计对照与转基因株系分枝数量，用SPSS软件做统计分析，结果显示明显差异(如图5所示)。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 中国农业大学
<120> 苹果柱型候选基因Co38及其编码蛋白与应用
<130> MP21001082
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 360
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Met Glu Asp Glu Ser Ser Tyr Tyr Asp Arg Thr Lys Glu Val Lys Glu
1 5 10 15
Phe Asp Glu Thr Lys Ala Gly Val Lys Gly Leu Val Asp Ser Gly Ile
20 25 30
Thr Lys Val Pro Lys Phe Leu Ile His Pro Pro His Ser Leu Ser Asn
35 40 45
Ser Glu Thr Thr Asn Val Asp Phe Lys Val Pro Val Ile Asp Phe Tyr
50 55 60
Gly Phe Asp Gln Asp Phe Arg Arg Ala Gln Ile Val Lys Glu Ile Cys
65 70 75 80
Glu Ala Ser Glu Thr Trp Gly Phe Phe Gln Met Val Asn His Gly Val
85 90 95
Pro Glu Arg Val Ile Glu Asn Met Leu Glu Gly Ile Arg Gly Phe His
100 105 110
Glu Gln Pro Lys Glu Val Lys Met Glu Trp Tyr Ser Arg Asp Ser Lys
115 120 125
His Arg Val Arg Tyr Tyr Cys Asn Gly Asp Leu Leu Val Ser Lys Thr
130 135 140
Ala Asn Trp Arg Asp Thr Ile Gly Phe Asp Phe Gln Asp Gly Pro Leu
145 150 155 160
Asp Pro Glu Thr Phe Pro Phe Val Cys Arg Glu Ala Val Gln Glu Tyr
165 170 175
Ile Asp His Leu Lys Asn Leu Arg Glu Met Leu Ser Gly Leu Leu Ser
180 185 190
Glu Ala Leu Gly Leu Ser Thr Asp Tyr Leu Glu Asn Ile Glu Cys Met
195 200 205
Glu Thr Glu Asn Leu Val Cys His Tyr Tyr Pro Ser Cys Pro Glu Pro
210 215 220
Glu Leu Thr Leu Gly Thr Thr Lys His Ser Asp Pro Ser Ser Leu Thr
225 230 235 240
Val Leu Leu Gln Asp Asn Leu Gly Gly Leu Gln Val Leu His Gln Gly
245 250 255
His Trp Val Asp Val Pro Pro Thr Pro Gly Ala Leu Val Ala Asn Val
260 265 270
Gly Asp Leu Met Gln Leu Ile Thr Asn Asp Lys Phe Arg Ser Val Glu
275 280 285
His Arg Val Leu Ala Arg Arg Val Gly Pro Arg Ile Ser Ala Ala Cys
290 295 300
Phe Phe Tyr Pro Ser Ala Thr Gln Arg Phe Lys Pro Tyr Gly Pro Ile
305 310 315 320
Lys Glu Phe Leu Ser Asp Asn Leu Pro Ile Tyr Arg Glu Thr His Phe
325 330 335
Gly Glu Tyr Leu Ala Tyr Tyr Arg Ser Lys Gly Leu Asp Gly Asn Ser
340 345 350
Ala Leu Ser His Phe Lys Leu Ala
355 360
<210> 2
<211> 1083
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
atggaagacg aatcctcgta ttacgacaga accaaggaag tgaaagagtt tgatgaaacg 60
aaagccggag ttaagggcct tgtggactca gggatcacaa aagtccccaa gttcctcatt 120
catccaccac atagcctttc aaattcagaa acaacaaatg tagacttcaa ggttcctgtc 180
atagactttt acggctttga tcaagatttc cggcgagcgc agattgtgaa ggagatttgt 240
gaagcatccg aaacgtgggg gttctttcaa atggttaatc atggagttcc agagagagtg 300
attgagaata tgttggaagg gattcgaggg tttcatgagc agccgaagga ggtgaagatg 360
gagtggtatt ctcgtgactc gaaacataga gtgagatact actgcaatgg agatctgttg 420
gtgtcgaaaa cagcgaattg gagagacacg atagggtttg atttccagga cggtccattg 480
gaccccgaga catttccctt cgtttgcaga gaggcagtgc aggagtacat cgatcactta 540
aagaacttga gggagatgct atcaggtttg ttgtccgagg ccttggggct cagcactgac 600
tacctggaaa acatagagtg catggagact gaaaatctgg tgtgccatta ctacccgagc 660
tgtccagaac cggagctgac ccttggcaca accaagcatt cggatccttc ctctttaact 720
gtactcttgc aggataatct cggcggcctg caagtcctcc atcaaggtca ctgggttgat 780
gttcctccaa ctcctggagc tcttgtggcg aatgtcggtg atcttatgca acttatcacc 840
aatgacaagt tcagaagcgt cgagcataga gtactggcta gaagagtggg gcccaggatc 900
tcagctgcat gttttttcta tccaagtgct acgcaaagat tcaaacccta tggccccatc 960
aaggagtttc tatcggacaa cctaccgata tacagggaaa cacactttgg ggagtatctt 1020
gcttattaca gatcaaaggg gttagatggt aattctgccc tttctcattt taaattagcc 1080
taa 1083
<210> 3
<211> 1095
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ccatggatgg aagacgaatc ctcgtattac gacagaacca aggaagtgaa agagtttgat 60
gaaacgaaag ccggagttaa gggccttgtg gactcaggga tcacaaaagt ccccaagttc 120
ctcattcatc caccacatag cctttcaaat tcagaaacaa caaatgtaga cttcaaggtt 180
cctgtcatag acttttacgg ctttgatcaa gatttccggc gagcgcagat tgtgaaggag 240
atttgtgaag catccgaaac gtgggggttc tttcaaatgg ttaatcatgg agttccagag 300
agagtgattg agaatatgtt ggaagggatt cgagggtttc atgagcagcc gaaggaggtg 360
aagatggagt ggtattctcg tgactcgaaa catagagtga gatactactg caatggagat 420
ctgttggtgt cgaaaacagc gaattggaga gacacgatag ggtttgattt ccaggacggt 480
ccattggacc ccgagacatt tcccttcgtt tgcagagagg cagtgcagga gtacatcgat 540
cacttaaaga acttgaggga gatgctatca ggtttgttgt ccgaggcctt ggggctcagc 600
actgactacc tggaaaacat agagtgcatg gagactgaaa atctggtgtg ccattactac 660
ccgagctgtc cagaaccgga gctgaccctt ggcacaacca agcattcgga tccttcctct 720
ttaactgtac tcttgcagga taatctcggc ggcctgcaag tcctccatca aggtcactgg 780
gttgatgttc ctccaactcc tggagctctt gtggcgaatg tcggtgatct tatgcaactt 840
atcaccaatg acaagttcag aagcgtcgag catagagtac tggctagaag agtggggccc 900
aggatctcag ctgcatgttt tttctatcca agtgctacgc aaagattcaa accctatggc 960
cccatcaagg agtttctatc ggacaaccta ccgatataca gggaaacaca ctttggggag 1020
tatcttgctt attacagatc aaaggggtta gatggtaatt ctgccctttc tcattttaaa 1080
ttagcctaag gtacc 1095
<210> 4
<211> 25
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
atggaagacg aatcctcgta ttacg 25
<210> 5
<211> 28
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
ttaggctaat ttaaaatgag aaagggca 28

Claims (4)

1.苹果柱型候选基因Co38在培育具有多分枝性状的转基因植物中的应用；
所述基因Co38的核苷酸编码区序列如SEQ ID NO:2所示，或者如SEQ IDNO:3所示；
所述植物为苹果或烟草。
2.一种培育具有多分枝性状的转基因植物的方法，其特征在于，在出发植物中过表达苹果柱型候选基因Co38；
所述基因Co38的核苷酸编码区序列如SEQ ID NO:2所示，或者如SEQ IDNO:3所示；
所述出发植物为苹果或烟草。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：
在植物表达载体中插入如SEQ ID NO:2所示序列，得到过表达载体；
将过表达载体导入出发植物。
4.苹果柱型候选基因Co38编码蛋白在调控植物多分枝性状中的应用；
所述苹果柱型候选基因Co38编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；
所述植物为苹果或烟草。
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