CN112920196A

CN112920196A - 一类抗肥胖症的瑞香烷型二萜及其应用

Info

Publication number: CN112920196A
Application number: CN202110126049.1A
Authority: CN
Inventors: 尹胜; 黄志纾; 严雪龙; 饶勇; 唐贵华
Original assignee: Sun Yat Sen University
Current assignee: Sun Yat Sen University
Priority date: 2021-01-29
Filing date: 2021-01-29
Publication date: 2021-06-08
Anticipated expiration: 2041-01-29
Also published as: CN112920196B

Abstract

本发明公开了一类抗肥胖症的瑞香烷型二萜及其应用，瑞香烷型二萜化合物的结构通式如式Ⅰ或式II所示

Description

一类抗肥胖症的瑞香烷型二萜及其应用

技术领域

本发明涉及一类天然化合物的应用，特别涉及一类瑞香烷型二萜化合物在制备降脂或减肥药物/食品方面的应用。

背景技术

肥胖是指体内脂肪堆积异常增高而导致的一种病理状态，世界卫生组织(WHO)用身体BMI指数(体重除以身高的平方Kg/m²)大于或等于30来定义肥胖症。它是一系列慢性代谢性疾病(糖尿病、心血管类疾病、脂肪性肝炎以及某些癌症等)的重要诱因，严重威胁人类健康和降低生活质量。近年来全球超重与肥胖人数逐年剧增，2018年WHO最新健康报告显示，目前全球范围内超重人口达到20亿，其中肥胖人口已突破10亿，每年至少有280万人死于超重或肥胖并发症。在我国，过去十五年内肥胖人口数量增加了28倍，超过了1亿，成为全球肥胖人口最多的国家，给社会带来了巨大的负担和医疗投入。因此，肥胖症治疗药物的研发具有重大的社会和经济效应，已成为全球新药研发的热点。

天然产物由于结构与活性的多样性是新药创制的重要来源。目前用于治疗肥胖症及其相关代谢疾病的药物如肠道脂酶抑制剂奥利司他、利普司他汀，降脂药物斯达汀和非诺贝特酸，均来源于于天然产物。近年来随着现代研究手段的不断提高，天然药物减肥得到深入研究和广泛推广，其安全性更为肥胖者所接受。因此从中草药中寻找结构新颖、机制独特的抗肥胖症活性的天然小分子是开发新型减肥药物的一条捷径。

文献调研显示瑞香科植物中富含结构新颖的瑞香烷型二萜。它们是具有5/7/6三环碳骨架的复杂分子结构，含有多个手性中心，通常在C3、C4、C5、C9、C13、C14、C20等位置含有手性羟基；其中，诸多化合物在C9、C13、C14位置的手性羟基之间形成特定的原酸酯结构。前人研究显示，瑞香烷型二萜具有抗HIV、抗肿瘤、神经保护、杀虫等活性，但是在降脂或减肥方面的应用却未见报道，药效学及机制研究尚且匮乏。

发明内容

本发明的目的在于提供一类瑞香烷型二萜化合物在制备降脂或减肥药物/食品方面的应用。

本发明所采取的技术方案是：

一类瑞香烷型二萜化合物在制备降脂或减肥组合物中的应用，所述瑞香烷型二萜化合物的结构通式如式Ⅰ或式II所示：

式I和式II中：C-1和C-2之间为双键或不为双键；C-6和C-7之间为双键或不为双键；C-15和C-16之间为双键或不为双键；

R₁选自氢或羟基；

R₂选自氢、羟基、羰基、苯甲酰基或乙酰基；

R₃选自氢、羟基、乙酰基、异戊酰基、巴豆酰基或苯甲酰基；

R₄选自氢、羟基、乙酰基、异丁酰基、2-噻吩甲酰基、苯甲酰基或棕榈酰基；

R₅选自羟基、氟、氯、溴、碘，与R₆形成三元环氧或与R₆消除形成C6＝C7双键；

R₆选自氢、羟基、氟、氯、溴、碘，与R₅形成三元环氧或与R₅消除形成C6＝C7双键；

式I中：R₇选自甲基、苯基、壬烷基、(1E，3E)-壬二烯基、(1E，3Z)-壬二烯基或(1E，3E，5E)-壬三烯基；

式II中：R₇选自氢、苯甲酰基、乙酰基、癸酰基、(2E，4E)-癸二烯酰基、(2E，4Z)-癸二烯酰基或(2E，4E，6E)-癸三烯酰基；

R₈选自氢或羟基；

R₉选自氢、羟基、乙酰基、苯甲酰基、异丁酰基、丁酰基或丙酰基。

在一些实例中，所述瑞香烷型二萜化合物选自：

在一些实例中，所述瑞香烷型二萜化合物选自上述化合物1、2、6、6a、6b、6c、6e、6f、6g、6h、7、7a、7b、7c、7d、7e、7f、7g、7h、9、9a、9b、9c、9、11、11a、11b、11c、11g、11h、16、17、18、19中的至少一种。

在一些实例中，所述瑞香烷型二萜化合物还包括其药学上或食品学上可接受的衍生物。

在一些实例中，所述药学上或食品学上可接受的衍生物为其盐。

在一些实例中，所述组合物为口服剂。

在一些实例中，所述口服剂选自片剂、颗粒剂、固体饮料。

在一些实例中，所述组合物还包括药学上或食品学上可接受的辅料。

本发明的有益效果是：

本发明的一些实例，通过实验发现一类瑞香烷型二萜化合物具有降脂或减肥的新功能，特别是化合物6e在细胞水平和动物水平都表现出较强的降脂活性，有望开发为降脂、减肥药物或食品。

附图说明

图1是化合物6e对3T3-L1细胞甘油三酯含量影响；

图2是化合物6e对3T3-L1细胞分化成脂相关因子的影响；

图3是化合物6e动物水平降脂活性评价；

图4是化合物6e对小鼠脂肪形成相关基因的影响；

图5是化合物6e对细胞自噬活动的影响；

图6是调节自噬活动对3T3-L1细胞分化的影响。

具体实施方式

发明人从瑞香科植物芫花中分离得到35个天然瑞香烷型二萜，并对部分化合物进行结构修饰获得30个衍生物(参见CN202011524327.0)。将所得化合物进行降脂活性相关测试，发现了一系列化合物能显著降低小鼠3T3-L1脂肪细胞中甘油三酯含量，并且具有较低的细胞毒性。其中化合物6e在细胞水平和动物水平均有较强的降脂效果，有望开发成降脂或减肥药物/食品

下面结合实施例，进一步说明本发明的技术方案。除非特别说明，本发明采用的试剂、设备和方法为本技术领域常规市购的试剂、设备和常规使用的方法。

本发明中对瑞香科植物(以芫花为例)进行研究。

设备及试剂：NMR波谱采用Bruker AM-400/500 spectrometer记录，TMS内标。柱色谱硅胶(300～400目)：青岛海洋化工厂；GF₂₅₄硅胶薄层色谱预制板：青岛海洋化工厂；MCI填料(CHP20P，75～150μm)：日本Mitsubishi公司；葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)：美国GE公司；ODS填料(12nm，S-50μm)：日本YMC公司；其余溶剂和试剂：分析纯(AR)，天津市百世化工有限公司。

瑞香烷型二萜类化合物的制备

取芫花20kg，用95％乙醇提取，最终得到芫花乙醇提取物浸膏1500g，浸膏用1L水分散后，用乙酸乙酯萃取三次，得到乙酸乙酯萃取物300g。

取上述乙酸乙酯萃取物载于硅胶柱上，用石油醚：乙酸乙酯，二氯甲烷：甲醇进行初步分段，然后用ODS、MCI、凝胶Sephadex LH-20等进一步分离，最后用半制备高效液相色谱手段在(乙腈：水)或(甲醇：水)条件下进一步纯化，得到35个单体化合物。

将所得部分瑞香烷型二萜化合物进行结构修饰制备其衍生物。

分离产物的鉴定

实施例1：通过半制备HPLC纯化得到化合物15，其结构和数据如下：

15:[α]²⁵ _D+7.8(c 0.230,CH₂Cl₂)；UV(MeOH)λ_max(logε)232(4.21)nm；ECD(c 3.3×10^-4M,MeCN)λ_max(Δε)252(-2.44)nm；IR(KBr)ν_max 3445,2925,2856,1705,1632,1451,1401,1379,1301,1268,1108,1070,1026,938,913,863cm^-1；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ_H 7.55(1H,s,H-1),4.20(1H,s,H-5),3.61(1H,s,H-7),3.59(1H,d,J＝2.4Hz,H-8),3.76(1H,m,H-10),2.52(1H,q,J＝7.2Hz,H-11),5.18(1H,s,H-12),4.84(1H,d,J＝2.4Hz,H-14),4.99(2H,s,H-16),1.84(3H,s,H₃-17),1.37(3H,d,J＝7.2Hz,H₃-18),1.76(3H,br s,H₃-19),3.81(1H,d,J＝12.0Hz,H-20a),3.90(1H,d,J＝12.0Hz,H-20b),1′-Me:1.70(3H,s)；12-OBz:7.87(2H,m),7.44(2H,m),7.57(1H,m)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ_C 160.3(C-1),136.9(C-2),209.4(C-3),72.2(C-4),71.8(C-5),60.7(C-6),64.1(C-7),35.5(C-8),77.8(C-9),47.4(C-10),44.0(C-11),78.9(C-12),83.9(C-13),80.5(C-14),143.0(C-15),113.5(C-16),18.6(C-17),18.3(C-18),9.8(C-19),64.8(C-20),118.9(C-1′),1′-Me:21.5,12-OBz:165.4,129.7,129.4×2,128.6×2,133.3；HRESIMS m/z 541.2070[M+H]⁺(calcd forC₂₉H₃₃O₁₀ ⁺,541.2068).

实施例2：通过半制备HPLC分离纯化得到化合物28，其结构和数据如下：

28:[α]²⁵ _D-14.2(c 0.148,CH₂Cl₂)；UV(MeOH)λ_max(logε)232(4.50)nm；IR(KBr)ν_max3418,2925,2855,1704,1631,1452,1379,1315,1270,1178,1108,1070,1026,1010,940,915cm^-1；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ_H 7.63(1H,s,H-1),4.13(1H,s,H-5),3.36(1H,s,H-7),4.22(1H,d,J＝5.2Hz,H-8),3.51(1H,s,H-10),2.51(1H,m,H-11),5.22(1H,d,J＝2.2Hz,H-12),6.19(1H,d,J＝5.2Hz,H-14),5.04(1H,s,H-16a),5.34(1H,s,H-16b),1.88(3H,s,H₃-17),1.40(3H,d,J＝7.3Hz,H₃-18),1.75(3H,br s,H₃-19),3.34(1H,d,J＝12.3Hz,H-20a),4.00(1H,d,J＝12.3Hz,H-20b),12-OBz:7.97(2H,d,J＝7.4Hz),7.49(2H,m),7.60(1H,m)；14-OBz:8.07(2H,d,J＝7.0Hz),7.28(2H,m),7.60(1H,m)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ_C 159.6(C-1),137.0(C-2),208.6(C-3),72.4(C-4),69.5(C-5),63.1(C-6),62.8(C-7),40.3(C-8),75.8(C-9),51.0(C-10),42.9(C-11),79.9(C-12),75.2(C-13),73.7(C-14),144.5(C-15),114.9(C-16),19.6(C-17),16.2(C-18),9.9(C-19),65.5(C-20),12-OBz:165.8,129.4,129.6×2,128.6×2,133.3,14-OBz:166.6,129.8,130.0×2,128.4×2,133.4；HRESIMS m/z 619.2168[M-H]^-(calcd for C₃₄H₃₅O₁₁ ^-,619.2185).

衍生物的制备

以下实施例中所用的原料化合物为6，7，9及11，它们的结构如下：

实施例3：化合物6c的制备

取化合物6(20mg)溶于2mL二氯甲烷中，搅拌情况下加入100μL三乙胺(Et₃N)，然后加入苯甲酰氯100μL，反应30分钟，待原料反应完，加入5mL H₂O停止反应，随后用二氯甲烷(3×5mL)萃取，有机相浓缩后用凝胶(Sephadex LH-20,MeOH)和制备薄层(CH₂Cl₂/MeOH,50:1)纯化后得到化合物6c(11mg)。其结构和数据如下：

6c:[α]_D ²⁵+24(c 0.43,MeOH)；UV(MeOH)λ_max(logε)231(3.50)nm；IR(KBr)ν_max3465,2925,1721,1274,1240,1082,and 1023cm^-1；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ_H 7.58(1H,br s,H-1),4.39(1H,s,H-5),3.59(1H,s,H-7),3.66(1H,d,J＝2.3Hz,H-8),4.01(1H,br s,H-10),2.49(1H,q,J＝7.3Hz,H-11),5.08(1H,s,H-12),4.90(1H,d,J＝2.3Hz,H-14),5.03(1H,s,H-16a),5.05(1H,s,H-16b),1.88(3H,s,H₃-17),1.37(3H,d,J＝7.3Hz,H₃-18),1.79(3H,br s,H₃-19),5.13(1H,d,J＝11.9Hz,H-20a),4.10(1H,d,J＝11.9Hz,H-20b).1′-Ph:7.71(2H,m),7.38(2H,m),7.38(1H,m).12-OAc:2.02(3H.s).20-OBz:8.05(2H,d,J＝7.7Hz),7.43(2H,t,J＝7.7Hz),7.56(1H,m)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ_C 160.1(C-1),136.9(C-2),209.2(C-3),72.3(C-4),69.8(C-5),59.7(C-6),64.2(C-7),35.3(C-8),78.6(C-9),47.3(C-10),44.0(C-11),78.3(C-12),84.1(C-13),80.7(C-14),143.0(C-15),113.5(C-16),18.8(C-17),18.3(C-18),9.9(C-19),66.6(C-20),117.9(C-1′).1′-Ph:135.2,126.0×2,128.0×2,129.6.12-OAc:169.6,21.1.20-OBz:166.2,129.8,129.7×2,128.4×2,133.2；ESIMS m/z 645.2[M+H]⁺,679.2[M+Cl]^-；HRESIMS m/z 643.2184[M-H]^-(calcd forC₃₆H₃₅O₁₁ ^-,643.2185).

实施例4：化合物7a和7b的制备

取化合物7(30mg)溶于2mL吡啶中，在N₂保护下搅拌，然后用注射器打入100μL乙酸酐，50℃加热反应，薄层检测有两个产物，并且原料基本反应完时，加入3mL水使反应停止，之后用EtOAc(5mL)萃取三次，反应产物通过制备薄层(CH₂Cl₂/MeOH,50:1)纯化得7a(13mg)与7b(10mg)，结构和数据如下：

7a:[α]_D ²⁵+63.3(c 0.33,MeOH)；UV(MeOH)λ_max(logε)231(3.99)nm；IR(KBr)ν_max3445,2925,1710,1268,1080,and 713cm^-1；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ_H 7.50(1H,br s,H-1),5.55(1H,s,H-5),3.59(1H,s,H-7),3.78(1H,d,J＝2.5Hz,H-8),4.08(1H,m,H-10),2.55(1H,q,J＝7.2Hz,H-11),5.28(1H,s,H-12),5.05(1H,d,J＝2.5Hz,H-14),5.09(1H,s,H-16a),5.04(1H,s,H-16b),1.92(3H,s,H₃-17),1.40(3H,d,J＝7.2Hz,H₃-18),1.74(3H,br s,H₃-19),4.79(1H,d,J＝12.0Hz,H-20a),3.64(1H,d,J＝12.0Hz,H-20b).1′-Ph:7.75(2H,m),7.40(2H,m),7.40(1H,m).12-OBz:7.94(2H,m),7.48(2H,m),7.61(1H,m).5-OAc:2.14(3H,s).20-OAc:2.03(3H,s)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ_C 158.0(C-1),137.2(C-2),205.4(C-3),71.7(C-4),68.4(C-5),59.6(C-6),64.2(C-7),35.9(C-8),78.4(C-9),47.9(C-10),44.0(C-11),78.9(C-12),84.3(C-13),80.6(C-14),142.9(C-15),113.8(C-16),18.9(C-17),18.2(C-18),10.0(C-19),66.4(C-20),118.0(C-1′).1′-Ph:135.1,126.0×2,128.1×2,129.7.12-OBz:165.4,129.7,129.5×2,128.6×2,133.4.5-OAc:168.8,20.7.20-OAc:170.6,20.3；ESIMS m/z 687.3[M+H]⁺；HRESIMS m/z 687.2420[M+H]⁺(calcd for C₃₈H₃₉O₁₂ ⁺,687.2436).

7b:white powder；[α]_D ²⁵+50.2(c 0.43,MeOH)；UV(MeOH)λ_max(logε)232(4.02)nm；IR(KBr)ν_max 3446,2925,1908,1451,1365,1267,1241,978,713cm^-1；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ_H 7.59(1H,br s,H-1),4.28(1H,d,J＝2.4Hz,H-5),3.59(1H,s,H-7),3.73(1H,d,J＝2.5Hz,H-8),3.98(1H,m,H-10),2.64(1H,q,J＝7.3Hz,H-11),5.32(1H,s,H-12),5.01(1H,d,J＝2.5Hz,H-14),5.08(1H,s,H-16a),5.03(1H,s,H-16b),1.92(3H,s,H₃-17),1.45(3H,d,J＝7.3Hz,H₃-18),1.77(3H,br s,H₃-19),4.84(1H,d,J＝12.0Hz,H-20a),3.92(1H,d,J＝12.0Hz,H-20b).1′-Ph:7.75(2H,m),7.40(2H,m),7.40(1H,m).12-OBz:7.92(2H,m),7.47(2H,m),7.59(1H,m).20-OAc:2.09(3H,s)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ_C 160.1(C-1),136.9(C-2),209.2(C-3),72.1(C-4),69.8(C-5),59.4(C-6),64.1(C-7),35.7(C-8),78.6(C-9),47.3(C-10),44.1(C-11),78.9(C-12),84.2(C-13),80.7(C-14),142.9(C-15),113.8(C-16),18.9(C-17),18.4(C-18),9.9(C-19),65.8(C-20),118.0(C-1′).1′-Ph:135.1,126.0×2,128.1×2,129.7.12-OBz:165.4,129.7,129.5×2,128.6×2,133.4.20-OAc:170.6,20.9；ESIMS m/z 645.3[M+H]⁺；HRESIMS m/z 645.2339[M+H]⁺(calcd for C₃₆H₃₇O₁₁ ⁺,645.2330).

实施例5：化合物11c的制备

取化合物11(23mg)，参照实施例3中的方法制备，所得产物经过凝胶(SephadexLH-20,MeOH)和制备薄层(CH₂Cl₂/MeOH,100:1)纯化后得11c(15mg)。其结构和数据如下：

11c:Colorless oil；[α]_D ²⁵+28.5(c0.067,MeOH)；UV(MeOH)λ_max(logε)230(4.50)nm；IR(KBr)ν_max 3459,2926,1719,1273,1230,1026,and 711cm^-1；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ_H7.57(1H,m,H-1),4.37(1H,s,H-5),3.52(1H,s,H-7),3.57(1H,d,J＝2.5Hz,H-8),3.91(1H,m,H-10),2.40(1H,q,J＝7.2Hz,H-11),4.99(1H,s,H-12),4.76(1H,d,J＝2.5Hz,H-14),5.01(1H,s,H-16a),4.97(1H,s,H-16b),1.84(3H,s,H₃-17),1.30(3H,d,J＝7.2Hz,H-18),1.78(3H,br s,H₃-19),5.12(1H,d,J＝11.9Hz,H-20a),4.07(1H,d,J＝11.9Hz,H-20b),5.64(1H,d,J＝15.5Hz,H-2′),6.66(1H,dd,J＝15.5,10.6Hz,H-3′),6.03(1H,dd,J＝15.0,10.6Hz,H-4′),5.85(1H,dd,J＝15.0,7.4Hz,H-5′),2.08(2H,m,H₂-6′),1.37(2H,m,H₂-7′),1.26(2H,m,H₂-8′),1.26(2H,m,H₂-9′),0.87(3H,t,J＝6.9Hz,H-10′).12-OAc:1.99(3H.s).20-OBz:8.04(2H,d,J＝7.3Hz),7.44(2H,m,),7.56(1H,m)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ_C160.2(C-1),136.9(C-2),209.2(C-3),72.3(C-4),69.7(C-5),59.7(C-6),64.1(C-7),35.2(C-8),78.1(C-9),47.3(C-10),43.9(C-11),78.2(C-12),83.6(C-13),80.3(C-14),143.1(C-15),113.3(C-16),18.7(C-17),18.2(C-18),9.9(C-19),66.6(C-20),117.1(C-1′),122.2(C-2′),135.0(C-3′),128.5(C-4′),139.3(C-5′),32.6(C-6′),28.7(C-7′),31.3(C-8′),22.5(C-9′),14.0(C-10′).12-OAc:169.7,21.1.20-OBz:166.2,129.7,129.7×2,128.4×2,133.1；ESIMS m/z 691.3[M+H]⁺,725.2[M+Cl]^-；HRESIMS m/z 689.2962[M-H]^-(calcd for C₃₉H₄₅O₁₁,689.2967).

实施例6：化合物11f的制备

取化合物11(30mg)溶于3mL二氯甲烷中，加入10mg Grubbs二代催化剂，抽真空加氮气保护，用注射器加入200μL苯乙烯，然后在40℃加热搅拌反应1小时。过滤除掉催化剂，滤液浓缩后用HPLC(MeCN/H₂O,75％,3mL/min)纯化得化合物11f(15mg,t_R＝10min)。其结构和数据如下：

11f:[α]_D ²⁵+4.2(c 0.33,MeOH)；UV(MeOH)λ_max(logε)286(4.26)nm；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ_H 7.59(1H,br s,H-1),4.27(1H,s,H-5),3.57(1H,s,H-7),3.53(1H,d,J＝2.5Hz,H-8),3.85(1H,m,H-10),2.39(1H,q,J＝7.3Hz,H-11),5.00(1H,s,H-12),4.79(1H,d,J＝2.5Hz,H-14),5.03(1H,br s,H-16a),4.97(1H,br s,H-16b),1.85(3H,s,H₃-17),1.31(3H,d,J＝7.3Hz,H₃-18),1.80(3H,br s,H₃-19),3.94(1H,d,J＝12.4Hz,H-20a),3.81(1H,d,J＝12.4Hz,H-20b),5.88(1H,d,J＝14.9Hz,H-2′),6.86(1H,dd,J＝14.9,10.0Hz,H-3′),6.77(1H,dd,J＝15.1,10.0Hz,H-4′),6.69(1H,d,J＝15.1Hz,H-5′),7.40(2H,m,H-7′/H-11′),7.32(1H,dd,J＝7.5,7.5Hz,H-8′/H-10′),7.26(1H,m,H-9′)；12-OAc:2.00(3H,s)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ_C 160.3(C-1),136.9(C-2),209.4(C-3),72.2(C-4),71.9(C-5),60.5(C-6),64.2(C-7),35.4(C-8),78.3(C-9),47.4(C-10),44.0(C-11),78.2(C-12),83.8(C-13),80.5(C-14),143.0(C-15),113.4(C-16),18.7(C-17),18.3(C-18),9.9(C-19),65.1(C-20),116.8(C-1′),124.9(C-2′),134.8(C-3′),127.0(C-4′),136.0(C-5′),136.7(C-6′),126.7(C-7′/C-11′),128.6(C-8′/10′),128.1(C-9′),12-OAc:169.7,21.2；HRESIMS m/z615.2206[M+Na]⁺(calcd for,C₃₃H₃₆O₁₀Na⁺,615.2201)and 627.1993[M+Cl]^-(calcd forC₃₃H₃₆O₁₀Cl^-,627.2002).

实施例7：化合物9e的制备

取化合物9(30mg)，参照实施例6中的方法进行制备，所得产物经过HPLC(MeCN/H₂O,80％,3mL/min)纯化得化合物9e(16mg,t_R＝14min)。其结构和数据如下：

9e:[α]_D ²⁵+27.8(c 0.13,MeOH)；UV(MeOH)λ_max(logε)285(4.24)nm；¹H NMR(CDCl₃,500MHz)δ_H 7.61(1H,br s,H-1),4.23(1H,s,H-5),3.66(1H,s,H-7),3.65(1H,d,J＝2.7Hz,H-8),3.87(1H,m,H-10),2.58(1H,q,J＝7.2Hz,H-11),5.24(1H,s,H-12),4.93(1H,d,J＝2.7Hz,H-14),5.04(1H,br s,H-16a),5.02(1H,br s,H-16b),1.89(3H,s,H₃-17),1.41(3H,d,J＝7.2Hz,H₃-18),1.79(3H,br s,H₃-19),3.94(1H,d,J＝12.2Hz,H-20a),3.83(1H,d,J＝12.2Hz,H-20b),5.91(1H,d,J＝15.2Hz,H-2′),6.90(1H,dd,J＝15.2,10.5Hz,H-3′),6.78(1H,dd,J＝15.4,10.5Hz,H-4′),6.73(1H,d,J＝15.4Hz,H-5′),7.41(2H,d,J＝7.6Hz,H-7′/H-11′),7.33(1H,dd,J＝7.6,7.6Hz,H-8′/H-10′),7.26(1H,m,H-9′)；12-OBz:7.90(2H,d,J＝7.6Hz),7.46(2H,dd,J＝7.6,7.6Hz),7.58(1H,dd,J＝7.6,7.6Hz)；¹³C NMR(CDCl₃,125MHz)δ_C 160.2(C-1),137.0(C-2),209.3(C-3),72.2(C-4),71.8(C-5),60.6(C-6),64.0(C-7),35.8(C-8),78.4(C-9),47.4(C-10),44.1(C-11),78.9(C-12),84.0(C-13),80.5(C-14),142.9(C-15),113.7(C-16),18.8(C-17),18.3(C-18),9.9(C-19),64.7(C-20),116.9(C-1′),124.8(C-2′),134.8(C-3′),127.0(C-4′),136.1(C-5′),136.7(C-6′),126.7(C-7′/C-11′),128.6(C-8′/10′),128.1(C-9′),12-OBz:129.6,129.5×2,128.7×2,133.3；HRESIMS m/z 689.2147[M+Cl]^-(calcd for C₃₈H₃₈O₁₀Cl^-,689.2159).

实施例8：化合物7c的制备

取化合物7，溶于甲醇中，加入适量钯碳催化剂，然后加氢气保护于50度油浴反应2小时，所得产物经过HPLC(MeCN/H₂O,70％,3mL/min)纯化得化合物7c(10mg,t_R＝17min)。其结构和数据如下：

7c:[α]_D ²⁵+64.5(c 0.067,MeOH)；UV(MeOH)λ_max(logε)230(4.08)nm；IR(KBr)ν_max3483,2968,1720,1272,1079,and 1025cm^-1；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ_H 2.36(1H,m,H-1α),1.61(1H,m,H-1β),2.25(1H,m,H-2),4.05(1H,s,H-5),3.62(1H,s,H-7),3.59(1H,d,J＝2.4Hz,H-8),3.01(1H,dd,J＝13.2,5.8Hz,H-10),2.54(1H,q,J＝6.9Hz,H-11),5.42(1H,s,H-12),4.74(1H,d,J＝2.4Hz,H-14),2.03(1H,m,H-15),1.04(3H,d,J＝6.7Hz,H₃-16),1.04(3H,d,J＝6.7Hz,H₃-17),1.46(3H,d,J＝6.9Hz,H₃-18),1.09(3H,d,J＝6.6Hz,H₃-19),3.86(1H,d,J＝12.3Hz,H-20a),3.79(1H,d,J＝12.3Hz,H-20b)；1′-Ph:7.75(2H,m),7.39(2H,m),7.39(1H,m).12-OBz:7.94(2H,d,J＝7.4Hz),7.47(2H,dd,J＝7.4,7.4Hz),7.59(1H,dd,J＝7.4,7.4Hz)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ_C 33.4(C-1),42.8(C-2),220.1(C-3),74.9(C-4),71.2(C-5),60.7(C-6),64.4(C-7),36.1(C-8),78.9(C-9),44.1(C-10),43.8(C-11),77.3(C-12),84.1(C-13),81.0(C-14),31.6(C-15),16.7(C-16),16.2(C-17),18.6(C-18),12.4(C-19),65.1(C-20),118.1(C-1′).1′-Ph:135.7,125.9×2,128.0×2,129.5.12-OBz:165.6,129.8,129.5×2,128.6×2,133.3；HRESIMS m/z 605.2407[M-H]^-(calcd forC₃₄H₃₇O₁₀ ^-,605.2392).

实施例9：6g和6h的制备

取化合物6(30mg)溶于2mL四氢呋喃(THF)，搅拌的情况下加入200μL浓盐酸，反应20min左右，加入10mL水使反应停止，然后加入EtOAc(3×10mL)萃取。反应产物经过凝胶(MeOH)和制备薄层(CH₂Cl₂/MeOH,40:1)得化合物6g(13mg)和6h(10mg)。其结构和数据如下：

6g:[α]_D ²⁵+10.5(c 0.13,MeOH)；UV(MeOH)λ_max(logε)241(3.70)nm；IR(KBr)ν_max3451,2925,1740,1691,1230,1078,and 697cm^-1；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ_H 7.61(1H,br s,H-1),4.38(1H,s,H-5),4.74(1H,s,H-7),3.60(1H,d,J＝2.4Hz,H-8),4.04(1H,m,H-10),2.85(1H,q,J＝7.3Hz,H-11),5.03(1H,s,H-12),4.96(1H,d,J＝2.4Hz,H-14),5.03(1H,s,H-16a),5.06(1H,s,H-16b),1.87(3H,s,H₃-17),1.35(3H,d,J＝7.3Hz,H₃-18),1.81(3H,brs,H₃-19),4.01(1H,d,J＝11.3Hz,H-20a),4.16(1H,d,J＝11.3Hz,H-20b).1′-Ph:7.64(2H,m),7.41(2H,m),7.40(1H,m).12-OAc:1.98(3H.s)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ_C 158.6(C-1),136.7(C-2),208.6(C-3),75.2(C-4),70.9(C-5),76.9(C-6),81.4(C-7),36.2(C-8),78.9(C-9),49.9(C-10),43.5(C-11),77.7(C-12),84.7(C-13),82.7(C-14),142.4(C-15),113.9(C-16),18.7(C-17),17.8(C-18),9.9(C-19),68.8(C-20),117.7(C-1′).1′-Ph:134.6,125.8×2,128.2×2,130.0.12-OAc:169.5,20.9；HRESIMS m/z 575.1685[M-H]^-(calcd.for C₂₉H₃₂O₁₀Cl^-,575.1689).

6h:[α]_D ²⁵+15(c 0.1,MeOH)；UV(MeOH)λ_max(logε)241(3.70)nm；IR(KBr)ν_max 3451,2925,1740,1691,1230,1078,and 697cm^-1；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ_H 7.59(1H,br s,H-1),3.96(1H,s,H-5),4.89(1H,d,J＝9.8Hz,H-7),3.06(1H,m,H-8),3.07(1H,m,H-10),2.85(1H,q,J＝7.2Hz,H-11),5.02(1H,s,H-12),5.37(1H,d,J＝2.4Hz,H-14),5.01(1H,s,H-16a),5.03(1H,s,H-16b),1.85(3H,s,H₃-17),1.33(3H,d,J＝7.2Hz,H₃-18),1.80(3H,br s,H₃-19),4.06(1H,d,J＝10.4Hz,H-20a),4.46(1H,d,J＝10.4Hz,H-20b).1′-Ph:7.67(2H,m),7.39(2H,m),7.39(1H,m).12-OAc:2.03(3H.s)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ_C 158.9(C-1),137.6(C-2),208.5(C-3),73.3(C-4),81.7(C-5),79.0(C-6),66.9(C-7),36.8(C-8),78.4(C-9),50.6(C-10),42.8(C-11),77.9(C-12),84.2(C-13),79.1(C-14),142.8(C-15),113.7(C-16),18.8(C-17),18.1(C-18),10.0(C-19),61.8(C-20),117.4(C-1′).1′-Ph:134.8,125.9×2,128.1×2,129.8.12-OAc:169.7,21.0；HRESIMS m/z 575.1681[M-H]^-(calcd.for C₂₉H₃₂O₁₀Cl^-,575.1689).

实施例10:7e和7f的制备

取化合物7(40mg)，用实施例9中相同的方法制备后经制备薄层(CH₂Cl₂/MeOH,50:1)纯化得化合物7e(20mg)和7f(12mg)。其结构和数据如下：

7e:[α]_D ²⁵+23.6(c 0.46,MeOH)；UV(MeOH)λ_max(logε)231(4.01)nm；IR(KBr)ν_max3450,2924,1721,1268,1079,and 711cm^-1；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ_H 7.64(1H,s,H-1),4.40(1H,s,H-5),4.84(1H,s,H-7),3.79(1H,d,J＝2.4Hz,H-8),4.08(1H,m,H-10),2.99(1H,q,J＝7.3Hz,H-11),5.34(1H,s,H-12),5.10(1H,d,J＝2.4Hz,H-14),5.07(1H,s,H-16a),5.03(1H,s,H-16b),1.91(3H,s,H₃-17),1.45(3H,d,J＝7.3Hz,H₃-18),1.81(3H,br s,H₃-19),4.16(1H,d,J＝11.5Hz,H-20a),4.02(1H,d,J＝11.5Hz,H-20b).1′-Ph:7.68(2H,m),7.42(2H,m),7.44(1H,m).12-OBz:7.97(2H,m),7.42(2H,m),7.55(1H,t,J＝7.4Hz)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ_C 158.6(C-1),136.9(C-2),208.6(C-3),75.1(C-4),70.9(C-5),77.0(C-6),81.6(C-7),36.6(C-8),79.1(C-9),49.9(C-10),43.8(C-11),78.0(C-12),85.1(C-13),82.9(C-14),142.4(C-15),114.2(C-16),18.8(C-17),18.0(C-18),9.9(C-19),68.9(C-20),117.9(C-1′).1′-Ph:134.6,125.8×2,128.3×2,130.1.12-OBz:165.1,129.4,129.6×2,128.4×2,133.4；HRESIMS m/z 637.18513[M-H]^-(calcd for C₃₄H₃₄O₁₀Cl^-,637.18460).

7f:[α]_D ²⁵+16.7(c 0.35,MeOH)；UV(MeOH)λ_max(logε)230(4.10)nm；IR(KBr)ν_max3431,2960,1721,1451,1268,and 1075cm^-1；¹H NMR(CDCl₃,500MHz)δ_H 7.62(1H,br s,H-1),3.90(1H,s,H-5),4.90(1H,d,J＝9.9Hz,H-7),3.12(1H,d,J＝9.9Hz,H-8),3.06(1H,br s,H-10),2.99(1H,q,J＝7.2Hz,H-11),5.28(1H,s,H-12),5.51(1H,s,H-14),5.06(1H,s,H-16a),5.01(1H,s,H-16b),1.88(3H,s,H₃-17),1.44(3H,d,J＝7.2Hz,H-18),1.78(3H,br s,H-19),4.33(1H,d,J＝11.1Hz,H-20a),4.06(1H,d,J＝11.1Hz,H-20b).1′-Ph:7.71(2H,d,J＝7.3Hz),7.42(2H,m),7.43(1H,m).12-OBz:7.94(2H,d,7.4),7.47(2H,m),7.59(1H,t,J＝7.4Hz)；¹³C NMR(CDCl₃,125MHz)δ_C 158.9(C-1),137.6(C-2),208.4(C-3),73.1(C-4),81.8(C-5),78.5(C-6),66.5(C-7),37.1(C-8),78.4(C-9),50.4(C-10),43.0(C-11),78.5(C-12),84.4(C-13),79.2(C-14),142.8(C-15),114.0(C-16),18.9(C-17),18.3(C-18),10.0(C-19),62.1(C-20),117.5(C-1′).1′-Ph:134.8,125.9×2,128.2×2,130.1.12-OBz:165.0,129.4,129.4×2,128.7×2,133.6；HRESIMS m/z 637.18536[M-H]^-(calcd forC₃₄H₃₄O₁₀Cl^-,637.18460).

实施例11:6e和6f的制备

取化合物6(100mg)溶于3mL二氯甲烷中，加入200μL三乙胺，然后再加入苯甲酰氯(0.5mL)，室温下搅拌反应，用薄层色谱检测原料反应完后，减压浓缩除去二氯甲烷。然后将混合物置于80℃油浴锅加热继续搅拌反应8小时，所得混合物用甲醇溶解后经过半制备HPLC(MeCN/H₂O,80:20,3mL/min)纯化得化合物6e(54mg,t_R＝15min)和6f(21mg,t_R＝12min)，结构和数据如下：

6e：[α]_D ²⁵+32.1(c 0.33,MeOH)；UV(MeOH)λ_max(logε)230(4.20)nm；IR(KBr)ν_max3446,2924,2856,1724,1691,1230,1073,1027,920,and 711cm^-1；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ_H7.64(1H,s,H-1),4.12(1H,s,H-5),4.81(1H,br s,H-7),3.68(1H,d,J＝2.4Hz,H-8),4.16(1H,m,H-10),2.85(1H,q,J＝7.3Hz,H-11),5.05(1H,s,H-12),4.95(1H,d,J＝2.4Hz,H-14),5.08(1H,s,H-16a),5.06(1H,s,H-16b),1.88(3H,s,H₃-17),1.37(3H,d,J＝7.3Hz,H₃-18),1.83(3H,br s,H₃-19),4.99(1H,d,J＝11.6Hz,H-20a),4.87(1H,d,J＝11.6Hz,H-20b).1′-Ph:7.65(2H,m),7.40(2H,m,7.3),7.41(1H,m),12-OAc:2.00(3H.s).20-OBz:8.10(2H,m),7.47(2H,t,J＝7.6Hz),7.59(1H,m).¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ_C 159.0(C-1),136.7(C-2),208.6(C-3),75.1(C-4),72.6(C-5),76.3(C-6),77.2(C-7),35.6(C-8),79.0(C-9),49.8(C-10),43.7(C-11),77.8(C-12),84.7(C-13),82.9(C-14),142.5(C-15),114.0(C-16),18.8(C-17),17.8(C-18),9.9(C-19),66.8(C-20),117.8(C-1′).1′-Ph:134.6,125.8×2,128.2×2,130.0.12-OAc:169.5,21.0.20-OBz:165.9,129.9,129.8×2,128.5×2,133.2；HRESIMS m/z 681.2094[M+H]⁺(calcd for C₃₆H₃₈O₁₁Cl⁺,681.2097)and m/z679.1961[M-H]^-(calcd for C₃₆H₃₆O₁₁Cl^-,679.1952).

6f:colorless crystal；mp 197.2-200.1℃；UV(MeOH)λ_max(logε)231(4.13)nm；IR(KBr)ν_max3412,2928,1719,1452,1267,1232,1080,1027,914,and 697cm^-1；¹H NMR(CDCl₃,400MHz)δ_H 7.60(1H,br s,H-1),3.95(1H,s,H-5),4.86(1H,d,J＝9.7Hz,H-7),3.25(1H,dd,J＝9.7,2.7Hz,H-8),3.13(1H,m,H-10),2.88(1H,q,J＝7.3Hz,H-11),5.04(1H,s,H-12),5.36(1H,d,J＝2.7Hz,H-14),5.03(2H,br s,H₂-16),1.85(3H,s,H₃-17),1.37(3H,d,J＝7.3Hz,H₃-18),1.81(3H,br s,H₃-19),5.18(1H,d,J＝12.3Hz,H-20a),5.13(1H,d,J＝12.3Hz,H-20b).1′-Ph:7.68(2H,m),7.40(2H,m),7.40(1H,m),12-OAc:2.09(3H.s).20-OBz:8.09(2H,m),7.44(2H,m),7.57(1H,m).¹³C NMR(CDCl₃,100MHz)δ_C 158.3(C-1),137.5(C-2),207.9(C-3),73.1(C-4),80.9(C-5),78.6(C-6),65.4(C-7),37.8(C-8),78.2(C-9),50.9(C-10),43.1(C-11),77.9(C-12),84.5(C-13),79.2(C-14),142.9(C-15),113.7(C-16),18.8(C-17),18.2(C-18),10.0(C-19),63.7(C-20),117.3(C-1′).1′-Ph:134.9,125.9×2,128.1×2,129.8.12-OAc:169.9,21.0.20-OBz:167.1,129.9,129.7×2,128.5×2,133.3；HRESIMS m/z 703.1917[M+Na]⁺(calcd for C₃₆H₃₇O₁₁ClNa⁺,703.1917)and m/z679.1949[M-H]^-(calcd for C₃₆H₃₆O₁₁Cl^-,679.1952).

瑞香烷型二萜化合物在3T3-L1脂肪细胞模型上的降脂活性评价

(1)3T3-L1脂肪细胞分化

将3T3-L1细胞按3000个/cm²的密度接种到48孔板中，以基础培养基培养至细胞100％融合。细胞融合48小时后，将培养基更换为分化培养基(含0.5mM异丁基-甲基-黄嘌呤、1ng/ml胰岛素、2μg/mL胰岛素的基础培养基)，如需给药，使用分化培养基将化合物稀释到相应的浓度后加入。诱导分化培养72小时后，将培养基更换为分化后培养基(含2μg/mL胰岛素的基础培养基)。换成分化后培养基再继续培养72小时，收集细胞检测细胞内甘油三酯或蛋白变化。

(2)油红O染色及甘油三酯含量测定评价降脂活性

油红O染色：取出已经分化好的板，弃去培养基，加入100μL多聚甲醛固定细胞30分钟。以3：2的体积比混合油红和超纯水配制油红染料，0.45μM和0.22μM的滤膜过滤后使用。弃去多聚甲醛，加入100μL的油红O染料，避光染色30分钟。染色结束后，用水清洗7-8遍(动作轻柔，避免吹起细胞)，然后在细胞成像仪拍照。

甘油三酯含量测定：油红O染色后的细胞中加入100μL 60％异丙醇，洗去非特异性结合的油红O染料，加入100μL的异丙醇萃取，摇床上萃取30分钟后，将液体(80μL)转移至96孔板，在510、505nm波长下测吸光度。甘油三酯含量分析的最终结果以“100％对照”的方式表示[(给药组的吸光度值/对照组的吸光度值)×100％]。以EC₅₀值(产生50％最大抑制效应的浓度)来评价化合物的降脂活性。

(3)检测化合物对3T3-L1细胞分化相关因子的影响：不同浓度的化合物6e(0.01μM，0.1μM，1μM和10μM)分别处理3T3-L1细胞3天、6天后提取细胞总RNA，采用RT-qPCR技术检测相关基因的转录表达水平。

(4)实验结果

①发现有32个化合物能显著降低3T3-L1细胞内甘油三酯含量(半最大抑制效应浓度EC₅₀：0.078-5.23μM)，其中有3个天然产物及6个结构衍生物的活性较为突出(EC₅₀:0.078-0.23μM)，且这些结构衍生物(6e-6h、7e和7f)具有较低的毒性，细胞毒IC₅₀值大于30μM，选择指数SI≥244(以IC₅₀/EC₅₀计算)，尤其化合物6e(EC₅₀＝0.097μM)在100μM浓度下无明显细胞毒性(SI≥1030)(表1)。

②如图1A所示，与未分化组(UND)相比，对照分化组(control)中含有大量环状脂滴，甘油三酯大量合成，而化合物6e处理组脂滴呈现剂量依赖性地减少，表明化合物6e能够浓度依赖性地减少细胞中甘油三酯的合成，10μM浓度的6e降脂率达80％(图1B)。

③如图2A和2B所示，化合物6e能浓度梯度依赖性地下调脂肪分化因子C/EBPβ、C/EBPδ、PPARγ、C/EBPα以及相关脂肪合成酶如SCD-1、FAS、ACC等蛋白表达水平(图2C)，这与化合物6e能够降低甘油三酯水平的结果一致，说明化合物6e通过抑制细胞分化的重要转录因子的表达和相关脂肪合成酶的合成，进而抑制3T3-L1细胞中脂质合成和累积。

④基于降脂活性筛选的结果，初步总结了主要构效关系如下：a.原酸酯为关键的活性基团，必须保留；b.6,7-环氧开环后生成氯代产物可增加活性，同时毒性下降，提示卤素取代对活性有利；c.5-OH或20-OH被乙酰基和苯甲酰基等亲脂性基团取代时不仅毒性降低，且对活性的影响较小。d.A环为不饱和5元环有利于活性。

表1.代表化合物在3T3-L1细胞上的降脂活性(EC₅₀)及细胞毒活性(IC₅₀)

EC₅₀表示引起50％最大抑制效应时的浓度；NA表示未检测。

化合物6e动物体内降脂活性评价及机制研究

(1)肥胖小鼠模型的构建

采用高脂高胆固醇饲料(60％脂肪+1％胆固醇，简称HFC饲料)构建肥胖小鼠模型。购买18-20g雄性C57BL/6J小鼠连续喂养10周后，根据体重差异筛选肥胖小鼠(HFC饲料喂养小鼠体重大于正常饲料喂养组小鼠20％)。将5周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为三组：正常饲料组(CH组)、高脂饲料组(HFC组)和高脂饲料+给药组，每组10只小鼠。采取腹腔注射方式每天给药一次，剂量为40mg/kg，连续给药6周。

(2)降脂活性评价及相关代谢指标检测

①记录小鼠在给药期间的体重变化：每隔两天记录一次小鼠体重；观察化合物对肥胖小鼠是否有减重效果。

②在给药三周与五周后分别进行葡萄糖耐受试验(GTT)和胰岛素耐受试验(ITT)。

GTT试验：小鼠禁食过夜，给予2g/kg葡萄糖腹腔注射处理后，分别在0min、15min、30min、60min、90min、120min检测小鼠的血糖水平，检测小鼠葡萄糖耐量变化。

ITT试验：小鼠禁食6小时后，每只小鼠给予0.6U胰岛素腹腔处理后，在0min、15min、30min、60min、90min、120min分别检测小鼠的血糖水平，检测小鼠胰岛素敏感性变化。

③为确证化合物能否有效地减少小鼠内脂肪含量，对小鼠各部位的脂肪组织(包括皮下脂肪、腹部脂肪、性腺脂肪及肾周脂肪)进行分离和称重。

④血清生化指标检测：在动物实验结束前6小时对小鼠进行禁食处理。通过摘眼球取血，将血液收集于1.5mL离心管中，冰上保存。在4℃，3000rpm/min离心15min，留取上清液，重复离心1次。运用生化自动分析仪检测血清中甘油三酯(TG)、葡萄糖(Glu)、胆固醇(CHO)、门冬氨酸转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、尿素(UREA)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)的水平，以评价化合物的体内毒性和对相关代谢综合征的治疗效果。

⑤检测小鼠腹部和皮下脂肪组织中与脂质合成相关酶类的基因表达水平，评价化合物对小鼠的脂肪合成代谢的影响。

(3)化合物6e抗肥胖作用机制研究

通过数据库虚拟筛选，结合文献调研，推测可能的作用机制并在细胞水平验证。

(4)实验结果

动物实验表明，化合物6e能够显著抑制高脂高胆固醇饮食(HFC)诱导的小鼠肥胖症的发生，并改善小鼠糖脂代谢紊乱、胰岛素抵抗及相关代谢综合症，详细动物实验结果如下：

①显著抑制肥胖小鼠体重的增加(与HFC小鼠相比，40mg/kg剂量给药6周后减重26.8％，图3A和3B)；

②抑制高脂饮食诱导的肝脏质量的增加，而对小鼠心脏，肾脏和脑没有显著影响(图3C)；

③有效降低小鼠体内各部位脂肪组织的含量，如腹部、皮下、性腺和肾周围(图3D)；

④可改善高脂饮食导致的葡萄糖耐受损伤(图3E)，并提高胰岛素敏感性(图3F)，还能降低血清中甘油三酯(TG)和总胆固醇(CHO)的水平(表2)，说明化合物6e能够缓解肥胖小鼠的糖脂代谢紊乱；

⑤下调肥胖小鼠腹部及皮下脂肪组织中相关脂肪合成酶如FAS、ACC、SCD1、SREBP-1c、GPAT3和DGAT2的基因表达水平，从而抑制脂肪合成，发挥抗肥胖作用(图4A和4B)。

表2.小鼠血液生化指标检测

CH为正常饮食对照组，HFC为高脂饮食诱导模型组。

机制研究实验表明：在3T3-L1细胞与A549细胞中利用腺病毒转染与免疫荧光分析观察细胞内自噬标志性蛋白LC3在化合物6e干预下的变化，发现化合物6e可以明显上调LC3的表达，说明化合物能促进细胞内自噬活动(图5)。

为研究自噬活动调节与抑制3T3-L1前脂肪细胞分化的关系，对比了自噬抑制剂3-MA(2mM)、自噬激活剂Rapamycin(0.1μM)以及化合物6e对3T3-L1脂肪细胞的分化的影响，发现调节3T3-L1细胞内的自噬活动可以抑制其成脂分化(图6)。

综上所述，本发明公开的瑞香烷型二萜具有较好的安全性，同时可以有效降脂或减肥，具有良好的开发潜力，有望开发为新型降脂或减肥药物/食品。

Claims

1.一类瑞香烷型二萜化合物在制备降脂或减肥组合物中的应用，所述瑞香烷型二萜化合物的结构通式如式Ⅰ或式II所示：

R₁选自氢或羟基；

R₂选自氢、羟基、羰基、苯甲酰基或乙酰基；

R₈选自氢或羟基；

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述瑞香烷型二萜化合物选自：

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述瑞香烷型二萜化合物选自化合物1、2、6、6a、6b、6c、6e、6f、6g、6h、7、7a、7b、7c、7d、7e、7f、7g、7h、9、9a、9b、9c、9、11、11a、11b、11c、11g、11h、16、17、18、19中的至少一种。

4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述瑞香烷型二萜化合物还包括其药学上或食品学上可接受的衍生物。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述药学上或食品学上可接受的衍生物为其盐。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述组合物为口服剂。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述口服剂选自片剂、颗粒剂、固体饮料。

8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述组合物还包括药学上或食品学上可接受的辅料。