CN112899305B

CN112899305B - 一种缩短水稻生育期的方法、蛋白质、核酸分子、生物材料及其应用

Info

Publication number: CN112899305B
Application number: CN202110190722.8A
Authority: CN
Inventors: 李家洋; 孟祥兵; 余泓; 张静昆; 刘贵富; 荆彦辉; 陈明江
Original assignee: Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Current assignee: Institute of Genetics and Developmental Biology of CAS
Priority date: 2021-02-02
Filing date: 2021-02-19
Publication date: 2023-05-02
Anticipated expiration: 2041-02-19
Also published as: CN112899305A

Abstract

本发明公开了一种缩短水稻生育期的方法、蛋白质、核酸分子、生物材料及其应用。该缩短水稻生育期的方法包括降低水稻中OaGhd7蛋白和/或OaDTH7蛋白的含量和/或活性，从而缩短所述水稻的生育期。

Description

一种缩短水稻生育期的方法、蛋白质、核酸分子、生物材料及其应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种缩短水稻生育期的方法、蛋白质、核酸分子、生物材料及其应用。

背景技术

生育期是作物驯化过程中一个重要的选择的性状，不仅影响作物产量，还涉及到种质的扩散与地域分布。植物的感光性主要由长日照与短日照条件下抽穗期的差异决定。水稻作为短日照植物，长日照抑制开花。

四倍体野生稻(CCDD，2x＝4n＝48)Oryza alta具有生物量大、适应力强、抗逆能力强等优势，主要分布于美洲地区。由于未经过人工驯化，其对于光周期有较强敏感性，不适于在更高纬度地区(日照时间长)种植。因而，利用基因组编辑技术对高秆野生稻的抽穗期相关基因进行快速驯化，可以为培育适用于不同纬度地区种植的野生稻材料具有重要意义。

发明内容

本发明提供一种缩短水稻生育期的方法，包括降低水稻中OaGhd7蛋白和/或OaDTH7蛋白的含量和/或活性，从而缩短所述水稻的生育期。

所述OaGhd7蛋白为如下a1)或a2)或a3)蛋白质：

a1)氨基酸序列为SEQ ID No.4或SEQ ID No.5所示蛋白质；

a2)将SEQ ID No.4或SEQ ID No.5所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同生物学功能的蛋白质；

a3)与SEQ ID No.4或SEQ ID No.5限定的氨基酸序列具有80％或80％以上同一性，来源于水稻且具有相同生物学功能的蛋白质。

所述OaDTH7蛋白为如下b1)或b2)或b3)蛋白质：

b1)氨基酸序列为SEQ ID No.6或SEQ ID No.7所示蛋白质；

b2)将SEQ ID No.6或SEQ ID No.7所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同生物学功能的蛋白质；

b3)与SEQ ID No.6或SEQ ID No.7限定的氨基酸序列具有80％或80％以上同一性，来源于水稻且具有相同生物学功能的蛋白质。

上文中，所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

可选地，根据上述的方法，所述降低水稻中OaGhd7蛋白和/或OaDTH7蛋白的含量通过降低或抑制水稻中OaGhd7蛋白编码基因的表达量和/或OaDTH7蛋白编码基因的表达量实现。

所述OaGhd7蛋白编码基因为如下c1)或c2)或c3)或c4)所示的DNA分子：

c1)编码序列是SEQ ID No.8或SEQ ID No.9所示的DNA分子；

c2)核苷酸序列是SEQ ID No.12或SEQ ID No.13所示的DNA分子；

c3)与c1)或c2)限定的核苷酸序列具有90％或90％以上同一性，来源于水稻且编码所述OaGhd7蛋白的DNA分子；

c4)在严格条件下与c1)或c2)限定的核苷酸序列杂交，且编码所述OaGhd7蛋白的DNA分子。

所述OaDTH7蛋白编码基因为如下d1)或d2)或d3)或d4)所示的DNA分子：

d1)编码序列是SEQ ID No.10或SEQ ID No.11所示的DNA分子；

d2)核苷酸序列是SEQ ID No.14或SEQ ID No.15所示的DNA分子；

d3)与d1)或d2)限定的核苷酸序列具有90％或90％以上同一性，来源于水稻且编码所述OaDTH7蛋白的DNA分子；

d4)在严格条件下与d1)或d2)限定的核苷酸序列杂交，且编码所述OaDTH7蛋白的DNA分子。

这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。所述具有90％或90％以上同一性可为至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％的同一性。

降低或抑制水稻中OaGhd7蛋白编码基因的表达量和/或OaDTH7蛋白编码基因的表达量可采用现有技术中的任何方式实现，以使基因产生缺失突变、插入突变或碱基变换突变，进而实现基因功能降低或丧失，具体可以采取化学诱变、物理诱变、RNAi、基因组定点编辑、同源重组等方法。

无论采取哪种方法，既可对OaGhd7和OaDTH7蛋白的整个编码基因作为靶标，又可将调控编码OaGhd7和OaDTH7基因表达的各个元件作为靶标，只要能实现基因功能丧失或降低即可。如可以将OaGhd7和OaDTH7的编码基因的外显子作为靶标。

上述基因组定点编辑方法中，可采用锌指核酸酶(Zinc finger nuclease，ZFN)技术、类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease，TALEN)技术或成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关系统(Clustered regularlyinterspaced short palindromic repeats/CRISPR associated，CRISPR/Cas9 system)技术，以及其它能实现基因组定点编辑的技术。

可选地，根据上述的方法，包括向所述水稻中导入降低或抑制所述OaGhd7蛋白编码基因表达的物质。

所述降低或抑制所述OaGhd7蛋白编码基因表达的物质为如下e1)-e4)任一种物质：

e1)抑制或降低权利要求2中所述OaGhd7蛋白编码基因表达的核酸分子；

e2)含有e1)所述核酸分子的表达盒；

e3)含有e1)所述核酸分子的重组载体、或含有e2)所述表达盒的重组载体；

e4)含有e1)所述核酸分子的重组微生物、或含有e2)所述表达盒的重组微生物、或含有e3)所述重组载体的重组微生物。

可选地，根据上述的方法，e1)所述的核酸分子为表达靶向所述OaGhd7蛋白编码基因的gRNA的DNA分子或靶向所述OaGhd7蛋白编码基因的gRNA；所述靶向所述OaGhd7蛋白编码基因的gRNA的靶序列如SEQ ID No.1和/或SEQ ID No.2所示。

可选地，根据上述的方法，包括向所述水稻中导入降低或抑制所述OaDTH7蛋白编码基因表达的物质。

所述降低或抑制所述OaDTH7蛋白编码基因表达的物质为如下f1)-f4)任一种物质：

f1)抑制或降低权利要求2中所述OaDTH7蛋白编码基因表达的核酸分子；

f2)含有f1)所述核酸分子的表达盒；

f3)含有f1)所述核酸分子的重组载体、或含有f2)所述表达盒的重组载体；

f4)含有f1)所述核酸分子的重组微生物、或含有f2)所述表达盒的重组微生物、或含有f3)所述重组载体的重组微生物。

可选地，根据上述的方法，f1)所述的核酸分子为表达靶向所述OaDTH7蛋白编码基因的gRNA的DNA分子或靶向所述OaDTH7蛋白编码基因的gRNA；所述靶向所述OaDTH7蛋白编码基因的gRNA的靶序列如SEQ ID No.3所示。

上述方法中，可通过CRISPR/Cas9方法对OaGhd7蛋白编码基因和OaDTH7蛋白编码基因进行定点编辑，使植物中的OaGhd7蛋白编码基因和OaDTH7蛋白编码基因的表达量降低或被抑制，例如将表达Cas9蛋白和gRNA的重组质粒载体通过农杆菌的侵染实现外源基因向植物细胞的转移和整合，具体可使用下述实施例中制备的重组质粒CRISPR-DTH-3Target。

该CRISPR-DTH-3Target按照如下方法制备：将设计的OaGhd-CC和OaGhd-DD靶点引物通过融合PCR的方法分别构建到中间载体pOsU3-Ghd7-CCgRNA、pOsU6a-Ghd7-DDgRNA，靶点引物OaDTH7通过融合PCR的方法构建到中间载体pOsU3-OaDTH7gRNA，然后通过“金门克隆”的方法将片段与pYLCRISPR/Cas9Pubi-H载体骨架相连，得到重组载体，记作CRISPR-DTH-3Target。

上述方法适用于任何水稻，只有含有上述靶序列即可，本发明列举的例子为高秆野生稻(Oryza alta，CCDD，2n＝4x＝48)。

由于高秆野生稻为四倍体植物，因而上述方法为改造后得到的水稻可以是所有染色单体均被定点编辑的水稻，也可以是部分染色单体被定点编辑的水稻，该方法设计了3个靶点，任一一个靶点发挥作用，均可不同程度缩短水稻生育期。

上述的OaGhd7蛋白和/或上述的OaDTH7蛋白属于本发明的保护范围之内。

上述OaGhd7蛋白编码基因和/或上述OaDTH7蛋白编码基因也属于本发明的保护范围之内。

包括上述降低或抑制所述OaGhd7蛋白编码基因表达的物质和/或上述降低或抑制所述OaDTH7蛋白编码基因表达的物质的生物材料也属于本发明的保护范围之内。

本发明还提供了上述蛋白质、上述核酸分子或上述生物材料在调控水稻生育期中的应用或在制备调控水稻生育期产品中的应用。

上文中，所述调控水稻生育期可为缩短水稻发育期，例如缩短水稻的抽穗期和/或促进水稻提前开花。

本发明具体实施例通过编辑在四倍体野生稻中OaGhd7和OaDTH7基因组序列，实现长日照条件下生育期缩短，适合更高纬度地区种植的多倍体水稻，有利于多倍体水稻野生种质的利用与扩散。

附图说明

图1为实施例1阳性编辑苗和野生型的抽穗状态，其中，标尺为30cm，箭头处表示正在孕穗的分蘖。

图2为pYLCRISPR/Cas9Pubi-H载体部分骨架图和三靶点结构示意图。

图3为实施例2中制备敲除载体中第二轮PCR扩增表达盒电泳图，其中，方框处条带为目的条带。

图4为实施例2中制备敲除载体中菌液PCR电泳图，泳道1-12分别为不同的菌液样品。

图5为实施例2部分T₀代转化苗扩增OaGhd7-CC和OaGhd7-DD的扩增结果，其中，泳道1-12分别为不同T₀代转化苗的扩增结果。

图6为实施例2部分T₀代转化苗扩增OaDTH7-CC和OaDTH7-DD的扩增结果，其中，泳道1-12分别为不同T₀代转化苗的扩增结果。

图7为实施例2部分阳性编辑苗的测序结果。

图8为OaGhd7-CC基因组序列，即SEQ ID No.12。

图9为OaGhd7-DD基因组序列，即SEQ ID No.13。

图10-图12为OaDTH7-CC基因组序列，即SEQ ID No.14。

图13-图18为OaDTH7-DD基因组序列，即SEQ ID No.15。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

表达载体pYLsgRNA-OsU3、pYLsgRNA-OsU6a，双元载体pYLCRISPR/Cas9Pubi-H、CRISPR敲除载体构建方法在文献“Ma，X.，et al.A robust CRISPR/Cas9 system forconvenient，high-efficiency multiplex genome editing in monocot and dicotplants.Molecular Plant 8，1274-1284.(2015).”中公开过，公众可从中国科学院遗传与发育生物学研究所获得。

下述实施例中的四倍体野生稻为野生稻Oryza alta 2007-24，即为文献1中第906页左栏1.1中的高秆野生稻种质材料(O.alta Swallen，染色体组为CCDD，编号为YD-7900)，公众可从中国科学院遗传与发育生物学研究所或国家种质南宁野生稻圃获得。文献1：梁云涛等，高秆野生稻愈伤组织诱导分化研究，西南农业学报，2014，27(3)，905-909。

四倍体野生稻Oryza alta为异源四倍体，大部分基因在CC和DD亚基因组上都有拷贝。通过比对分析，Oryza alta中存在两个Ghd7的同源基因，一个位于CC亚基因组7号染色体上，命名为OaGhd7-CC；另一个位于DD亚基因组7号染色体上，命名为OaGhd7-DD。在Oryzaalta中同样存在两个DTH7的同源基因，位于DD亚基因组4号染色体上的基因命名为OaDTH7-CC(来源于Ct亚基因组)，位于DD亚基因7号染色体上的基因命名为OaDTH7-DD。

OaGhd7-CC的基因组序列如SEQ ID No.12所示，其编码的OaGhd7蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示，该蛋白的CDS如SEQ ID No.8所示。OaGhd7-DD的基因组序列如SEQID No.13所示，其编码的OaGhd7蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示，该蛋白的CDS如SEQID No.9所示。OaDTH7-CC的基因组序列如SEQ ID No.14所示，其编码的OaDTH7蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.6所示，该蛋白的CDS如SEQ ID No.10所示。OaDTH7-DD的基因组序列如SEQ ID No.15所示，其编码的OaDTH7蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示，该蛋白的CDS如SEQ ID No.11所示。

实施例1、阳性编辑苗的表型鉴定

将实施例2制备的阳性编辑苗T0-1、T0-2、T0-3、T0-4、T0-5和四倍体野生稻(O.alta，野生型)在苗期鉴定好基因型，种植在中国科学院遗传与发育生物学研究所温室进行炼苗，炼苗30天后移栽遗传与发育生物学研究所北京实验基地。田间自然条件下生长，采取正常农艺管理方式，当由营养生长期向生殖生长期转变时，注意观察田间表型并记录抽穗期时间。

其中，T0-1、T0-2、T0-3、T0-4、T0-5的突变类型，以T0-1、T0-2为例，OaGhd7-CC、OaGhd7-DD、OaDTH7-CC和OaDTH7-DD四个基因位点均发生移码突变，蛋白功能被破坏掉。以T0-5为例，OaDTH7-CC和OaDTH7-DD两个基因位点发生移码突变，蛋白功能被破坏掉(如图7)。

图1为移栽至北京110天时，不同阳性编辑苗和野生型的抽穗状态。观察田间表型发现，同时编辑控制生育期的4个基因，不同的等位基因组合导致不同的抽穗期。T0-1抽穗时间最短，在北京移栽后82天开花，而野生型在北京移栽后150天都不能抽穗。T0-2和T0-3在北京移栽92天后开花。T0-4、T0-5分别为103天和110天抽穗。同时，5个阳性编辑苗的株高均有降低，这和先前报道的DTH7、Ghd7调控株高的功能一致(如图1)。

本发明证明，在四倍体野生稻中，可以通过编辑OaGhd7和OaDTH7，实现长日照条件下生育期缩短，适合更高纬度地区种植的多倍体水稻，有利于多倍体水稻野生种质的利用与扩散。

实施例2、阳性编辑苗的制备

1、敲除载体的制备

一、靶序列的设计

根据OaGhd7-CC、OaGhd7-DD、OaDTH7-CC和OaDTH7-DD的基因组序列设计靶位点。

靶序列如下-：

Target site 1：5’-GGAGAAGTATGTGGCCTGTG-3’(SEQ ID No.1，对应于SEQ IDNo.12的第403位-第422位，PAM为TGG，可特异靶向OaGhd7-CC)

Target site 2：5’-CCGGTGCAGGAGTTCCAGTT-3’(SEQ ID No.2，对应于SEQ IDNo.13的第495位-第514位，PAM为CCG，可特异靶向OaGhd7-DD)

Target site 3：5’-GCTTCGTCACTGCATGTATG-3’(SEQ ID No.3，对应于SEQ IDNo.15的第483位-第502位，PAM为CCT，可同时靶向OaDTH7-CC和OaDTH7-DD)

二、gRNA的设计

根据上述靶序列，设计gRNA。

三、重组质粒的构建

合成下述带有接头序列(下划线部分)的单链引物：

U3-OaGhd7-CC-F：

5’-GGAGAAGTATGTGGCCTGTGGTTTTAGAGCTAGAAAT-3’

U3-OaGhd7-CC-R：

5’-CACAGGCCACATACTTCTCCTGCCACGGATCATCTGC-3’

U6a-OaGhd7-DD-F：

5’-AACTGGAACTCCTGCACCGGGTTTTAGAGCTAGAAAT-3’

U6a-OaGhd7-DD-R：

5’-CCGGTGCAGGAGTTCCAGTTCGGCAGCCAAGCCAGCA-3’

U3-OaDTH7-F：

5’-CATACATGCAGTGACGAAGCGTTTTAGAGCTAGAAAT-3’

U3-OaDTH7-R：

5’-GCTTCGTCACTGCATGTATGTGCCACGGATCATCTGC-3’

合成构建载体的单链引物

U-F：5’-CTCCGTTTTACCTGTGGAATCG-3’

gRNA-R：5’-CGGAGGAAAATTCCATCCAC-3’

以U-F、gRNA-R、U3-OaGhd7-CC-F、U3-OaGhd7-CC-R为引物，以pYLsgRNA-OsU3质粒为模板做融合PCR扩增出pOsU3-Ghd7-CCgRNA表达盒。以U-F、gRNA-R、U6a-OaGhd7-DD-F、U6a-OaGhd7-DD-R为引物，以pYLsgRNA-OsU6a质粒为模板做融合PCR扩增出pOsU6a-Ghd7-DDgRNA表达盒。以U-F、gRNA-R、U3-OaDTH7-F、U3-OaDTH7-R为引物，pYLsgRNA-OsU3质粒为模板做融合PCR扩增出pOsU3-OaDTH7gRNA表达盒。pOsU3-OaGhd7-CCgRNA表达盒表达靶向靶序列Target site 1的gRNA。pOsU6a-OaGhd7-DDgRNA表达盒表达靶向靶序列Target site 2的gRNA。pOsU3-OaDTH7gRNA表达盒表达靶向靶序列Target site 3的gRNA。

将PCR产物进行稀释10倍，作为第二轮PCR扩增模板。

合成第二轮PCR扩增引物(下划线为引入的BsaI酶切位点)：

B-L：5’-TTCAGAGGTCTCTCTCGACTAGTATGGAATCGGCAGCAAAGG-3’

B2：5’-AGCGTGGGTCTCGTCAGGGTCCATCCACTCCAAGCTC-3’

B2’：5’-TTCAGAGGTCTCTCTGACACTGGAATCGGCAGCAAAGG-3’

B3：5’-AGCGTGGGTCTCGTCTTCACTCCATCCACTCCAAGCTC-3’

B3’：5’-TTCAGAGGTCTCTAAGACTTTGGAATCGGCAGCAAAGG-3’

B-R：5’-AGCGTGGGTCTCGACCGACGCGTATCCATCCACTCCAAGCTC-3’

以B-L、B2为引物，以pOsU3-OaGhd7-CCgRNA表达盒为模板进行第二轮PCR扩增。以B2’、B3为引物，以pOs6a-OaGhd7-DDgRNA表达盒为模板进行第二轮PCR扩增。以B3’、B-R为引物，以pOsU3-OaDTH7gRNA表达盒为模板进行第二轮PCR扩增。

扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，分别回收片段大小为的564bp、629bp和564bp的目的条带，如图3。进行纯化回收。将第二轮纯化产物按照常规分子实验操作“边切边连”的方法构建到pYLCRISPR/Cas9Pubi-H(限制性内切酶为BsaI，连接酶为T4 ligase)。转化DH5α中，挑取单克隆，进行菌液PCR，选取条带大小为1.8kb左右的阳性单克隆进行测序确定(如图4，选择泳道6、8、11的样品进行测序)。测序引物为SP1(5’-CCGACATAGATGCAATAACTTC-3’)，将测序正确的重组质粒命名为CRISPR-DTH-3Target。

pYLCRIsPR/Cas9Pubi-H的部分载体骨架示意图如图2中A所示，其中，Pubi启动子、核定位信号序列(NLs)、Cas9编码基因(Cas9)、核定位信号序列(NLS)以及Tnos终止子依次连接。CRISPR-DTH-3Target中的三靶点序列结构示意图如图1中B所示，其中，OsU3启动子、OaGhd7-CC-sgRNA编码序列(表达靶向靶序列Target site 1的gRNA)、OsU6a启动子、OaGhd7-DD-sgRNA编码序列(表达靶向靶序列Target site 2的gRNA)、OsU3启动子、OaDTH7-sgRNA编码序列(表达靶向靶序列Target site 3的gRNA)依次连接。在质粒CRISPR-DTH-3Target中，在Tnos终止子后连接前述三靶点序列。

2、敲除水稻中Ghd7蛋白基因、DTH7蛋白基因构建阳性编辑苗

将质粒CRIsPR-DTH-3Target通过电激方法转化农杆菌EHA105，利用重组农杆菌侵染四倍体野生稻的愈伤组织，然后依次进行抗性筛选、分化再生、生根培养得到T0代转化苗。

设计OaGhd7在CC和DD亚基因组上的特异引物，将得到的T0代转化苗用特异引物扩增OaGhd7-CC和OaGhd7-DD(如图5)。设计OaDTH7在CC和DD亚基因组上的特异引物，将得到的转化苗用特异引物扩增OaDTH7-CC和OaDTH7-DD(如图6)。然后再进行测序确定突变类型，将含有突变的T0代转化苗命名为阳性编辑苗。图7为阳性编辑苗T0-1、T0-2和T0-5的突变类型，以T0-1、T0-2为例，OaGhd7-CC、OaGhd7-DD、OaDTH7-CC和OaDTH7-DD四个基因位点均发生移码突变，蛋白功能被破坏掉。以T0-5为例，OaDTH7-CC和OaDTH7-DD两个基因位点发生移码突变，蛋白功能被破坏掉(如图7)。

用于扩增OaGhd7-CC的引物对如下

OaGhd7-CC-F：5’-CAAGTCATCTCGCTGATCG-3’

OaGhd7-CC-R：5’-GATGCAAATCGACACGGCT-3’

用于扩增OaGhd7-DD的引物对如下

OaGhd7-DD-F：5’-GCCGTTTGATTTTCTCATCG-3’

OaGhd7-DD-R：5’-GTCGACCCCAGAGTTGTTTC-3’

用于扩增Oa DTH7-CC的引物对如下

OaDTH7-CC-F：5’-GCACAAGCACAGATGTGGAT-3’

OaDTH7-CC-R：5’-GATGCGGAGCAGAAAATTTA-3’

用于扩增OaDTH7-DD的引物对如下

OaDTH7-DD-F：5’-AAGCAGACATGCGGAGCTAG-3’

OaDTH7-DD-R：5’-AATGAGGAACAGAAAAATTG-3’

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

序列表

<110> 中国科学院遗传与发育生物学研究所

<120> 一种缩短水稻生育期的方法、蛋白质、核酸分子、生物材料及其应用

<130> 210485

<160> 11

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

ggagaagtat gtggcctgtg 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

ccggtgcagg agttccagtt 20

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gcttcgtcac tgcatgtatg 20

<210> 4

<211> 259

<212> PRT

<213> 野生稻(Oryza alta)

<400> 4

Met Ser Ile Val Pro Ala Gly Glu Val Cys Gly Leu Cys Gly Ala Asp

1 5 10 15

Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Cys Cys Cys Cys Cys His His

20 25 30

His His His His Asp Asp Gly Phe Ser Leu Phe Pro Pro Ser Ala Arg

35 40 45

Arg Gly Ile Ala Pro Ala Pro Pro Val Gln Glu Phe Arg Phe Phe Gly

50 55 60

Asn Asp Asp Ser Glu Ser Val Ala Trp Leu Phe Asp Asp Tyr Pro Pro

65 70 75 80

Pro Pro Gln Glu His Arg Ser Pro Ser Pro Val Ala Thr Gly Gln Pro

85 90 95

Leu Tyr Asp Val Val Ala Pro Pro Ser Leu Phe Gly Arg Asn Asn Gly

100 105 110

Ala Gly Gly Leu Thr Phe Glu Val Ser Leu Arg Gly Arg Pro Ala Ala

115 120 125

Val Asp Leu Asp Ala Gly Leu Gly Leu Gly Gly Ser Arg His Ala Glu

130 135 140

Ala Ala Ala Ser Ala Thr Ile Met Ser Tyr Arg Gly Ser Thr Phe Thr

145 150 155 160

Asp Ala Ala Ser Ser Thr Pro Lys Glu Val Ala Met Ala Asp Gly Gly

165 170 175

Glu Ser Leu Asn Pro Asn Ile Val Val Gly Ala Met Val Glu Arg Glu

180 185 190

Ala Lys Leu Met Arg Tyr Lys Glu Lys Lys Lys Lys Arg Cys Tyr Glu

195 200 205

Lys Gln Ile Arg Tyr Ala Ser Arg Lys Ala Tyr Ala Glu Met Arg Pro

210 215 220

Arg Val Arg Gly Arg Phe Ala Lys Glu Pro Glu Ala Val Ala Pro Pro

225 230 235 240

Leu Pro Pro Pro Ser Thr Tyr Asp Pro Ser Arg Leu Glu Leu Gly Arg

245 250 255

Trp Phe Arg

<210> 5

<211> 245

<212> PRT

<213> 野生稻(Oryza alta)

<400> 5

Met Ser Met Gly Pro Ala Gly Glu Gly Cys Gly Leu Cys Cys Ala Asp

1 5 10 15

Arg Gly Gly Cys Arg His Arg Asp Asp Gly Phe Pro Phe Leu Pro Pro

20 25 30

Ser Gly Arg Arg Ala Pro Ala Pro Pro Pro Val Gln Glu Phe Gln Phe

35 40 45

Phe Gly Asn Asp Val Val Asp Val Asp Asp Asp Ser Gly Ser Val Ala

50 55 60

Trp Ile Phe Asp Asp Tyr Pro Pro Gln Pro Gln Glu Gln Arg Ser Ser

65 70 75 80

Ser Gln Phe Gly Ser Pro Tyr Asp Val Val Ala Pro Ser Leu Phe Gly

85 90 95

Arg Asn Asn Gly Gly Gly Leu Thr Phe Glu Val Ser Leu Gly Gly Gln

100 105 110

Pro Ala Val Asn Val Asp Ala Arg Leu Gly Leu Cys Ser Gly Arg His

115 120 125

Ala Glu Ala Ala Ala Ser Ala Thr Ile Met Ser Tyr Cys Gly Ser Thr

130 135 140

Phe Thr Asp Ala Ala Ser Ser Thr Pro Lys Gly Val Val Met Ala Asp

145 150 155 160

Gly Gly Glu Arg Leu Asn Pro Asn Ile Val Val Gly Ala Met Val Glu

165 170 175

Arg Glu Ala Lys Leu Met Arg Tyr Lys Glu Lys Arg Lys Lys Arg Cys

180 185 190

Tyr Glu Lys Gln Ile Arg Tyr Ala Ser Arg Lys Ala Tyr Ala Asp Met

195 200 205

Arg Pro Arg Val Arg Gly Arg Phe Ala Lys Val Pro Glu Ala Val Ala

210 215 220

Pro Pro Leu Pro Pro Pro Ser Thr Tyr Asp Pro Ile Arg Leu Glu Leu

225 230 235 240

Gly Arg Trp Phe Arg

245

<210> 6

<211> 978

<212> PRT

<213> 野生稻(Oryza alta)

<400> 6

Met Met Gly Thr Ala His His Asn Gln Thr Ala Gly Ser Ala Leu Gly

1 5 10 15

Val Gly Val Gly Asp Ala Asn Asp Ala Met Pro Arg Pro Gly Gly Gly

20 25 30

Gly Gly Gly Tyr Ser Asp Pro Asp Gly Gly Pro Thr Ser Gly Val Gln

35 40 45

Pro Pro Pro Gln Val Cys Trp Glu Arg Phe Ile Gln Lys Lys Thr Ile

50 55 60

Lys Val Leu Leu Val Glu Ser Asp Asp Ser Thr Arg Gln Val Val Ser

65 70 75 80

Ala Leu Leu Arg Gln Cys Met Tyr Glu Val Ile Pro Ala Glu Asn Gly

85 90 95

Gln Gln Ala Trp Lys Tyr Leu Glu Asp Met Gln Asn Ser Ile Asp Leu

100 105 110

Val Leu Thr Glu Val Val Met Pro Gly Val Ser Gly Ile Ser Leu Leu

115 120 125

Ser Arg Ile Met Asn His Asn Ile Cys Lys Asn Ile Pro Val Ile Met

130 135 140

Met Ser Ser Asn Asp Ala Met Gly Thr Val Phe Lys Cys Leu Ser Lys

145 150 155 160

Gly Ala Val Asp Phe Leu Val Lys Pro Ile Arg Lys Asn Glu Leu Lys

165 170 175

Asn Leu Trp Gln His Val Trp Arg Arg Cys His Ser Ser Ser Gly Ser

180 185 190

Gly Ser Glu Ser Gly Ile Gln Thr Gln Lys Cys Ala Lys Ser Lys Ser

195 200 205

Gly Asp Glu Ser Asp Asn Asn Ser Gly Ser Asn Asp Asp Asp Asp Asp

210 215 220

Asp Gly Val Ser Met Gly Leu Asn Ala Arg Asp Gly Ser Asp Asn Gly

225 230 235 240

Ser Gly Thr Gln Ala Gln Ser Ser Trp Thr Lys Arg Ala Val Glu Ile

245 250 255

Asp Ser Pro Gln Ala Met Ser Pro Asp Gln Leu Ala Asp Pro Pro Asp

260 265 270

Ser Thr Cys Ala Gln Val Ile His Pro Lys Ser Glu Ile Cys Ser Asn

275 280 285

Arg Trp Leu Pro Cys Thr Ser Asn Lys Asn Cys Lys Lys Gln Lys Glu

290 295 300

Thr Asn Asp Asp Phe Lys Gly Lys Asp Leu Glu Ile Gly Ser Pro Arg

305 310 315 320

Asn Leu Asn Thr Ala Tyr Gln Ser Ser Pro Asn Glu Arg Ser Ile Lys

325 330 335

Pro Thr Asp Arg Arg Asn Glu Tyr Pro Leu Gln Asn Asn Ser Lys Glu

340 345 350

Ala Ala Met Glu Asn Leu Glu Glu Pro Ser Val Arg Ala Ala Asp Leu

355 360 365

Ile Gly Ser Met Ala Lys Asn Met Asp Ala Gln Gln Ala Ala Arg Ala

370 375 380

Ala Asn Ala Pro Asn Cys Ser Thr Lys Val Pro Glu Gly Lys Asp Lys

385 390 395 400

Asn Arg Asp Asn Ile Met Pro Ser Leu Glu Leu Ser Leu Lys Arg Ser

405 410 415

Arg Ser Thr Gly Asp Gly Ala Asn Ala Ile Gln Glu Glu Gln Arg Asn

420 425 430

Val Leu Arg Arg Ser Asp Leu Ser Ala Phe Thr Arg Tyr His Thr Pro

435 440 445

Val Val Ser Asn Gln Gly Gly Thr Gly Phe Val Gly Ser Cys Ser Pro

450 455 460

His Asp Asn Ser Ser Glu Ala Met Lys Thr Asp Ser Thr Tyr Asn Met

465 470 475 480

Lys Ser Asn Ser Asp Ala Ala Pro Ile Lys Gln Gly Ser Asn Gly Ser

485 490 495

Ser Asn Asn Asn Asp Met Gly Ser Thr Thr Lys Asn Val Val Thr Lys

500 505 510

Pro Ser Thr Asn Lys Glu Arg Val Met Pro Pro Ser Ala Val Lys Ala

515 520 525

Asn Gly His Thr Ser Ala Phe His Pro Ala Gln His Trp Thr Ser Pro

530 535 540

Ala Asn Thr Thr Gly Lys Glu Lys Thr Asp Glu Val Ala Asn Asn Ala

545 550 555 560

Ala Lys Arg Ala Gln Pro Gly Glu Val Gln Ser Asn Leu Val Gln His

565 570 575

Pro Arg Pro Ile Leu His Tyr Val His Phe Asp Val Ser Arg Glu Asn

580 585 590

Gly Gly Ser Gly Ala Pro Gln Cys Gly Ser Ser Asn Val Phe Asp Pro

595 600 605

Pro Val Glu Gly His Ala Ala Asn Tyr Gly Val Asn Gly Ser Asn Ser

610 615 620

Gly Ser Asn Asn Gly Ser Asn Gly Gln Asn Gly Ser Thr Thr Ala Val

625 630 635 640

Asn Pro Glu Arg Pro Asn Met Glu Ile Ala Asn Gly Thr Ile Asn Lys

645 650 655

Ser Gly Pro Gly Gly Gly Asn Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Asp

660 665 670

Met Tyr Leu Lys Arg Phe Thr Gln Arg Glu His Arg Val Ala Ala Val

675 680 685

Ile Lys Phe Arg Gln Lys Arg Lys Glu Arg Asn Phe Gly Lys Lys Val

690 695 700

Arg Tyr Gln Ser Arg Lys Arg Leu Ala Glu Gln Arg Pro Arg Val Arg

705 710 715 720

Gly Gln Phe Val Arg Gln Ala Val Gln Asp Gln Gln Gln Gln Gly Glu

725 730 735

Arg Asp Asn Pro Pro Asn Leu Gln Gly Ser Ala Ser Ser Thr Ser Thr

740 745 750

Ser Thr Val Met Lys Gln Asp Gln Asp Ser Phe Gln Leu Ala Ala Asn

755 760 765

Lys Asp Ile Leu Val Ser Asn Gly Ser Ser Glu Asn Arg Arg Ile Ala

770 775 780

Ala Arg Thr Phe Thr Phe Arg Glu Leu Ala Ala Ala Thr Ser Asn Phe

785 790 795 800

Arg Ala Asp Cys Leu Leu Gly Glu Gly Gly Phe Gly Arg Val Tyr Lys

805 810 815

Gly Tyr Leu Glu Thr Val Asn Gln Ala Ser Asn Arg Glu Phe Leu Val

820 825 830

Glu Val Leu Met Leu Ser Met Leu His His Pro Asn Leu Val Asn Leu

835 840 845

Leu Gly Tyr Cys Ala Asp Gly Asp Gln Arg Leu Leu Val Tyr Glu Tyr

850 855 860

Leu Pro Leu Gly Ser Leu Glu Asp His Leu His Gly Leu Ala Val Ile

865 870 875 880

Cys Phe His Pro Phe Ile Phe Gly Gly Val Gln Phe Gln Ala Arg Pro

885 890 895

Leu Phe Lys Asp Arg Arg Lys Phe Pro Gln Met Ala Asp Pro Ala Leu

900 905 910

His Gly Gln Tyr Pro Ser Arg Gly Leu Tyr Gln Ala Leu Ala Val Ala

915 920 925

Ala Met Cys Val Gln Glu Gln Pro Thr Met Arg Pro Leu Ile Arg Asp

930 935 940

Val Val Thr Ala Leu Ala Tyr Leu Ala Ser Gln Thr Tyr Asp Pro Glu

945 950 955 960

Ala His Gly Val His His Thr Ser Arg Leu Met Ser Pro Asp Thr Gln

965 970 975

Gly Val

<210> 7

<211> 743

<212> PRT

<213> 野生稻(Oryza alta)

<400> 7

Met Met Gly Thr Pro His His Asn Gln Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ser

1 5 10 15

Ala Leu Gly Ile Gly Asp Ala Asn Asp Thr Val Pro Gly Pro Gly Gly

20 25 30

Gly Gly Tyr Ser Asp Pro Asp Gly Gly Pro Thr Ser Gly Val Gln Pro

35 40 45

Pro Pro Gln Val Tyr Trp Glu Arg Phe Ile Gln Lys Lys Thr Ile Lys

50 55 60

Val Leu Leu Val Glu Ser Asp Asp Ser Thr Arg Leu Val Val Thr Ala

65 70 75 80

Leu Leu Arg His Cys Met Tyr Glu Val Ile Pro Ala Glu Asn Gly Gln

85 90 95

Gln Ala Trp Thr Tyr Leu Glu Asp Met Gln Asn Ser Ile Asp Leu Val

100 105 110

Leu Thr Glu Val Val Met Pro Gly Val Ser Glu Ile Ser Leu Leu Ser

115 120 125

Arg Ile Met Asn His Asn Ile Cys Lys Asn Ile Pro Val Ile Met Met

130 135 140

Ser Ser Asn Asp Ala Met Gly Thr Val Phe Lys Cys Leu Ser Lys Gly

145 150 155 160

Ala Leu Asp Phe Leu Val Lys Pro Ile Arg Thr Asn Glu Leu Lys Asn

165 170 175

Leu Trp Gln His Gly Trp Arg Arg Tyr His Ser Ser Ser Gly Ser Gly

180 185 190

Ser Glu Ser Gly Ile Gln Thr Gln Lys Cys Ala Lys Ser Lys Ser Gly

195 200 205

Asp Glu Ser Asp Asn Asn Ser Gly Ser Asn Asp Asp Asp Glu Asp Asp

210 215 220

Gly Val Ser Met Gly Leu Asn Ala Arg Asp Gly Ser Asp Asn Gly Ser

225 230 235 240

Gly Thr Gln Ala Gln Ser Ser Trp Thr Lys Arg Ala Val Glu Ile Asp

245 250 255

Ser Pro Gln Ala Ile Ser Pro Asp Gln Leu Ala Asp Pro Pro Asp Ser

260 265 270

Thr Cys Ala Gln Val Ile His Pro Lys Ser Glu Ile Cys Ser Asn Arg

275 280 285

Trp Leu Pro Cys Thr Ser Asn Lys Asn Cys Lys Lys Gln Lys Glu Thr

290 295 300

Asn Asp Asp Phe Lys Gly Lys Asp Leu Glu Ile Gly Ser Pro Arg Asn

305 310 315 320

Leu Asn Thr Ala Tyr Gln Ser Ser Pro Lys Glu Arg Ser Ile Lys Pro

325 330 335

Thr Asp Arg Arg Ser Glu Tyr Pro Leu Gln Asn Asn Ser Lys Glu Ala

340 345 350

Thr Met Glu Asn Leu Glu Glu Ser Thr Val Arg Ala Ala Asp Leu Ile

355 360 365

Gly Ser Met Ala Lys Asn Val Asp Ala Gln Gln Ala Ala Arg Ala Ala

370 375 380

Asn Ala Pro Asn Cys Ser Thr Lys Val Pro Glu Gly Lys Asp Lys Asn

385 390 395 400

His Asp Asn Ile Met Pro Ser Leu Glu Leu Ser Leu Lys Arg Ser Arg

405 410 415

Ser Thr Ala Asp Gly Ala Asn Ala Ile Gln Glu Glu Gln Arg Asn Val

420 425 430

Leu Arg Arg Ser Asp Leu Ser Ala Phe Thr Arg Tyr His Thr Pro Val

435 440 445

Ala Ser Asn Gln Gly Gly Thr Gly Phe Val Gly Ser Cys Ser Pro His

450 455 460

Asp Asn Ser Ser Glu Ala Met Lys Thr Asp Ser Thr Tyr Asn Met Lys

465 470 475 480

Ser Asn Ser Asp Ala Ala Pro Ile Lys Gln Gly Ser Asn Gly Ser Ser

485 490 495

Asn Asn Asn Asp Met Gly Ser Thr Thr Lys Asn Val Val Thr Lys Pro

500 505 510

Ser Thr Asn Arg Glu Arg Val Met Ser Pro Ser Ala Val Lys Ala Asn

515 520 525

Gly His Thr Ser Ala Phe His Pro Ala Gln His Trp Thr Ser Pro Ala

530 535 540

Asn Thr Thr Gly Lys Glu Lys Thr Asp Glu Val Ala Asn Asn Ala Ala

545 550 555 560

Lys Arg Ala Gln Pro Gly Glu Val Gln Ser Asn Leu Val Gln His Pro

565 570 575

Arg Pro Ile Leu His Cys Val His Phe Asp Val Ser Arg Glu Asn Gly

580 585 590

Gly Ser Gly Pro Pro Gln Cys Gly Ser Ser Asn Val Phe Asp Pro Pro

595 600 605

Val Glu Gly His Ala Ala Asn Tyr Gly Val Asn Gly Ser Asn Ser Gly

610 615 620

Ser Asn Asn Gly Ser Asn Gly Gln Asn Gly Ser Thr Thr Thr Val Asn

625 630 635 640

Ala Glu Arg Pro Asn Met Glu Ile Ala Asn Gly Thr Ile Asn Lys Ser

645 650 655

Gly Pro Gly Gly Gly Asn Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Asn Asp Ile

660 665 670

Tyr Leu Lys Arg Phe Thr Gln Arg Glu His Arg Val Ala Ala Val Ile

675 680 685

Lys Phe Arg Gln Lys Arg Lys Glu Arg Asn Phe Gly Lys Lys Val Ala

690 695 700

Tyr Gln Ser Arg Lys Arg Leu Ala Glu Gln Arg Pro Arg Val Arg Gly

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Gln Phe Val Arg Gln Ala Val Gln Asp Gln Gln Gln His Gly Gly Gly

725 730 735

Arg Glu Ala Ala Ala Asp Arg

740

<210> 8

<211> 780

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

atgtcgattg taccagccgg agaagtatgt ggcctgtgtg gcgccgatgg cagcggtggc 60

agtggcggtg gcggctgctg ttgctgctgc caccaccacc accaccacga cgatggattc 120

tcgttgttcc caccgagtgc acgccggggt atcgccccgg ccccgccggt gcaggagttc 180

cggttcttcg gcaacgacga cagcgagagt gtggcctggc tgttcgacga ctacccgccg 240

ccgccccagg agcaccgctc gccgtcgccc gttgccaccg ggcagccgct gtacgacgtc 300

gtggcgccgc cgtcgctgtt cgggaggaac aacggcgccg gcgggctcac gttcgaggtc 360

tccctccgtg gacgacccgc agccgtcgac ttggacgccg ggctcggcct cggcggcagc 420

cggcacgccg aggctgcggc gagcgccacc atcatgtcat atcgtgggag cacgttcact 480

gacgctgcaa gctcgacacc caaggaggtg gccatggctg atggtgggga gagcttgaac 540

ccaaacattg tggttggcgc aatggtggaa agagaggcca agttgatgag gtacaaggag 600

aaaaagaaga agcgatgcta cgagaagcaa atccgatacg cgtccagaaa agcttatgcc 660

gaaatgaggc cccgagtgag aggtcgcttt gccaaagaac ctgaagctgt cgcaccgcca 720

ttgccaccgc catccaccta tgaccctagt aggcttgagc ttggacgatg gttcagatag 804

<210> 9

<211> 738

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

atgtcgatgg ggccagccgg agagggatgc ggcctgtgct gtgcggaccg cggcggctgc 60

cgccaccgcg atgacggctt ccccttcctc ccacctagtg ggcgccgggc cccggcgcct 120

ccgccggtgc aggagttcca gttcttcggc aacgacgtcg tcgacgtcga cgacgatagc 180

gggagcgtgg cctggatctt cgatgactac ccaccgcagc cgcaggagca gcgctcgtcg 240

tcgcagttcg gttcgccgta cgacgtcgtg gcgccgtcgc tgttcgggag gaacaacggc 300

ggcgggctca cgttcgaggt ctccctcggc ggacagcccg ccgtcaacgt ggacgccaga 360

cttggcctct gcagcggccg gcacgcggag gccgcggcga gcgccaccat catgtcatat 420

tgtgggagca cgttcactga tgctgcaagc tcgacaccca agggggtggt catggctgat 480

ggcggggaga ggttgaaccc aaacatcgtg gttggcgcaa tggtggagag agaggccaag 540

ctgatgaggt acaaggagaa gaggaagaag cggtgctacg agaagcaaat ccggtacgcg 600

tctagaaaag cctatgccga tatgaggcca cgggtgagag gtcgcttcgc caaagtacct 660

gaagctgtcg caccgccatt gccgccgcca tccacctatg accctattag gcttgagctt 720

ggacgatggt tcagatag 762

<210> 10

<211> 2937

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

atgatgggaa ccgcccatca caaccaaacc gccggctctg ccctcggagt cggagtcgga 60

gatgccaacg acgccatgcc taggcctggg ggtgggggtg ggggctacag cgacccggat 120

ggtggaccaa cctccggtgt gcagccgcca ccgcaggtct gctgggagcg cttcatccag 180

aagaagacca tcaaagtctt gctagttgag agtgatgact ccactaggca ggtggtcagt 240

gccctgcttc gtcagtgcat gtatgaagtc atccctgctg aaaatggcca gcaagcatgg 300

aaatatctag aagatatgca aaacagcatt gatcttgttt tgacagaggt tgttatgcct 360

ggtgtatctg gaatttctct attgagtagg atcatgaacc acaatatttg caagaatatt 420

ccagtgatta tgatgtcttc aaatgatgct atgggtacag tttttaagtg tttgtcaaaa 480

ggcgctgttg acttcttagt caagcccata cgtaagaatg aacttaagaa cctatggcag 540

catgtgtgga gacggtgcca cagctccagt ggcagtggaa gtgaaagtgg cattcagaca 600

caaaagtgtg ccaaatcaaa aagtggggat gaatccgata ataacagtgg cagcaatgat 660

gatgatgatg acgatggtgt aagcatggga cttaatgcaa gagatggcag tgataacggc 720

agtggcactc aagcgcagag ctcatggaca aagcgtgctg ttgagattga cagtccacag 780

gctatgtctc cagatcaatt agctgatcca cctgatagca cttgtgcaca agtgatccac 840

ccgaagtcag agatatgcag caatagatgg ttaccatgta caagcaacaa aaattgcaag 900

aaacaaaaag aaactaatga tgacttcaag gggaaggact tggaaatagg ttcccctaga 960

aatttaaaca cagcttatca atcctctccg aatgagagat ccatcaaacc aacagataga 1020

cggaatgaat atccactgca aaacaattca aaggaggcag cgatggaaaa tctggaggag 1080

ccaagtgttc gagctgctga cttaattggt tcgatggcca aaaacatgga tgcgcaacag 1140

gcagcaagag cggcaaatgc ccctaattgc tccaccaaag tgccagaagg gaaagataag 1200

aaccgtgata atattatgcc atcacttgaa ttaagtctga aaaggtcaag atcgactggg 1260

gatggtgcaa atgcaatcca agaggaacaa cggaatgttt tgagacgatc agatctctcg 1320

gcatttacaa ggtaccatac acctgtggtt tccaatcaag gtgggacagg attcgtggga 1380

agttgttcgc cgcatgataa cagctcagag gctatgaaaa cggattctac ttacaacatg 1440

aagtcaaact cagatgctgc gccaataaaa caaggttcta atggtagtag caataacaat 1500

gacatgggtt ccactacaaa gaacgttgtg acaaagccta gtacaaataa ggagagagta 1560

atgccaccct cagctgttaa ggctaatgga cacacatcag catttcatcc tgcgcagcac 1620

tggacgtctc cagctaatac aacaggaaaa gaaaagactg atgaagtggc taacaatgca 1680

gcaaagaggg ctcagcctgg tgaagtacag agcaacctcg tacagcaccc tcgcccaata 1740

cttcattatg ttcatttcga tgtgtcacgt gagaatggtg gatccggggc ccctcaatgt 1800

ggttcatcca atgtatttga tcctcctgtt gaaggtcatg ctgccaacta tggtgtcaat 1860

ggaagcaact cagggagtaa caatggaagc aatgggcaga atgggagtac gactgctgta 1920

aatcctgaac ggccaaatat ggagatcgct aatggcacca tcaacaaaag tggacctgga 1980

ggtggcaatg gaagtggaag cggcagtggc aatgacatgt atctgaaacg cttcactcaa 2040

cgagagcata gagtggctgc agtgatcaaa tttagacaga aaaggaaaga acgcaacttc 2100

ggaaaaaagg tgcggtacca gagcagaaag aggctggccg agcagcggcc aagggtccgt 2160

ggacagttcg tgcggcaagc tgtgcaagac caacaacagc agggtgaaag agataaccca 2220

ccaaacctgc agggctcggc ctcatcgaca tcgacatcga cagtgatgaa gcaggatcag 2280

gattcgtttc aattagctgc taacaaggac atccttgtga gcaatggatc atccgagaac 2340

cgccgcattg cagctcggac cttcaccttc agggagctcg ctgcggccac aagcaacttc 2400

agagccgatt gcctgctcgg ggagggcggt tttggacgag tgtacaaagg ctatttggag 2460

actgtcaacc aggctagcaa cagggagttt cttgttgaag ttcttatgct cagcatgctg 2520

caccacccaa atcttgttaa ccttcttgga tattgcgctg atggtgatca gaggctttta 2580

gtttatgagt atttgccatt aggttctttg gaagaccatc ttcacggact tgctgtaatc 2640

tgtttccatc cattcatatt tggtggtgta caatttcagg cccggccctt gttcaaggac 2700

aggaggaagt tcccccagat ggcagatcca gcgcttcatg gtcagtatcc atcgagagga 2760

ttgtaccagg ccttggctgt tgctgcgatg tgtgtccaag agcaaccgac catgagaccc 2820

ctgatcaggg atgttgttac agctctcgct taccttgcct ctcagactta tgatccagag 2880

gcacatggag tccatcacac gtcgcgtttg atgtctcctg acacacaagg tgtatga 3033

<210> 11

<211> 2232

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

atgatgggaa ccccccatca caaccaagca gccgccgccg ccgcttctgc actcggaatc 60

ggagatgcca acgacaccgt gcctgggcct gggggtgggg gctacagcga cccggatggc 120

ggaccaacct ccggcgtgca gccgccacct caggtctact gggagcgctt catccagaag 180

aagaccatca aagtcttact agttgagagt gatgactcca ccaggctggt ggtcactgcc 240

ctgcttcgtc actgcatgta tgaagtcatc cctgctgaaa atggccagca agcatggaca 300

tatctagaag atatgcaaaa cagcattgat cttgttttga cagaggttgt tatgcctggt 360

gtatctgaaa tttctctatt gagtaggatc atgaaccaca atatttgcaa gaatattcca 420

gtgattatga tgtcttcaaa tgatgctatg ggtacagttt ttaaatgttt gtcaaaaggc 480

gctcttgact tcttagtcaa gcctatacgt acgaatgaac ttaagaacct atggcagcat 540

gggtggagac ggtaccacag ctccagtggc agtggaagtg aaagtggcat tcagacacaa 600

aagtgtgcca aatcaaaaag tggggatgaa tccgataata acagtggcag caatgatgat 660

gatgaagacg atggtgtaag catgggactt aatgcaagag atggcagtga taatggcagt 720

ggcactcaag cacagagctc atggacaaag cgtgctgttg agattgacag tccacaggct 780

atatctccag atcaattagc tgatccacct gatagcactt gtgcacaagt gatccacccg 840

aagtcagaga tatgcagcaa tagatggtta ccatgtacaa gcaacaaaaa ttgcaagaaa 900

caaaaagaaa ctaatgatga cttcaagggg aaggatttgg aaataggttc acctagaaat 960

ttaaacacag cctatcaatc ttcaccgaaa gagagatcca tcaaaccaac agatagacgt 1020

agtgaatatc cactgcaaaa caattcaaag gaggcaacga tggaaaatct ggaggaatca 1080

actgttcgag ctgctgactt aattggttca atggccaaaa acgtggatgc acaacaggca 1140

gcaagagccg caaatgcccc taattgctcc accaaagtgc cagaagggaa agataagaac 1200

catgataata ttatgccatc acttgaattg agtttgaaaa ggtcaagatc gactgcggat 1260

ggtgcaaatg caatccaaga ggaacaacga aatgtattga gacgatcaga tctctcggca 1320

tttacgaggt accatacacc tgtggcttcc aatcaaggtg ggacaggatt cgtgggaagc 1380

tgttcgccgc atgataacag ctcagaggct atgaaaacgg attctactta caacatgaag 1440

tcaaactcag atgctgcgcc aataaaacaa ggttctaatg gtagtagcaa taacaatgac 1500

atgggttcca ctacaaagaa cgttgtgact aaacctagta caaataggga gagagtaatg 1560

tcaccctcag ctgttaaggc taatggacac acatcagcat ttcatcctgc gcagcactgg 1620

acgtctccag ctaatacaac aggaaaagaa aagactgatg aagtggctaa caatgcagca 1680

aagagggctc agcctggtga agtacagagc aacctcgtac agcaccctcg cccaatactt 1740

cattgtgttc atttcgatgt gtcacgtgag aatggtggat ccgggccccc tcaatgtggt 1800

tcatccaatg tatttgatcc tcctgtcgaa ggtcatgctg ccaactatgg tgtcaatgga 1860

agcaactcag gcagtaacaa tggaagcaac gggcagaatg ggagtacgac tactgtaaat 1920

gctgaacggc caaatatgga gatcgctaat ggcaccatca acaaaagtgg tcctggaggt 1980

ggcaatggaa gtggaagcgg cagtggaaat gacatatatc tgaaacgctt cactcaacga 2040

gagcatagag tggctgcagt gatcaaattt agacagaaaa ggaaagaacg caactttggg 2100

aaaaaggtag cgtaccagag cagaaagagg ctggccgagc agcggccaag ggtccgtgga 2160

cagtttgtgc ggcaagcagt gcaagaccaa caacaacacg gtggtgggcg cgaagcggca 2220

gcggacagat ga 2306

Claims

1.一种缩短水稻生育期的方法，其特征在于：包括同时降低水稻中OaGhd7蛋白和OaDTH7蛋白的含量和/或活性或者降低水稻中OaDTH7蛋白的含量和/或活性，从而缩短所述水稻的生育期，所述生育期为抽穗期；

所述OaGhd7蛋白为氨基酸序列为SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示蛋白质；

所述OaDTH7蛋白为氨基酸序列为SEQ ID No.6和SEQ ID No.7所示蛋白质。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述降低水稻中OaGhd7蛋白和OaDTH7蛋白的含量通过降低或抑制水稻中OaGhd7蛋白编码基因的表达量和OaDTH7蛋白编码基因的表达量实现，所述降低水稻中OaDTH7蛋白的含量通过降低或抑制OaDTH7蛋白编码基因的表达量实现；

所述OaGhd7蛋白编码基因为如下c1）或c2）所示的DNA分子：

c1）编码序列是SEQ ID No.8和SEQ ID No.9所示的DNA分子；

c2）核苷酸序列是SEQ ID No.12和SEQ ID No.13所示的DNA分子；

所述OaDTH7蛋白编码基因为如下d1）或d2）所示的DNA分子：

d1）编码序列是SEQ ID No.10和SEQ ID No.11所示的DNA分子；

d2）核苷酸序列是SEQ ID No.14和SEQ ID No.15所示的DNA分子。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：包括向水稻中导入降低或抑制所述OaGhd7蛋白编码基因表达的物质；

所述降低或抑制所述OaGhd7蛋白编码基因表达的物质为如下e1）-e4）任一种物质：

e1）抑制或降低权利要求2中所述OaGhd7蛋白编码基因表达的核酸分子；

e2）含有e1）所述核酸分子的表达盒；

e3）含有e1）所述核酸分子的重组载体、或含有e2）所述表达盒的重组载体；

e4）含有e1）所述核酸分子的重组微生物、或含有e2）所述表达盒的重组微生物、或含有e3）所述重组载体的重组微生物。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：

e1）中所述的核酸分子为表达靶向所述OaGhd7蛋白编码基因的gRNA的DNA分子或靶向所述OaGhd7蛋白编码基因的gRNA；

所述靶向所述OaGhd7蛋白编码基因的gRNA的靶序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：包括向水稻中导入降低或抑制所述OaDTH7蛋白编码基因表达的物质；

所述降低或抑制所述OaDTH7蛋白编码基因表达的物质为如下f1）-f4）任一种物质：

f1）抑制或降低权利要求2中所述OaDTH7蛋白编码基因表达的核酸分子；

f2）含有f1）所述核酸分子的表达盒；

f3）含有f1）所述核酸分子的重组载体、或含有f2）所述表达盒的重组载体；

f4）含有f1）所述核酸分子的重组微生物、或含有f2）所述表达盒的重组微生物、或含有f3）所述重组载体的重组微生物。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：

f1）中所述的核酸分子为表达靶向所述OaDTH7蛋白编码基因的gRNA的DNA分子或靶向所述OaDTH7蛋白编码基因的gRNA；

所述靶向所述OaDTH7蛋白编码基因的gRNA的靶序列如SEQ ID No.3所示。

7.蛋白质，其特征在于：所述蛋白质为权利要求1中所述的OaGhd7蛋白和/或权利要求1中所述的OaDTH7蛋白。

8.核酸分子，其特征在于：所述核酸分子为权利要求2中所述OaGhd7蛋白编码基因和/或权利要求2中所述OaDTH7蛋白编码基因。

9.生物材料，其特征在于：所述生物材料包括权利要求3或4中所述降低或抑制所述OaGhd7蛋白编码基因表达的物质和/或权利要求5或6中所述降低或抑制所述OaDTH7蛋白编码基因表达的物质。