CN112891423B - 中药发酵液在肠道菌群重建药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种中药发酵液在制备肠道菌群重建药物中的用途,属于医药技术领域。本发明的中药组合物在制备肠道菌群重建药物中的用途,所述中药发酵液采用包括以下重量份的活性成份发酵得到:刺梨5~100份,余甘子5~100份,蜂蜜5~100份,核桃1~30份,柠檬1~30份。本发明的发酵中药具有优异的恢复肠道菌群的作用。动物实验表明能够增加肠道菌群多样性;在门水平上改善拟杆菌门、疣微菌门、变形菌门中的至少一种的丰度;在属水平上改善拟杆菌属、艾克曼菌属、副拟杆菌属、毛螺菌属、葡萄球菌属、假单胞菌属中的至少一种的丰度。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药发酵液在制备肠道菌群重建药物中的用途,属于医药技术领域。
背景技术
人体的肠道中存在着数目庞大的微生物菌群,种类多达500-1000种,数量是人体细胞数量的十倍。这些菌群相互作用,构成了复杂而相对稳定的微生态系统,参与人体免疫调节、生物拮抗、抑制肿瘤、脂质代谢和营养吸收等众多过程。健康情况下,肠道菌群在肠胃中形成一个平衡稳定的微生态系统,维持身体健康,而一旦菌群比例大幅改变,平衡被打破,会造成菌群失调,从而引起消化不良、肥胖、肿瘤、抑郁症等多种疾病。
引起菌群失调的因素有很多,其中之一就是抗生素滥用。抗生素的长期大量使用,会在杀死敏感病原菌的同时,破坏肠道中正常菌群的平衡,打破肠道微生态系统稳定,导致肠道菌群失调,从而引起免疫力下降和肠道消化功能障碍,并导致腹泻。
专利申请CN201710226412.0中公开了一种改善机体循环的中药复方,该复方以彝族传统医药理论为指导,以刺梨、余甘子、蜂蜜、核桃和柠檬组成,通过粉碎或切片后,经醇提、渗漉后,收集提取液或渗漉液,加入蜂蜜混合均匀,制备成口服制剂;或取所述药材或食材经发酵或浸泡制得口服制剂。
发明内容
本发明的目的是提供一种CN2017102264120公开的中药组合物在制备肠道菌群重建药物中的新用途。
为达到本发明的目的,所述中药发酵液采用包括以下重量份的活性成份发酵得到:刺梨 5~100份,余甘子5~100份,蜂蜜5~100份,核桃1~30份,柠檬1~30份。
在一种具体实施方式中,所述刺梨20~80份,余甘子8~30份,蜂蜜10~50份,核桃2~10份,柠檬2~10份。
在一种具体实施方式中,将所述刺梨、余甘子、蜂蜜、核桃、柠檬与水混合,在15~40℃,避光,密封条件发酵30~300天得到;
所述水为刺梨、余甘子、蜂蜜、核桃、柠檬总量的2~6倍。
在一种具体实施方式中,所述水为刺梨、余甘子、蜂蜜、核桃、柠檬总量的3~5倍。
在一种具体实施方式中,所述肠道菌群重建包括增加肠道菌群多样性。
在一种具体实施方式中,所述肠道菌群重建包括改善拟杆菌门、疣微菌门、变形菌门中的至少一种的丰度。
在一种具体实施方式中,所述肠道菌群重建包括改善拟杆菌属、艾克曼菌属、副拟杆菌属、毛螺菌属、葡萄球菌属、假单胞菌属中的至少一种的丰度。
有益效果:
本发明的发酵中药具有优异的恢复肠道菌群的作用。动物实验表明能够增加肠道菌群多样性。在门水平上改善拟杆菌门、疣微菌门、变形菌门中的至少一种的丰度。在属水平上改善拟杆菌属、艾克曼菌属、副拟杆菌属、毛螺菌属、葡萄球菌属、假单胞菌属中的至少一种的丰度。
附图说明
图1群落组成分析(平均值);
A门水平上肠道菌群相对丰度;B属水平上肠道菌群相对丰度;
图2小鼠回盲肠菌群的Alpha多样性分析图;
图3小鼠回盲肠菌群Beta多样性PCoA分析图。
具体实施方式
为达到本发明的目的,所述中药发酵液采用包括以下重量份的活性成份发酵得到:刺梨 5~100份,余甘子5~100份,蜂蜜5~100份,核桃1~30份,柠檬1~30份。
在一种具体实施方式中,所述刺梨20~80份,余甘子8~30份,蜂蜜10~50份,核桃2~10份,柠檬2~10份。
在一种具体实施方式中,将所述刺梨、余甘子、蜂蜜、核桃、柠檬与水混合,在15~40℃,避光,密封条件发酵30~300天得到;
所述水为刺梨、余甘子、蜂蜜、核桃、柠檬总量的2~6倍。
在一种具体实施方式中,所述水为刺梨、余甘子、蜂蜜、核桃、柠檬总量的3~5倍。
在一种具体实施方式中,所述肠道菌群重建包括增加肠道菌群多样性。
在一种具体实施方式中,所述肠道菌群重建包括改善拟杆菌门、疣微菌门、变形菌门中的至少一种的丰度。
在一种具体实施方式中,所述肠道菌群重建包括改善拟杆菌属、艾克曼菌属、副拟杆菌属、毛螺菌属、葡萄球菌属、假单胞菌属中的至少一种的丰度。
下面结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步的描述,并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
实施例1
取刺梨300g、余甘子250g、蜂蜜600g、核桃650g、柠檬600g,加入上述组方总重量4倍的水,置阴凉处室温15~40℃发酵300天,过滤,收集发酵液,分装成100ml/瓶,即得,标记为解本JB10。
实施例2
取刺梨650g、余甘子150g、蜂蜜120g、核桃30g、柠檬30g,加入上述组方总重量4倍的水,在15~40℃,避光,密封,发酵300天,过滤,收集发酵液,分装成100ml/瓶,即得,标记为解本JB303。
试验例1
(1)小鼠肠道菌群失调模型建立
将实适应性喂养一周的昆明小鼠,随机留下4只雌鼠和4只雄鼠作为正常对照组(Normal 组),其余50只灌胃给予盐酸林可霉素溶液,12mL/kg,每天2次,连续7天,正常对照组灌胃给予等体积的生理盐水。7d后,将拉肚子的小鼠分别选取4只雌鼠和4只雄鼠,处死,作为模型组(Model组),无菌条件下收集小鼠回盲肠部粪便,并观察粪便性状,-20℃冻存,进行16S rRNA检测。
(2)小鼠分组及药物处理
将拉肚子的小鼠随机分组,雌雄各半,每组8只。分别为实施例1产品高剂量(JB10H组)、实施例1产品低剂量(JB10L组)、实施例2产品高剂量(JB303H组)、实施例2产品低剂量(JB303L 组)和自然恢复组(Control组)。高剂量实验组灌胃给予JB10和JB303,低剂量实验组先将JB10 和JB303用生理盐水稀释一倍后使用。12mL/kg,每天2次,连续7天,正常对照组灌胃给予等体积的生理盐水。7d后观察小鼠拉肚子的情况,然后处死小鼠,无菌收集各组回盲肠部粪便,并观察粪便性状,-20℃保存,进行16S rRNA检测。
(3)肠道菌群的检测与分析
使用DNA提取试剂盒对小鼠粪便样本进行总基因组DNA抽提,检测DNA完整性和浓度之后,对样本的16S rRNA基因V4区域进行扩增,扩增引物序列为515F (5’-GTGYCAGCMGCCGCGGTAA-3’)和806R(5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’)。扩增后对目的片段进行电泳检测,检测合格的样品,取目的条带进行回收,构建文库进行高通量测序。测序结果经过拼接过滤,得到高质量目标序列,进行生物信息学分析。其中群落组成分析、Alpha多样性分析和Beta多样性分析结果分别见图1-3。
由图1的A图可知,在门水平上,林可霉素可导致拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度急剧下降,变形菌门(Proteobacteria)丰度大幅提升。灌服JB303和JB10后,拟杆菌门和变形菌门的丰度均得到有效恢复。此外,解本发酵液还可使小鼠回盲肠中疣微菌门(Verrucomicrobia)的相对丰度明显升高。由图1的B图可知,经林可霉素处理后,小鼠回盲肠部拟杆菌属(Bacteroides)、副拟杆菌属(Parabacteroides)、艾克曼菌属(Akkermansia)和毛螺菌属 (Lachnospiraceae NK4A136)的丰度显著下降,而葡萄球菌属(Staphylococcus)和假单胞菌属 (Pseudomonas)的丰度大大增加。灌服JB303和JB10后,副拟杆菌属和毛螺菌属的丰度得到部分提升,拟杆菌属和艾克曼菌属的丰度显著提升,而葡萄球菌属和假单胞菌属的丰度被显著降低。
图2是小鼠回盲肠菌群的Alpha多样性分析。从图可以看出,林可霉素处理后,肠道菌群丰度和多样性均低于正常小鼠,灌服解本后,菌群丰度和多样性较模型组均得到了提升。
图3是小鼠回盲肠菌群的Beta多样性分析,由图可知,林可霉素处理后,菌群结构与正常组差异明显,菌群多样性降低。给予解本发酵液后,菌群多样性显著增加。根据以上结果,服用JB303和JB10后,有益菌拟杆菌门和疣微菌门的丰度得到显著提升,而有害菌变形菌门的丰度被显著抑制,具有剂量依赖性。在属水平上,解本发酵液能使有益菌拟杆菌属和艾克曼菌属的丰度显著提升,并明显降低或消除了一些失调小鼠肠道中急剧上升成为优势菌的菌群,如假单胞菌属、葡萄球菌属等。Alpha多样性分析表明,灌服解本7d后,回盲肠部菌群多样性明显恢复,且均比自发恢复的Control组更接近正常组,表明解本对失调小鼠的菌群的多样性有明显恢复作用。Beta多样性分析结果表明,林可霉素处理后,小鼠肠道菌群多样性明显降低,灌服解本发酵液后,可使肠道菌群增加。
综上所述,发酵液对菌群失调小鼠的肠道菌群具有恢复重建作用。
Claims (7)
1.中药发酵液在制备改善肠道菌群失调药物中的用途,其特征在于,按重量份计,所述中药发酵液由以下重量份的活性成分发酵得到:刺梨5~100份,余甘子5~100份,蜂蜜5~100份,核桃1~30份,柠檬1~30份;
将所述刺梨、余甘子、蜂蜜、核桃、柠檬与水混合,在15~40℃,避光,密封条件发酵30~300天得到。
2.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,所述刺梨20~80份,余甘子8~30份,蜂蜜10~50份,核桃2~10份,柠檬2~10份。
3.根据权利要求1或2所述的用途,其特征在于,所述水为刺梨、余甘子、蜂蜜、核桃、柠檬总量的2~6倍。
4.根据权利要求3所述的用途,其特征在于,所述水为刺梨、余甘子、蜂蜜、核桃、柠檬总量的3~5倍。
5.根据权利要求1或2所述的用途,其特征在于,所述改善肠道菌群失调包括增加肠道菌群多样性。
6.根据权利要求5所述的用途,其特征在于,所述改善肠道菌群失调包括改善拟杆菌门、疣微菌门、变形菌门中的至少一种的丰度。
7.根据权利要求1或2所述的用途,其特征在于,所述改善肠道菌群失调包括改善拟杆菌属、艾克曼菌属、副拟杆菌属、毛螺菌属、葡萄球菌属、假单胞菌属中的至少一种的丰度。
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