CN112877239A - 一株乳酸杆菌菌株及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一株乳酸杆菌菌株及其应用，属于微生物技术领域。一株乳酸杆菌菌株，该菌是罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)的菌株RGW1，该菌株于2019年9月27日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院，中科院微生物研究所，邮编100101）保藏，其保藏号为：CGMCC No.18626。本发明所提供的菌株不具有毒力基因，对常用抗生素敏感，具有耐胃肠道内环境的能力，具有高疏水性使其能够黏附到肠道上皮发挥益生作用，其益生作用包括能够提高动物结肠绒毛高度和绒毛/隐窝比值，并抑制由病原微生物引起的肠道炎症。

Description

一株乳酸杆菌菌株及其应用
技术领域
本发明涉及一株乳酸杆菌菌株及其应用，属于微生物技术领域。
背景技术
目前中国已经禁用饲用抗生素，寻找并开发可以替代抗生素且具有天然无毒害作用的饲用添加剂尤为重要。益生菌以其绿色无残留，安全促生长等优点受到研究者以及产业界的关注，其中，乳酸菌作为一种常见的益生菌，在人和动物的消化道中能够调节肠道微生态、防治消化道炎症、增强肠上皮屏障、促进肠道对蛋白质的消化利用、促进肠道蠕动改善便秘。
目前中国饲用抗生素被禁用，学术界及产业界都在寻找抗生素替代物的大背景下，急需筛选和开发具有能够替代抗生素，安全有效，能够促进动物肠道健康生长，抑制病原菌引起的肠道炎症的替代品。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一株能够同时有效抑制大肠杆菌、都柏林属沙门氏菌生长、促进动物肠道健康生长以及抑制由病原微生物引起的动物肠道炎症的乳酸杆菌菌株。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
一株乳酸杆菌菌株，该菌是罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)的菌株RGW1，该菌株于2019年9月27日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院，中科院微生物研究所，邮编100101)保藏，其保藏号为：CGMCC No.18626。
本发明所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)菌株RGW1的个体形态特征：该菌株的16S rDNA序列全长共1140bp，经Genbank比对与Lactobacillus reuteri相似性达到99％；结合个体形态、群体形态特征及生理生化试验结果，将该菌鉴定为Lactobacillusreuteri，并命名为Lactobacillus reuteri RGW1。
本发明所述罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)菌株RGW1，能够有效抑制大肠杆菌K99(Escherichia coli K99)和都柏林属沙门氏菌(Salmonella dublin)的生长，且其对S.dublin的抑菌作用显著大于现广泛应用的益生乳酸菌Lactobacillusparalimentarius。
一种编码所述乳酸杆菌菌株的乳酸杆菌基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
含有权利要求1所述菌株的菌剂。
一种添加剂，所述添加剂包含所述的菌株或所述的菌剂。
一种所述菌株在制作饲料添加剂(微生态制剂)方面的应用。
本发明所述乳酸杆菌菌株是从1月龄的健康犊牛粪便中分离，利用MRS固体培养基通过厌氧培养分离得到。本发明中所提到的阳性对照菌株为Lactobacillusparalimentarius(菌种号DSM-13238)。本发明提供的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)菌株RGW1具有以下优势：
1、本发明提供的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)菌株RGW1生长速度快于Lactobacillus paralimentarius(菌种号DSM-13238)。
2、本发明提供的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)菌株RGW1对都柏林属沙门氏菌(Salmonella dublin)的抑菌作用显著大于现广泛应用的益生乳酸菌Lactobacillus paralimentarius(菌种号DSM-13238)。
3、本发明提供的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)菌株RGW1不具有毒力基因，因此，本发明所涉及的菌株安全，对宿主无毒无害。
4、本发明提供的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)菌株RGW1对常用的抗生素四环素、氯霉素、红霉素、阿莫西林、氨苄青霉素、青霉素G、头孢唑林七种常用抗生素敏感，因此，可以认为，本发明所涉及的菌株不会因为抗(耐)药性问题而产生超级细菌。
5、本发明提供的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)菌株RGW1可在pH低至3的环境中生长，且存活数大于log7CFU/mL。同时，该菌株具有耐胆盐性能，胆盐浓度高达0.5％时依然能够生存。该菌株在含有0.3％胆盐和1g/L胰蛋白酶的模拟肠液中的耐受性显著高于目前广泛应用的益生乳酸菌Lactobacillus paralimentarius。因此，本发明提供的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)菌株RGW1能够存活于动物胃肠道内，可能具有作为益生菌的潜力。
6、本发明提供的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)菌株RGW1具有极高的疏水性，其疏水性达到了74％，使其可以轻易贴附到肠道表面，并且可以吸附在Caco-2细胞周围，能够有效定植于肠道上皮。说明本发明提供的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)菌株RGW1可能具有了黏附于动物肠道的能力，为其发挥益生作用提供了基础。
7、本发明提供的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)菌株RGW1能够提高小鼠结肠绒毛高度和绒毛/隐窝比值，并抑制LPS诱导的肠道炎症。因此，可以认为，本发明所涉及的菌株在调节动物肠道健康、抑制由病原微生物引起的肠道炎症方面具有作用。
综上所述，本发明同现有技术相比具有如下优点：相比于现有的商用益生乳酸菌Lactobacillus paralimentarius(菌种号DSM-13238)，本发明提供的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)菌株RGW1生长速度更快，对病原菌都柏林属沙门氏菌(Salmonella dublin)生长的抑制作用更大。
此外，本发明所提供的菌株不具有毒力基因，对常用抗生素敏感，具有耐胃肠道内环境的能力，具有高疏水性使其能够黏附到肠道上皮发挥益生作用，其益生作用包括能够提高动物结肠绒毛高度和绒毛/隐窝比值，并抑制由病原微生物引起的肠道炎症。这些优点对于菌株作为不以治疗为目的的生物防治中使用来说，意义重大，本发明所提供的菌株是对目前益生菌菌库的有效补充。可作为饲料添加剂(微生态制剂)使用，在替代抗生素，促进动物肠道健康生长以及抑制肠道炎症上发挥重要作用。
附图说明
图1是L.RGW1和L.paralimentarius生长曲线对照图，
图2是L.RGW1和L.paralimentarius对E.coli K99和S.dublin的抑菌圈直径(mm)照片，
图3是共同培养对L.RGW1与E.coli K99数量的影响曲线图，
图4是L.RGW1和L.paralimentarius抗生素纸片敏感性示意图，
图5是L.RGW1和L.paralimentarius的低pH耐受结果对比图，
图6是L.RGW1和L.paralimentarius的胆盐耐受结果对比图，
图7是L.RGW1和L.paralimentarius的模拟胃肠液耐受结果对比图，
图8是L.RGW1和L.paralimentarius表面疏水性对比图，
图5-图8中，注：*代表与L.paralimentarius相比差异显著(P<0.05)；
图9是L.RGW1对Caco-2细胞黏附结果电镜照片，
图10是不同处理条件下小鼠血清细胞因子含量对比图，
图11是不同处理条件下小鼠结肠和盲肠形态切片照片，
图12是利用毒力基因引物对L.RGW1进行菌液PCR扩增后的电泳图。
具体实施方式
为了令本发明的目的、特征、优点更加明显易懂，以下通过实施例的形式对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
另外，下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法，本发明所涉及的各种培养基配方均可以在实验手册中查到。本发明中所提到的目前广泛应用的益生乳酸菌为Lactobacillus paralimentarius(菌种号DSM-13238)，在具体实施例中出现均作为阳性对照菌株。
实施例1乳酸杆菌Lactobacillus reuteri RGW1的分离与鉴定
按照下面的方法分离得到乳酸杆菌Lactobacillus reuteri RGW1：
1.收集1月龄健康犊牛粪便，采集后立即保存于无菌厌氧甘油中保存。
2.将保存的粪便样品混合均匀，每管混合液取100μL均匀涂布于MRS琼脂培养基表面，晾干，置于厌氧手套箱中的37℃恒温培养箱中培养24小时后，选择生长有30-200个菌斑的培养皿，用无菌接种环挑取白色、圆形且边缘整齐的，符合乳酸菌标准形态的菌斑溶解于200μL无菌PBS溶液中，混匀后，将混合的菌液在MRS固体培养基表面划线，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。重复上述挑菌和划线的过程3次后，选取单个菌落溶解于200uL无菌PBS溶液中，混匀，使用一次性无菌注射器将其注入10mL MRS培养基中，在37℃，180rpm水平恒温摇床中过夜培养。培养完成后，将菌液与厌氧甘油按照1：1体积比混匀，转移至-80℃超低温冰箱中保存。
3.将分离的菌液用于提取总DNA，使用细菌通用引物27F和1492R(27F:5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′，1492R:5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)对提取的DNA进行PCR产物扩增，将试验所得PCR产物进行测序，将所得测序结果通过NCBI数据库进行BLAST比对，鉴定菌株为Lactobacillus reuteri。
实施例2乳酸杆菌Lactobacillus reuteri RGW1生长曲线的测定
按照2％体积乳酸杆菌Lactobacillus reuteri RGW1以及对照菌株Lactobacillus paralimentarius(菌种号DSM-13238)分别接种于MRS液体培养基中，置于37℃，180rpm恒温水平摇床中培养，每隔2小时在波长为600nm的可见光分光光度计中测定其OD值，以时间(单位：小时)为横轴，OD值为纵轴绘制生长曲线。
结果如图1所示，细菌生长曲线一般可分为迟滞期、对数期、平稳期和衰亡期四个阶段。L.RGW1生长的迟滞期为0-2小时，对数生长期为2-8小时，8小时后进入平稳期；而L.paralimentarius生长的迟滞期为0-5小时，对数生长期为5-16小时，16小时后进入平稳期。和L.paralimentarius相比，L.RGW1的生长速度更快，生长进入平稳期的时间更短。
实施例3乳酸杆菌Lactobacillus reuteri RGW1的抑菌性能测试
A.牛津杯抑菌法：
在一次性培养皿中倒入5mL灭菌的LB琼脂培养基，待其凝固后在其上方竖直放置干燥无菌的牛津杯。将100μL浓度约为109CFU/mL的E.coli K99和S.dublin液分别加入两瓶未凝固的LB琼脂培养基中，轻轻摇匀后，将10mL含有病原菌(108CFU)的培养基倒入培养皿中。待培养基凝固后，用无菌镊子夹起牛津杯，在牛津杯形成的圆孔中分别加入150μL过夜培养的Lactobacillus reuteri RGW1和Lactobacillus paralimentarius菌液，同时另一个圆孔中加入空白培养基作为阴性对照。培养皿置于37℃厌氧条件下培养16-18小时，培养结束后将培养皿取出，并使用游标卡尺测量圆环样抑菌圈大小。
抑菌圈结果见图2，测量后结果如表1所示，该结果表明，L.RGW1对病原菌E.coliK99和S.dublin均有抑制效果。且其对S.dublin的抑菌圈直径显著大于L.paralimentarius(P<0.05)，对E.coli K99的抑菌圈在数值上大于L.paralimentarius。
表1.L.RGW1和L.paralimentarius对E.coli K99和S.dublin的抑菌圈直径(mm)
Figure BDA0002922883320000061
B.液体培养基共培养抑菌法：
本试验共分五组：(1)E.coli K99单独培养组；(2)L.paralimentarius单独培养组；(3)L.RGW1单独培养组；(4)E.coli K99和L.RGW1共培养组；(5)E.coli K99和L.paralimentarius共培养组。
将5mL MRS液体培养基与5mL LB液体培养基混合，接种109CFU乳酸菌和108CFU病原菌，同时在相同培养基中分别单独接种109CFU Lactobacillus reuteri RGW1和Lactobacillus paralimentarius菌液和108CFU E.coli K99和S.dublin液作为对照组，在恒温37℃，180rpm条件下培养。分别在第0、8、16、24小时对培养基中的两种乳酸菌和两种病原菌进行菌落计数，比较数量差异。
共同培养的结果如图3所示，该结果表明，培养8，16，24小时后，与L.RGW1共培养中E.coli K99数量分别显著低于同期的单独培养E.coli K99活菌数，而L.RGW1活菌数未受显著影响。
以上两种抑菌实验的结果表明，本发明所述菌株具有抑制病原菌E.coli K99和S.dublin的作用，且对S.dublin的抑制作用效应大于现广泛应用的益生乳酸菌Lactobacillus paralimentarius现广泛应用的益生乳酸菌Lactobacillusparalimentarius。
实施例3乳酸杆菌Lactobacillus reuteri RGW1的抗生素敏感性测试
在MRS固体培养基表面接种200μL浓度约为108CFU/mL的乳酸菌菌液，晾干后，将四环素、氯霉素、红霉素、阿莫西林、氨苄青霉素、青霉素G、头孢唑林七种常用抗生素试纸分别放置在培养皿中央，于37℃厌氧条件下培养18小时后，观察是否具有抑菌圈，并用游标卡尺测量抑菌圈直径大小。
结果如图4所示，测量后其结果如表2所示，结果表明，L.RGW1对七种抗生素都呈现敏感结果，且其对红霉素的抑菌圈直径显著大于L.paralimentarius。而对其他抗生素的抑菌圈直径显著小于L.paralimentarius。
表2L.RGW1和L.paralimentarius抗生素敏感性抑菌圈直径
Figure BDA0002922883320000071
注：S表示对相应抗生素敏感。
实施例4乳酸杆菌Lactobacillus reuteri RGW1的胃肠道内环境耐受力
胃肠道内环境包括低pH,胆盐环境以及胃肠液环境
A.低pH耐受力
将过夜培养的乳酸菌菌液在10000rpm，4℃条件下离心10分钟，弃掉上清液，用无菌PBS洗涤沉淀，再用新鲜无菌的MRS液体培养基重新悬浮菌体，将浓度调整为约108CFU/mL。用1.0M盐酸分别调节MRS液体培养基的pH值至7.0、5.0、4.0、3.0，分别取10mL不同pH值的MRS培养基各3管，接种200μL上述菌液，在37℃厌氧条件下培养3小时后，再对各试验组中的乳酸菌活菌进行菌落计数。
结果如图5所示，结果表明，L.RGW1可在pH低至3的环境中生长，且存活数大于log7CFU/mL，与L.paralimentarius在低pH为3环境中的存活状态无显著差异，当pH＝4时，L.RGW1的存活数显著大于L.paralimentarius，两株乳酸菌均随着培养基pH值上升存活率不断增加。
B.胆盐耐受力
将过夜培养的乳酸菌菌液在10000rpm，4℃条件下离心10分钟，弃掉上清，用无菌PBS洗涤沉淀，再用MRS液体培养基重新悬浮菌体，将浓度调整为约108CFU/mL。将提前配置的胆盐溶液经0.22μm无菌滤膜过滤至培养基中，试验组培养基中胆盐含量分别为0％、0.1％、0.3％、0.5％，分别取10mL胆盐含量不同的MRS厌氧培养基各3管，接种200uL上述菌液，在37℃厌氧条件下培养3小时后，再对各试验组中乳酸菌活菌含量进行菌落计数。
结果如图6所示，结果表明，L.RGW1在胆盐浓度为0.1％的条件下活菌数显著高于L.paralimentarius，而随着胆盐浓度的升高，L.RGW1的活菌数则呈下降趋势。
C.胃、肠液耐受力
将胃蛋白酶悬浮于10mL无菌PBS溶液中，浓度为3g/L，振荡混匀，调节pH值至2.5后，将溶液过0.22μm无菌滤膜，制备模拟胃液。接种200μL浓度约为108CFU/mL乳酸菌菌液，在37℃，180rpm条件下厌氧培养3小时，对培养液中乳酸菌进行菌落计数。
将胆盐和胰蛋白酶溶解在10mL无菌PBS溶液中，浓度分别为0.3％和1g/L，pH值调节至8.0，制备模拟肠液，并将模拟肠液过0.22μm无菌滤膜。接种200μL浓度约为108CFU/mL乳酸菌菌液，在恒温水平培养箱中，37℃、180rpm条件下厌氧培养6小时，对培养液中乳酸菌进行菌落计数。
结果如图7所示，结果表明，在模拟胃液中，L.RGW1的耐受能力显著低于L.paralimentarius，而在模拟肠液中，L.RGW1的耐受能力则显著高于L.paralimentarius，但活菌数均大于106CFU/mL。说明L.RGW1能够在模拟胃液和模拟肠液中存活。
实施例5乳酸杆菌Lactobacillus reuteri RGW1的肠上皮细胞黏附性
在细胞培养板底部提前铺上细胞爬片，将人克隆结肠腺癌细胞(Caco-2细胞)转移至培养板上培养，待其长满培养板80％面积后，将过夜培养的乳酸菌经无菌PBS洗涤至无色，重悬于无菌PBS，并加入细胞培养板，在5％CO2，37℃条件下培养两小时后，将细胞爬片取出，用无菌PBS溶液小心的将多余的乳酸菌洗去后，在酒精灯上进行热固定，染色后在光学显微镜下观察。
结果如图8所示，结果表明，L.RGW1的疏水性高达74％，且显著高于L.paralimentarius(P<0.05)。利用Caco-2细胞黏附实验结果如图9所示，结果表明，L.RGW1对Caco-2细胞具有较强的黏附力。说明L.RGW1具有了在宿主肠道发挥益生作用的基础，即能够定植与宿主肠道细胞表面。
实施例6乳酸杆菌Lactobacillus reuteri RGW1的毒力基因筛查
如表3所示，根据毒力基因gelE、cylA、esp、efaAfs、hyl、asa、hdc、ace、tdc、odc的引物序列，对L.RGW1进行菌液PCR扩增，扩增后利用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，从而鉴定乳酸菌菌株中是否含有毒力基因。
表3毒力基因引物及PCR扩增条件
Figure BDA0002922883320000091
Figure BDA0002922883320000101
结果如图12所示，结果表明，利用上述毒力基因对L.RGW1进行菌液PCR扩增后，未发现相应产物的条带，L.RGW1中不存在毒力基因gelE、cylA、esp、efaAfs、hyl、asa、hdc、ace、tdc和odc。说明本发明所涉及菌株对宿主无毒无害。
实施例7乳酸杆菌Lactobacillus reuteri RGW1在动物体内发挥益生作用的应用
应用方法：选用36只5周龄雄性C57/BL小鼠(购自上海斯莱克实验动物有限责任公司)，在温度22±2℃，湿度56±5％，12小时光照/黑暗的条件下，饲养于浙江中医药大学屏障系统调控动物房。经过3天适应期，并将36只小鼠随机分为4组：(1)对照组；(2)去除L.RGW1菌细胞的培养液组(上清组)；(3)辐照灭活L.RGW1菌液组(辐照组)；(4)L.RGW1活菌菌液组(活菌组)，每组9只，三只一笼。试验期1-7天，每天9：00给各组小鼠灌胃乳酸菌或其代谢产物，如表4所示。整个试验期间所有小鼠自由采食和饮水。于第八天早上腹腔注射LPS，注射剂量为10mg/kg，注射后24小时屠宰小鼠取样。
表4小鼠灌胃情况
Figure BDA0002922883320000102
本实施例提供的小鼠取样方法：采用摘眼球法采集小鼠血液于无菌1.5mL离心管中，室温下静置30分钟后，在4℃，3000rpm条件下离心10分钟后收集血清，存储于-20℃备用。采集血液后，小鼠采用脱颈法处死，解剖并采集盲肠和结肠组织样品，在无菌PBS缓冲液中洗涤干净后，一部分组织样品置于4％多聚甲醛中固定，用于后续石蜡包埋和HE染色；另一部分组织样品冻存于-80℃备用。采集的血液用于测定细胞因子。
本实施例提供的辐照灭活L.RGW1菌液的制备方法：将过夜培养的L.RGW1(浓度约为108CFU/mL)送至浙江省农业科学院作物与核技术利用研究所进行γ射线辐照试验，辐照场地：钴-60，1号源，源强4.8万居里。辐照试验共分为5组，选取1-4KGy的辐照强度，辐照试验结束后将菌液带回实验室进行菌落计数分析。结果显示当辐照剂量为1KGy和2KGy的强度时分别有1×104CFU/mL、1×102CFU/mL的菌存活，不符合试验要求；而当辐照强度为3KGy和4KGy时，无乳酸菌存活，因此选择3KGy辐照强度下的菌液用于动物试验。
本实施例提供的去除L.RGW1菌细胞的培养液的制备方法：过夜培养的乳酸菌在4℃，12000g条件下离心10分钟并将上清液过0.22μm无菌滤膜以去除菌液中的菌细胞，收集上清液作为去除菌细胞的培养液(简称上清液)。
本实施例提供的血液细胞因子检测的方法：采用ELISA试验试剂盒(上海江莱生物科技有限公司)，通过酶联免疫吸附方法测定(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测血清中细胞因子IL10、TGF-β和TNF-α的浓度。
结果如图10所示，结果表明，活菌组的血清IL10和TGF-β含量显著高于对照组(P<0.05)，而辐照组、上清组和对照组的血清IL10和TGF-β并无显著差异。说明了灌喂本发明所述菌株菌液给被LPS诱导炎症的小鼠，能够提高抗炎症因子IL10和TGF-β含量，产生该作用的菌株是活菌。
本实施例提供的小鼠肠道形态测定的方法：HE染色的肠道组织切片在光学显微镜下观察组织形态，并使用Image-Pro软件测量绒毛高度和隐窝深度。
结果如图11所示，经测量后如表5所示，结果表明，活菌组的结肠绒毛高度和绒毛/隐窝比值显著高于对照组(P<0.05)，绒毛/隐窝比值显著高于上清组以及辐照组(P<0.05)。在肠道形态上，可以观察到对照组小鼠的结肠和盲肠均有大量的淋巴细胞增生；上清组小鼠的结肠和盲肠，以及辐照组和活菌组小鼠的结肠结构基本完整，无明显炎性细胞浸润；辐照组和活菌组中仅观察到1只小鼠的盲肠存在淋巴细胞增生。该结果说明了通过灌喂本发明所述菌株菌液能够提高小鼠结肠结肠绒毛高度和绒毛/隐窝比值，并抑制LPS诱导的肠道炎症。
表5不同处理条件下小鼠结肠和盲肠形态
Figure BDA0002922883320000121
实施例8乳酸杆菌Lactobacillus reuteri RGW1菌粉的制备
利用发酵罐技术，在MRS液体培养基中富集得到大量高浓度的乳酸杆菌Lactobacillus reuteri RGW1菌液。将菌液分装至250ml离心管并充入CO2，在24000×g条件下高速离心20min沉淀菌体。弃去上清液后，加入1000ml冻干保护剂重悬沉淀，置于-80℃硬化2h。使用真空冷冻干燥机(Martin Christ Gefriertrocknungsanlagen GmbH，奥斯特罗德，德国)冻干后，得到乳酸杆菌Lactobacillus reuteri RGW1的菌粉。
本实施例提供的冻干保护剂的制备方法：100g脱脂奶粉溶于1000ml煮沸蒸馏水，微波炉中再次冒泡去除溶氧，在血清瓶中(液面以上)持续通入CO2冷却备用。
实施例9乳酸杆菌Lactobacillus reuteri RGW1的应用
罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)广泛寄存于人、猪、家禽及其他动物肠道中，是动物肠道中的主要乳酸杆菌之一。罗伊氏乳杆菌更是被列为中国饲料添加剂目录(2013)中的微生态制剂之一，目前仍然位列其中。本发明所提供的乳酸杆菌Lactobacillusreuteri RGW1可以作为饲料添加剂应用于动物养殖中。这里的动物指的是猪、家禽及反刍动物。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
序列表
<110> 浙江大学
<120> 一株乳酸杆菌菌株及其应用
<130> ZJWL-WJK2021
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1140
<212> DNA
<213> L. RGW1基因(Lactobacillus reuteri)
<400> 1
gaaccggggc ggggtgtgct atacatgcaa gtcgtacgca ctggcccaac tgattgatgg 60
tgcttgcacc tgattgacga tggatcacca gtgagtggcg gacgggtgag taacacgtag 120
gtaacctgcc ccggagcggg ggataacatt tggaaacaga tgctaatacc gcataacaac 180
aaaagccgca tggcttttgt ttgaaagatg gctttggcta tcactctggg atggacctgc 240
ggtgcattag ctagttggta aggtaacggc ttaccaaggc gatgatgcat agccgagttg 300
agagactgat cggccacaat ggaactgaga cacggtccat actcctacgg gaggcagcag 360
tagggaatct tccacaatgg gcgcaagcct gatggagcaa caccgcgtga gtgaagaagg 420
gtttcggctc gtaaagctct gttgttggag aagaacgtgc gtgagagtaa ctgttcacgc 480
agtgacggta tccaaccaga aagtcacggc taactacgtg ccagcagccg cggtaatacg 540
taggtggcaa gcgttatccg gatttattgg gcgtaaagcg agcgcaggcg gttgcttagg 600
tctgatgtga aagccttcgg cttaaccgaa gaagtgcatc ggaaaccggg cgacttgagt 660
gcagaagagg acagtggaac tccatgtgta gcggtggaat gcgtagatat atggaagaac 720
accagtggcg aaggcggctg tctggtctgc aactgacgct gaggctcgaa agcatgggta 780
gcgaacagga ttagataccc tggtagtcca tgccgtaaac gatgagtgct aggtgttgga 840
gggtttccgc ccttcagtgc cggagctaac gcattaagca ctccgcctgg ggagtacgac 900
cgcaaggttg aaactcaaag gaattgacgg gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt 960
taattcgaag ctacgcgaag aaccttacca ggtcttgaca tcttgcgcta accttagaga 1020
taagcgttcc cttcgggacg caatgacagg tgtgcatggt cgtcgtcagc tcgtgtcgtg 1080
agatggtggg tagtcccgca cgagcgcacc cttgttacta gttgccagca ttgagttggg 1140

Claims (9)

1.一株乳酸杆菌菌株，该菌是罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri) 菌株RGW1，该菌株于2019年9月27日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为：CGMCC No .18626。
2.一种编码权利要求1所述乳酸杆菌菌株的乳酸杆菌基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
3.含有权利要求1所述菌株的菌剂。
4.一种添加剂，其特征在于，所述添加剂包含权利要求1所述的菌株和/或权利要求3所述的菌剂。
5.一种权利要求1所述菌株在抑制病原菌生长方面的应用。
6. 根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述病原菌包括大肠杆菌K99（Escherichia coli K99）和都柏林属沙门氏菌（Salmonella dublin）。
7.一种权利要求1所述菌株在抑制动物炎症方面的应用。
8.一种动物饲料，其特征在于，包含权利要求4所述的添加剂。
9.一种由权利要求1所述菌株制得的食品或保健品。
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