CN112852685A - 一株植物乳杆菌sal及其制剂、应用 - Google Patents

一株植物乳杆菌sal及其制剂、应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112852685A
CN112852685A CN202110368490.0A CN202110368490A CN112852685A CN 112852685 A CN112852685 A CN 112852685A CN 202110368490 A CN202110368490 A CN 202110368490A CN 112852685 A CN112852685 A CN 112852685A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sal
cgmcc
lactobacillus plantarum
tumor
preserved
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110368490.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112852685B (zh
Inventor
伦永志
孙杰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Xiamen Chengge Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Putian University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Putian University filed Critical Putian University
Priority to CN202110368490.0A priority Critical patent/CN112852685B/zh
Publication of CN112852685A publication Critical patent/CN112852685A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112852685B publication Critical patent/CN112852685B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L3/00Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
    • A23L3/34Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
    • A23L3/3454Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
    • A23L3/3463Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23L3/3571Microorganisms; Enzymes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74Bacteria
    • A61K35/741Probiotics
    • A61K35/744Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04Antibacterial agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00Antineoplastic agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11Lactobacillus
    • A23V2400/169Plantarum
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02ATECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供了一种新的保藏于CGMCC,保藏号为CGMCC No.21786的植物乳杆菌SAL及其制剂和应用。所述植物乳杆菌SAL对人体胃肠道环境具有较强的耐受力,可抑制细菌生长,所述细菌包括金黄色葡萄球ATCC25923、肺炎克雷伯菌ATCC700603、铜绿假单胞菌ATCC27853、粪肠球菌ATCC29212、鲍曼不动杆菌、产单核李斯特菌、福氏志贺菌和鼠伤寒沙门菌。所述植物乳杆菌SAL可应用于减缓肿瘤机体的体重下降、抑制肿瘤体积和重量方面、提高肿瘤机体免疫力。

Description

一株植物乳杆菌SAL及其制剂、应用
技术领域
本发明涉及到生物医药领域,特别涉及到一株植物乳杆菌SAL及其制剂、应用。
背景技术
植物乳杆菌是一种革兰氏阳性菌,最适生长温度为30~35℃,是典型的兼性厌氧菌。菌体呈短杆状,不产芽孢,在MRS固体培养基中呈乳白色不透明,圆形,光滑的菌落。植物乳杆菌为同型发酵乳酸菌,能利用葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等,在发酵过程中只产生乳酸,有很强的的发酵碳水化合物的能力,有较强的耐酸耐胆盐耐高盐能力。
目前,植物乳杆菌与人类的生活密切相关,它能通过胃肠道并定植于肠道发挥益生作用,因此,也越来越多地被添加到人用益生菌粉、益生菌咀嚼片等产品中。申请号为202011081780.9与申请号为202010498244.2的专利均公开了一种新的植物乳杆菌菌株。
发明内容
本发明提供了一株新的植物乳杆菌SAL产品及其制剂,其可抑制细菌生长,并具有在人体胃肠道环境中的耐受力,还可以减缓肿瘤机体的体重下降、抑制肿瘤体积和重量、提高肿瘤机体免疫力,应用于肿瘤机体的调节领域。
为达到本发明的第一个发明目的,本发明提供了保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC,保藏号为CGMCC No.21786,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号的植物乳杆菌SAL。保藏日期为:2021年2月1日,分类命名:植物乳杆菌;拉丁名称:Lactobacillus plantarum。
为达到本发明的第二个发明目的,本发明提供了保藏于CGMCC,保藏号为保藏号为CGMCC No.21786的植物乳杆菌SAL在抑制细菌生长方面的应用,优选的,所述细菌包括金黄色葡萄球ATCC25923、肺炎克雷伯菌ATCC700603、铜绿假单胞菌ATCC27853、粪肠球菌ATCC29212、鲍曼不动杆菌、产单核李斯特菌、福氏志贺菌和鼠伤寒沙门菌。
保藏号为CGMCC No.21786的植物乳杆菌SAL对福氏志贺菌抑菌效果最好,对铜绿假单胞菌抑菌作用稍弱;对以上8种细菌的抑菌圈直径均在16.00mm以上。
为达到本发明的第三个发明目的,本发明提供了一种抑菌剂,所述抑菌剂中含有保藏于CGMCC,保藏号为CGMCC No.21786的植物乳杆菌SAL作为其有效成分。
为达到本发明的第四个发明目的,本发明提供保藏于CGMCC,保藏号为CGMCCNo.21786的植物乳杆菌SAL在减缓肿瘤机体的体重下降方面的应用。
在移植瘤裸鼠试验中,通过灌胃植物乳杆菌SAL悬菌液,能够明显减缓移植瘤裸鼠体重下降。
为达到本发明的第五个发明目的,本发明提供保藏于CGMCC,保藏号为CGMCCNo.21786的植物乳杆菌SAL在抑制肿瘤体积和重量方面的应用。
在移植瘤裸鼠试验中,通过灌胃植物乳杆菌SAL悬菌液,肿瘤体积减小33.62%,肿瘤重量相比降低21.26%。
在移植瘤裸鼠试验中,灌胃植物乳杆菌SAL悬菌液的移植瘤裸鼠脾脏指数接近空白对照组,而阴性对照组脾脏指数显著升高(P<0.05),表明植物乳杆菌SAL对脾脏有保护作用。
为达到本发明的第六个发明目的,本发明提供保藏于CGMCC,保藏号为CGMCCNo.21786的植物乳杆菌SAL在提高肿瘤机体免疫力方面的应用。
在移植瘤裸鼠试验中,通过灌胃植物乳杆菌SAL菌悬液,能够显著提高裸鼠IFN-γ水平,从而增强机体直接或间接杀伤肿瘤细胞的能力;能够显著提高裸鼠TNF-β水平,其可通过增强脾淋巴细胞TNF-β的分泌来提高机体抗肿瘤免疫力。
优选的,所述植物乳杆菌SAL提高肿瘤机体的IFN-γ水平。
优选的,所述植物乳杆菌SAL提高肿瘤机体的TNF-β水平。
为达到本发明的第六个发明目的,本发明提供保藏于CGMCC,保藏号为CGMCCNo.21786的植物乳杆菌SAL在制备抗肿瘤药物、食品、保健品方面的应用。
区别于现有技术,上述技术方案至少包括以下有益效果:提供了一种新的保藏于CGMCC,保藏号为CGMCC No.21786的植物乳杆菌SAL及其抑菌剂。所述植物乳杆菌SAL可抑制细菌生长,所述细菌包括金黄色葡萄球ATCC25923、肺炎克雷伯菌ATCC700603、铜绿假单胞菌ATCC27853、粪肠球菌ATCC29212、鲍曼不动杆菌、产单核李斯特菌、福氏志贺菌和鼠伤寒沙门菌。所述植物乳杆菌SAL对人体胃肠道环境具有耐受力,可应用于减缓肿瘤机体的体重下降、抑制肿瘤体积和重量方面、提高肿瘤机体免疫力。
附图说明
图1为植物乳杆菌SAL革兰染色结果(×1000)。
图2为植物乳杆菌SAL在MRS平板上的菌落特征图。
图3为裸鼠体重变化图。
图4为离体肿瘤大小比较图。
图5为裸鼠肿瘤体积比较图。
图6为裸鼠肿瘤重量比较图;注:*P<0.05versus阴性对照组。
图7为裸鼠脾脏指数比较图;注:*P<0.05versus阴性对照组及空白对照组。
图8为裸鼠血清IFN-γ水平比较图;注:*P<0.05versus阴性对照组及空白对照组。
图9为裸鼠血清TNF-β水平比较图;注:*P<0.05versus阴性对照组及空白对照组。
具体实施方式
为详细说明技术方案的技术内容、构造特征、所实现目的及效果,以下结合具体实施例并配合附图详予说明。
本实施方式中,材料来源如下:
1、菌株:9株指示菌株(金黄色葡萄球ATCC25923、肺炎克雷伯菌ATCC700603、铜绿假单胞菌ATCC27853、粪肠球菌ATCC29212、鲍曼不动杆菌、产单核李斯特菌、福氏志贺菌、鼠伤寒沙门菌、白假丝酵母菌ATCC10231)购自温州市康泰生物科技有限公司。
2、实验动物:SPF级成年雄性健康Balb/c-Nude裸鼠,6-8周龄,体重25g左右,30只,由重庆恩斯维尔生物科技有限公司提供。分组如下:
空白对照组(无菌NS 200μL/次·d),10只。
阴性对照组(无菌NS 200μL/次·d),10只。
SAL株实验组(SAL株菌悬液200μL/次·d),10只。
3、试剂
MRS琼脂培养基、MRS肉汤培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基、甘露醇高盐培养基、麦康凯培养基、TSA-YE选择培养基、肠球菌琼脂、营养肉汤培养基购自青岛海博生物技术有限公司;血琼脂平板购自江门市凯林贸易有限公司;牛胆盐、碳酸钙、浓盐酸购自国药集团药业股份有限公司;API50CHL微生物测试条购自梅里埃生物科技有限公司;厌氧产气袋2.5L购自日本三菱公司;PBS粉末购自北京中杉金桥生物技术有限公司;0.9%氯化钠注射液购自河北天成药业有限公司;无水乙醇购自重庆川东化工集团有限公司;水合氯醛购自阿拉丁试剂上海有限公司;小鼠γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒、小鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司。
一、乳杆菌的分离纯化:
1、分离纯化
植物乳杆菌SAL株分离自长期应用抗生素、激素及其他药物治疗患者的新鲜粪便标本。挑取患者粪便接种于含有碳酸钙的MRS固体平板上分离划线,置于LOCK保鲜盒中(内置三菱厌氧产气袋),37℃厌氧培养48h后,挑取中等大小、乳白色、有溶钙圈的单个菌落进行革兰染色和触酶试验,触酶试验阴性、革兰染色为阳性、长杆状无芽胞的菌株为疑似乳杆菌,将其传代至MRS培养基上保存。
试验结果:图1为其行革兰染色后的镜下形态特征,菌体呈直杆状,末端钝圆,呈单个或短链状存在。图2为其在含有碳酸钙的MRS平板上的菌落特征:乳白色、不透明、圆形、表面光滑、中央凸起的菌落,有溶钙圈。
2、乳杆菌的种属鉴定
参照《伯杰细菌鉴定手册》(第八版),对分离得到的纯化菌株进行明胶液化试验、硝酸盐还原试验、硫化氢试验、吲哚试验,确定各菌株是否属于乳杆菌属。大部分乳杆菌硝酸盐还原试验阴性,不液化明胶,不产生吲哚和硫化氢。先挑取符合属鉴定标准的菌株至MRS平板上,37℃厌氧培养24h,然后用API50CHL培养基制备2个麦氏浊度的菌悬液,接种至API50CHL鉴定试剂条进行生化鉴定,用矿物油封口,37℃厌氧培养48h后,利用API鉴定软件分析反应结果,结果如下:
分离得到的菌株不液化明胶,硝酸盐还原试验、吲哚试验、硫化氢试验阴性,初步鉴定为乳杆菌属细菌。API鉴定结果确定为植物乳杆菌(lactobacillus plantarum),命名为Lactobacillus plantarum SAL。
3、抑菌试验
将植物乳杆菌SAL株活化,取MRS平板上单个菌落接种于MRS肉汤培养基中,37℃150r/min摇床培养过夜,取适量菌液分别点种于9个MRS平板上,每板平行3个点,37℃孵育箱厌氧培养过夜。9株指示菌分别在营养琼脂平板上分离划线培养后,取单个菌落接种于营养肉汤中,37℃150r/min摇床培养24h。每株指示菌取200μl菌液与7mL软琼脂混匀,倒在点种有植物乳杆菌SAL株的MRS平板上(软琼脂为表1中的选择性琼脂培养基,高压灭菌后,保持在45-50℃,不可过热或过冷),待软琼脂凝固,37℃需氧培养24h后,观察并测量乳杆菌斑点周围抑菌圈的大小。
试验结果:除白假丝酵母菌外,植物乳杆菌SAL株对8种指示菌均有较好的抑制作用,对福氏志贺菌抑菌效果最好,对铜绿假单胞菌抑菌作用稍弱,但抑菌圈直径均在16.00mm以上(表1)。总体观察,SAL株对革兰阴性菌抑菌效果明显优于革兰阳性菌。
表1植物乳杆菌SAL对9种指示菌的抑菌圈平均直径(mm)
Figure BDA0003008364320000061
4、耐胆盐试验
配制不同浓度的胆盐MRS肉汤,使其质量浓度分别为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5g/100mL,充分混匀,分装至中试管(6mL/支),121℃高压蒸气灭菌20min,冷却至室温备用。将活化后的植物乳杆菌SAL株肉汤纯培养物以体积分数10%接种量,分别接种到上述胆盐肉汤中,37℃150r/min摇床培养24h后,进行菌落计数。
试验结果:随着胆盐浓度的增加,SAL株活菌数量逐渐减少。当胆盐浓度达到0.3g/100mL时,活菌数从109cfu/mL降至104cfu/mL;当胆盐浓度继续增高,乳杆菌活菌数相对稳定,始终维持在104cfu/mL以上(表2)。人体小肠中胆盐浓度在0.03-0.3g/100mL之间,食物在小肠中一般停留1-4h。试验结果表明,培养24h后,随着胆盐浓度的升高,乳杆菌活菌计数虽然均呈下降趋势,但是在人体小肠胆盐生理浓度范围内,SAL株对胆盐的耐受力强。
表2植物乳杆菌SAL在不同浓度胆盐溶液中培养24h后的活菌计数(cfu/mL)
Figure BDA0003008364320000071
5、耐高盐试验
配制不同浓度的NaCl MRS肉汤,使其质量浓度分别为0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0g/100mL,充分混匀,分装至中试管(6mL/支),121℃高压蒸气灭菌20min,冷却至室温备用。将活化后的植物乳杆菌SAL株肉汤纯培养物以体积分数10%接种量,分别接种到上述高盐肉汤中,37℃150r/min摇床培养24h后,进行菌落计数。
试验结果:随着NaCl浓度的增加,培养24h后,SAL株的数量随着NaCl溶液浓度增加而减少,但活菌数仍然保持在108cfu/mL以上,说明株菌对高盐溶液有较强的耐受能力(表3)。人体消化道中的NaCl浓度在1-4g/100mL范围波动,试验结果表明,在人体消化道NaCl生理浓度范围内,SAL株对高盐环境的耐受力强。
表3乳杆菌在不同浓度NaCl溶液中培养24h后的活菌计数(cfu/mL)
Figure BDA0003008364320000081
6、人工胃液耐受试验
6.1人工胃液的配制
取稀盐酸16.4ml,加蒸馏水稀释,调节pH值,使pH值分别达到1.5、2.5、3.5、4.5,用孔径0.22μm针头滤器过滤除菌后,按照1g/100mL的质量浓度比分别加入胃蛋白酶,充分溶解后,得到不同pH值的人工胃液备用。
6.2人工胃液耐受试验
按10%体积比把活化好的植物乳杆菌SAL株肉汤培养物加入上述人工胃液中,每个pH值3管。37℃150r/min摇床培养,分别在1h、2h、3h取出进行菌落计数。结果如下:
SAL乳杆菌在pH 1.5-4.5的人工胃液中仍然可以缓慢生长,培养3h后,活菌计数无明显变化,始终维持在108cfu/mL数量级以上,保持了较高的生长活力(表4)。正常人体胃液的pH值一般在3.0左右,由于饮食结构不同,胃液pH值通常在1.5-5.0之间波动,食物在胃里停留时间一般在1-2h。试验数据表明,SAL乳杆菌对胃酸和胃蛋白酶有较强的耐受力。
表4植物乳杆菌SAL在不同pH值人工胃液中培养不同时间后的菌落计数(cfu/mL)
Figure BDA0003008364320000082
7、人工肠液耐受试验
7.1人工肠液的配制
称取磷酸二氢钾6.8g,加水500mL溶解,用0.4%的氢氧化钠溶液调pH值至6.8,加水稀释至1000mL,用孔径0.22μm针头滤器过滤除菌,然后按照1g/100mL的质量浓度比加入胰蛋白酶,充分混匀后,制得人工肠液备用。
7.2人工肠液耐受试验
按10%体积比将活化好的植物乳杆菌SAL株肉汤培养物加入上述人工肠液中,充分混匀,37℃150r/min摇床培养,分别于1h、2h、3h取出进行菌落计数。
试验结果:
乳杆菌SAL在人工肠液中培养3h后,继续缓慢生长,活菌计数无明显变化,始终维持在108cfu/mL数量级以上(表5)。小肠环境为碱性,pH值大约在7.6左右,肠液中有大量的水、各种消化酶和胆汁酸等,食物在小肠中停留时间一般在1-4h。试验结果表明,乳杆菌SAL对胰蛋白酶消化的耐受力较强。
表5植物乳杆菌SAL在人工肠液中培养不同时间后菌落计数(cfu/mL)
Figure BDA0003008364320000091
8、裸鼠移植瘤抑制试验
8.1裸鼠皮下接种CT26细胞
裸鼠房12h-12h昼夜交替,保持动物自由饮水、进食,温度23-25℃,适应性饲养14天后进入实验。对接种环境消毒,用注射器进行细胞重悬,酒精棉球对裸鼠注射部位消毒后,取对数生长期的细胞,制成浓度为1×106/mL的细胞悬液,阴性对照组、SAL株实验组进行接种,每只裸鼠于右腋皮下缓慢接种200μL细胞悬液。拔针后迅速用针头将细胞聚集,防止细胞液外漏。
8.2植物乳杆菌SAL株处理
空白对照组、阴性对照组每天每只裸鼠灌胃给药200μL生理盐水;SAL株实验组每天每只裸鼠灌胃200μL SAL株悬菌液。各组每天灌胃一次,连续灌胃4周。于灌胃第3周荷瘤,建立结肠癌裸鼠模型,至第6周测定各项指标。
8.3成瘤观察与测量
饲喂期间每隔1天测量体重一次,记录体重,计算平均体重,绘制体重变化曲线。待成瘤后,每周测量肿瘤长径与短径并计算肿瘤体积(肿瘤体积=(长径×短径2)/2)。裸鼠处死前后分别拍摄肿瘤载体及立体图片,称瘤重并测量体积,拍照留底,液氮保存。
计算肿瘤抑制率,其公式如下:抑瘤率=(对照组平均瘤重-实验组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%。摘眼球取血处死裸鼠,血液静置2h后离心分离出血清,血清放入-80℃冷冻保存用作后续检测。裸鼠处死后无菌取出脾脏,将周围组织剥离干净,用滤纸吸净组织表面血液后称重,计算免疫脏器指数(脾脏指数):IOI=脾脏重量(mg)/体重(g)。
试验结果:
体重变化:如图2所示,SAL株实验组能够明显减缓移植瘤裸鼠体重下降,阴性对照组体重则持续下降。
肿瘤体积及体重变化:如图3及图4所示,SAL株实验组肿瘤体积降低水平为33.62%。如图5所示,SAL株实验组肿瘤重量降低水平为21.26%。
脾脏指数:如图6所示。脾脏是机体重要的免疫器官,脾脏指数是反映机体免疫功能最基本、最常规的指标。与空白对照组相比,阴性对照组脾脏指数显著升高(P<0.05),而SAL株的脾脏指数较阴性对照组均有明显改善且更接近空白对照组,表明其在提高移植瘤裸鼠免疫力的同时对脾脏有一定的保护作用。
9、裸鼠免疫功能调节试验
9.1 ELISA检测裸鼠血清中IFN-γ表达
9.1.1样本处理
室温下血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
9.1.2 ELISA检测
①标准品的加样:设置标准品孔和样品孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μl;
②加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上加样品50μl。加样时将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
③加酶:每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外。
④温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
⑤配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
⑥洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
⑦显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。
⑧终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
⑨测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟内进行。
9.1.3计算方法
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
试验结果:ELISA检测裸鼠血清中IFN-γ表达结果如图7所示。IFN-γ在机体识别和清除肿瘤细胞过程中发挥重要作用,SAL株能够显著提高裸鼠IFN-γ水平,从而增强机体直接或间接杀伤肿瘤细胞的能力。
9.2 ELISA检测裸鼠血清中IFN-β表达
9.2.1样本处理
样本处理方法同9.1.1。
9.2.2ELISA检测
①标准品的加样:设置标准品孔和样品孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μl;
②加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上加样品50μl。加样时将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
③加酶:每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外。
④温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
⑤配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
⑥洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
⑦显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。
⑧终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
⑨测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟内进行。
9.2.3计算方法
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
试验结果如图8所示。TNF-β是体内T淋巴细胞产生的具有多种生物活性的重要细胞因子,具有抗肿瘤、抗病毒感染、诱发炎性反应、免疫调节等作用,其抗肿瘤作用优于TNF-α,它能特异性地杀伤肿瘤细胞而不影响正常组织的生理功能。肿瘤可抑制宿主免疫功能,使巨噬细胞和淋巴细胞受到抑制,导致TNF-β分泌减少。SAL株实验组能够显著提高裸鼠TNF-β水平,表明其通过增强脾淋巴细胞TNF-β的分泌来提高机体抗肿瘤免疫力。
需要说明的是,在本文中,诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来,而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且,术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者终端设备不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品或者终端设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下,由语句“包括……”或“包含……”限定的要素,并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者终端设备中还存在另外的要素。此外,在本文中,“大于”、“小于”、“超过”等理解为不包括本数;“以上”、“以下”、“以内”等理解为包括本数。
需要说明的是,尽管在本文中已经对上述各实施例进行了描述,但并非因此限制本发明的专利保护范围。因此,基于本发明的创新理念,对本文所述实施例进行的变更和修改,或利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换,直接或间接地将以上技术方案运用在其他相关的技术领域,均包括在本发明的专利保护范围之内。

Claims (10)

1.保藏于CGMCC,保藏号为CGMCC No.21786的植物乳杆菌SAL。
2.保藏于CGMCC,保藏号为CGMCC No.21786的植物乳杆菌SAL在抑制细菌生长方面的应用。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述细菌包括金黄色葡萄球ATCC25923、肺炎克雷伯菌ATCC700603、铜绿假单胞菌ATCC27853、粪肠球菌ATCC29212、鲍曼不动杆菌、产单核李斯特菌、福氏志贺菌和鼠伤寒沙门菌。
4.一种抑菌剂,其特征在于,所述抑菌剂中含有权利要求1所述植物乳杆菌SAL作为其有效成分。
5.保藏于CGMCC,保藏号为CGMCC No.21786的植物乳杆菌SAL在减缓肿瘤机体体重下降方面的应用。
6.保藏于CGMCC,保藏号为CGMCC No.21786的植物乳杆菌SAL在抑制肿瘤体积和重量方面的应用。
7.保藏于CGMCC,保藏号为CGMCC No.21786的植物乳杆菌SAL在提高肿瘤机体免疫力方面的应用。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述植物乳杆菌SAL提高肿瘤机体的IFN-γ水平。
9.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述植物乳杆菌SAL提高肿瘤机体的TNF-β水平。
10.保藏于CGMCC,保藏号为CGMCC No.21786的植物乳杆菌SAL在制备抗肿瘤药物、食品、保健品方面的应用。
CN202110368490.0A 2021-04-06 2021-04-06 一株植物乳杆菌sal及其制剂、应用 Active CN112852685B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110368490.0A CN112852685B (zh) 2021-04-06 2021-04-06 一株植物乳杆菌sal及其制剂、应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110368490.0A CN112852685B (zh) 2021-04-06 2021-04-06 一株植物乳杆菌sal及其制剂、应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112852685A true CN112852685A (zh) 2021-05-28
CN112852685B CN112852685B (zh) 2022-03-29

Family

ID=75992232

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110368490.0A Active CN112852685B (zh) 2021-04-06 2021-04-06 一株植物乳杆菌sal及其制剂、应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112852685B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113773989A (zh) * 2021-08-30 2021-12-10 大连工业大学 植物乳杆菌y12所产胞外多糖在缓解由福氏志贺氏菌引起痢疾病症的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104561228A (zh) * 2015-01-26 2015-04-29 西华大学 一种降胆固醇植物乳杆菌i4增菌培养基响应面优化方法
CN105441357A (zh) * 2015-12-16 2016-03-30 北京工商大学 一株产抗肿瘤活性胞外多糖的植物乳杆菌
CN105821093A (zh) * 2016-04-05 2016-08-03 南昌大学 一种植物乳杆菌胞外多糖及其制备方法
CN109234182A (zh) * 2017-12-22 2019-01-18 浙江大学 植物乳杆菌zjuf t34及其应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104561228A (zh) * 2015-01-26 2015-04-29 西华大学 一种降胆固醇植物乳杆菌i4增菌培养基响应面优化方法
CN105441357A (zh) * 2015-12-16 2016-03-30 北京工商大学 一株产抗肿瘤活性胞外多糖的植物乳杆菌
CN105821093A (zh) * 2016-04-05 2016-08-03 南昌大学 一种植物乳杆菌胞外多糖及其制备方法
CN109234182A (zh) * 2017-12-22 2019-01-18 浙江大学 植物乳杆菌zjuf t34及其应用

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113773989A (zh) * 2021-08-30 2021-12-10 大连工业大学 植物乳杆菌y12所产胞外多糖在缓解由福氏志贺氏菌引起痢疾病症的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN112852685B (zh) 2022-03-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Beumer et al. Campylobacter jejuni non-culturable coccoid cells
CN109182207B (zh) 一株具有调节血糖和胆固醇水平等益生功能的嗜酸乳杆菌La-SJLH001及其应用
CN109234182B (zh) 植物乳杆菌zjuft34及其应用
CN103421715B (zh) 一种鼠李糖乳杆菌及其应用
CN114574406B (zh) 鼠李糖乳杆菌菌株wka55及其在制备防治酒精性肝损伤制品方面的用途与产品
CN108004155A (zh) 植物乳杆菌pc-26菌株及其应用
US8728794B2 (en) Strain conferring anti-disease properties to host and bacterial cell composition
CN112175872B (zh) 一种鼠李糖乳杆菌及其制剂、应用
CN110643524A (zh) 一种具有胃肠道粘膜保护作用的复合益生菌制剂及其应用
CN114085789A (zh) 戊糖片球菌ma.wtpqj01及其应用
CN112852685B (zh) 一株植物乳杆菌sal及其制剂、应用
CN116083325A (zh) 一种改善幽门螺杆菌相关性胃肠疾病的鼠李糖乳杆菌及其应用
CN114774327A (zh) 一种植物乳杆菌hb13-2及其应用
WO2024060768A1 (zh) 一种母乳源植物乳杆菌hm-p2及其应用
CN117143767B (zh) 可调节肠道菌群的母乳源发酵粘液乳杆菌msjk0025及其应用
CN105274032B (zh) 一种拮抗空肠弯曲杆菌及抑制其flaA基因表达的罗伊氏乳杆菌
CN113913334B (zh) 一株粪肠球菌ef-za1107-06及其应用
CN116970512A (zh) 一种植物乳杆菌、植物乳杆菌的培养方法及其应用
RU2768281C1 (ru) Комбинированный пробиотик для аквакультуры на основе спорообразующих бактерий рода bacillus и способ его производства
CN111944729B (zh) 一种耐高温植物乳杆菌菌剂及其制备方法与应用
Raja et al. Lactobacillus as a probiotic feed for chickens
CN109234181A (zh) 植物乳杆菌zjuf hn9及其应用
CN110892961B (zh) 一种含乳双歧杆菌bl-99的固体饮料及其应用
CN109679879B (zh) 一种菌株、菌剂及应用
CN113508907A (zh) 一株耐热型发酵乳杆菌在制备促排便食品或药品中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20240131

Address after: Room W605A, Taiwan Science and Technology Enterprise Development Center, No. 88 Xiangxing Road, Torch High tech Zone (Xiang'an) Industrial Zone, Xiamen City, Fujian Province, 361100

Patentee after: Xiamen chengge Biotechnology Co.,Ltd.

Country or region after: China

Address before: 351100 No. 1133, Xue Yuan Street, Chengxiang District, Putian, Fujian.

Patentee before: PUTIAN University

Country or region before: China