CN112852683A

CN112852683A - 一株嗜热解糖厌氧杆菌及其应用

Info

Publication number: CN112852683A
Application number: CN202110315297.0A
Authority: CN
Inventors: 朱明军; 卜杰; 魏浩林
Original assignee: South China University of Technology SCUT
Current assignee: South China University of Technology SCUT
Priority date: 2021-03-24
Filing date: 2021-03-24
Publication date: 2021-05-28
Anticipated expiration: 2041-03-24
Also published as: CN112852683B

Abstract

本发明公开了一株嗜热解糖厌氧杆菌及其应用。该嗜热解糖厌氧杆菌的名称为嗜热解糖厌氧杆菌(Thermoanaerobacterium thermosaccharolyticum)MJ2，保藏号为GDMCC No：61394，于2020年12月29号保藏于位于中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所的广东省微生物菌种保藏中心。本发明提供的嗜热解糖厌氧杆菌能够有效利用葡萄糖、木糖和纤维二糖进行发酵产氢，利用树叶基生物炭进一步在缩短发酵周期的同时有效改善了嗜热解糖厌氧杆菌的发酵产氢表现，具有生物制氢工业化参考价值和较为广阔的应用前景。

Description

一株嗜热解糖厌氧杆菌及其应用

技术领域

本发明属于微生物发酵产氢技术领域，特别涉及一株嗜热解糖厌氧杆菌及其应用。

背景技术

随着化石燃料的不断消耗，人类正面临严峻的环境污染和能源危机双重问题，新能源的开发与应用也因此受到极大关注。其中，氢气由于具有热值高和清洁无污染等优点，具有取代化石燃料的潜力。目前，全世界的制氢技术仍然依赖化石燃料作为原材料，无法根本上解决环境与能源问题。生物制氢技术能够利用废弃有机生物质及其被生物转化所得的可发酵糖进行发酵代谢产氢，同时为废弃生物质的处置和新能源的开发提供解决途径。其中，暗发酵生物制氢技术具有反应器制备设计简单、运行稳定、可利用多种废弃生物质等诸多优点而收到广泛关注。

虽然目前已有大量研究聚焦，但暗发酵生物制氢技术的产氢效率依然有待提高。为了解决这一问题，接种物的选择和运行调控作策略为影响暗发酵产氢效率的关键因素亟需优化。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一株嗜热解糖厌氧杆菌。该嗜热解糖厌氧杆菌能高效利用可发酵糖进行发酵产氢。

本发明的另一目的在于提供上述嗜热解糖厌氧杆菌在生物制氢中的应用。在该应用中，可通过生物炭进一步强化上述嗜热解糖厌氧杆菌的产氢性能，获得较高的氢气产量和得率。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一株嗜热解糖厌氧杆菌，名称为嗜热解糖厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumthermosaccharolyticum)MJ2，保藏号为GDMCC No：61394，于2020年12月29号保藏于位于中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所的广东省微生物菌种保藏中心。

上述嗜热解糖厌氧杆菌在生物制氢中的应用，优选包括以下步骤：

(1)种子液的制备：将所述菌株接种至种子培养基中进行活化和放大培养，获得种子液；

(2)将种子液接种入发酵培养基中进行暗发酵产氢。

步骤(1)中所述的种子培养基是以木糖为碳源的培养基，组成优选如下：木糖4～6g/L、酵母膏3～5g/L、三水合磷酸氢二钾(磷酸氢二钾三水合物)3.9～4.0g/L、磷酸二氢钾1～2g/L、六水合氯化镁0.5～1.5g/L、硫酸铵1～2g/L、二水合氯化钙0.05～0.15g/L、半胱氨酸0.4～0.6g/L、浓度为0.01％(w/v)的刃天青0.5～1.5mL/L，溶剂为水；更优选如下：木糖5g/L、酵母膏4g/L、三水合磷酸氢二钾(磷酸氢二钾三水合物)3.93g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、六水合氯化镁1g/L、硫酸铵1.3g/L、二水合氯化钙0.1g/L、半胱氨酸0.5g/L、浓度为0.01％(w/v)的刃天青1mL/L，溶剂为水。

所述的种子培养基的pH值为7.0±0.3。

步骤(1)中所述的接种的接种量优选为10％(v/v)。

步骤(1)中所述的活化条件优选为：在西林瓶中加入种子培养基，抽真空、充入惰性气体后接种上述嗜热解糖厌氧杆菌，于50～60℃、120～180rpm的条件下震荡培养10～14h；更优选为：在西林瓶中加入种子培养基，抽真空、充入惰性气体后接种上述嗜热解糖厌氧杆菌，于55℃、150rpm条件下震荡培养12h。

步骤(1)中所述的放大培养条件优选为：在血清瓶中加入种子培养基，抽真空、充入惰性气体后接种嗜热解糖厌氧杆菌，于50～60℃、120～180rpm的条件下震荡培养10～14h；更优选为：在血清瓶中加入种子培养基，抽真空、充入惰性气体后接种上述嗜热解糖厌氧杆菌，于55℃、150rpm条件下震荡培养12h。

步骤(2)优选如下：在可密封的发酵容器中加入发酵培养基，密封，抽真空充入惰性气体，灭菌后接种嗜热解糖厌氧杆菌种子液，进行暗发酵产氢。

所述的可密封的发酵容器优选为血清瓶。

所述的惰性气体优选为氮气。

所述的充入惰性气体优选为充入0.01MPa的惰性气体。

所述的灭菌的条件优选为于115～121℃灭菌20～30min；更优选为于115℃灭菌30min。

所述的接种的接种量优选为10％(v/v)。

步骤(2)中所述的发酵培养基是以物质A为碳源的培养基，物质A为葡萄糖、木糖和纤维二糖中的至少一种；组成优选如下：物质A 8～12g/L、酵母膏3～5g/L、三水合磷酸氢二钾3.9～4.0g/L、磷酸二氢钾1～2g/L、六水合氯化镁0.5～1.5g/L、硫酸铵1～2g/L、二水合氯化钙0.05～0.15g/L、半胱氨酸0.4～0.6g/L、浓度为0.01％(w/v)的刃天青0.5～1.5mL/L、生物炭0～20g/L，溶剂为水；更优选如下：物质A 10g/L、酵母膏4g/L、三水合磷酸氢二钾3.93g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、六水合氯化镁1g/L、硫酸铵1.3g/L、二水合氯化钙0.1g/L、半胱氨酸0.5g/L、浓度为0.01％(w/v)的刃天青1mL/L、生物炭0～15g/L，溶剂为水。

所述的生物炭的含量优选为5～15g/L；更优选为5～10g/L。

所述的生物炭通过如下方法得到：收集木质纤维素类生物质，干燥粉碎过筛后进行热解，获得生物炭。

所述的木质纤维素类生物质优选为树叶；更优选为小榕树的春季落叶。

所述的干燥温度优选为50～60℃；更优选为55℃。干燥的作用是去除木质纤维素类生物质的水分，以有利于粉碎。

所述的过筛优选为过至少100目筛；更优选为过200目。

所述的热解的温度优选为300～600℃；更优选为300℃、450℃和600℃。

所述的发酵培养基的pH值为7.0±0.3。

所述的暗发酵的条件优选为：于50～60℃、120～180rpm发酵4～48h；更优选为：于55℃、150rpm发酵4～48h。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

(1)本发明提供的嗜热解糖厌氧杆菌能够有效利用葡萄糖、木糖和纤维二糖进行发酵产氢，具有较好的应用前景。

(2)本发明利用树叶基生物炭进一步在缩短发酵周期的同时有效改善了嗜热解糖厌氧杆菌的发酵产氢表现。

(3)本发明利用嗜热解糖厌氧杆菌结合生物炭强化产氢策略获得可观的产氢得率和产量，具有生物制氢工业化参考价值和较为广阔的应用前景。

附图说明

图1为本发明提供的嗜热解糖厌氧杆菌MJ2的16S rDNA进化树图。

图2为本发明提供的嗜热解糖厌氧杆菌MJ2与另一株热解糖杆菌MJ1在相同培养条件下的氢气产量对比图。

图3为本发明提供的嗜热解糖厌氧杆菌MJ2在不同生物炭添加条件下的氢气产量对比图。

图4为本发明提供的嗜热解糖厌氧杆菌MJ2在特定生物炭添加条件下的产氢时间曲线对比图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1：嗜热解糖厌氧杆菌MJ2的分离鉴定

(1)稳定混合菌群的获得：取造纸污泥(广东省佛山东华造纸厂)和纤维素发酵培养基按1g：10mL的比例制备得到菌悬液，置于经过三次抽真空、充氮气循环的血清瓶中于55℃、150rpm摇床中培养48h后以10％(v/v)接种量接入新鲜的纤维素发酵培养基培养12h，并在此条件下重复转接，获得稳定的产氢菌群。其中，纤维素发酵培养基的成分为：碳源为结晶纤维素(PH-105，25μm)3g/L，酵母膏4g/L，三水合磷酸氢二钾3.93g/L，磷酸二氢钾1.5g/L，六水合氯化镁1g/L，硫酸铵1.3g/L，二水合氯化钙0.1g/L，0.5g/L半胱氨酸和浓度为0.01％(w/v)的刃天青1mL/L，溶剂为水。

(2)单菌落的分离：将获得的菌群利用生理盐水进行倍比稀释后接种至含有木糖固体培养基(在种子培养基基础上加入琼脂20g/L)的厌氧培养管进行三次抽真空和充氮气循环以营造厌氧环境，55℃静置培养48h后观察到菌落长出，分别挑取具有不同颜色和外观形态的菌落进一步分离纯化。通过发酵实验，以氢气产量为指标优选出一株细菌，其菌落直径约1mm，乳白色且边缘呈圆形，镜检观察该菌呈长度为2～4μm的杆状细菌。种子培养基成分为：碳源为木糖5g/L、酵母膏4g/L、三水合磷酸氢二钾3.93g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、六水合氯化镁1g/L、硫酸铵1.3g/L、二水合氯化钙0.1g/L、半胱氨酸0.5g/L，浓度为0.01％(w/v)的刃天青1mL/L，pH 7.0±0.3，溶剂为水。

(3)菌株的16s rDNA鉴定：将分离得到的杆状细菌接种至种子培养基中培养后离心获得菌体，用OMEGA的细菌基因组提取试剂盒提取菌体的基因组DNA，然后以提取的DNA为模板进行PCR扩增，扩增引物采用细菌的16S rDNA通用引物：16S-F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和16S-R(5’-ACGGTTACCTTGTTACGACTT-3’)。PCR反应体系为：基因组DNA 2.5μL，上游引物1μL，下游引物1μL，dNTPs 4μL，高保真Taq聚合酶0.5μL，10×Buffer5μL，补足ddH₂O至50μL。PCR反应条件为95℃预变性5min；95℃变性1min、55℃退火1min、72℃延伸2min，30个循环；72℃保温10min。扩增得到的PCR产物在4℃保存。PCR产物经过加A和胶回收后按说明书的方法与pMD-18T进行连接，筛选阳性克隆子后送至上海生工生物工程有限公司进行16S rDNA测序，结果为：

TGCAAGTCGAGCGAAGTGAGTACTACGGTACGAACTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACGCGTGGACAATCTACCCTGTAGTTTGGGATAACACCTCGAAAGGGGTGCTAATACCGGATAATGTCAAGAAACGGCATCGTTTCTTGAAGAAAGGAGAAATCCGCTATAGGATGAGTCCGCGTCCCATTAGCTAGTTGGCGGGGTAAAAGCCCACCAAGGCGACGATGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGTGAACGGCCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGTGCAATGGGGGAAACCCTGACACAGCGACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCCTTCGGGTCGTAAAGCTCAATAGTATGGGAAGATAGTGACGGTACCATACGAAAGCCCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGGGCGAGCGTTGTCCGGAATTACTGGGCGTAAAGAGCACGTAGGCGGCTGTAAAAGTCAGATGTGAAAAACCTGGGCTCAACCGAGGGTATGCATCTGAAACTAAATAGCTTGAGTCAAGGAGAGGAGAGCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCAGGAAGAATACCAGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGACTTGAACTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGGATACTAGGTGTGGGTGAGGAATCATCCGTGCCGGAGTTAACGCAATAAGTATCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCAGCGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGGCTTGACATCCACAGAATCGGGTAGAAATACTTGAGTGCCTTGTAAGAGGAGCTGTGAGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTTGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTGTTGGTAGTTACCAGCGTGGAAAGACGGGGACTCTACCGAGACTGCCGTGGAGAACACGGAGGAAGGCGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCTATATGCCCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGCCTGAACAGAGGGCAGCGAAGGAGCGATCCGGAGCGAATCCCAGAAAACAGGTCCCAGTTCAGATTGCAGGCTGCAACCCGCCTGCATGAAGACGGAGTTGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTACAACACCCGAAGTCAGTGACCTAACCGAAAGGGAGGAGC。

(4)测序的结果在NCBI上进行比对后并用MEGA 5.05软件进行系统进化树的构建，结果如图1。图1的结果表明分离得到菌株MJ2为嗜热解糖厌氧杆菌。

将得到的菌株命名为嗜热解糖厌氧杆菌(Thermoanaerobacteriumthermosaccharolyticum)MJ2，保藏号为GDMCC No.61394，于2020年12月29号保藏于中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所的广东省微生物菌种保藏中心。

实施例2：嗜热解糖厌氧杆菌MJ2和嗜热解糖厌氧杆菌MJ1利用不同碳源的产氢能力对比：

(1)嗜热厌氧解糖杆菌种子液的制备：在西林瓶中加入种子培养基，抽真空、充氮气后以10％的接种量接种嗜热解糖厌氧杆菌保存菌，于55℃、150rpm条件下震荡培养12h；得到活化的嗜热厌氧解糖杆菌。在血清瓶中加入种子培养基，抽真空、充氮气后以10％的接种量接种活化的嗜热解糖厌氧杆菌，于55℃、150rpm条件下震荡培养12h，放大培养，得到种子液。

(2)发酵培养基的制备和灭菌：分别以10g/L的木糖、葡萄糖和纤维二糖为碳源配置发酵培养基，分装入100mL血清瓶中(工作体积30mL)，用胶塞和铝盖密封后重复进行抽真空和充入0.01MPa氮气三次操作以保证厌氧环境，随后进行灭菌(115℃、30min)，获得发酵培养基。

发酵培养基的组成如下：物质A 10g/L、酵母膏4g/L、三水合磷酸氢二钾3.93g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、六水合氯化镁1g/L、硫酸铵1.3g/L、二水合氯化钙0.1g/L、半胱氨酸0.5g/L、浓度为0.01％(w/v)的刃天青1mL/L、生物炭0g/L，pH7.0±0.3，溶剂为水；物质A为葡萄糖、木糖或纤维二糖。

(3)发酵产氢：将种子液以10％(v/v)接种至发酵培养基中55℃、150rpm培养48h。结果如图2，可见嗜热解糖厌氧杆菌MJ2能利用木糖、葡萄糖和纤维二糖分别生成154.4、146.0和183.7mmol/L氢气，均显著高于热解糖杆菌MJ1(该菌株已在“CN106635887-一种嗜热解糖厌氧杆菌及其在生物制氢中的应用”中公开)。这说明所用的嗜热解糖厌氧杆菌MJ2能够高效利用可发酵糖进行发酵产氢，具有较好的应用前景。

实施例3：嗜热解糖厌氧杆菌MJ2在不同种类生物炭添加条件下的氢气产量测定：

(1)嗜热厌氧解糖杆菌种子液的制备：同实施例2。

(2)发酵培养基的制备和灭菌：同实施例2，只是发酵培养基的碳源固定为10g/L的葡萄糖，且分别添加0g/L和5g/L的不同裂解温度下制备的生物炭(300℃生物炭，450℃生物炭和600℃生物炭)。

生物炭的制备如下：收集华南地区(N 23°，S 113°)生长的小榕树的春季落叶，55℃干燥，粉碎，过200目筛后放入马弗炉中，在300℃、450℃和600℃分别进行热解，获得300℃生物炭，450℃生物炭和600℃生物炭。

(3)发酵产氢：将种子液以10％(v/v)接种量接种至发酵培养基中55℃、150rpm培养14h，测定氢气产量。结果如图3，不同生物炭的添加条件下分别获得41.4、141.6和132.2mmol/L氢气产量，均显著高于不添加生物炭的对照组(28.3mM)，说明生物炭的添加有效提高了氢气生成速率，提高了发酵产氢的效率。

实施例4：嗜热解糖厌氧杆菌MJ2在特定生物炭添加条件下的氢气生成时间曲线：

(1)嗜热厌氧解糖杆菌种子液的制备：同实施例2。

(2)发酵培养基的制备和灭菌：同实施例3，只是生物炭的添加只选择450℃烧制的生物炭(450℃生物炭)且添加量固定为10g/L。

(3)发酵产氢：同实施例2，只是发酵的前12h每隔2h测定氢气产量而随后的发酵中每隔6h测定氢气产量。结果如图4，添加10g/L的450℃生物炭有效提高了氢气生成速率，最终获得176.1mM的氢气产量，显著高于不添加生物炭的对照组(146.1mM)，说明10g/L的450℃生物炭能够有效缩短嗜热解糖厌氧杆菌发酵产氢周期的同时进一步提高其氢气生成能力。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 华南理工大学

<120> 一株嗜热解糖厌氧杆菌及其应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 引物16S-F

<400> 1

agagtttgat cctggctcag 20

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 16S-R

<400> 2

acggttacct tgttacgact t 21

<210> 3

<211> 1379

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 16S rDNA序列

<400> 3

tgcaagtcga gcgaagtgag tactacggta cgaacttagc ggcggacggg tgagtaacgc 60

gtggacaatc taccctgtag tttgggataa cacctcgaaa ggggtgctaa taccggataa 120

tgtcaagaaa cggcatcgtt tcttgaagaa aggagaaatc cgctatagga tgagtccgcg 180

tcccattagc tagttggcgg ggtaaaagcc caccaaggcg acgatgggta gccggcctga 240

gagggtgaac ggccacactg gaactgagac acggtccaga ctcctacggg aggcagcagt 300

ggggaatatt gtgcaatggg ggaaaccctg acacagcgac gccgcgtgag tgaagaaggc 360

cttcgggtcg taaagctcaa tagtatggga agatagtgac ggtaccatac gaaagccccg 420

gctaactacg tgccagcagc cgcggtaata cgtagggggc gagcgttgtc cggaattact 480

gggcgtaaag agcacgtagg cggctgtaaa agtcagatgt gaaaaacctg ggctcaaccg 540

agggtatgca tctgaaacta aatagcttga gtcaaggaga ggagagcgga attcctggtg 600

tagcggtgaa atgcgtagag atcaggaaga ataccagtgg cgaaagcggc tctctggact 660

tgaactgacg ctgaggtgcg aaagcgtggg gagcaaacag gattagatac cctggtagtc 720

cacgccgtaa acgatggata ctaggtgtgg gtgaggaatc atccgtgccg gagttaacgc 780

aataagtatc ccgcctgggg agtacggccg caaggttgaa actcaaagga attgacgggg 840

gcccgcacaa gcagcggagc atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg 900

gcttgacatc cacagaatcg ggtagaaata cttgagtgcc ttgtaagagg agctgtgaga 960

caggtggtgc atggttgtcg tcagcttgtg tcgtgagatg ttgggttaag tcccgcaacg 1020

agcgcaaccc ctgttggtag ttaccagcgt ggaaagacgg ggactctacc gagactgccg 1080

tggagaacac ggaggaaggc ggggatgacg tcaaatcatc atgccctata tgccctgggc 1140

tacacacgtg ctacaatggc ctgaacagag ggcagcgaag gagcgatccg gagcgaatcc 1200

cagaaaacag gtcccagttc agattgcagg ctgcaacccg cctgcatgaa gacggagttg 1260

ctagtaatcg cggatcagca tgccgcggtg aatacgttcc cgggccttgt acacaccgcc 1320

cgtcacacca cgagagttta caacacccga agtcagtgac ctaaccgaaa gggaggagc 1379

Claims

1.一株嗜热解糖厌氧杆菌，其特征在于：所述的嗜热解糖厌氧杆菌的名称为嗜热解糖厌氧杆菌(Thermoanaerobacterium thermosaccharolyticum)MJ2，保藏号为GDMCC No：61394，于2020年12月29号保藏于位于中国广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所的广东省微生物菌种保藏中心。

2.权利要求1所述的嗜热解糖厌氧杆菌在生物制氢中的应用。

3.根据权利要求2所述的嗜热解糖厌氧杆菌在生物制氢中的应用，其特征在于：包括以下步骤：

(2)将种子液接种入发酵培养基中进行暗发酵产氢；

步骤(1)中所述的种子培养基是以木糖为碳源的培养基；

步骤(2)中所述的发酵培养基是以物质A为碳源的培养基，物质A为葡萄糖、木糖和纤维二糖中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的嗜热解糖厌氧杆菌在生物制氢中的应用，其特征在于：步骤(2)如下：在可密封的发酵容器中加入发酵培养基，密封，充入惰性气体，灭菌后接种嗜热解糖厌氧杆菌种子液，进行暗发酵产氢。

5.根据权利要求4所述的嗜热解糖厌氧杆菌在生物制氢中的应用，其特征在于：

所述的可密封的发酵容器为血清瓶；

所述的惰性气体为氮气；

所述的灭菌的条件为于115～121℃灭菌20～30min；

所述的接种的接种量为10％(v/v)。

6.根据权利要求3或4所述的嗜热解糖厌氧杆菌在生物制氢中的应用，其特征在于：

步骤(1)中所述的种子培养基的组成如下：木糖4～6g/L、酵母膏3～5g/L、三水合磷酸氢二钾3.9～4.0g/L、磷酸二氢钾1～2g/L、六水合氯化镁0.5～1.5g/L、硫酸铵1～2g/L、二水合氯化钙0.05～0.15g/L、半胱氨酸0.4～0.6g/L、浓度为0.01％(w/v)的刃天青0.5～1.5mL/L，溶剂为水；

步骤(2)中所述的发酵培养基的组成如下：物质A 8～12g/L、酵母膏3～5g/L、三水合磷酸氢二钾3.9～4.0g/L、磷酸二氢钾1～2g/L、六水合氯化镁0.5～1.5g/L、硫酸铵1～2g/L、二水合氯化钙0.05～0.15g/L、半胱氨酸0.4～0.6g/L、浓度为0.01％(w/v)的刃天青0.5～1.5mL/L、生物炭0～20g/L，溶剂为水；

7.根据权利要求6所述的嗜热解糖厌氧杆菌在生物制氢中的应用，其特征在于：

步骤(1)中所述的种子培养基的组成如下：木糖5g/L、酵母膏4g/L、三水合磷酸氢二钾3.93g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、六水合氯化镁1g/L、硫酸铵1.3g/L、二水合氯化钙0.1g/L、半胱氨酸0.5g/L、浓度为0.01％(w/v)的刃天青1mL/L，溶剂为水；

步骤(2)中所述的发酵培养基的组成如下：物质A 10g/L、酵母膏4g/L、三水合磷酸氢二钾3.93g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、六水合氯化镁1g/L、硫酸铵1.3g/L、二水合氯化钙0.1g/L、半胱氨酸0.5g/L、浓度为0.01％(w/v)的刃天青1mL/L、生物炭0～15g/L，溶剂为水。

8.根据权利要求6所述的嗜热解糖厌氧杆菌在生物制氢中的应用，其特征在于：

所述的木质纤维素类生物质为树叶；

所述的干燥温度为50～60℃；

所述的过筛为过至少100目筛；

所述的热解的温度为300～600℃。

9.根据权利要求3或4所述的嗜热解糖厌氧杆菌在生物制氢中的应用，其特征在于：所述的暗发酵的条件为：于50～60℃、120～180rpm发酵4～48h；进一步为：于55℃、150rpm发酵4～48h。

10.根据权利要求3或4所述的嗜热解糖厌氧杆菌在生物制氢中的应用，其特征在于：

步骤(1)中所述的活化条件为：在西林瓶中加入种子培养基，抽真空、充入惰性气体后接种上述嗜热解糖厌氧杆菌，于50～60℃、120～180rpm的条件下震荡培养10～14h；

步骤(1)中所述的放大培养条件为：在血清瓶中加入种子培养基，抽真空、充入惰性气体后接种嗜热解糖厌氧杆菌，于50～60℃、120～180rpm的条件下震荡培养10～14h。