CN114874941B - 一株具有水解生淀粉能力的叶际类芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

一株具有水解生淀粉能力的叶际类芽孢杆菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN114874941B
CN114874941B CN202210509925.3A CN202210509925A CN114874941B CN 114874941 B CN114874941 B CN 114874941B CN 202210509925 A CN202210509925 A CN 202210509925A CN 114874941 B CN114874941 B CN 114874941B
Authority
CN
China
Prior art keywords
paenibacillus
fermentation
starch
culture medium
glucose
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202210509925.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114874941A (zh
Inventor
鄢贵龙
周玉珍
谢鹏
邬建国
金慈
钱时权
汪伟
赵利琴
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Huaiyin Normal University
Original Assignee
Huaiyin Normal University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Huaiyin Normal University filed Critical Huaiyin Normal University
Priority to CN202210509925.3A priority Critical patent/CN114874941B/zh
Publication of CN114874941A publication Critical patent/CN114874941A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114874941B publication Critical patent/CN114874941B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/02—Monosaccharides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/59—Biological synthesis; Biological purification

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一株具有水解生淀粉能力的叶际类芽孢杆菌及其应用，提供了一株叶际类芽孢杆菌Paenibacillus phyllosphaerae HYNU‑YU148，并提供了一种利用该菌株水解生淀粉制备葡萄糖的方法，该方法具有成本低，不受地域、季节等条件限制，适合工业化大规模生产等优点。同时本发明将传统淀粉制糖工艺的淀粉蒸煮糊化、液化、糖化多步合并为一步直接糖化，不需要传统的高温蒸煮糊化和糖化冷却工序，极大地降低了能量的消耗，简化了工序，降低了生产成本，符合当前环保和可持续发展的要求。

Description

一株具有水解生淀粉能力的叶际类芽孢杆菌及其应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，特别涉及一株具有水解生淀粉能力的叶际类芽孢杆菌及其应用。
背景技术
随着人类社会经济发展，当前的能源结构、资源结构、环境状态已不能支撑现有的发展模式。特别是随着煤、石油等能源的耗竭以及环境保护的迫切需求，如果没有基于科技进步的大力开发，能源和资源将难以支撑人类社会的进一步发展。因此，人类正面临着经济发展方式的新变革，而从基于不可再生的“碳氢化合物”为能源和原材料的经济结构，向基于可再生的“碳水化合物”的经济结构的转变是未来社会发展方式的新选择。
微生物由于其强大和多样化的代谢能力，能将来源于太阳能的可再生资源碳水化合物转变为现代社会所需要的化工原料和能源，成为构筑可持续发展经济结构最重要的战略资源和技术源泉。在利用微生物进行各种产品的生产过程中，营养物质的成本中碳源占了主要部分。葡萄糖是微生物的一种通用碳源，也是目前发酵工业使用最广泛的碳源。目前，工业葡萄糖的来源主要还是通过淀粉的水解获得。以淀粉质为原料生产葡萄糖时，其工艺流程一般分为三个阶段，即淀粉质原料的糊化、液化和糖化。在这一工艺过程中，蒸煮糊化和糖化冷却工序要消耗大量能量，也是造成制糖成本和发酵成本高昂的主要原因。例如，在酒精发酵过程中，蒸煮糊化过程所需的热能大概占全部生产所需能耗的30%-40%。若能直接利用未糊化淀粉即生淀粉制取葡萄糖，将能有效降低蒸煮糊化和糖化冷却工序的能耗，极大地降低制糖工业的生产成本，提高企业的竞争能力。
发明内容
本发明目的在于提供一株能水解生淀粉的叶际类芽孢杆菌及其应用，利用叶际类芽孢杆菌Paenibacillus phyllosphaerae HYNU-YU148直接发酵生淀粉制备葡萄糖，不需要传统的高温蒸煮糊化和糖化冷却工序，极大地降低了能量的消耗，简化了工序，降低了生产成本，可以有效解决背景技术中的问题。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种叶际类芽孢杆菌，所述叶际类芽孢杆菌为Paenibacillus phyllosphaeraeHYNU-YU148，该菌株于2021年10月25日保藏于广东省微生物菌种保藏中心（简称：GDMCC）（广东省广州市先烈中路100号，广东省微生物研究所），保藏编号：GDMCC 62008。
叶际类芽孢杆菌Paenibacillus phyllosphaerae HYNU-YU148在发酵生淀粉制备葡萄糖中的应用。
利用叶际类芽孢杆菌Paenibacillus phyllosphaerae HYNU-YU148发酵生淀粉制备葡萄糖的方法，包括以下步骤：
S1.将Paenibacillus phyllosphaerae HYNU-YU148接种至固体平板培养基上，将固体平板培养基置于28-32℃恒温培养箱中培养2-4天，用接种环从固体平板培养基上挑取单菌落至液体种子培养基中，于28-32℃，100-200rpm下摇床培养1-3天作为种子液备用；
S2. 将S1中培养好的种子液接入生淀粉发酵培养基中发酵，发酵后得到含葡萄糖的发酵液；
S3. 将S2所得的含葡萄糖的发酵液进行离心，离心得到的上清液即为水解获得的葡萄糖溶液。
进一步地，所述S1中固体平板培养基的组分和质量含量为蛋白胨8-12g/L，酵母浸粉4-6g/L，氯化钠4-6g/L，可溶性淀粉8-12g/L，琼脂18-22g/L。
进一步地，所述S1中液体种子培养基组分和质量含量为蛋白胨8-12g/L，酵母浸粉4-6g/L，氯化钠4-6g/L，可溶性淀粉8-12g/L。
进一步地，所述S2中种子液接入生淀粉发酵培养基得发酵液，所述发酵液中的种子液按体积比为1-10%。
进一步地，所述S2中培养基组分和质量含量为生淀粉10-100g/L，硫酸铵1-3g/L，蛋白胨2-10g/L，磷酸氢二钾0.5-1.5g/L，七水硫酸镁0.4-0.6g/L，氯化钙0.5-1.5g/L，七水硫酸亚铁0.005-0.015g/L，培养基的pH值为6.5-7.5。
进一步地，所述S2的发酵条件为摇床速度为100-200r/min，发酵温度为28-32℃，发酵时间为72-120小时。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供的菌株及其应用于生淀粉的葡萄糖制备，具有成本低，不受地域、季节等条件限制，适合工业化大规模生产等优点。同时本发明将传统淀粉制糖工艺的淀粉蒸煮糊化、液化、糖化多步合并为一步直接糖化，不需要传统的高温蒸煮糊化和糖化冷却工序，极大地降低了能量的消耗，简化了工序，降低了生产成本，符合环保和可持续发展的要求。
附图说明
图1菌种经革兰氏染色后的菌体形态图
图2菌种在生淀粉平板上培养后菌落照片。
具体实施方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
一、菌株的分离、筛选与鉴定
从淀粉制品厂周围取土样，然后将样品用无菌水制成菌悬液，梯度稀释后涂布于淀粉为唯一碳源的分离平板中，平板培养基为生淀粉20 g/L，硫酸铵2 g/L，蛋白胨5 g/L，磷酸氢二钾1 g/L，七水硫酸镁0.5 g/L，氯化钙1 g/L，七水硫酸亚铁0.01 g/L，琼脂20 g/L，其中生淀粉为干热灭菌，其它成分配置好后湿热灭菌。经培养后挑选透明圈直径比较大的菌落并进一步划线分离培养获得纯培养物，获得叶际类芽孢杆菌Paenibacillus phyllosphaerae HYNU-YU148，保存于斜面。
按照生工EZ-10柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒说明书提取总DNA。以上述提取的总DNA为模板，采用引物27F/1492R进行PCR扩增。PCR产物在1％琼脂糖凝胶中电泳，由电泳结果切割所需DNA目的条带，按UNIQ-10柱式DNA胶回收试剂盒说明书进行纯化回收。PCR产物由上海生工生物工程有限公司测序。测序结果如下：
GACTACACCTTCGGGTGTGGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTAGGTAACCTGCCTGTAAGACCGGGATAACATTCGGAAACGAATGCTAATACCGGATATGCGGTTTGCTCGCATGAGCGAATCGGGAAAGACGGTGCAAGCTGTCACTTACAGATGGACCTGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGGGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGCCAGGGAAGAACGAGTGGGAGAGTAACTGCTCCTGCTATGACGGTACCTGAGAAGAAAGCCCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGTTTTGTAAGTCAGGTGTTTAAGCTCGGGGCTCAACCCCGATTCGCATCTGAAACTGCAAGACTTGAGTGCAGAAGAGGGAAAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGGCTGTAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGCTAGGTGTTAGGGGTTTCGATACCCTTGGTGCCGAAGTTAACACATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGCTCGCAAGAGTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCAGTGGAGTATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCCTTTGAATCCTCTAGAGATAGAGGCGGCCCTTCGGGGACAGAGGAGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATTTTAGTTGCCAGCACTTTAAGGTGGGCACTCTAGAATGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGCGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTACTACAATGGCCGTTACAACGGGAAGCGAAGGAGCGATCTGGAGCGAATCCTAAAAAGGCGGTCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGTCGGAATTGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTACAACACCCGAAGCCGGTGGGGT
将测得菌株的16S rDNA序列与GenBank数据库中序列进行BLAST分析，经BLAST序列比对及系统进化树分析，结果表明：本发明的菌株位于系统发育树与叶际类芽孢杆菌（Paenibacillus phyllosphaerae）有最近的亲缘关系，HYNU-YU148 16S rRNA基因序列与Paenibacillus phyllosphaerae strain SM26的同源性为99%，结合进化树，确定其为叶际类芽孢杆菌（Paenibacillus phyllosphaerae）。
本发明提供的Paenibacillus phyllosphaerae HYNU-YU148，该菌株于2021年10月25日保藏于广东省微生物菌种保藏中心（简称：GDMCC）（广东省广州市先烈中路100号，广东省微生物研究所），保藏编号：GDMCC 62008。
二、利用叶际类芽孢杆菌Paenibacillus phyllosphaerae HYNU-YU148直接发酵生淀粉制得葡萄糖，包括以下实施例：
实施例1
S1. 将叶际类芽孢杆菌Paenibacillus phyllosphaerae HYNU-YU148接种至固体平板培养基上，固体平板培养基的组分和质量含量为：蛋白胨11.5g/L，酵母浸粉4g/L，氯化钠6g/L，可溶性淀粉8g/L，琼脂17.5g/L。将固体平板培养基置于32℃恒温培养箱中培养2天，用接种环从固体平板培养基上挑取单菌落至液体种子培养基中，液体种子培养基的组分和质量含量为：蛋白胨8g/L，酵母浸粉4g/L，氯化钠4g/L，可溶性淀粉8g/L。28℃，110rpm下摇床培养1天作为种子液备用；
S2. 将S1中培养好的种子液按体积比1%接入生淀粉发酵培养基中进行发酵，生淀粉发酵培养基组分和质量含量为：生淀粉10g/L，硫酸铵1g/L，蛋白胨2g/L，磷酸氢二钾0.5g/L，七水硫酸镁0.4g/L，氯化钙0.5g/L，七水硫酸亚铁0.005g/L。培养基的pH值为6.5。摇床速度为190r/min，培养温度为32℃，培养时间为74小时。
S3. 将S2所得的含葡萄糖的发酵液进行离心，离心得到的上清液即为水解获得的葡萄糖溶液。
经检验，每克淀粉可转化为0.832g葡萄糖，转化率为83.2％，葡萄糖溶液中葡萄糖含量为9.7g/L。
实施例2
S1. 将叶际类芽孢杆菌Paenibacillus phyllosphaerae HYNU-YU148接种至固体平板培养基上，固体平板培养基组分和质量含量为：蛋白胨g7.5g/L，酵母浸粉6g/L，氯化钠6g4g/L，可溶性淀粉12g/L，琼脂21.52g/L。将固体平板置于2832℃恒温培养箱中培养4天，用接种环从固体平板培养基上挑取单菌落至液体种子培养基中，液体种子培养基中组分和质量含量为：蛋白胨12g/L，酵母浸粉6g/L，氯化钠6g/L，可溶性淀粉11.52g/L。32℃，200rpm下摇床培养3天作为种子液备用；
S2. 将S1中培养好的种子液按体积比为10%接入生淀粉发酵培养基中进行发酵，生淀粉发酵培养基组分和质量含量为：生淀粉100g/L，硫酸铵3g/L，蛋白胨10g/L，磷酸氢二钾1.5g/L，七水硫酸镁0.6g/L，氯化钙1.5g/L，七水硫酸亚铁0.015g/L。培养基的pH值为7.5。摇床速度为100r/min，培养温度为32℃，培养时间为118小时。
S3. 将S2所得的含葡萄糖的发酵液进行离心，离心得到的上清液即为水解获得的葡萄糖溶液。
经检验，每克淀粉可转化为0.756g葡萄糖，转化率为75.6％，葡萄糖溶液中葡萄糖含量为8.8g/L。
实施例3
S1. 将叶际类芽孢杆菌Paenibacillus phyllosphaerae HYNU-YU148接种至固体平板培养基上，固体平板培养基组分和质量含量为：蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，氯化钠5g/L，可溶性淀粉10g/L，琼脂20g/L。将固体平板置于30℃恒温培养箱中培养3天，用接种环从固体平板培养基上挑取单菌落至液体种子培养基中，液体种子培养基的组分和质量含量为：蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，氯化钠5g/L，可溶性淀粉10g/L。30℃，150rpm下摇床培养2天作为种子液备用；
S2. 将S1中培养好的种子液按体积比为5 %接入培养基中发酵，发酵培养基组分和质量含量为：生淀粉50g/L，硫酸铵2g/L，蛋白胨10g/L，磷酸氢二钾1g/L，七水硫酸镁0.5g/L，氯化钙1g/L，七水硫酸亚铁0.01g/L。培养基的pH值为7.0。摇床速度为150r/min，培养温度为30℃，培养时间为96小时。
S3. 将S2所得的发酵液离心，上清液即水解获得的葡萄糖溶液。
经检验，每克淀粉可转化为0.943g葡萄糖，转化率为94.3％，葡萄糖溶液中葡萄糖含量为5.5g/L。
实施例4
S2. 将培养好的种子液按体积比为1%接入培养基中发酵，发酵培养基组成和质量含量为：生淀粉10g/L，硫酸铵2 g/L，蛋白胨2 g/L，磷酸氢二钾1 g/L，七水硫酸镁0.5 g/L，氯化钙1 g/L，七水硫酸亚铁0.01 g/L。培养基的pH值为7.0。摇床速度为150r/min，培养温度为30℃，培养时间为72小时。
S3. 将S2所得的发酵液离心，上清液即水解获得的葡萄糖溶液。
其余实施如实施例3。
经检验，每克淀粉可转化为0.816g葡萄糖，转化率为81.6％，葡萄糖溶液中葡萄糖含量为9.5g/L。
实施例5
S2. 将培养好的种子液按体积比为10%接入培养基中发酵，发酵培养基组成和质量含量为：生淀粉100g/L，硫酸铵2 g/L，蛋白胨10 g/L，磷酸氢二钾1 g/L，七水硫酸镁0.5g/L，氯化钙1 g/L，七水硫酸亚铁0.01 g/L。培养基的pH值为7.0。摇床速度为150r/min，培养温度为30℃，培养时间为120小时。
S3. 将S2所得的发酵液离心，上清液即水解获得的葡萄糖溶液。
其余实施如实施例3。
经检验，每克淀粉可转化为0.763g葡萄糖，转化率为76.3％，葡萄糖溶液中葡萄糖含量为8.9g/L。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
序列表
<110> 淮阴师范学院
<120> 一株具有水解生淀粉能力的叶际类芽孢杆菌及其应用
<130> 2022
<141> 2022-05-11
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 2
<211> 1381
<212> DNA
<213> 人工序列(Paenibacillus phyllosphaerae HYNU-YU148)
<400> 2
gactacacct tcgggtgtgg ttagcggcgg acgggtgagt aacacgtagg taacctgcct 60
gtaagaccgg gataacattc ggaaacgaat gctaataccg gatatgcggt ttgctcgcat 120
gagcgaatcg ggaaagacgg tgcaagctgt cacttacaga tggacctgcg gcgcattagc 180
tagttggtgg ggtaacggct caccaaggcg acgatgcgta gccgacctga gagggtgatc 240
ggccacactg ggactgagac acggcccaga ctcctacggg aggcagcagt agggaatctt 300
ccgcaatgga cgaaagtctg acggagcaac gccgcgtgag tgatgaaggt tttcggatcg 360
taaagctctg ttgccaggga agaacgagtg ggagagtaac tgctcctgct atgacggtac 420
ctgagaagaa agccccggct aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt agggggcaag 480
cgttgtccgg aattattggg cgtaaagcgc gcgcaggcgg ttttgtaagt caggtgttta 540
agctcggggc tcaaccccga ttcgcatctg aaactgcaag acttgagtgc agaagaggga 600
aagtggaatt ccacgtgtag cggtgaaatg cgtagagatg tggaggaaca ccagtggcga 660
aggcgacttt ctgggctgta actgacgctg aggcgcgaaa gcgtggggag caaacaggat 720
tagataccct ggtagtccac gccgtaaacg atgaatgcta ggtgttaggg gtttcgatac 780
ccttggtgcc gaagttaaca cattaagcat tccgcctggg gagtacgctc gcaagagtga 840
aactcaaagg aattgacggg gacccgcaca agcagtggag tatgtggttt aattcgaagc 900
aacgcgaaga accttaccag gtcttgacat ccctttgaat cctctagaga tagaggcggc 960
ccttcgggga cagaggagac aggtggtgca tggttgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt 1020
tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct tgattttagt tgccagcact ttaaggtggg 1080
cactctagaa tgactgccgg tgacaaaccg gaggaaggcg gggatgacgt caaatcatca 1140
tgccccttat gacctgggct acacacgtac tacaatggcc gttacaacgg gaagcgaagg 1200
agcgatctgg agcgaatcct aaaaaggcgg tctcagttcg gattgcaggc tgcaactcgc 1260
ctgcatgaag tcggaattgc tagtaatcgc ggatcagcat gccgcggtga atacgttccc 1320
gggtcttgta cacaccgccc gtcacaccac gagagtttac aacacccgaa gccggtgggg 1380
t 1381

Claims (7)

1.一株具有水解生淀粉能力的叶际类芽孢杆菌(Paenibacillusphyllosphaerae)，其特征在于：所述叶际类芽孢杆菌为PaenibacillusphyllosphaeraeHYNU-YU148，该菌株于2021年10月25日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCCNo:62008。
2.权利要求1所述的叶际类芽孢杆菌PaenibacillusphyllosphaeraeHYNU-YU148在发酵生淀粉制备葡萄糖中的应用。
3.利用权利要求1所述的叶际类芽孢杆菌PaenibacillusphyllosphaeraeHYNU-YU148发酵生淀粉制备葡萄糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.将所述叶际类芽孢杆菌PaenibacillusphyllosphaeraeHYNU-YU148接种至固体平板培养基上，将固体平板培养基置于28-32℃恒温培养箱中培养2-4天，用接种环从固体平板培养基上挑取单菌落至液体种子培养基中，于28-32℃，摇床培养1-3天作为种子液备用；
S2.将S1中培养好的种子液接入生淀粉发酵培养基中发酵，发酵后得到含葡萄糖的发酵液；
S3.将S2所得的含葡萄糖的发酵液进行离心，得到的上清液即为葡萄糖溶液；
所述S2中生淀粉发酵培养基组分和质量含量为生淀粉10-100g/L，硫酸铵1-3g/L，蛋白胨2-10g/L，磷酸氢二钾0.5-1.5g/L，七水硫酸镁0.4-0.6g/L，氯化钙0.5-1.5g/L，七水硫酸亚铁0.005-0.015g/L，培养基的pH值为6.5-7.5。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述S1中固体平板培养基的组分和质量含量为蛋白胨8-12g/L，酵母浸粉4-6g/L，氯化钠4-6g/L，可溶性淀粉8-12g/L，琼脂18-22g/L。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述S1中液体种子培养基组分和质量含量为蛋白胨8-12g/L，酵母浸粉4-6g/L，氯化钠4-6g/L，可溶性淀粉8-12g/L。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述S2中种子液按体积比1-10％接入生淀粉发酵培养基得发酵液。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述S2的发酵条件为摇床速度为100-200r/min，发酵温度为28-32℃，发酵时间为72-120小时。
CN202210509925.3A 2022-05-11 2022-05-11 一株具有水解生淀粉能力的叶际类芽孢杆菌及其应用 Active CN114874941B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210509925.3A CN114874941B (zh) 2022-05-11 2022-05-11 一株具有水解生淀粉能力的叶际类芽孢杆菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210509925.3A CN114874941B (zh) 2022-05-11 2022-05-11 一株具有水解生淀粉能力的叶际类芽孢杆菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114874941A CN114874941A (zh) 2022-08-09
CN114874941B true CN114874941B (zh) 2023-08-11

Family

ID=82676535

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210509925.3A Active CN114874941B (zh) 2022-05-11 2022-05-11 一株具有水解生淀粉能力的叶际类芽孢杆菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114874941B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114854795B (zh) * 2022-05-11 2023-08-18 淮阴师范学院 一种双菌发酵生淀粉生产乙醇的方法

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014099525A1 (en) * 2012-12-21 2014-06-26 Danisco Us Inc. Paenibacillus curdlanolyticus amylase, and methods of use, thereof
CN104726385A (zh) * 2015-04-22 2015-06-24 湖南龙腾生物科技有限公司 具有高纤维素酶活性的菌株及其应用和获得方法
CN104877936A (zh) * 2015-05-15 2015-09-02 江西师范大学 一株从传统豆豉中分离得到产纤溶酶的解淀粉芽孢杆菌菌株
CN105802879A (zh) * 2016-03-25 2016-07-27 浙江工业大学 类芽孢杆菌d7及其在降解纤维素中的应用
KR20170033642A (ko) * 2015-09-17 2017-03-27 대한민국(농촌진흥청장) 셀룰라아제 생산능이 있는 페니바실러스 자밀레 ｂｒｃ１５­１ 균주 및 이의 이용
CN106630063A (zh) * 2016-12-20 2017-05-10 南京理工大学 一种类芽孢杆菌产生的微生物絮凝剂及其应用
CN109251879A (zh) * 2018-11-22 2019-01-22 青岛中达农业科技有限公司 一种杰米拉类芽孢杆菌高密度发酵方法
CN111909872A (zh) * 2020-08-03 2020-11-10 南京理工大学 类芽孢杆菌ZX1905及其生产的胞外多糖Lubcan和应用
CN112501071A (zh) * 2020-12-15 2021-03-16 河北省科学院生物研究所 一株多粘类芽孢杆菌swgc4112及其培养方法和应用
CN114854795A (zh) * 2022-05-11 2022-08-05 淮阴师范学院 一种双菌发酵生淀粉生产乙醇的方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8652819B2 (en) * 2008-05-23 2014-02-18 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Paenibacillus spp. and methods for fermentation of lignocellulosic materials

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014099525A1 (en) * 2012-12-21 2014-06-26 Danisco Us Inc. Paenibacillus curdlanolyticus amylase, and methods of use, thereof
CN104726385A (zh) * 2015-04-22 2015-06-24 湖南龙腾生物科技有限公司 具有高纤维素酶活性的菌株及其应用和获得方法
CN104877936A (zh) * 2015-05-15 2015-09-02 江西师范大学 一株从传统豆豉中分离得到产纤溶酶的解淀粉芽孢杆菌菌株
KR20170033642A (ko) * 2015-09-17 2017-03-27 대한민국(농촌진흥청장) 셀룰라아제 생산능이 있는 페니바실러스 자밀레 ｂｒｃ１５­１ 균주 및 이의 이용
CN105802879A (zh) * 2016-03-25 2016-07-27 浙江工业大学 类芽孢杆菌d7及其在降解纤维素中的应用
CN106630063A (zh) * 2016-12-20 2017-05-10 南京理工大学 一种类芽孢杆菌产生的微生物絮凝剂及其应用
CN109251879A (zh) * 2018-11-22 2019-01-22 青岛中达农业科技有限公司 一种杰米拉类芽孢杆菌高密度发酵方法
CN111909872A (zh) * 2020-08-03 2020-11-10 南京理工大学 类芽孢杆菌ZX1905及其生产的胞外多糖Lubcan和应用
CN112501071A (zh) * 2020-12-15 2021-03-16 河北省科学院生物研究所 一株多粘类芽孢杆菌swgc4112及其培养方法和应用
CN114854795A (zh) * 2022-05-11 2022-08-05 淮阴师范学院 一种双菌发酵生淀粉生产乙醇的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
一株产生淀粉酶杆菌Bacillus sp.GEL-09的筛选、鉴定及发酵条件优化;段绪果 等;《微生物学通报》;第45卷(第6期);第1180-1189页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114874941A (zh) 2022-08-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Yokoi et al. Microbial hydrogen production from sweet potato starch residue
CN110484471B (zh) 一株高产细菌纤维素的耐酸菌株及其生产细菌纤维素的方法
CN104164395A (zh) 一种用于发酵产氢的拜氏梭菌及其发酵方法和应用
CN114874941B (zh) 一株具有水解生淀粉能力的叶际类芽孢杆菌及其应用
CN112852678A (zh) 一株产烟酰胺单核苷酸的成都肠杆菌及其应用
CN103937691B (zh) 一株产β‑果糖苷酶的米曲霉菌株及其培养方法与应用
CN101724592B (zh) 一株枯草芽孢杆菌及其在生物催化生产l-乳酸中的应用
CN101988075B (zh) 一种利用专性厌氧巴氏梭菌发酵制氢的方法
CN114854795B (zh) 一种双菌发酵生淀粉生产乙醇的方法
CN111826308B (zh) 一株海洋沉积物来源的几丁质高效降解菌及其应用
CN108753643A (zh) 一种弧菌h11及其应用
CN101531979B (zh) 肺炎克雷伯氏菌及其制备氢气和2,3-丁二醇的方法
CN105802892A (zh) 一种产角蛋白酶的嗜麦芽寡养单胞菌及其应用
CN106635887B (zh) 一种嗜热解糖厌氧杆菌及其在生物制氢中的应用
CN116200286B (zh) 一株高效糖化纤维素的热纤梭菌及其应用
CN103468606B (zh) 一株产酸克雷伯氏菌及其在生产蒜糖醇中的应用
CN101250484B (zh) 扩张青霉菌株及其培养方法与应用
CN107365730A (zh) 枯草芽孢杆菌菌株及利用该菌株生产支链淀粉酶的方法
CN108728370A (zh) 一株高效产壳聚糖酶的鲑亚科肾杆菌菌株qd-01及其发酵方法和应用
CN103952334B (zh) 一种微生物发酵生产l-赤藓酮糖的菌株hd385和方法
CN112852683B (zh) 一株嗜热解糖厌氧杆菌及其应用
CN112746026A (zh) 一株维斯假丝酵母及其应用
CN115786300B (zh) 一株低产芽孢解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN114480223B (zh) 一种热反硝化地芽孢杆菌hx-4及其生产纤维素酶的方法和应用
CN115261265B (zh) 一株碱性蛋白酶高产菌株及其发酵工艺

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant