CN112843028A - 维生素k1与替莫唑胺联合用药在制备治疗胆管癌药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药领域，特别涉及维生素K1和替莫唑胺联合用药在制备治疗胆管癌药物中的应用。本发明首次提出维生素K1和替莫唑胺联合用药在制备治疗胆管癌药物中的应用，两者具有明显的协同作用，有效提高疗效，相对于单一组分疗效更为显著，提高了对肿瘤细胞的杀伤性；有效降低用药量，从而减少毒副作用。两者联合使用也可节约成本，减轻病人的经济负担，为胆管癌的防治提供了一条新途径，在医药学领域有广阔的应用前景。

Description

维生素K1与替莫唑胺联合用药在制备治疗胆管癌药物中的 应用

技术领域

本发明属于医药领域，特别涉及维生素K1与替莫唑胺联合用药在制备治疗胆管癌药物中的应用。

背景技术

胆管癌是起源于胆管上皮细胞的恶性肿瘤，是仅次于肝癌的第二大肝胆系统常见恶性肿瘤。肝胆恶性肿瘤总体死亡率在所有恶性肿瘤中居第5位。我国为胆管癌高发地区，近年来发病率不断上升。胆管癌侵袭性强，仅30％~40％的病人在诊断时能通过手术切除得到有效的治疗，而大多数患者确诊时已处于晚期，缺乏有效的治疗手段，预后极差。

替莫唑胺是抗恶性胶质瘤和黑色素瘤的一线化疗药物，能对DNA特别是其鸟嘌呤片段部分进行甲基化作用，导致DNA的错误复制和蛋白质表达受限，从而引起细胞信息紊乱进而导致细胞凋亡，因此替莫唑胺对于快速分裂增殖的恶性细胞具有更大的抑制生长和杀伤作用。但由于替莫唑胺在生理条件下的不稳定性，其循环时间较短，并且该分子不具有靶向性，恶性胶质瘤细胞系和黑色素瘤细胞系对替莫唑胺具有一定的抗药性，需要通过提高药物浓度来实现药效，而与此同时即会对正常组织细胞造成伤害，如引发肝损伤等

维生素K是1934年由丹麦科学家发现的一组脂溶性维生素，是一类具有叶绿醌生物活性的萘醌基团的衍生物，主要包括维生素K1、维生素K2、维生素K3和维生素K4等。其中维生素K1和维生素K2存在于自然界，维生素K3和维生素K4为合成物。维生素K作为羧化酶的辅酶参与肝脏合成凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ和Ⅹ，临床上常用于治疗维生素K缺乏或凝血酶原缺乏导致的出血以及新生儿出血等，也可用于抗凝剂中毒的解救。维生素K还参与了人体骨代谢，可以用于治疗骨质疏松。此外维生素K在抗肿瘤、镇痛、抑菌等方面也有应用。

关于维生素K1与替莫唑胺共同作用效果的报道尚未出现。本发明在人胆管癌模型中研究了维生素K1在增敏替莫唑胺治疗胆管癌中的作用。

发明内容

发明目的

提出维生素K1增敏替莫唑胺在制备治疗胆管癌药物中的应用，增强了该化合物的疗效，为老药新用提供依据。

技术方案

本发明提供了维生素K1与替莫唑胺联合用药在制备治疗胆管癌药物中的应用

因此，维生素K1与替莫唑胺联合用药在制备治疗胆管癌药物中的应用，以及一种同时含有维生素K1与替莫唑胺的抗胆管癌药物，都在本发明的保护范围之内。

优选地，所述胆管癌为人胆管癌细胞CCLP细胞和HUCCT1细胞。

优选地，所述胆管癌为人胆管癌组织类器官。

另外，优选地，所述维生素K1与替莫唑胺的重量比为：维生素K1：替莫唑胺=20~1280:7.5~240。

优选地，所述维生素K1与替莫唑胺的重量比为：维生素K1：替莫唑胺=320~1280:120~240。

特别优选地，所述维生素K1与替莫唑胺的重量比为：维生素K1：替莫唑胺=1280:240。

有益效果

本发明首次公开了维生素K1在提高胆管癌细胞对替莫唑胺敏感性方面的发现，可以实现协同增效的作用，实现抗肿瘤效果的显著提高，通过联合用药减少了替莫唑胺用量，从而减低毒副作用，对维生素K1与替莫唑胺联合用药抗胆管癌应用具有显著的意义。

附图说明

图1是MTT方法检测维生素K1单独处理胆管癌细胞后的抑制率分析结果图。

图2是MTT方法检测替莫唑胺单独使用或维生素K1与替莫唑胺联合用药处理胆管癌细胞后的抑制率分析结果图；其中，A：CCLP细胞结果分析；B:HUCCT1细胞结果分析。

图3是替莫唑胺单独使用或维生素K1与替莫唑胺联合用药处理人胆管癌组织类器官后的抑制率分析结果图。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂盒材料均为市购。

实施例1MTT法检测不同胆管癌细胞对维生素K1的敏感性

1、实验材料

（1）药物：维生素K1注射液。

（2）胆管癌细胞：人胆管癌细胞CCLP细胞和HUCCT1细胞。

（3）市购的MTT试剂盒。

2、实验分组

（1）对照组：空白对照，即胆管癌细胞不经过任何药物处理。

（2）实验组：使用不同浓度的维生素K1处理胆管癌细胞。

3、MTT法检测不同肿瘤细胞对维生素K1的敏感性

（1）将人胆管癌细胞CCLP细胞和HUCCT1细胞以每孔5000~9000个细胞的数量接种到96孔板，待细胞贴壁后，分别加入不同浓度的维生素K1的PBS溶液。培养24h后，每孔加入10μl浓度为5mg/ml的MTT再培养4h，然后弃培养液每孔加入100μl的DMSO，用酶标仪在490nm读取每孔的吸光值。对数据进行统计分析。

（2）分析结果如图1所示，说明维生素K1对胆管癌细胞有一定抑制增殖的作用，但抑制的效果较弱。

实施例2 替莫唑胺单独使用或维生素K1和替莫唑胺联合用药对胆管癌细胞抑制率的影响

1、实验材料

（1）药物：维生素K1注射液、替莫唑胺。

（2）胆管癌细胞：人胆管癌细胞CCLP细胞和HUCCT1细胞。

（3）市购的MTT试剂盒。

2、实验分组

（1）对照组：胆管癌细胞仅使用替莫唑胺处理。

（2）实验组：不同浓度的维生素K1和替莫唑胺联合使用处理胆管癌细胞。

3、MTT法检测胆管癌细胞对维生素K1和替莫唑胺联合用药的敏感性

（1）将人胆管癌细胞CCLP细胞和HUCCT1细胞以每孔5000~9000个细胞的数量接种到96孔板，待细胞贴壁后，分别加入不同的维生素K1和替莫唑胺的配比的PBS溶液。培养24h后，每孔加入10μl浓度为5mg/ml的MTT再培养4h，然后弃培养液每孔加入100μl的DMSO，用酶标仪在490nm读取每孔的吸光值。对数据进行统计分析。

（2）分析结果如图2所示，在替莫唑胺使用基础上加用维生素K1，相对于单独用药能更显著地抑制胆管癌细胞增殖，显示维生素K1和替莫唑胺联合使用显著提高了胆管癌的治疗效果，实现了协同增效的治疗效果。

实施例3 替莫唑胺单独使用或维生素K1和替莫唑胺联合用药对人胆管癌组织类器官抑制率的影响

1、实验材料

（1）药物：维生素K1注射液、替莫唑胺。

（2）胆管癌细胞：人胆管癌组织类器官。

（3）市购的CellTiter-Glo 3D试剂盒。

2、实验分组

（1）对照组：仅使用替莫唑胺处理。

（2）实验组：不同浓度的维生素K1和替莫唑胺联合使用处理人胆管癌组织类器官。

3、人胆管癌组织类器官对维生素K1和替莫唑胺联合用药的敏感性

（1）将处理过的人胆管癌细胞与Matrigel基质胶混合，在48孔板上，每孔加入50μl混匀后的Mtrigel基质胶，成胶后每孔加入250μl完全培养基，置于37℃，CO₂浓度为5%的细胞培养箱内培养。每3-4天更换一次培养液，每1-2周可进行传代、冻存。类器官建模成功后，传代培养进行药物处理，每孔加入含不同的维生素K1和替莫唑胺的配比的培养液，置于培养箱内培养5天。每孔加入与培养基等体积的CellTiter-Glo 3D检测试剂，震荡混匀后在室温下孵育25分钟，用酶标仪检测，对数据进行统计分析。

（2）分析结果如图2所示，在替莫唑胺使用基础上加用维生素K1，相对于单独用药能更显著地抑制人胆管癌组织类器官的细胞增殖，显示维生素K1和替莫唑胺联合使用显著提高了胆管癌的治疗效果，实现了协同增效的治疗效果。

Claims (6)

1.维生素K1和替莫唑胺联合用药在制备治疗胆管癌药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的维生素K1和替莫唑胺的重量比为：维生素K1：替莫唑胺=20~1280:7.5~240。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述的维生素K1和替莫唑胺的重量比为：维生素K1：替莫唑胺=320~1280:120~240。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的维生素K1和替莫唑胺的重量比为：维生素K1：替莫唑胺=1280: 240。

5.一种治疗胆管癌的制剂，其特征是：由如权利要求1~4所述的组合物和药学上可接受的辅料组成。

6.如权利要求5所述的治疗胆管癌的制剂，其特征是：所述制剂的剂型为注射剂、片剂、粒剂或胶囊。

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