CN112841034A - 一种南药穿心莲的组培快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种南药穿心莲的组培快繁方法，具体涉及穿心莲培养技术领域，包括以下步骤：步骤一、选取制作培养基质的材料；步骤二、制备培养基质；步骤三、选取穿心莲种子；步骤四、制备灭菌溶液。本发明向培养皿中添加活性炭和砂土，以提高培养皿中培养基的透气性，从而能够提高培养基中的氧气含量，以促进穿心莲植株的呼吸，利用搅拌棒对培养皿中的MS培养基、琼脂、赤霉素、蔗糖和苯乙酸进行充分地搅拌，并在搅拌的过程中不停地振动培养皿，使得培养皿中的不同成分能够充分地混合，而且振动培养皿还能够将该混合物均匀地平铺在培养皿的内部，以保证培养皿中每个区域的营养成分相同，使得穿心莲种子能够正常的生根发芽。
Description
技术领域
本发明实施例涉及穿心莲培养技术领域，具体涉及一种南药穿心莲的组培快繁方法。
背景技术
穿心莲是我国传统的中药材，在初秋茎叶茂盛时采割地上部分，晒于，全草可入药。穿心莲叶片的主要成分是二萜内酯化合物，而根主要含黄酮类化合物以及甾醇和生物碱等。现代研究较多的是叶片中的内酯类化合物，包括穿心莲内酯、新穿心莲内酯和去氧穿心莲内酯等，其中穿心莲内酯含量最高。穿心莲因为具有抗炎，抗病毒，抗肿瘤，抗心血管疾病这四抗和解热解毒等多方面作用而有很高的临床药用和保健价值。其四抗作用逐渐引起国内外药学界的重视，研究人员正在筛选以穿心莲内酯为主要构架的新药，并进一步研究这些新药的作用机制。目前市场上出现的穿心莲注射液等中成药都是以穿心莲为主要原料的。这些药具有清热解毒，凉血消肿之用，可以治疗风热感冒、发炎等多种病症。
穿心莲以种子繁殖为常规繁殖方式，即育苗移栽法或直播法、育苗移栽法为主。具体方法为分批采摘9～10月间的褐色穿心莲果实，用罩子盖住种子，放在通风荫凉处后熟几日，等果荚全部裂开后，筛除果皮，获得种子。穿心莲种子不仅细小，而且种皮较坚硬，外层包有蜡质，不容易通水透气，需要较高的播种技术。因此，在播种前需要对种子进行一系列的预处理，先用砂或细砂纸磨去种子外层的蜡质，再放在30℃的温箱中催芽，然后才能播种。这种常规的种子繁殖育苗法特别费时，从预处理到出苗定植要1个多月，而且播种时发芽率不高，出苗不一致，难以满足工厂化大质退化以及种质混杂、药用成分含量下降等问题。因此，应该采用组培快繁手段，在短期内培育出大量整齐一致的试管苗，解决穿心莲传统繁殖存在的这些问题，有利于穿心莲优良植株性状的保持与推广，同时为穿心莲多倍体育种以提高有效药用成分打下良好基础。
所以现代化的穿心莲的培养多是利用培养皿对穿心莲的组织进行培养，以获得更多高质量的穿心莲，但是穿心莲在培养的过程中由于采用固体培养基，很容易造成培养皿内部养分分布不均、通气性较差的问题，从而容易影响穿心莲种子的正常生根发芽。
发明内容
为此，本发明实施例提供一种南药穿心莲的组培快繁方法，通过向培养皿中添加活性炭和砂土，以提高培养皿中培养基的透气性，从而能够提高培养基中的氧气含量，以促进穿心莲植株的呼吸，并通过向培养皿中添加萘乙酸，促进诱导穿心莲植株愈伤组织的分化，从而能够促进穿心莲植株的发育和培养，利用搅拌棒对培养皿中的MS培养基、琼脂、赤霉素、蔗糖和苯乙酸进行充分地搅拌，并在搅拌的过程中不停地振动培养皿，使得培养皿中的不同成分能够充分地混合，而且振动培养皿还能够将该混合物均匀地平铺在培养皿的内部，以保证培养皿中每个区域的营养成分相同，使得穿心莲种子能够正常的生根发芽。
为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：一种南药穿心莲的组培快繁方法，包括以下步骤：
步骤一、选取制作培养基质的材料，选取的基质材料有MS培养基60-90份、赤霉素5-20份、蔗糖30-45份、琼脂5-8份、萘乙酸5-20份、活性炭10-40份和砂土10-25份；
步骤二、制备培养基质；
步骤三、选取穿心莲种子；
步骤四、制备灭菌溶液，向无菌烧杯中添加蒸馏水和次氯酸钠并搅拌；
步骤五、对穿心莲种子进行灭菌处理，需要将选取的穿心莲种子放置在次氯酸钠溶液中进行灭菌处理，浸泡8分钟；
步骤六、将灭菌后的穿心莲种子从灭菌溶液中取出，并利用蒸馏水进行冲洗，以去除穿心莲种子上所粘附的次氯酸钠溶液；
步骤七、将制得的培养基质放入培养皿中；
步骤八、将灭菌后的穿心莲种子埋设在培养基中进行培养并观察、记录。
进一步地，在步骤二中培养基质制备具体为：向培养皿中添加MS培养基，再将琼脂融化，然后将融化后的琼脂添加到培养皿中，进行搅拌，使得琼脂能够与MS培养基充分混合，然后再向培养皿中依次添加赤霉素、蔗糖和苯乙酸，而且每次添加之后都需要用搅拌棒对培养皿内部进行搅拌，使得培养皿中的不同成分能够充分混合，然后向培养皿中添加活性炭和砂土，并对其进行搅拌，在搅拌的过程中晃动培养皿，使得活性炭和砂土能够充分与培养皿中的物质混合，然后振动培养皿，使得培养皿中的基质能够均匀的铺设在培养皿内部。
进一步地，在步骤三中所选取的穿心莲种子外壳未变褐色、没有蜡质层。
进一步地，在步骤五中浸泡的过程中要用密封盖将无菌烧杯密封。
进一步地，在步骤八中，将培养皿放置在培养室中，进行3000-5000lx的光照强度进行光照，并将室温控制在25-30℃，培养30天。
进一步地，在步骤七中所使用的培养皿经过高温灭菌处理。
进一步地，在步骤八中记录的内容有穿心莲植株的高度、平均叶片数和叶片颜色浓郁程度。
本发明实施例具有如下优点：
1、本发明通过向培养皿中添加活性炭和砂土，以提高培养皿中培养基的透气性，从而能够提高培养基中的氧气含量，以促进穿心莲植株的呼吸，并通过向培养皿中添加萘乙酸，促进诱导穿心莲植株愈伤组织的分化，从而能够促进穿心莲植株的发育和培养；
2、本发明通过利用搅拌棒对培养皿中的MS培养基、琼脂、赤霉素、蔗糖和苯乙酸进行充分地搅拌，并在搅拌的过程中不停地振动培养皿，使得培养皿中的不同成分能够充分地混合，而且振动培养皿还能够将该混合物均匀地平铺在培养皿的内部，以保证培养皿中每个区域的营养成分相同，使得穿心莲种子能够正常的生根发芽。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
本发明提供一种南药穿心莲的组培快繁方法，包括以下步骤：
步骤一、选取制作培养基质的材料，选取的基质材料有MS培养基60份、赤霉素5份、蔗糖30份、琼脂5份、萘乙酸5份、活性炭10份和砂土10份；
步骤二、制备培养基质，向培养皿中添加MS培养基，再将琼脂融化，然后将融化后的琼脂添加到培养皿中，进行搅拌，使得琼脂能够与MS培养基充分混合，然后再向培养皿中依次添加赤霉素、蔗糖和苯乙酸，而且每次添加之后都需要用搅拌棒对培养皿内部进行搅拌，使得培养皿中的不同成分能够充分混合，然后向培养皿中添加活性炭和砂土，并对其进行搅拌，在搅拌的过程中晃动培养皿，使得活性炭和砂土能够充分与培养皿中的物质混合，然后振动培养皿，使得培养皿中的基质能够均匀的铺设在培养皿内部；
步骤三、选取穿心莲种子，所选取的穿心莲种子外壳未变褐色、没有蜡质层；
步骤四、制备灭菌溶液，向无菌烧杯中添加蒸馏水和次氯酸钠并搅拌；
步骤五、对穿心莲种子进行灭菌处理，需要将选取的穿心莲种子放置在次氯酸钠溶液中进行灭菌处理，浸泡8分钟，浸泡的过程中要用密封盖将无菌烧杯密封，防止细菌落入无菌烧杯内部，从而能够避免细菌对本穿心莲植株生长的影响；
步骤六、将灭菌后的穿心莲种子从灭菌溶液中取出，并利用蒸馏水进行冲洗，以去除穿心莲种子上所粘附的次氯酸钠溶液；
步骤七、将制得的培养基质放入培养皿中，所使用的培养皿经过高温灭菌处理，以防止细菌的存在影响穿心莲植株的生长；
步骤八、将灭菌后的穿心莲种子埋设在培养基中进行培养并观察、记录，将培养皿放置在培养室中，进行3000lx的光照强度进行光照，穿心莲植株喜光，辅以足够的光照有利于穿心莲植株的生长发育，并将室温控制在25℃，培养30天，并对穿心莲植株的高度、平均叶片数和叶片颜色浓郁程度进行记录观察。
实施例2：
本发明提供一种南药穿心莲的组培快繁方法，包括以下步骤：
步骤一、选取制作培养基质的材料，选取的基质材料有MS培养基75份、赤霉素17份、蔗糖37份、琼脂6.5份、萘乙酸13份、活性炭25份和砂土13份；
步骤二、制备培养基质，向培养皿中添加MS培养基，再将琼脂融化，然后将融化后的琼脂添加到培养皿中，进行搅拌，使得琼脂能够与MS培养基充分混合，然后再向培养皿中依次添加赤霉素、蔗糖和苯乙酸，而且每次添加之后都需要用搅拌棒对培养皿内部进行搅拌，使得培养皿中的不同成分能够充分混合，然后向培养皿中添加活性炭和砂土，并对其进行搅拌，在搅拌的过程中晃动培养皿，使得活性炭和砂土能够充分与培养皿中的物质混合，然后振动培养皿，使得培养皿中的基质能够均匀的铺设在培养皿内部；
步骤三、选取穿心莲种子，所选取的穿心莲种子外壳未变褐色、没有蜡质层；
步骤四、制备灭菌溶液，向无菌烧杯中添加蒸馏水和次氯酸钠并搅拌；
步骤五、对穿心莲种子进行灭菌处理，需要将选取的穿心莲种子放置在次氯酸钠溶液中进行灭菌处理，浸泡8分钟，浸泡的过程中要用密封盖将无菌烧杯密封，防止细菌落入无菌烧杯内部，从而能够避免细菌对本穿心莲植株生长的影响；
步骤六、将灭菌后的穿心莲种子从灭菌溶液中取出，并利用蒸馏水进行冲洗，以去除穿心莲种子上所粘附的次氯酸钠溶液；
步骤七、将制得的培养基质放入培养皿中，所使用的培养皿经过高温灭菌处理，以防止细菌的存在影响穿心莲植株的生长；
步骤八、将灭菌后的穿心莲种子埋设在培养基中进行培养并观察、记录，将培养皿放置在培养室中，进行4000lx的光照强度进行光照，穿心莲植株喜光，辅以足够的光照有利于穿心莲植株的生长发育，并将室温控制在27℃，培养30天，并对穿心莲植株的高度、平均叶片数和叶片颜色浓郁程度进行记录观察。
实施例3：
本发明提供一种南药穿心莲的组培快繁方法，包括以下步骤：
步骤一、选取制作培养基质的材料，选取的基质材料有MS培养基90份、赤霉素20份、蔗糖45份、琼脂8份、萘乙酸20份、活性炭40份和砂土25份；
步骤二、制备培养基质，向培养皿中添加MS培养基，再将琼脂融化，然后将融化后的琼脂添加到培养皿中，进行搅拌，使得琼脂能够与MS培养基充分混合，然后再向培养皿中依次添加赤霉素、蔗糖和苯乙酸，而且每次添加之后都需要用搅拌棒对培养皿内部进行搅拌，使得培养皿中的不同成分能够充分混合，然后向培养皿中添加活性炭和砂土，并对其进行搅拌，在搅拌的过程中晃动培养皿，使得活性炭和砂土能够充分与培养皿中的物质混合，然后振动培养皿，使得培养皿中的基质能够均匀的铺设在培养皿内部；
步骤三、选取穿心莲种子，所选取的穿心莲种子外壳未变褐色、没有蜡质层；
步骤四、制备灭菌溶液，向无菌烧杯中添加蒸馏水和次氯酸钠并搅拌；
步骤五、对穿心莲种子进行灭菌处理，需要将选取的穿心莲种子放置在次氯酸钠溶液中进行灭菌处理，浸泡8分钟，浸泡的过程中要用密封盖将无菌烧杯密封，防止细菌落入无菌烧杯内部，从而能够避免细菌对本穿心莲植株生长的影响；
步骤六、将灭菌后的穿心莲种子从灭菌溶液中取出，并利用蒸馏水进行冲洗，以去除穿心莲种子上所粘附的次氯酸钠溶液；
步骤七、将制得的培养基质放入培养皿中，所使用的培养皿经过高温灭菌处理，以防止细菌的存在影响穿心莲植株的生长；
步骤八、将灭菌后的穿心莲种子埋设在培养基中进行培养并观察、记录，将培养皿放置在培养室中，进行5000lx的光照强度进行光照，穿心莲植株喜光，辅以足够的光照有利于穿心莲植株的生长发育，并将室温控制在30℃，培养30天，并对穿心莲植株的高度、平均叶片数和叶片颜色浓郁程度进行记录观察。
实施例4：
分别取上述实施例1-3所培养的30个穿心莲植株，每10个分为一组，对穿心莲植株进行观察和记录，分别观察穿心莲植株的高度、平均叶片数、叶片颜色浓郁程度和计算增殖率，得到以下数据：
由上表可知，实施例3中的方法最适宜，将穿心莲种子放置在实施例3中的培养皿中进行培养，30天后所获得的穿心莲植株相较于实施例1和2中的植株，植株的高度最高、植株的叶片数最多、植株的叶片颜色最浓郁、。增殖率最高，说明该培养皿中的培养基更适合穿心莲植株的生长发育，穿心莲植株更适合在实施例3中的培养基中进行培养。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (7)
1.一种南药穿心莲的组培快繁方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤一、选取制作培养基质的材料，选取的基质材料有MS培养基60-90份、赤霉素5-20份、蔗糖30-45份、琼脂5-8份、萘乙酸5-20份、活性炭10-40份和砂土10-25份；
步骤二、制备培养基质；
步骤三、选取穿心莲种子；
步骤四、制备灭菌溶液，向无菌烧杯中添加蒸馏水和次氯酸钠并搅拌；
步骤五、对穿心莲种子进行灭菌处理，需要将选取的穿心莲种子放置在次氯酸钠溶液中进行灭菌处理，浸泡8分钟；
步骤六、将灭菌后的穿心莲种子从灭菌溶液中取出，并利用蒸馏水进行冲洗，以去除穿心莲种子上所粘附的次氯酸钠溶液；
步骤七、将制得的培养基质放入培养皿中；
步骤八、将灭菌后的穿心莲种子埋设在培养基中进行培养并观察、记录。
2.根据权利要求1所述的一种南药穿心莲的组培快繁方法，其特征在于：在步骤二中培养基质制备具体为：向培养皿中添加MS培养基，再将琼脂融化，然后将融化后的琼脂添加到培养皿中，进行搅拌，使得琼脂能够与MS培养基充分混合，然后再向培养皿中依次添加赤霉素、蔗糖和苯乙酸，而且每次添加之后都需要用搅拌棒对培养皿内部进行搅拌，使得培养皿中的不同成分能够充分混合，然后向培养皿中添加活性炭和砂土，并对其进行搅拌，在搅拌的过程中晃动培养皿，使得活性炭和砂土能够充分与培养皿中的物质混合，然后振动培养皿，使得培养皿中的基质能够均匀的铺设在培养皿内部。
3.根据权利要求1所述的一种南药穿心莲的组培快繁方法，其特征在于：在步骤三中所选取的穿心莲种子外壳未变褐色、没有蜡质层。
4.根据权利要求1所述的一种南药穿心莲的组培快繁方法，其特征在于：在步骤五中浸泡的过程中要用密封盖将无菌烧杯密封。
5.根据权利要求1所述的一种南药穿心莲的组培快繁方法，其特征在于：在步骤八中，将培养皿放置在培养室中，进行3000-5000lx的光照强度进行光照，并将室温控制在25-30℃，培养30天。
6.根据权利要求1所述的一种南药穿心莲的组培快繁方法，其特征在于：在步骤七中所使用的培养皿经过高温灭菌处理。
7.根据权利要求1所述的一种南药穿心莲的组培快繁方法，其特征在于：在步骤八中记录的内容有穿心莲植株的高度、平均叶片数和叶片颜色浓郁程度。
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