CN112826922A - 用于治疗或预防纤维增生性疾病的药物 - Google Patents

用于治疗或预防纤维增生性疾病的药物 Download PDF

Info

Publication number
CN112826922A
CN112826922A CN202011555147.9A CN202011555147A CN112826922A CN 112826922 A CN112826922 A CN 112826922A CN 202011555147 A CN202011555147 A CN 202011555147A CN 112826922 A CN112826922 A CN 112826922A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bmp4
seq
bmp4 protein
protein
sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202011555147.9A
Other languages
English (en)
Inventor
卢文菊
管瑞娟
王健
蔡宙
徐静仪
李媛媛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University
Original Assignee
First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University filed Critical First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University
Priority to CN202011555147.9A priority Critical patent/CN112826922A/zh
Priority to CN202311172950.8A priority patent/CN117045776A/zh
Publication of CN112826922A publication Critical patent/CN112826922A/zh
Priority to PCT/CN2021/140837 priority patent/WO2022135523A1/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1875—Bone morphogenic factor; Osteogenins; Osteogenic factor; Bone-inducing factor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了BMP4蛋白在制备用于治疗或预防对象的纤维增生性疾病的药物中的应用，其中所述BMP4蛋白是游离的BMP4蛋白或表达BMP4蛋白的重组载体。其中所述表达BMP4蛋白的重组载体包含载体，所述载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。BMP4能够抑制成纤维细胞增殖、促进了成纤维细胞的凋亡、抑制成纤维细胞向肌纤维母细胞转化。这些结果表明可以靶向BMP4来治疗或预防纤维增生性疾病。

Description

用于治疗或预防纤维增生性疾病的药物
技术领域
本发明涉及骨形态发生蛋白4（Bone Morphogenetic Protein 4, BMP4）的医药用途，具体涉及BMP4在纤维增生性疾病的治疗中的应用。
背景技术
纤维化（fibrosis）是以成纤维细胞增殖及大量细胞外基质聚集并伴炎症损伤、组织结构破坏为特征的一大类疾病的终末期改变，也就是正常的组织被损坏后经过异常修复导致结构异常。
肺纤维化（Pulmonary Fibrosis, PF）是一种病因不明、进展迅速、预后极差、致死率极高的间质性肺疾病，缺乏有效治疗方法。其典型病理特征为弥漫性肺间质胶原沉积、瘢痕形成，进行性、不可逆的肺泡结构破坏及弥漫性纤维化，多数病人因换气功能障碍而死于呼吸衰竭。该病的常见病因包括感染、粉尘、药物、吸烟和自身免疫性疾病等。
特发性肺纤维化（Idiopathic Pulmonary Fibrosis, IPF），是一种病因不明的肺纤维化，也是肺纤维化中最常见和最严重的一种，有时呈急性恶化。IPF的特征是肺成纤维细胞/肌成纤维细胞过度增殖和胶原沉积，破坏肺部结构和功能。成纤维细胞和肌成纤维细胞在成纤维细胞灶中激活并聚集，产生过量的细胞外基质。IPF患者肺功能呈进行性下降，最终因呼吸衰竭死亡，确诊后的平均存活期仅为3-5年，5年病死率超过40%。
尽管对纤维化（包括肺纤维化）进行了大量的研究，但其病因和发病机制尚未完全清楚，至今仍缺乏有效的治疗手段。针对IPF的上市药物只有两个，分别是吡非尼酮和尼达尼布，但其都不能有效提高患者生存期，且治疗费用高。目前，肺移植是唯一能够有效延长生存期的治疗方法，但也受到诸多应用条件的限制。
因此，有必要提供更多能够有效治疗或预防纤维化的方法和手段。
发明内容
本发明的一方面提供BMP4蛋白在制备用于治疗或预防对象的纤维增生性疾病的药物中的应用。在一些实施方式中，所述BMP4蛋白是游离的BMP4蛋白。在一些实施方式中，BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病选自：肺、心血管系统、肝、肾、眼、神经系统、骨髓和皮肤的纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病是肺纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述肺纤维增生性疾病是特发性肺纤维化。在一些实施方式中，所述游离的BMP4蛋白是从天然来源纯化得到的，或者是通过基因工程方法得到的重组BMP4蛋白。
本发明的另一方面提供了一种治疗或预防对象的纤维增生性疾病的方法，所述方法包括向有需要的对象施用治疗有效量的本发明的BMP4蛋白，其中所述BMP4蛋白是游离的BMP4蛋白。在一些实施方式中，BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO:3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病选自：肺、心血管系统、肝、肾、眼、神经系统、骨髓和皮肤的纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病是肺纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述肺纤维增生性疾病是特发性肺纤维化。在一些实施方式中，所述游离的BMP4蛋白是从天然来源纯化得到的，或者是通过基因工程方法得到的重组BMP4蛋白。
本发明的另一方面提供了一种表达BMP4蛋白的重组载体，其包含载体，所述载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述多核苷酸是编码BMP4蛋白的DNA、RNA、或DNA-RNA杂交体。在一些实施方式中，BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ IDNO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 4至SEQ ID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO: 29所示的序列或其变体。在一些实施方式中，所述载体是病毒载体或非病毒载体。在一些实施方式中，所述非病毒载体选自：质粒、脂质体、逆转录元件、转座子、附加型载体、阳离子多聚物、壳聚糖聚合物、无机纳米粒子和外泌体。在一些实施方式中，所述病毒载体选自：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯性疱疹病毒、牛痘病毒、杆状病毒和慢病毒。在一些实施方式中，所述病毒载体是腺相关病毒。
本发明的另一方面提供了一种治疗或预防对象的纤维增生性疾病的方法，所述方法包括向有需要的对象施用治疗有效量的本发明的重组载体，其中该重组载体包含载体，所述载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述多核苷酸是编码BMP4蛋白的DNA、RNA、或DNA-RNA杂交体。在一些实施方式中，BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 4至SEQ ID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ IDNO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO: 29所示的序列或其变体。在一些实施方式中，所述载体是病毒载体或非病毒载体。在一些实施方式中，所述非病毒载体选自：质粒、脂质体、逆转录元件、转座子、附加型载体、阳离子多聚物、壳聚糖聚合物、无机纳米粒子和外泌体。在一些实施方式中，所述病毒载体选自：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯性疱疹病毒、牛痘病毒、杆状病毒和慢病毒。在一些实施方式中，所述病毒载体是腺相关病毒。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病选自：肺、心血管系统、肝、肾、眼、神经系统、骨髓和皮肤的纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病是肺纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述肺纤维增生性疾病是特发性肺纤维化。
本发明的另一方面提供了本发明的重组载体在制备用于治疗或预防对象的纤维增生性疾病的药物中的应用，其中该重组载体包含载体，所述载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述多核苷酸是编码BMP4蛋白的DNA、RNA、或DNA-RNA杂交体。在一些实施方式中，BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 4至SEQ ID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQID NO: 28或SEQ ID NO: 29所示的序列或其变体。在一些实施方式中，该载体是病毒载体或非病毒载体。在一些实施方式中，所述非病毒载体选自：质粒、脂质体、逆转录元件、转座子、附加型载体、阳离子多聚物、壳聚糖聚合物、无机纳米粒子和外泌体。在一些实施方式中，所述病毒载体选自：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯性疱疹病毒、牛痘病毒、杆状病毒和慢病毒。在一些实施方式中，所述病毒载体是腺相关病毒。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病选自：肺、心血管系统、肝、肾、眼、神经系统、骨髓和皮肤的纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病是肺纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述肺纤维增生性疾病是特发性肺纤维化。
本发明的另一方面提供了一种在对象中治疗或预防纤维增生性疾病的药物组合物，其中该药物组合物包含重组载体和药学上可接受的赋形剂，其中该重组载体包含载体，所述载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述多核苷酸是编码BMP4蛋白的DNA、RNA、或DNA-RNA杂交体。在一些实施方式中，BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 4至SEQ ID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ IDNO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO: 29所示的序列或其变体。在一些实施方式中，所述载体是病毒载体或非病毒载体。在一些实施方式中，所述非病毒载体选自：质粒、脂质体、逆转录元件、转座子、附加型载体、阳离子多聚物、壳聚糖聚合物、无机纳米粒子和外泌体。在一些实施方式中，所述病毒载体选自：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯性疱疹病毒、牛痘病毒、杆状病毒和慢病毒。在一些实施方式中，所述病毒载体是腺相关病毒。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病选自：肺、心血管系统、肝、肾、眼、神经系统、骨髓和皮肤的纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病是肺纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述肺纤维增生性疾病是特发性肺纤维化。
本发明的另一方面提供了一种治疗或预防对象的纤维增生性疾病的方法，所述方法包括向有需要的对象施用治疗有效量的本发明的药物组合物，其中该药物组合物包含重组载体和药学上可接受的赋形剂，其中该重组载体包含载体，所述载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述多核苷酸是编码BMP4蛋白的DNA、RNA、或DNA-RNA杂交体。在一些实施方式中，BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ IDNO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 4至SEQ ID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO: 29所示的序列或其变体。在一些实施方式中，所述载体是病毒载体或非病毒载体。在一些实施方式中，所述非病毒载体选自：质粒、脂质体、逆转录元件、转座子、附加型载体、阳离子多聚物、壳聚糖聚合物、无机纳米粒子和外泌体。在一些实施方式中，所述病毒载体选自：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯性疱疹病毒、牛痘病毒、杆状病毒和慢病毒。在一些实施方式中，所述病毒载体是腺相关病毒。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病选自：肺、心血管系统、肝、肾、眼、神经系统、骨髓和皮肤的纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病是肺纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述肺纤维增生性疾病是特发性肺纤维化。
本发明的另一方面提供了本发明的药物组合物在制备用于治疗或预防对象的纤维增生性疾病的药物中的应用，其中该药物组合物包含重组载体和药学上可接受的赋形剂，其中该重组载体包含载体，所述载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述多核苷酸是编码BMP4蛋白的DNA、RNA、或DNA-RNA杂交体。在一些实施方式中，BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 4至SEQID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO:29所示的序列或其变体。在一些实施方式中，所述载体是病毒载体或非病毒载体。在一些实施方式中，所述非病毒载体选自：质粒、脂质体、逆转录元件、转座子、附加型载体、阳离子多聚物、壳聚糖聚合物、无机纳米粒子和外泌体。在一些实施方式中，所述病毒载体选自：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯性疱疹病毒、牛痘病毒、杆状病毒和慢病毒。在一些实施方式中，所述病毒载体是腺相关病毒。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病选自：肺、心血管系统、肝、肾、眼、神经系统、骨髓和皮肤的纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病是肺纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述肺纤维增生性疾病是特发性肺纤维化。
在一些实施方式中，本发明的BMP4蛋白、重组载体或药物组合物被施用于对象后引起BMP4蛋白在所述对象的细胞中表达增加。在一些实施方式中，本发明的BMP4蛋白、重组载体或药物组合物被施用于对象后引起BMP4基因在所述对象的细胞中表达升高。在一些实施方式中，本发明的BMP4蛋白、重组载体或药物组合物被施用于对象后抑制成纤维细胞增殖，促进了成纤维细胞的凋亡。在一些实施方式中，本发明的BMP4蛋白、重组载体或药物组合物被施用于对象后抑制成纤维细胞向肌纤维母细胞转化。
附图说明
图1：相对正常对照肺组织而言，IPF患者肺组织中BMP4的表达显著降低。A：蛋白条带图；B：条带灰度分析统计结果；C：mRNA表达情况统计结果；D：人肺组织切片免疫荧光图；Control：正常对照组，n=19；IPF：肺纤维化组，n=16。*P＜0.05，**P＜0.01。
图2：博莱霉素（Bleomycin，BLM）诱导小鼠肺组织中BMP4蛋白表达降低。A：条带灰度分析统计结果；B：蛋白条带图。***P<0.001，与0 day比较；###P<0.001，与0 day比较，n=6。
图3：BMP4基因敲除对博莱霉素诱导的小鼠生存率和体重的影响。A：给予博来霉素处理后小鼠生存率曲线；B：小鼠体重变化情况。BMP4 +/+ +Saline：野生型小鼠对照组，n=12；BMP4 +/- +Saline：BMP4 +/- 小鼠对照组，n=10；BMP4 +/+ +BLM：野生型小鼠予以博来霉素处理组，n=25；BMP4 +/- +BLM：BMP4 +/- 小鼠予以博来霉素处理组，n=37。
图4：BMP4基因敲除对博来霉素诱导的小鼠Micro-CT肺影像结果的影响。n=10。
图5：BMP4基因敲除对博来霉素诱导的小鼠肺功能的影响。A：动态肺顺应性；B：气道阻力。*P<0.05，***P<0.001，与BMP4 +/+ +Saline比较，n=6；#P<0.05，##P<0.01，BMP4 +/+ +BLM与BMP4 +/- +BLM比较，n=6。
图6：BMP4基因敲除对博来霉素诱导的小鼠HE和Masson染色结果的影响。A：HE染色结果，B：Masson染色结果。n=10。
图7：BMP4基因敲除对博来霉素诱导的小鼠肺组织中羟脯胺酸含量的影响。*P<0.05，与BMP4 +/+ +Saline比较，n=10；###P<0.001，与BMP4 +/- +BLM比较，n=10。
图8：BMP4基因敲除对小鼠肺组织中纤连蛋白（Fibronectin）、α-平滑肌肌动蛋白（Alpha-smooth muscle actin，α-SMA）、I 型胶原蛋白（Collagen 1，Col 1）、III 型胶原蛋白（Collagen 3，Col 3）的蛋白表达变化的影响。
图9：BMP4过表达对博来霉素诱导的肺纤维化小鼠的预防和治疗作用的影响。（A）BMP4过表达对博来霉素诱导肺纤维化小鼠肺功能的影响；（B）BMP4过表达对博来霉素诱导肺纤维化小鼠肺病理的影响。
图10A：BMP4基因敲除对TGF-β1诱导的小鼠原代成纤维细胞转化和合成ECM的影响。
图10B-10D：外源性加入BMP4重组蛋白对TGF-β1诱导的小鼠原代成纤维细胞转化的影响。
图11A-11C：BMP4基因敲除对TGF-β1诱导的小鼠原代成纤维细胞增殖的影响。A：蛋白条带图；B、C：条带灰度分析统计结果，n=5。
图11D-11F：外源性加入BMP4重组蛋白对TGF-β1诱导的小鼠原代成纤维细胞转化的影响。E、F：条带灰度分析统计结果，n=5。
图12：BMP4基因敲除对TGF-β1诱导的小鼠原代成纤维细胞凋亡的影响。A：细胞凋亡流式图；B：细胞凋亡率统计结果，n=5。
具体实施方式
定义
在本发明中，术语“治疗”是指疗法上的以及预防性的措施，其阻止或减缓对象发生不期望的生理学改变或病症，例如肺部纤维化的发生或癌症进展。有利或期望的临床效果包括，但不限于，症状的缓解、疾病程度的降低、疾病状态的稳定化（即不恶化）、疾病进展的延迟或减缓、疾病状态的减轻或缓和以及疾病的部分或全部治愈，而不论上述效果是否可检测到。“治疗”也可指与不治疗相比生存期延长。需要治疗的对象包括已患有该疾病或病症的对象，以及有可能患有该疾病或病症的对象，或要预防该疾病或病症的对象。
“对象”或“患者”、“个体”是指任何期望进行诊断、预后或治疗的对象，特别是哺乳动物对象。哺乳动物包括人、家畜、农畜、动物园动物、竞技动物或宠物，例如狗、猫、猪、兔、大鼠、小鼠、马、牛、奶牛等。本文所称的对象优选是人。
本文所用的术语“有治疗需要的患者”或“有治疗需要的对象”包括因施用本发明用于例如检测、诊断和/或治疗用途的多肽或其组合物而受益的对象，如哺乳动物对象。
如本文中所使用的，术语“治疗有效量”或“有效量”是指当将本发明的药物或药物组合物单独给予或与另外的治疗剂联合给予细胞、组织或受治疗者时，其有效防止或减缓待治疗的疾病或病症的量。治疗有效剂量进一步指所述化合物足以导致症状减缓的量，所述减缓症状例如为治疗、治愈、防止或减缓相关医学状态，或提高对所述病征的治疗率、治愈率、防止率或减缓率。当施用给个体单独给予的活性成分时，治疗有效量是指该单独的成分。当施用组合时，治疗有效量是指产生治疗效果的活性成分的联合的量，而不论其是联合给予、连续给予还是同时给予。治疗有效量将减轻症状通常至少10％；通常至少20％；优选至少约30％；更优选至少40％和最优选至少50％。
在本发明中，“约”是指数值在由本领域一般技术人员所测定的具体值的可接受误差范围内，所述数值部分取决于怎样测量或测定（即测量体系的限度）。例如，在本领域每一次实行中“约”可意味着在1内或超过1的标准差。或者，“约”或“基本上包含”可意味着至多20％的范围。此外，对于生物学系统或过程而言，该术语可意味着至多一个数量级或数值的至多5倍。除非另外说明，否则当具体值在本申请和权利要求中出现时，“约”或“基本上包含”的含义应该假定为在该具体值的可接受误差范围内。
本领域普通技术人员还应该理解，可以修饰基因的基因组，使得它们在核苷酸序列上与它们所衍生出的修饰的多核苷酸不同。例如，从指定的DNA序列衍生的多核苷酸或核苷酸序列可以是相似的，例如与起始序列具有一定的百分比同一性，例如它可以与起始序列60%、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％相同。
此外，可以进行核苷酸或氨基酸取代、缺失或插入，以在“非必需”区域进行保守取代或改变。例如，衍生自指定蛋白质的多肽或氨基酸序列，除了一个或多个单独的氨基酸取代、插入或缺失（例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或更多个单个氨基酸取代、插入或缺失）之外，其余部分可以与起始序列相同。在某些实施方式中，衍生自指定蛋白的多肽或氨基酸序列相对于起始序列具有1至5个、1至10个、1至15个或1至20个单独的氨基酸取代、插入或缺失。
BMP4
骨形态发生蛋白（Bone morphogenetic proteins, BMPs）属于转化生长因子（TGF）家族，是一大类多功能生长因子，能影响肾、肺等器官胚胎发生和组织生成，并调节细胞增殖、转化、凋亡和ECM成分的分泌等。在肺发育和再生过程中，TGF-β1和BMP信号活性之间的平衡至关重要。
如本文所用，术语“BMP4”是指骨形态发生蛋白4，是BMP的一员，是肺发育过程中的关键因子之一。BMP4蛋白的氨基酸序列可以从NCBI获得，登录号为NP_001334841.1、NP_001334845.1、NP_001334843.1、NP_001193.2、NP_570911.2、NP_570912.2、NP_001334846.1、NP_001334842.1、以及NP_001334844.1。BMP4蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO: 1至SEQ ID NO: 3任一个所示。编码BMP4蛋白产物的核苷酸序列如SEQ ID NO: 4至SEQID NO: 9任一个所示。BMP4的信使RNA（mRNA）的NCBI序列登陆号为NM_001347912.1（SEQ IDNO: 19）、NM_001347916.1（SEQ ID NO: 20）、NM_001347914.2（SEQ ID NO: 21）、NM_001202.6（SEQ ID NO: 22）、NM_130850.5（SEQ ID NO: 23）、NM_130851.4（SEQ ID NO:24）、NM_001347917.1（SEQ ID NO: 25）、NM_001347913.2（SEQ ID NO: 26）、以及NM_001347915.2（SEQ ID NO: 27）。BMP4的DNA序列的NCBI序列登陆号为NC_000014.9（SEQ IDNO: 28），基因ID为652。BMP4在维持肺血管稳态中起重要作用，抑制BMP4能抑制低氧性肺动脉高压的病理改变。有研究表明，BMP4抑制人肺成纤维细胞增殖，诱导肺上皮细胞增殖和去分化。
编码BMP4的多核苷酸
本文可互换使用的术语“多核苷酸”和“核酸”是指任何长度的核苷酸（核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸）的聚合形式。这些术语包括单链、双链或三链DNA，基因组DNA、cDNA、基因组RNA、mRNA、DNA-RNA杂交体、或聚合物；该聚合物包含嘌呤和嘧啶碱基，或其他天然的，化学、生物化学修饰的，非天然或衍生的核苷酸碱基。多核苷酸的骨架可包含糖和磷酸基团（通常可在RNA或DNA中发现），或经修饰或取代的糖或磷酸基团。或者，多核苷酸的主链可以包含合成亚单位的聚合物（例如氨基磷酸酯（phosphoramidate）），并且因此可以是寡聚脱氧核苷氨基磷酸酯（P-NH2）或混合的氨基磷酸酯-磷酸二酯寡聚体。
如本文所用，术语“编码”指这样的任何过程，借助该过程聚合物大分子或序列串中的信息被用来指导产生不同于第一分子或序列串的第二分子或序列串。如本文所用，所述术语被广泛使用，并且可以具有各种应用。在一个方面，术语“编码”描述了半保守DNA复制的过程，其中双链DNA分子的一条链被用作模板来通过DNA依赖性的DNA聚合酶来编码新合成的互补姐妹链。在另一个方面，术语“编码”是指这样的任何过程，借助该过程一个分子中的信息被用来指导产生与第一分子具有不同的化学性质的第二分子。例如，DNA分子可以编码RNA分子（例如，通过参与DNA依赖性的RNA聚合酶的转录过程）。而且，RNA分子可以编码多肽，如在翻译过程中那样。当用于描述翻译过程时，术语“编码”也延伸至编码氨基酸的三联体密码子。在一些方面，RNA分子可以编码DNA分子，例如通过参与RNA依赖性的DNA聚合酶的逆转录过程。在另一个方面，DNA分子可以编码多肽，其中应理解的是，在该情况下使用的“编码”包含转录和翻译过程。
如本文所用，术语“变体”是指在“非必需”区域进行保守取代或改变使其与序列具有至少60%、70%、80%、90%、95%、98%序列同一性的核苷酸或氨基酸序列。
同一性
“同源性”或“同一性”或“相似性”是指两个肽之间或两个核酸分子之间的序列相似性。同源性能够通过比较每个序列中的位置来确定，该序列可以为了比较的目的而被比对。当比较的序列中的位置被相同的碱基或氨基酸占据时，那么分子在该位置是同源的。序列间同源性的程度是序列共有的匹配或同源位置的数量的函数。“无关的”或“非同源的”序列与本发明的序列之一共享小于40％的同一性，但优选地小于25％的同一性。
多核苷酸或多核苷酸区域（或者多肽或多肽区域）与另一个序列具有一定百分比（例如60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或者99%）的“序列同一性”，意味着当比对时，在比较两个序列时该百分比的碱基（或氨基酸）是相同的。这种比对和百分比同源性或序列同一性可以使用本领域已知的软件程序来确定。
病毒载体
病毒载体可将遗传物质带入细胞，原理是利用病毒具有传送其基因组进入其他细胞，进行感染的分子机制。病毒载体也可以称为载体、载体病毒粒子或载体粒子。病毒载体的实例包括但不限于：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯性疱疹病毒、牛痘病毒、杆状病毒和慢病毒。
逆转录病毒载体可以使衍生自或能够衍生自任何适合的逆转录病毒。大量的不同的逆转录病毒已经被鉴定。例子包括但不限于：鼠白血病病毒（MLV）、人T-细胞白血病病毒（HTLV）、小鼠乳腺肿瘤病毒（MMTV）、劳氏肉瘤病毒（RSV）、Fujinami肉瘤病毒（FuSV）、莫洛尼鼠白血病病毒（Mo MLV）、FBR鼠骨肉瘤病毒（FBR MSV）、莫洛尼鼠肉瘤病毒（Mo-MSV）、Abelson鼠白血病病毒（A-MLV）、禽骨髓细胞瘤病毒-29（MC29）和禽红细胞增多症病毒（AEV）。
腺病毒是双链的线性DNA病毒，其不通过RNA中间体复制。腺病毒是双链的DNA无包膜病毒，其能够在体内、离体和体外转导大范围的人和非人来源的细胞类型。这些细胞包括呼吸道气道上皮细胞、肝细胞、肌肉细胞、心肌细胞、滑膜细胞、原代乳腺上皮细胞和有丝分裂后终末分化的细胞（例如神经元）。腺病毒已被用作用于基因治疗和异源基因表达的载体。大（36kb）基因组可以容纳高达8 kb的外源插入DNA，并且能够在互补细胞系中有效地复制以产生每毫升高达1012个转导单位的非常高的效价。腺病毒因此是研究原代非复制细胞中基因表达的最佳系统之一。来自腺病毒基因组的病毒基因或外源基因的表达不需要复制细胞。腺病毒载体通过受体介导的内吞作用进入细胞。一旦进入细胞内，腺病毒载体很少整合到宿主染色体中。相反，它们作为附加体（独立于宿主基因组）存在，作为宿主细胞核中的线性基因组。
腺相关病毒（adeno-associated virus，AAV），也称腺伴随病毒，属于微小病毒科依赖病毒属，是目前发现的一类结构最简单的单链DNA缺陷型病毒。重组的AAV载体已成功地被用于标记基因和涉及人类疾病的基因的体外、离体和体内的转导。已经开发了某些AAV载体，其可以有效地结合大的有效载荷（高达8-9kb）。现在已经鉴定了多种腺相关病毒（AAV）的血清型，包括12种人血清型（AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11和AAV12）和超过100种来自非人灵长动物的血清型。本发明预期可使用这些血清型中的任何一个。
单纯性疱疹病毒（HSV）是包膜的双链DNA病毒，其天然地感染神经元。它可以容纳外源DNA的大区段，并且已经被采用为用于对神经元的基因递送的载体。在治疗过程中HSV的使用需要使毒株减毒，从而它们不能建立裂解周期。特别地，如果HSV载体用于人类的基因治疗，则优选地将多核苷酸插入必需基因中。这是因为如果病毒载体遭遇野生型病毒，则可以通过重组将异源基因转移至野生型病毒。然而，如果以防止其复制的方式构建重组病毒，则这可以通过将寡核苷酸插入对复制必需的病毒基因来实现。
本发明的病毒载体可以是牛痘病毒载体，例如MVA或NYVAC。牛痘载体的替代物包括例如称为ALVAC的鸡痘或金丝雀痘的禽痘（avipox）载体，以及由其衍生的毒株，该毒株可以在人类细胞中感染和表达重组蛋白但不能复制。应当理解的是，在重组基因的插入之后病毒基因组的部分可以保持完整。这意味着病毒载体可以保留感染细胞并随后表达额外的基因的能力的概念，该额外的基因支持其复制并可能促进被感染细胞的裂解和死亡。
慢病毒是更大群体的逆转录病毒的一部分。可以分为灵长类动物和非灵长类动物群体。灵长类慢病毒的例子包括但不限于：人免疫缺陷病毒（HIV）、人自身免疫缺陷综合症（AIDS）的病原体以及猿猴免疫缺陷病毒（SIV）。非灵长类动物慢病毒群体包括原型“慢病毒”visna/maedi病毒（VMV），以及相关的山羊关节炎-脑炎病毒（CAEV）、马传染性贫血病毒（EIAV）、猫免疫缺陷病毒（FIV）和牛免疫缺陷病毒（BIV）。慢病毒载体一般是指以人类免疫缺陷病毒-1（HIV-1）来源的一种病毒载体，慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息，是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在细胞或活体组织中表达。
非病毒载体
非病毒载体是利用非病毒的载体材料的物化性质来介导基因的转移。任何合适的非病毒载体可被用于将BMP4基因引入对象的细胞中。非病毒载体的例子包括但不限于，质粒、脂质体、逆转录元件、转座子、附加型载体、阳离子多聚物、壳聚糖聚合物、无机纳米粒子和外泌体。
质粒是小型环状DNA分子，在基因工程中作为最常用，最简单的载体，必须包括三部分：遗传标记基因，复制区，目的基因。质粒在所有的细菌类群中都可发现，它们是独立于细菌染色体外自我复制的DNA分子。质粒载体的例子包括但不限于：大肠杆菌质粒载体、枯草杆菌质粒载体、酵母质粒载体、农杆菌质粒载体和蓝细菌质粒载体。
脂质体由卵磷脂和神经酰胺等制得的脂质体（空心），具有的双分子层结构，是一种人工膜。脂质体的组成通常是磷脂（特别是高相转变温度的磷脂）的组合，通常与类固醇（尤其是胆固醇）组合。也可以使用其他磷脂或其他脂质。脂质体的物理特性取决于pH、离子强度和二价阳离子的存在。通过在转导期间通过使用二油酰磷脂酰乙醇胺可以增加脂质体的转导效率。高效脂质体可商购获得。脂质体的例子包括但不限于：中性脂质体、负电荷脂质体和正电荷脂质体。
附加型载体是一种允许和帮助水溶性物质渗入并穿过细胞膜的脂质层而转移到细胞中去的物质。它是膜上的一种蛋白质，调节着离子主动吸收的一种成分。附加型载体可以包括一种或多种多能性基因，其可操作地连接至少一个用于表达因子的调控序列。本发明的附加型载体还可包括允许该载体在细胞中复制的组分。例如，Epstein Barr oriP/核抗原-1（EBNA-1）组合可以支持哺乳动物细胞（特别是灵长类动物细胞）中载体的自我复制。来自于EBV基因组的EBNA1反式元件和OriP顺式元件使得简单质粒能够在增殖的人类细胞中作为附加体进行复制和维持。
用于基因转移的阳离子多聚物包括但不限于：多聚赖氨酸、聚乙烯亚胺和树突状聚合物。
壳聚糖作为一种天然阳离子聚合物，通过与DNA以静电方式作用使壳聚糖-DNA体系不被降解，完全进入细胞。作为基因载体，壳聚糖具有细胞毒性低、生物相容性好、基因免疫性低和转染效率较高等特点。壳聚糖-DNA复合物按制备方法主要分为壳聚糖及其衍生物的DNA复合物、壳聚糖-DNA纳米微球和壳聚糖自聚体-DNA。
无机纳米粒子主要通过穿过细胞膜将药物或生物分子转运到生物体中而起到治疗疾病的作用。应用于基因转运的无机纳米粒子的例子包括但不限于硅、铁氧化物、碳纳米管、磷酸钙、金属纳米粒子、量子点等。
重组载体
本文所公开的重组载体是表达BMP4蛋白的重组载体，其包含载体，所述载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述载体是病毒载体或非病毒载体。
表达BMP4蛋白的重组载体
在本文公开的任何重组载体、药物组合物和方法中，编码BMP4蛋白的多核苷酸通过载体来施用，其中载体包含病毒载体和非病毒载体。将编码BMP4蛋白的核酸序列包装进载体的方法是本领域技术人员已知的。
本发明的一个方面提供一种在对象中治疗或预防纤维增生性疾病的重组载体，其包含载体，所述载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述多核苷酸是编码BMP4蛋白的DNA、RNA、或DNA-RNA杂交体。在一些实施方式中，BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 4至SEQ ID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQID NO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO: 29所示的序列或其变体。
在一些实施方式中，所述载体是病毒载体。在一些实施方式中，所述病毒载体选自逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯性疱疹病毒、牛痘病毒、杆状病毒和慢病毒。
在一些实施方式中，所述重组载体包含病毒载体，其中所述病毒载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述重组载体包含病毒载体，其中所述病毒载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ IDNO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含病毒载体，其中所述病毒载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 4至SEQ ID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含病毒载体，其中所述病毒载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ IDNO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含病毒载体，其中所述病毒载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO: 29所示的序列或其变体。
在一些实施方式中，所述病毒载体是腺相关病毒载体。在一些实施方式中，所述重组载体包含腺相关病毒载体，其中所述腺相关病毒载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述重组载体包含腺相关病毒载体，其中所述腺相关病毒载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含腺相关病毒载体，其中所述腺相关病毒载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 4至SEQ ID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含腺相关病毒载体，其中所述腺相关病毒载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含腺相关病毒载体，其中所述腺相关病毒载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO:28或SEQ ID NO: 29所示的序列或其变体。
在一些实施方式中，所述载体是非病毒载体，在一些实施方式中，所述非病毒载体选自质粒、脂质体、逆转录元件、转座子、附加型载体、阳离子多聚物、壳聚糖聚合物、无机纳米粒子和外泌体。
在一些实施方式中，所述重组载体包含非病毒载体，其中所述非病毒载体包含编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述重组载体包含非病毒载体，其中所述非病毒载体包含编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO:1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含非病毒载体，其中所述非病毒载体包含编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 4至SEQ ID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含非病毒载体，其中所述非病毒载体包含编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含非病毒载体，其中所述非病毒载体包含编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO: 29所示的序列或其变体。
在一些实施方式中，所述非病毒载体是外泌体。在一些实施方式中，所述重组载体包含外泌体，其中所述外泌体包含编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述重组载体包含外泌体，其中所述外泌体包含编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含外泌体，其中所述外泌体包含编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 4至SEQ ID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含外泌体，其中所述外泌体包含编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ IDNO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含外泌体，其中所述外泌体包含编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO: 29所示的序列或其变体。
在一些实施方式中，所述非病毒载体是质粒。在一些实施方式中，所述重组载体包含质粒，其中所述质粒包含编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述重组载体包含质粒，其中所述质粒包含编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含质粒，其中所述质粒包含编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 4至SEQ ID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含质粒，其中所述质粒包含编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 10至SEQ IDNO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含质粒，其中所述质粒包含编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO: 29所示的序列或其变体。
在一些实施方式中，所述非病毒载体是脂质体。在一些实施方式中，所述重组载体包含脂质体，其中所述脂质体包含编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述重组载体包含脂质体，其中所述脂质体包含编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含脂质体，其中所述脂质体包含编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 4至SEQ ID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含脂质体，其中所述脂质体包含编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ IDNO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述重组载体包含脂质体，其中所述脂质体包含编码BMP4蛋白的多核苷酸，其中所述编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO: 29所示的序列或其变体。
药物组合物
“药物组合物”是指用于人的药物制剂。该药物组合物包含本发明的药物以及载体、稳定剂和/或赋形剂的合适制剂。
本发明的一个方面提供包含重组载体以及药学上可接受的赋形剂的药物组合物，其中该重组载体包含载体，所述载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。该药物组合物可用于治疗或预防对象的纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述多核苷酸是编码BMP4蛋白的DNA、RNA、或DNA-RNA杂交体。在一些实施方式中，BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQID NO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 4至SEQ ID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO: 29所示的序列或其变体。在一些实施方式中，所述载体是病毒载体或非病毒载体。在一些实施方式中，所述非病毒载体选自：质粒、脂质体、逆转录元件、转座子、附加型载体、阳离子多聚物、壳聚糖聚合物、无机纳米粒子和外泌体。在一些实施方式中，所述病毒载体选自：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯性疱疹病毒、牛痘病毒、杆状病毒和慢病毒。在一些实施方式中，所述病毒载体是腺相关病毒。
本发明的另一个方面提供包含游离的BMP4蛋白以及药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一些实施方式中，所述游离的BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述游离的BMP4蛋白是从天然来源纯化得到的，或者是通过基因工程方法得到的重组BMP4蛋白。
为了制备药物组合物或无菌组合物，让重组载体与可药用载体或赋形剂混合。可通过与生理学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合，来制备呈例如冻干粉、浆液、水溶液或混悬剂形式的治疗及诊断药物的制剂。
药学上可接受的赋形剂是本领域熟知的。如本文所用，“药学上可接受的赋形剂”包括当与组合物的活性成分组合时允许该成分保持生物活性并且不会引起与对象的免疫系统的破坏性反应的材料。这些可以包括稳定剂、防腐剂、盐或糖配合物或晶体等。“药学上可接受的”是指当施用至人体时不会产生过敏反应或类似的不期望的反应的分子和成分。本领域已知如何制备包含作为活性组分的水性组合物。通常，这些组合物被制备成注射剂或喷雾剂，例如液态溶液或悬浮液；也可以制备成适于在注射或喷雾之前配制成溶液或悬浮液的固体形式。
纤维增生性疾病
纤维增生可发生于多种器官，主要病理改变为器官组织内纤维结缔组织增多，实质细胞减少，持续进展可致器官结构破坏和功能减退，乃至衰竭，严重威胁人类健康和生命。
在本发明中，纤维增生性疾病包括但不限于：肺、心血管系统、肝、肾、眼、神经系统、骨髓和皮肤的纤维增生性疾病。
肺纤维增生性疾病包括但不限于：无机粉尘职业病（例如矽肺、石棉肺、煤肺等），有机粉尘和过敏性肺炎（例如农民肺），肺原发性疾病（例如特发性间质性肺炎、闭塞性细支气管炎伴机化性肺炎等），特发性肺纤维化，进行性系统硬化症，淋巴细胞间质性肺炎，家族性肺纤维化等。
心血管系统纤维增生性疾病包括但不限于心肌梗死后的替代性和间质性纤维化。
肝纤维增生性疾病包括但不限于：病毒性肝硬化（例如乙、丙和丁型肝炎病毒性肝炎），营养不良性肝硬化等。
肾纤维增生性疾病包括但不限于：慢性肾小球肾炎、慢性肾盂肾炎、阻塞性肾病、系统性红斑狼疮性肾病等。
眼睛纤维增生性疾病包括但不限于眼睛外伤和手术后眼睛纤维增生性疾病等。
神经系统纤维增生性疾病包括但不限于脊髓外伤后纤维增生性疾病等。
骨髓纤维增生性疾病包括但不限于特发性和药物引起的骨髓纤维化等。
皮肤纤维增生性病症包括但不限于口腔粘膜纤维化等。
方法和治疗
本发明的一方面，提供了一种治疗或预防对象的纤维增生性疾病的方法，所述方法包括向有需要的对象施用治疗有效量的本发明的BMP4蛋白，其中所述BMP4蛋白是游离的BMP4蛋白。在一些实施方式中，BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO:3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述游离的BMP4蛋白是从天然来源纯化得到的，或者是通过基因工程方法得到的重组BMP4蛋白。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病选自：肺、心血管系统、肝、肾、眼、神经系统、骨髓和皮肤的纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病是肺纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述肺纤维增生性疾病是特发性肺纤维化。
进一步地，本发明提供了本发明的BMP4蛋白在制备用于治疗或预防对象的纤维增生性疾病的药物中的应用，其中所述BMP4蛋白是游离的BMP4蛋白。在一些实施方式中，BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，所述游离的BMP4蛋白是从天然来源纯化得到的，或者是通过基因工程方法得到的重组BMP4蛋白。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病选自：肺、心血管系统、肝、肾、眼、神经系统、骨髓和皮肤的纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病是肺纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述肺纤维增生性疾病是特发性肺纤维化。
本发明的另一方面，提供了一种治疗或预防对象的纤维增生性疾病的方法，所述方法包括向有需要的对象施用治疗有效量的本发明的BMP4蛋白，其中所述BMP4蛋白是表达BMP4蛋白的重组载体，所述重组载体包含载体，所述载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述多核苷酸是编码BMP4蛋白的DNA、RNA、或DNA-RNA杂交体。在一些实施方式中，BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQID NO: 4至SEQ ID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO:28或SEQ ID NO: 29所示的序列或其变体。在一些实施方式中，所述载体是病毒载体或非病毒载体。在一些实施方式中，所述非病毒载体选自：质粒、脂质体、逆转录元件、转座子、附加型载体、阳离子多聚物、壳聚糖聚合物、无机纳米粒子和外泌体。在一些实施方式中，所述病毒载体选自：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯性疱疹病毒、牛痘病毒、杆状病毒和慢病毒。在一些实施方式中，所述病毒载体是腺相关病毒。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病选自：肺、心血管系统、肝、肾、眼、神经系统、骨髓和皮肤的纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病是肺纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述肺纤维增生性疾病是特发性肺纤维化。
进一步地，本发明提供了本发明的BMP4蛋白在制备用于治疗或预防对象的纤维增生性疾病的药物中的应用，其中所述BMP4蛋白是表达BMP4蛋白的重组载体，所述重组载体包含载体，所述载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述多核苷酸是编码BMP4蛋白的DNA、RNA、或DNA-RNA杂交体。在一些实施方式中，BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 4至SEQ ID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQID NO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO: 29所示的序列或其变体。在一些实施方式中，所述载体是病毒载体或非病毒载体。在一些实施方式中，所述非病毒载体选自：质粒、脂质体、逆转录元件、转座子、附加型载体、阳离子多聚物、壳聚糖聚合物、无机纳米粒子和外泌体。在一些实施方式中，所述病毒载体选自：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯性疱疹病毒、牛痘病毒、杆状病毒和慢病毒。在一些实施方式中，所述病毒载体是腺相关病毒。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病选自：肺、心血管系统、肝、肾、眼、神经系统、骨髓和皮肤的纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病是肺纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述肺纤维增生性疾病是特发性肺纤维化。
本发明的另一方面，提供了一种治疗或预防对象的纤维增生性疾病的方法，所述方法包括向有需要的对象施用治疗有效量的本发明的药物组合物，其中该药物组合物包含重组载体和药学上可接受的赋形剂，其中该重组载体包含载体，所述载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述多核苷酸是编码BMP4蛋白的DNA、RNA、或DNA-RNA杂交体。在一些实施方式中，BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ IDNO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 4至SEQ ID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO: 29所示的序列或其变体。在一些实施方式中，所述载体是病毒载体或非病毒载体。在一些实施方式中，所述非病毒载体选自：质粒、脂质体、逆转录元件、转座子、附加型载体、阳离子多聚物、壳聚糖聚合物、无机纳米粒子和外泌体。在一些实施方式中，所述病毒载体选自：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯性疱疹病毒、牛痘病毒、杆状病毒和慢病毒。在一些实施方式中，所述病毒载体是腺相关病毒。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病选自：肺、心血管系统、肝、肾、眼、神经系统、骨髓和皮肤的纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病是肺纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述肺纤维增生性疾病是特发性肺纤维化。
进一步地，本发明提供了本发明的药物组合物在制备用于治疗或预防对象的纤维增生性疾病的药物中的应用，其中该药物组合物包含重组载体和药学上可接受的赋形剂，其中该重组载体包含载体，所述载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。在一些实施方式中，所述多核苷酸是编码BMP4蛋白的DNA、RNA、或DNA-RNA杂交体。在一些实施方式中，BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 4至SEQID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。在一些实施方式中，编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ ID NO: 28或SEQ ID NO:29所示的序列或其变体。在一些实施方式中，所述载体是病毒载体或非病毒载体。在一些实施方式中，所述非病毒载体选自：质粒、脂质体、逆转录元件、转座子、附加型载体、阳离子多聚物、壳聚糖聚合物、无机纳米粒子和外泌体。在一些实施方式中，所述病毒载体选自：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯性疱疹病毒、牛痘病毒、杆状病毒和慢病毒。在一些实施方式中，所述病毒载体是腺相关病毒。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病选自：肺、心血管系统、肝、肾、眼、神经系统、骨髓和皮肤的纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述纤维增生性疾病是肺纤维增生性疾病。在一些实施方式中，所述肺纤维增生性疾病是特发性肺纤维化。
合适的给药途径包括胃肠外给药（例如肌内、静脉内或皮下给药）及口服给药。可按多种常规方式给予本发明方法的BMP4蛋白、重组载体或药物组合物，这些方法例如有经气管插管给予、经口摄取、吸入、局部施用或经皮肤、皮下、腹膜内、胃肠外、动脉内或静脉内注射。此外，人们可以在靶向药物递送系统中给予本发明的BMP4蛋白、重组载体或药物组合物。在一个实施方式中，经气管插管给予本发明的BMP4蛋白、重组载体或药物组合物。在一个实施方式中，经静脉内注射给予本发明的BMP4蛋白、重组载体或药物组合物。
由临床医生例如用本领域已知或怀疑影响治疗或预期影响治疗的参数或因子来测定合适的剂量。通常，开始剂量比最佳剂量稍低，此后少量增加直到达到相对于任何不良副作用所要的或最佳的作用效果。重要的诊断测量包括测量例如炎性症状或所产生的炎性细胞因子的水平。
可通过连续给药或通过以一定间隔（例如一天、一周或每周1-7次）给药来施用本发明的BMP4蛋白、重组载体或药物组合物。可通过气管插管、静脉内、皮下、腹膜内、经皮肤、局部、经口、经鼻、经直肠、肌内、大脑内或脊柱内来提供剂量。优选剂量方案是包括避免显著的不合乎需要的副作用的最大剂量或给药频率的方案。
在一些实施方式中，本发明的治疗或预防纤维增生性疾病的方法阻止了纤维化的进展或由纤维化导致的疾病的发作。因此，在一些实施方式中，本发明提供一种阻止纤维化的进展和/或由纤维化导致的疾病的发作的方法，该方法包括向有此需要的对象施用有效量的本发明的BMP4蛋白、重组载体或药物组合物。在一些实施方式中，这些治疗或预防纤维增生性疾病的方法阻止了与纤维化有关的症状的发作、进展和/或复发。因此，在一些实施方式中，本发明提供了治疗或预防与纤维化有关的症状的方法，该方法包括向有此需要的对象施用有效量的本发明的BMP4蛋白、重组载体或药物组合物。
实施例
实验动物
SPF级野生型C57BL/6小鼠购自广州中医药大学动物实验中心，C57BL/6背景的BMP4 +/- 杂合子基因敲除小鼠购自于美国Jackson Laboratory。所有动物均在广州医科大学实验动物中心SPF级动物房进行饲养和繁殖，在小鼠6-8周龄时将小鼠随机分组进行实验，所有动物的使用和处理等均经过广州医科大学实验动物伦理委员会的审查批准。
统计学处理
使用GraphPad Prism 5.0软件进行统计学分析和软件作图，实验结果以均数±标准误差表示（Mean±SEM），两组样本之间均数的比较应用t检验，多组均数比较应用单因素方差分析（one way-ANOVA）检验，P<0.05为有统计学意义。
实施例1 在IPF患者和博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠肺组织中BMP4的表达显著降低
免疫印迹检测肺组织中相关目的蛋白的表达量
（1）肺组织总蛋白提取：将冻存的肺组织从-80℃冰箱拿出，用生理盐水清洗肺组织，并吸干水。称量肺组织重量，大约每100 mg肺组织加入1 ml蛋白裂解液，装入匀浆管中，用高速匀浆机破碎肺组织，裂解至裂解液成浓汤样。于高速冷冻离心机中离心，4 ℃ 12000g，离心25分钟，吸取上层液体至一新的EP管中，用于后续测蛋白浓度，弃去沉淀。
（2）测蛋白浓度：按碧云天BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书操作。加入总体积为25μl的梯度稀释的标准品。将1.25 μl的样品用水稀释20倍，使总体积为25 μl并加入96孔板。试剂A、试剂B按50：1比例混匀，将混合液200 μl加入已加标准品和样品的96孔板中，37℃避光孵育30 min。全波长酶标仪于562 nm波长下测定每个孔的OD值，制作标准曲线，并计算出每孔样品蛋白浓度。
（3）制备上样蛋白：以上样20 ng为总量，根据所测蛋白浓度，算出每个样品上样体积，用蛋白裂解液稀释样品，使每个样品最终上样体积一致。按照比例加入5 *loadingbuffer。100℃沸水煮样品5 min使蛋白变性，煮完将样品置于冰上冷却后于-20℃保存。
（4）蛋白免疫印迹：提前配制好10%分离胶和5%浓缩胶，向电泳槽内加入电泳液，垂直向上拔出加样梳，将样品加入上样孔。先以70 v电压恒压电泳，至样品经浓缩胶压成一条直线，marker 开始分离，加压至120 v，恒压电泳至溴酚蓝跑至底部约0.5 cm时结束。用甲醇浸泡PVDF膜，取出放入装有电转液的盘子中，弃去电泳液，从电泳槽中取出凝胶，按照“海绵-滤纸-凝胶-PVDF膜-滤纸-海绵”的顺序制作电转“三明治”。将三明治夹放入电转槽中，将预冷的电转液倒入电转仪中，放入冰袋使电转液保持低温。以300 mA，120 min条件电转并用冰覆盖电转槽。电转完将PVDF膜取出，将目的蛋白相应条带加入对应的一抗置于摇床上慢摇，4℃孵育过夜，第二天用TBST洗膜3次，每次10 min，加入对应二抗室温孵育1到2个小时，TBST洗膜3次，每次10分钟。用全自动化学发光显影系统显影，用Image J图像分析软件对目的条带灰度值进行分析并用Graph-Pad 软件进行统计。
结果
IPF患者肺组织中BMP4的表达显著降低
收集癌旁正常对照肺组织和IPF患者肺组织，观察IPF患者和正常对照肺组织中BMP4的表达变化 (n=20)。如图1A和图1B所示，IPF患者肺组织中BMP4蛋白水平显著降低。荧光定量PCR（Real-time PCR）的结果显示，IPF患者肺组织中BMP4 mRNA水平显著降低（图1C）。免疫荧光染色的结果显示，IPF患者肺组织中BMP4的荧光强度显著降低（图1D）。综上，根据图1所示的结果可知，相对正常对照肺组织而言，肺纤维化患者肺组织中BMP4的表达显著降低。
博来霉素在肺纤维化小鼠肺组织中诱导BMP4蛋白表达的降低
博莱霉素气管内给药（2.5 mg/kg）诱导野生型小鼠发生肺纤维化，分别在肺纤维化发展的不同阶段，即给予博来霉素造模后第0、7、14、21天收集肺组织标本；应用蛋白免疫印迹技术，分析在肺纤维化不同阶段，小鼠肺组织中BMP4蛋白表达情况。发现，与对照组小鼠相比，模型组小鼠肺组织中BMP4水平显著降低，且随着博来霉素的作用时间增加，肺纤维化小鼠肺组织中BMP4蛋白表达进一步降低（图2）。
实施例2 BMP4基因敲除对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的影响
BMP4基因敲除小鼠（BMP4 +/- ）的鉴定
（1）剪取小鼠尾巴并裂解：给小鼠编号，用洁净的剪刀剪取小鼠尾巴，并置于1.5ml EP管内，每个EP管中加入200 μl鼠尾裂解液，55℃水浴过夜（约10 h左右），再85℃水浴1h使蛋白酶K灭活（标本可置于4℃保存一周）。
（2）引物序列如下表所示：
表1 BMP4基因敲除小鼠（BMP4+/-）基因型鉴定引物序列
引物名称 碱基序列
NEO Forward 5’-ACTGGCTGCTATTGGGCGAAGTG-3’（SEQ ID NO: 30）
NEO Reverse 5’-GTAAAGCACGAGGAAGCGGTCAG-3’ （SEQ ID NO: 31）
WT Forward 5’-CCCAGAGACACCATGATTCC-3’ （SEQ ID NO: 32）
WT Reverse 5’-AGCCGGTAAAGATCCCTCAT-3’ （SEQ ID NO: 33）
注：NEO引物用于扩增BMP4突变基因；WT引物用于扩增BMP4野生基因。
（3）按照下表配制PCR反应体系（总体积25 μl）：
表2 BMP4+/-小鼠基因鉴定反应体系
主要成分 加样体积
2×PCR Master Mix 12.5 μl
DNA模板 2 μl
ddH<sub>2</sub>O 8.5 μl
F 1 μl
R 1 μl
注：F：上游引物；R：下游引物。
（4）PCR扩增的反应条件
表3 BMP4 +/- 小鼠基因型鉴定反应条件
Figure 627769DEST_PATH_IMAGE001
注：将反应体系充分混匀后再行PCR扩增反应。
（5）琼脂糖凝胶电泳
称取适量琼脂糖粉末至锥形瓶中，按比加入1xTAE轻轻摇匀，用微波炉加热至沸腾后，轻轻摇匀，使琼脂糖完全溶解。待其稍微冷却后加入EB替代物（每100 ml琼脂糖凝胶液加入5 μl EB替代物），混匀后倒入加样槽中，并垂直插入加样梳，待琼脂糖凝胶彻底凝固后，拔出加样梳，取出琼脂糖凝胶并放入琼脂糖电泳槽中，加入1xTAE至没过琼脂糖凝胶。按序加入DL1000 marker和样品，按120 V、30 min的条件进行电泳。电泳结束后，将琼脂糖凝胶置于凝胶成像系统中拍照成像，保存并分析结果。
小鼠肺纤维化模型建立
将小鼠分为四组：野生型小鼠对照组，BMP4 +/- 小鼠对照组，野生型小鼠予以博来霉素处理组，BMP4 +/- 小鼠予以博来霉素处理组。采用经喉气管插管的方式气管内滴注博来霉素，博来霉素给药剂量为2.0 mg/kg，对照组给予相应剂量的生理盐水。用1.2%阿佛丁（0.2ml/10 g）腹腔注射麻醉小鼠，麻醉不宜过深。将小鼠固定于手术实验台上，垂直于桌面。将小鼠喉镜插入部插入小鼠口腔，将整个喉镜向上提起，暴露声门，于声门张开时顺势将22 g静脉留置针插入气管内，并用注射器头向里推注约0.1 ml的气体，观察小鼠是否仍能正常均匀呼吸。若小鼠出现短暂的呼吸停止，表明气管插管成功。将稀释好的博来霉素注入气管内，并轻捏小鼠尾巴，刺激小鼠呼吸，进一步将留置针内的液体吸入肺部，轻晃小鼠身体，促进博来霉素在肺内均匀分布。给药后，观察小鼠的一般情况并记录小鼠体重以及死亡情况。
小鼠活体CT扫描
腹腔注射1.2%阿佛丁（0.2 ml/10 g）麻醉小鼠，将麻醉后的小鼠置于CT扫描箱中，用LCT-200 Micro CT对小鼠进行胸部CT扫描成像。
小鼠肺功能检测
于博来霉素造模后第21天，用小动物肺功能仪检测小鼠肺功能情况。校正小动物肺功能仪，使机器参数达标后开始检测。腹腔注射1.2%阿佛丁（0.2 ml/10 g）麻醉小鼠，用酒精擦拭小鼠颈部，切开颈部皮肤，顿性分离肌肉组织，暴露气管，剪开气管并接气管插管，放入体描箱后，连接小动物肺功能仪并进行机械通气。待小鼠呼吸及各参数变化趋于稳定后测定肺功能，记录各项肺通气功能指标。
小鼠肺组织HE染色
将分离的小鼠肺组织用多聚甲醛固定，再进行脱水、包埋、切片，切成约3 μm厚的切片。将切片置于烤片机上烤2 h，使石蜡充分熔化；脱蜡：二甲苯10 min*2次，100%酒精5min*2次，95%酒精5 min*2次，流水冲洗5 min；苏木素染核10 min，流水冲洗3 min；2%盐酸酒精转化15 s，流水冲洗2 min；伊红染色1 min，流水冲洗4 min；脱水透明：95%酒精5 min*2 次，100%酒精5 min*2次，二甲苯2次；待玻片晾干，用中性树脂封片；扫片机全视野扫描后观察肺部病变情况。
小鼠肺组织Masson染色
小鼠肺组织用甲醛固定后，常规脱水包埋切片，切片脱蜡后，置于固定液中于常温下过夜，流水冲洗。与天青石蓝液、苏木精液中各染2分钟，用1%的盐酸乙醇分化，流水冲洗10分钟。于品红溶液、1%磷铝酸盐溶液各处理10分钟，再于2%的苯胺蓝溶液中染5分钟，于0.2%冰醋酸溶液中处理2分钟。95%酒精脱水，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
肺组织中羟脯氨酸（hydroxyproline，HYP）含量测定
（1）肺组织的水解：称取约20 mg左右的肺组织至15 ml的EP管中，加入500 μl碱性水解液，混匀后放置于95℃水浴锅中水解20 min，间中多次摇晃混匀。
（2）调节PH至6.0~6.8左右：水解后用流水冲洗EP管使其冷却，加入指示剂后充分振荡摇匀，准确加入调PH甲液500 μl后充分振荡摇匀，液体呈红色；将调PH的乙液加入各EP管，边加边充分振荡摇匀，直至EP 管中的液体由红色变黄绿色；往EP管中加双蒸水至5 ml后充分振荡摇匀；取1.5-1.6 ml经稀释的水解液于2 ml的EP管中，称量10-15 mg活性炭于水解液中，充分振荡摇匀后，3500 rpm/min离心10 min，用加样枪吸取离心后的上清液500μl以待检测。
（3）检测反应体系：
表4 反应体系
空白管 标准管 检测管
双蒸水（μl） 500 —— ——
5 ug/ml标准应用液（μl） —— 500 ——
检测液（μl） —— —— 500
试剂一（μl） 250 250 250
试剂二（μl） 250 250 250
试剂三（μl） 250 250 250
注：加完试剂一后充分振荡摇匀后，静置10 min，再加入试剂二，充分振荡摇匀后，静置5 min，再加入试剂三，充分振荡摇匀冷却后，置于60℃的水浴锅中反应15 min，再3500rpm/min离心10 min。
（4）样品OD值测量：用加样枪吸取200 μl的样品于96孔板中，置于酶标仪中以550nm的波长测量各样品的OD值。
结果
一般状态观察
我们将小鼠随机分为四组，BMP4 +/+ +Saline：野生型小鼠对照组，n=12；BMP4 +/- +Saline：BMP4 +/- 小鼠对照组，n=10；BMP4 +/+ +BLM：野生型小鼠予以博来霉素处理组，n=25；BMP4 +/- +BLM：BMP4 +/- 小鼠予以博来霉素处理组，n=37。博来霉素造模后，对各组小鼠的活动状态进行观察。对照组（Saline）小鼠的反应灵敏，呼吸平稳，毛色及光泽正常；而模型组（BLM）小鼠的活动状态差，毛色发暗，无光泽，呼吸急促。
小鼠生存率和体重
小鼠给予博来霉素（2.0 mg/kg）处理，记录造模21天过程中小鼠的体重及死亡情况。与对照组（Saline）小鼠相比，模型组（BLM）小鼠的生存率下降。模型组（BLM）小鼠中，与野生型小鼠相比，BMP4 +/- 组小鼠生存率下降更显著（图3A）。博来霉素造模后，与对照组（Saline）相比，模型组（BLM）小鼠的体重于造模后的10天内逐渐下降，10天后趋于平稳以及逐渐复升。模型组（BLM）小鼠中，与野生型小鼠相比，BMP4 +/- 组小鼠体重下降更显著（图3B）。
小鼠肺部CT结果
小鼠博来霉素造模后第14天，进行了小鼠活体胸部CT扫描，评估小鼠肺纤维化程度。如图4所示，与对照组相比，模型组（BLM）小鼠的肺实变及纤维化显著。模型组（BLM）小鼠中，与野生型小鼠相比，BMP4 +/- 小鼠肺实变及纤维化更显著。
小鼠肺功能结果
造模后第21天，对小鼠进行肺功能检测，如图5所示：与对照组（Saline）相比，模型组（BLM）小鼠的肺功能下降，表现为肺顺应性下降（n=6，P＜0.05）和气道阻力升高（n=6，P＜0.001）。模型组（BLM）小鼠中，与野生型小鼠相比，BMP4 +/- 组肺功能下降更显著。
小鼠肺组织HE和Masson染色结果
小鼠博来霉素造模后第21天，小鼠肺组织HE染色结果如图6A所示，Masson染色结果如图6B所示，予以生理盐水处理组的小鼠肺泡结构完整，气道及肺泡周围无炎症细胞浸润，未见纤维组织增生和胶原沉积；模型组（BLM）小鼠肺泡结构破坏，肺泡壁及肺泡间隔增厚，可见气道及肺泡周围有炎症细胞浸润，肺泡间隔有纤维组织增生，BMP4 +/- +BLM组肺组织破坏最显著。
肺组织中羟脯氨酸（hydroxyproline，HYP）的含量
肺纤维化时，肺组织内胶原纤维增加，而羟脯胺酸为胶原纤维所特有，以此作为肺纤维化的指标。博来霉素造模后第21天，检测了小鼠肺组织中羟脯胺酸含量（图7），以此判断纤维化程度。与对照组相比，模型组（BLM）小鼠的肺组织中的羟脯胺酸含量增多（n=10，P<0.05），BMP4 +/- +BLM含量最高，其差别具有统计学意义（n=10，P<0.001）。
实施例3 BMP4基因敲除对博来霉素诱导小鼠成纤维细胞向肌纤维母细胞转化和合成ECM成分的影响
α-SMA是成纤维细胞向肌纤维母细胞转化的标记物，Fibronectin、和胶原主要成分Col 1、Col 3是ECM的主要成分。博来霉素造模后，我们检测了各组小鼠肺组织α-SMA、Fibronectin、Col 1、Col 3蛋白表达情况。
结果
如图8所示，与对照组相比，予以博来霉素处理21天后小鼠肺组织中的Fibronectin、α-SMA、Col 1、Col 3蛋白含量显著增加，说明博来霉素诱导了小鼠成纤维细胞向肌纤维母细胞转化和合成大量的ECM。模型组（BLM）小鼠中，与野生型小鼠相比，BMP4 +/- 小鼠肺组织中的Fibronectin、α-SMA、Col 1、Col 3表达更高，说明BMP4基因敲除加重了博来霉素诱导的小鼠成纤维细胞向肌纤维母细胞转化以及ECM的沉积。
实施例4 BMP4过表达对博来霉素诱导肺纤维化小鼠的预防和治疗作用的影响
为了进一步确定BMP4在肺纤维化中的保护作用，我们包装了过表达BMP4（SEQ IDNO: 34）的腺相关病毒（AAV9-BMP4），分别在气管内注射博莱霉素前两周以及造模9天后，经气管插管给予腺相关病毒AAV-BMP4。在给予博莱霉素造模23天后对各组小鼠进行肺功能测定，并对取材后的组织进行HE染色和Masson染色，观察BMP4过表达对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的预防和治疗作用。将小鼠分为四组：对照组（control），博来霉素和AAV9空载体处理组（BLM+AAV-Empty），博来霉素处理后AAV9-BMP4处理组（BLM+AAV9-BMP4），AAV9-BMP4处理后BLM处理组（AAV9-BMP4+BLM）。
结果
如图9A所示，与博莱霉素模型组（BLM+AAV-Empty）相比，BMP4过表达预防组（AAV9-BMP4+BLM）和治疗组（BLM+AAV9-BMP4）小鼠的肺功能都明显改善，表现为肺动态顺应性增加和肺阻力降低；图9B所示，与博莱霉素模型组（BLM+AAV-Empty）相比，BMP4过表达预防组（AAV9-BMP4+BLM）和治疗组（BLM+AAV9-BMP4）小鼠的肺纤维化病理程度也显著降低，进一步说明了BMP4在肺纤维化中能够起到抗纤维化的作用。
实施例5 BMP4基因敲除能够促进TGF-β1诱导的小鼠原代肺成纤维细胞转化和合成ECM
小鼠肺原代成纤维细胞的提取和培养
将小鼠用1.2%阿佛丁（0.2 ml/10 g）腹腔注射麻醉，麻醉后用酒精浸泡小鼠3-5分钟，将小鼠放入超净台中，剪开腹主动脉放血，打开胸腔取出肺组织，弃掉靠近大气道的肺组织，将肺组织放入含PBS的大皿中清洗2-3遍，移入新的大皿中，将肺组织快速剪成约1mm3碎块，用PBS清洗组织块至液体澄清，弃去PBS。往组织块中加入胰酶消化15 min，将消化后的组织块和胰酶吸入滤网中过滤，用无FBS的DMEM冲洗。将肺组织移入培养瓶中，不带有残留的液体。加入含有10%FBS的DMEM 4 ml，放入37℃细胞培养箱中过夜。第二天将培养瓶中的组织块吹打均匀并吸至50 ml EP管中，将液体吸弃，留组织块于管中，用DMEM清洗组织块3遍，吸弃液体，往50 ml EP管中加入2 ml含10%FBS的DMEM，将组织块移入2个培养瓶中，吸弃液体，往培养瓶一侧瓶壁上均匀摆放组织块，使组织块黏附于瓶壁，距离瓶底下缘至少0.5 cm远，往瓶中加入4 ml含10%FBS的DMEM，将培养瓶垂直放入细胞培养箱中，3 h后轻轻将瓶放倒，使培养基没过组织块并确保组织块仍然黏附于瓶壁上。3天后更换培养基，吸弃漂浮的组织块，贴壁组织块继续培养，7-10天后传代。
细胞总蛋白的提取
将细胞孔板或细胞培养皿中培养基吸弃，加入PBS清洗一遍，弃去PBS，加入配好的蛋白裂解液，于冰上裂解30 min。用细胞刮刮取细胞，将蛋白裂解液及细胞碎片吸入1.5 mlEP管中，置于事先预冷的离心机中，4 °C，12000 rpm，离心30 min。将上清吸至新的1.5 mlEP管中，弃去沉淀，-80℃保存用于后续实验。
为研究BMP4基因敲除对小鼠原代成纤维细胞转化的影响。对BMP4 +/- 小鼠和野生型小鼠肺组织中提取培养的原代肺成纤维细胞（BMP4 +/- 和BMP4 +/+ ），予以TGF-β1处理48 h，建立肺纤维化细胞模型，探究BMP4基因敲除是否影响肺纤维化结果。检测小鼠原代成纤维细胞中成纤维细胞转化标志物Fibronectin、α-SMA、Col 3、Col 1的表达。
结果
如图10A所示，与空白对照组相比，予以TGF-β1处理的肺成纤维细胞中，Fibronectin、α-SMA、Col3、Col1的表达显著升高，BMP4 +/- 组中表达高于BMP4 +/+ 组。且予以TGF-β1处理的肺成纤维细胞中BMP4表达降低，说明TGF-β1能抑制成纤维细胞中BMP4表达，BMP4基因敲除能加重TGF-β1诱导的小鼠原代肺成纤维细胞转化，加重肺纤维化。
实施例6 外源性加入BMP4重组蛋白能够抑制TGF-β1诱导的小鼠原代肺成纤维细胞转化和ECM的产生
细胞爬片免疫荧光染色
将细胞孔板中放入相应大小的圆形盖玻片，将细胞均匀铺入孔板中，置于培养箱培养3-5天并给药处理，从培养箱取出细胞孔板，用PBS轻轻清洗细胞表面1遍，弃去PBS，加入4%多聚甲醛并将孔板置于摇床上慢摇5-10 min，以固定细胞。弃去固定液，加入PBS清洗3遍，弃去PBS。加入10%TRIT-100，摇床上慢摇15 min以透化细胞膜，加入PBS清洗3遍，弃去PBS，加入3%BSA室温封闭1 h。弃去BAS，夹出盖玻片移至湿盒，按一抗说明书稀释一抗，将稀释好的一抗滴至圆形盖玻片上，阴性对照组则加入PBS，将湿盒放至4度冰箱，一抗孵育过夜。第二天将湿盒取出，于室温复温约半小时，将玻片夹至细胞孔板中，加入PBS清洗3遍，弃去PBS。加入稀释好的二抗，室温避光孵育1 h。加入PBS清洗3遍，弃去PBS。加入细胞核染色试剂DAPI，避光室温孵育5-8 min。加入PBS清洗3遍，弃去PBS，用防淬灭封片剂封片。于荧光显微镜下对细胞染色情况进行观察并采集图像。
为研究外源性BMP4对小鼠原代成纤维细胞转化和合成ECM能力的影响，对小鼠原代成纤维细胞予以TGF-β1刺激，建立纤维化细胞模型，在此基础上予以BMP4处理48 h，检测细胞中成纤维细胞转化标志物Fibronectin、α-SMA、Col 1、Col 3蛋白表达变化。
结果
如图10B-10D所示，予以TGF-β1处理后，细胞中Fibronectin、α-SMA、Col 1、Col 3的蛋白表达显著升高，予以BMP4处理可以抑制TGF-β1所致Fibronectin、α-SMA、Col 1、Col3的表达升高，其差别具有统计学意义。单独予以BMP4处理不影响Fibronectin、α-SMA、Col1、Col 3蛋白表达。免疫荧光结果显示，予以TGF-β1处理后，细胞中α-SMA、Vimentin蛋白表达显著升高，予以BMP4处理可以抑制TGF-β1所致α-SMA、Vimentin蛋白表达升高。说明外源性BMP4能抑制TGF-β1诱导的小鼠原代成纤维细胞转化。
实施例7 BMP4基因敲除能够促进TGF-β1诱导的小鼠肺原代成纤维细胞增殖
成纤维细胞的激活和转化是肺纤维化的主要特征。成纤维细胞的激活包括过度增殖和凋亡抵抗。我们研究BMP4对TGF-β1诱导的成纤维细胞增殖的影响。
结果
如图11A-11C所示，小鼠原代成纤维细胞（BMP4 +/- 和BMP4 +/+ ）予以TGF-β1处理后，小鼠原代成纤维细胞中PCNA、Survivin的表达显著升高，BMP4 +/- 原代成纤维细胞中PCNA、Survivin的表达高于BMP4 +/+ 原代成纤维细胞，其差别具有统计学意义。说明BMP4基因敲除促进TGF-β1诱导的小鼠原代成纤维细胞的增殖。
实施例8 外源性加入BMP4重组蛋白能够抑制TGF-β1诱导的小鼠肺原代成纤维细胞增殖
如图11D-11F所示，予以外源性BMP4处理能抑制TGF-β1所致PCNA、Survivin的表达升高，其差别具有统计学意义。
实施例9 BMP4基因敲除抑制了TGF-β1介导的成纤维细胞的凋亡抵抗，促进成纤维细胞凋亡
为研究BMP4对肺成纤维细胞凋亡的影响，探究BMP4是否通过抑制TGF-β1，促进成纤维细胞的凋亡，发挥抗纤维化作用。我们对小鼠肺原代成纤维细胞（BMP4 +/- 和BMP4 +/+ ）予以TGF-β1处理48 h后，检测细胞凋亡情况。
AnnexinV FITC细胞凋亡检测
按照AnnexinV FITC细胞凋亡检测试剂盒说明书操作，具体步骤如下：先用PBS清洗贴壁细胞1遍，用胰酶消化细胞，加含10%FBS的DMEM终止消化，吹打后将细胞悬液移入15ml EP管中，800 rpm，离心5 min。用预冷的PBS清洗细胞2遍，800 rpm，离心5 min，弃去PBS，用1×Bingding Buffer 溶液重悬细胞，并行细胞计数，稀释细胞悬液，使得细胞浓度为1×106/ml。将100 μl的细胞悬液移至流式管中，加入5 μl的FITC Annexin和5 μl的PI，轻轻混匀，室温下避光孵育10~15 min。每管加入400 μl的1×Bingding Buffer，上流式细胞仪检测。结果判断：在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限显示活细胞，为（FITC-/PI-）；其它象限为早期、晚期凋亡细胞和坏死细胞。
结果
使用AnnexinV FITC细胞凋亡检测试剂盒检测小鼠原代成纤维细胞予以TGF-β1处理后细胞凋亡情况，并计算凋亡率，结果显示，BMP4 +/- +TGF-β1组凋亡率最低，结果有统计学差异（n=5，P<0.01）。说明TGF-β1抑制了小鼠原代成纤维细胞的凋亡，促进了细胞凋亡抵抗。BMP4能抑制TGF-β1介导的成纤维细胞的凋亡抵抗，促进成纤维细胞凋亡。
应该理解的是，尽管已经通过优选实施方式和任选的特征具体公开了本发明，但是本领域技术人员可以对本文所公开的本发明进行修改、改进和变化，这些修改、改进和变化被认为在本发明的范围内。在此提供的材料、方法和实施例是优选的实施方式的代表，是示例性的，并且不旨在作为对本技术的范围的限制。
SEQUENCE LISTING
<110> 广州医科大学附属第一医院（广州呼吸中心）
<120> 用于治疗或预防纤维增生性疾病的药物
<130> 20D-1642-CNP
<160> 34
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 455
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4蛋白的氨基酸序列
<222> (1)..(455)
<400> 1
Met Arg Glu Gly Arg Gly Gly Gly Arg Glu Gly Arg Ser Ala Glu Pro
1 5 10 15
Gly Pro Glu Ala Arg Ser His Ser Val Val Pro Ser Arg Ala Thr His
20 25 30
Cys Cys Ser Phe Pro Glu Pro Phe Gln Gln Val Cys Ser Arg Leu Ala
35 40 45
Val Lys Asn His Gly Leu Leu Leu Tyr Ala Leu Phe Ser Val Ile Leu
50 55 60
Leu Gly Gly Ala Ser His Ala Ser Leu Ile Pro Glu Thr Gly Lys Lys
65 70 75 80
Lys Val Ala Glu Ile Gln Gly His Ala Gly Gly Arg Arg Ser Gly Gln
85 90 95
Ser His Glu Leu Leu Arg Asp Phe Glu Ala Thr Leu Leu Gln Met Phe
100 105 110
Gly Leu Arg Arg Arg Pro Gln Pro Ser Lys Ser Ala Val Ile Pro Asp
115 120 125
Tyr Met Arg Asp Leu Tyr Arg Leu Gln Ser Gly Glu Glu Glu Glu Glu
130 135 140
Gln Ile His Ser Thr Gly Leu Glu Tyr Pro Glu Arg Pro Ala Ser Arg
145 150 155 160
Ala Asn Thr Val Arg Ser Phe His His Glu Glu His Leu Glu Asn Ile
165 170 175
Pro Gly Thr Ser Glu Asn Ser Ala Phe Arg Phe Leu Phe Asn Leu Ser
180 185 190
Ser Ile Pro Glu Asn Glu Val Ile Ser Ser Ala Glu Leu Arg Leu Phe
195 200 205
Arg Glu Gln Val Asp Gln Gly Pro Asp Trp Glu Arg Gly Phe His Arg
210 215 220
Ile Asn Ile Tyr Glu Val Met Lys Pro Pro Ala Glu Val Val Pro Gly
225 230 235 240
His Leu Ile Thr Arg Leu Leu Asp Thr Arg Leu Val His His Asn Val
245 250 255
Thr Arg Trp Glu Thr Phe Asp Val Ser Pro Ala Val Leu Arg Trp Thr
260 265 270
Arg Glu Lys Gln Pro Asn Tyr Gly Leu Ala Ile Glu Val Thr His Leu
275 280 285
His Gln Thr Arg Thr His Gln Gly Gln His Val Arg Ile Ser Arg Ser
290 295 300
Leu Pro Gln Gly Ser Gly Asn Trp Ala Gln Leu Arg Pro Leu Leu Val
305 310 315 320
Thr Phe Gly His Asp Gly Arg Gly His Ala Leu Thr Arg Arg Arg Arg
325 330 335
Ala Lys Arg Ser Pro Lys His His Ser Gln Arg Ala Arg Lys Lys Asn
340 345 350
Lys Asn Cys Arg Arg His Ser Leu Tyr Val Asp Phe Ser Asp Val Gly
355 360 365
Trp Asn Asp Trp Ile Val Ala Pro Pro Gly Tyr Gln Ala Phe Tyr Cys
370 375 380
His Gly Asp Cys Pro Phe Pro Leu Ala Asp His Leu Asn Ser Thr Asn
385 390 395 400
His Ala Ile Val Gln Thr Leu Val Asn Ser Val Asn Ser Ser Ile Pro
405 410 415
Lys Ala Cys Cys Val Pro Thr Glu Leu Ser Ala Ile Ser Met Leu Tyr
420 425 430
Leu Asp Glu Tyr Asp Lys Val Val Leu Lys Asn Tyr Gln Glu Met Val
435 440 445
Val Glu Gly Cys Gly Cys Arg
450 455
<210> 2
<211> 408
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4蛋白的氨基酸序列
<222> (1)..(408)
<400> 2
Met Ile Pro Gly Asn Arg Met Leu Met Val Val Leu Leu Cys Gln Val
1 5 10 15
Leu Leu Gly Gly Ala Ser His Ala Ser Leu Ile Pro Glu Thr Gly Lys
20 25 30
Lys Lys Val Ala Glu Ile Gln Gly His Ala Gly Gly Arg Arg Ser Gly
35 40 45
Gln Ser His Glu Leu Leu Arg Asp Phe Glu Ala Thr Leu Leu Gln Met
50 55 60
Phe Gly Leu Arg Arg Arg Pro Gln Pro Ser Lys Ser Ala Val Ile Pro
65 70 75 80
Asp Tyr Met Arg Asp Leu Tyr Arg Leu Gln Ser Gly Glu Glu Glu Glu
85 90 95
Glu Gln Ile His Ser Thr Gly Leu Glu Tyr Pro Glu Arg Pro Ala Ser
100 105 110
Arg Ala Asn Thr Val Arg Ser Phe His His Glu Glu His Leu Glu Asn
115 120 125
Ile Pro Gly Thr Ser Glu Asn Ser Ala Phe Arg Phe Leu Phe Asn Leu
130 135 140
Ser Ser Ile Pro Glu Asn Glu Val Ile Ser Ser Ala Glu Leu Arg Leu
145 150 155 160
Phe Arg Glu Gln Val Asp Gln Gly Pro Asp Trp Glu Arg Gly Phe His
165 170 175
Arg Ile Asn Ile Tyr Glu Val Met Lys Pro Pro Ala Glu Val Val Pro
180 185 190
Gly His Leu Ile Thr Arg Leu Leu Asp Thr Arg Leu Val His His Asn
195 200 205
Val Thr Arg Trp Glu Thr Phe Asp Val Ser Pro Ala Val Leu Arg Trp
210 215 220
Thr Arg Glu Lys Gln Pro Asn Tyr Gly Leu Ala Ile Glu Val Thr His
225 230 235 240
Leu His Gln Thr Arg Thr His Gln Gly Gln His Val Arg Ile Ser Arg
245 250 255
Ser Leu Pro Gln Gly Ser Gly Asn Trp Ala Gln Leu Arg Pro Leu Leu
260 265 270
Val Thr Phe Gly His Asp Gly Arg Gly His Ala Leu Thr Arg Arg Arg
275 280 285
Arg Ala Lys Arg Ser Pro Lys His His Ser Gln Arg Ala Arg Lys Lys
290 295 300
Asn Lys Asn Cys Arg Arg His Ser Leu Tyr Val Asp Phe Ser Asp Val
305 310 315 320
Gly Trp Asn Asp Trp Ile Val Ala Pro Pro Gly Tyr Gln Ala Phe Tyr
325 330 335
Cys His Gly Asp Cys Pro Phe Pro Leu Ala Asp His Leu Asn Ser Thr
340 345 350
Asn His Ala Ile Val Gln Thr Leu Val Asn Ser Val Asn Ser Ser Ile
355 360 365
Pro Lys Ala Cys Cys Val Pro Thr Glu Leu Ser Ala Ile Ser Met Leu
370 375 380
Tyr Leu Asp Glu Tyr Asp Lys Val Val Leu Lys Asn Tyr Gln Glu Met
385 390 395 400
Val Val Glu Gly Cys Gly Cys Arg
405
<210> 3
<211> 345
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4蛋白的氨基酸序列
<222> (1)..(345)
<400> 3
Met Phe Gly Leu Arg Arg Arg Pro Gln Pro Ser Lys Ser Ala Val Ile
1 5 10 15
Pro Asp Tyr Met Arg Asp Leu Tyr Arg Leu Gln Ser Gly Glu Glu Glu
20 25 30
Glu Glu Gln Ile His Ser Thr Gly Leu Glu Tyr Pro Glu Arg Pro Ala
35 40 45
Ser Arg Ala Asn Thr Val Arg Ser Phe His His Glu Glu His Leu Glu
50 55 60
Asn Ile Pro Gly Thr Ser Glu Asn Ser Ala Phe Arg Phe Leu Phe Asn
65 70 75 80
Leu Ser Ser Ile Pro Glu Asn Glu Val Ile Ser Ser Ala Glu Leu Arg
85 90 95
Leu Phe Arg Glu Gln Val Asp Gln Gly Pro Asp Trp Glu Arg Gly Phe
100 105 110
His Arg Ile Asn Ile Tyr Glu Val Met Lys Pro Pro Ala Glu Val Val
115 120 125
Pro Gly His Leu Ile Thr Arg Leu Leu Asp Thr Arg Leu Val His His
130 135 140
Asn Val Thr Arg Trp Glu Thr Phe Asp Val Ser Pro Ala Val Leu Arg
145 150 155 160
Trp Thr Arg Glu Lys Gln Pro Asn Tyr Gly Leu Ala Ile Glu Val Thr
165 170 175
His Leu His Gln Thr Arg Thr His Gln Gly Gln His Val Arg Ile Ser
180 185 190
Arg Ser Leu Pro Gln Gly Ser Gly Asn Trp Ala Gln Leu Arg Pro Leu
195 200 205
Leu Val Thr Phe Gly His Asp Gly Arg Gly His Ala Leu Thr Arg Arg
210 215 220
Arg Arg Ala Lys Arg Ser Pro Lys His His Ser Gln Arg Ala Arg Lys
225 230 235 240
Lys Asn Lys Asn Cys Arg Arg His Ser Leu Tyr Val Asp Phe Ser Asp
245 250 255
Val Gly Trp Asn Asp Trp Ile Val Ala Pro Pro Gly Tyr Gln Ala Phe
260 265 270
Tyr Cys His Gly Asp Cys Pro Phe Pro Leu Ala Asp His Leu Asn Ser
275 280 285
Thr Asn His Ala Ile Val Gln Thr Leu Val Asn Ser Val Asn Ser Ser
290 295 300
Ile Pro Lys Ala Cys Cys Val Pro Thr Glu Leu Ser Ala Ile Ser Met
305 310 315 320
Leu Tyr Leu Asp Glu Tyr Asp Lys Val Val Leu Lys Asn Tyr Gln Glu
325 330 335
Met Val Val Glu Gly Cys Gly Cys Arg
340 345
<210> 4
<211> 1368
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的CDS对应的RNA序列
<222> (1)..(1368)
<400> 4
augcgagaag gcagaggagg agggagggag ggaaggagcg cggagcccgg cccggaagcu 60
aggagccauu ccguagugcc aucccgagca acgcacugcu gcagcuuccc ugagccuuuc 120
cagcaaguuu guucaagauu ggcugucaag aaucauggac uguuauuaua ugccuuguuu 180
ucugucaucc ugcuaggagg cgcgagccau gcuaguuuga uaccugagac ggggaagaaa 240
aaagucgccg agauucaggg ccacgcggga ggacgccgcu cagggcagag ccaugagcuc 300
cugcgggacu ucgaggcgac acuucugcag auguuugggc ugcgccgccg cccgcagccu 360
agcaagagug ccgucauucc ggacuacaug cgggaucuuu accggcuuca gucuggggag 420
gaggaggaag agcagaucca cagcacuggu cuugaguauc cugagcgccc ggccagccgg 480
gccaacaccg ugaggagcuu ccaccacgaa gaacaucugg agaacauccc agggaccagu 540
gaaaacucug cuuuucguuu ccucuuuaac cucagcagca ucccugagaa cgaggugauc 600
uccucugcag agcuucggcu cuuccgggag cagguggacc agggcccuga uugggaaagg 660
ggcuuccacc guauaaacau uuaugagguu augaagcccc cagcagaagu ggugccuggg 720
caccucauca cacgacuacu ggacacgaga cugguccacc acaaugugac acggugggaa 780
acuuuugaug ugagcccugc gguccuucgc uggacccggg agaagcagcc aaacuauggg 840
cuagccauug aggugacuca ccuccaucag acucggaccc accagggcca gcaugucagg 900
auuagccgau cguuaccuca agggaguggg aauugggccc agcuccggcc ccuccugguc 960
accuuuggcc augauggccg gggccaugcc uugacccgac gccggagggc caagcguagc 1020
ccuaagcauc acucacagcg ggccaggaag aagaauaaga acugccggcg ccacucgcuc 1080
uauguggacu ucagcgaugu gggcuggaau gacuggauug uggccccacc aggcuaccag 1140
gccuucuacu gccaugggga cugccccuuu ccacuggcug accaccucaa cucaaccaac 1200
caugccauug ugcagacccu ggucaauucu gucaauucca guauccccaa agccuguugu 1260
gugcccacug aacugagugc caucuccaug cuguaccugg augaguauga uaagguggua 1320
cugaaaaauu aucaggagau gguaguagag ggaugugggu gccgcuga 1368
<210> 5
<211> 1227
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的CDS对应的RNA序列
<222> (1)..(1227)
<400> 5
augauuccug guaaccgaau gcugaugguc guuuuauuau gccaaguccu gcuaggaggc 60
gcgagccaug cuaguuugau accugagacg gggaagaaaa aagucgccga gauucagggc 120
cacgcgggag gacgccgcuc agggcagagc caugagcucc ugcgggacuu cgaggcgaca 180
cuucugcaga uguuugggcu gcgccgccgc ccgcagccua gcaagagugc cgucauuccg 240
gacuacaugc gggaucuuua ccggcuucag ucuggggagg aggaggaaga gcagauccac 300
agcacugguc uugaguaucc ugagcgcccg gccagccggg ccaacaccgu gaggagcuuc 360
caccacgaag aacaucugga gaacauccca gggaccagug aaaacucugc uuuucguuuc 420
cucuuuaacc ucagcagcau cccugagaac gaggugaucu ccucugcaga gcuucggcuc 480
uuccgggagc agguggacca gggcccugau ugggaaaggg gcuuccaccg uauaaacauu 540
uaugagguua ugaagccccc agcagaagug gugccugggc accucaucac acgacuacug 600
gacacgagac ugguccacca caaugugaca cggugggaaa cuuuugaugu gagcccugcg 660
guccuucgcu ggacccggga gaagcagcca aacuaugggc uagccauuga ggugacucac 720
cuccaucaga cucggaccca ccagggccag caugucagga uuagccgauc guuaccucaa 780
gggaguggga auugggccca gcuccggccc cuccugguca ccuuuggcca ugauggccgg 840
ggccaugccu ugacccgacg ccggagggcc aagcguagcc cuaagcauca cucacagcgg 900
gccaggaaga agaauaagaa cugccggcgc cacucgcucu auguggacuu cagcgaugug 960
ggcuggaaug acuggauugu ggccccacca ggcuaccagg ccuucuacug ccauggggac 1020
ugccccuuuc cacuggcuga ccaccucaac ucaaccaacc augccauugu gcagacccug 1080
gucaauucug ucaauuccag uauccccaaa gccuguugug ugcccacuga acugagugcc 1140
aucuccaugc uguaccugga ugaguaugau aaggugguac ugaaaaauua ucaggagaug 1200
guaguagagg gaugugggug ccgcuga 1227
<210> 6
<211> 1038
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的CDS对应的RNA序列
<222> (1)..(1038)
<400> 6
auguuugggc ugcgccgccg cccgcagccu agcaagagug ccgucauucc ggacuacaug 60
cgggaucuuu accggcuuca gucuggggag gaggaggaag agcagaucca cagcacuggu 120
cuugaguauc cugagcgccc ggccagccgg gccaacaccg ugaggagcuu ccaccacgaa 180
gaacaucugg agaacauccc agggaccagu gaaaacucug cuuuucguuu ccucuuuaac 240
cucagcagca ucccugagaa cgaggugauc uccucugcag agcuucggcu cuuccgggag 300
cagguggacc agggcccuga uugggaaagg ggcuuccacc guauaaacau uuaugagguu 360
augaagcccc cagcagaagu ggugccuggg caccucauca cacgacuacu ggacacgaga 420
cugguccacc acaaugugac acggugggaa acuuuugaug ugagcccugc gguccuucgc 480
uggacccggg agaagcagcc aaacuauggg cuagccauug aggugacuca ccuccaucag 540
acucggaccc accagggcca gcaugucagg auuagccgau cguuaccuca agggaguggg 600
aauugggccc agcuccggcc ccuccugguc accuuuggcc augauggccg gggccaugcc 660
uugacccgac gccggagggc caagcguagc ccuaagcauc acucacagcg ggccaggaag 720
aagaauaaga acugccggcg ccacucgcuc uauguggacu ucagcgaugu gggcuggaau 780
gacuggauug uggccccacc aggcuaccag gccuucuacu gccaugggga cugccccuuu 840
ccacuggcug accaccucaa cucaaccaac caugccauug ugcagacccu ggucaauucu 900
gucaauucca guauccccaa agccuguugu gugcccacug aacugagugc caucuccaug 960
cuguaccugg augaguauga uaagguggua cugaaaaauu aucaggagau gguaguagag 1020
ggaugugggu gccgcuga 1038
<210> 7
<211> 1368
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的CDS
<222> (1)..(1368)
<400> 7
atgcgagaag gcagaggagg agggagggag ggaaggagcg cggagcccgg cccggaagct 60
aggagccatt ccgtagtgcc atcccgagca acgcactgct gcagcttccc tgagcctttc 120
cagcaagttt gttcaagatt ggctgtcaag aatcatggac tgttattata tgccttgttt 180
tctgtcatcc tgctaggagg cgcgagccat gctagtttga tacctgagac ggggaagaaa 240
aaagtcgccg agattcaggg ccacgcggga ggacgccgct cagggcagag ccatgagctc 300
ctgcgggact tcgaggcgac acttctgcag atgtttgggc tgcgccgccg cccgcagcct 360
agcaagagtg ccgtcattcc ggactacatg cgggatcttt accggcttca gtctggggag 420
gaggaggaag agcagatcca cagcactggt cttgagtatc ctgagcgccc ggccagccgg 480
gccaacaccg tgaggagctt ccaccacgaa gaacatctgg agaacatccc agggaccagt 540
gaaaactctg cttttcgttt cctctttaac ctcagcagca tccctgagaa cgaggtgatc 600
tcctctgcag agcttcggct cttccgggag caggtggacc agggccctga ttgggaaagg 660
ggcttccacc gtataaacat ttatgaggtt atgaagcccc cagcagaagt ggtgcctggg 720
cacctcatca cacgactact ggacacgaga ctggtccacc acaatgtgac acggtgggaa 780
acttttgatg tgagccctgc ggtccttcgc tggacccggg agaagcagcc aaactatggg 840
ctagccattg aggtgactca cctccatcag actcggaccc accagggcca gcatgtcagg 900
attagccgat cgttacctca agggagtggg aattgggccc agctccggcc cctcctggtc 960
acctttggcc atgatggccg gggccatgcc ttgacccgac gccggagggc caagcgtagc 1020
cctaagcatc actcacagcg ggccaggaag aagaataaga actgccggcg ccactcgctc 1080
tatgtggact tcagcgatgt gggctggaat gactggattg tggccccacc aggctaccag 1140
gccttctact gccatgggga ctgccccttt ccactggctg accacctcaa ctcaaccaac 1200
catgccattg tgcagaccct ggtcaattct gtcaattcca gtatccccaa agcctgttgt 1260
gtgcccactg aactgagtgc catctccatg ctgtacctgg atgagtatga taaggtggta 1320
ctgaaaaatt atcaggagat ggtagtagag ggatgtgggt gccgctga 1368
<210> 8
<211> 1227
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的CDS
<222> (1)..(1227)
<400> 8
atgattcctg gtaaccgaat gctgatggtc gttttattat gccaagtcct gctaggaggc 60
gcgagccatg ctagtttgat acctgagacg gggaagaaaa aagtcgccga gattcagggc 120
cacgcgggag gacgccgctc agggcagagc catgagctcc tgcgggactt cgaggcgaca 180
cttctgcaga tgtttgggct gcgccgccgc ccgcagccta gcaagagtgc cgtcattccg 240
gactacatgc gggatcttta ccggcttcag tctggggagg aggaggaaga gcagatccac 300
agcactggtc ttgagtatcc tgagcgcccg gccagccggg ccaacaccgt gaggagcttc 360
caccacgaag aacatctgga gaacatccca gggaccagtg aaaactctgc ttttcgtttc 420
ctctttaacc tcagcagcat ccctgagaac gaggtgatct cctctgcaga gcttcggctc 480
ttccgggagc aggtggacca gggccctgat tgggaaaggg gcttccaccg tataaacatt 540
tatgaggtta tgaagccccc agcagaagtg gtgcctgggc acctcatcac acgactactg 600
gacacgagac tggtccacca caatgtgaca cggtgggaaa cttttgatgt gagccctgcg 660
gtccttcgct ggacccggga gaagcagcca aactatgggc tagccattga ggtgactcac 720
ctccatcaga ctcggaccca ccagggccag catgtcagga ttagccgatc gttacctcaa 780
gggagtggga attgggccca gctccggccc ctcctggtca cctttggcca tgatggccgg 840
ggccatgcct tgacccgacg ccggagggcc aagcgtagcc ctaagcatca ctcacagcgg 900
gccaggaaga agaataagaa ctgccggcgc cactcgctct atgtggactt cagcgatgtg 960
ggctggaatg actggattgt ggccccacca ggctaccagg ccttctactg ccatggggac 1020
tgcccctttc cactggctga ccacctcaac tcaaccaacc atgccattgt gcagaccctg 1080
gtcaattctg tcaattccag tatccccaaa gcctgttgtg tgcccactga actgagtgcc 1140
atctccatgc tgtacctgga tgagtatgat aaggtggtac tgaaaaatta tcaggagatg 1200
gtagtagagg gatgtgggtg ccgctga 1227
<210> 9
<211> 1038
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的CDS
<222> (1)..(1038)
<400> 9
atgtttgggc tgcgccgccg cccgcagcct agcaagagtg ccgtcattcc ggactacatg 60
cgggatcttt accggcttca gtctggggag gaggaggaag agcagatcca cagcactggt 120
cttgagtatc ctgagcgccc ggccagccgg gccaacaccg tgaggagctt ccaccacgaa 180
gaacatctgg agaacatccc agggaccagt gaaaactctg cttttcgttt cctctttaac 240
ctcagcagca tccctgagaa cgaggtgatc tcctctgcag agcttcggct cttccgggag 300
caggtggacc agggccctga ttgggaaagg ggcttccacc gtataaacat ttatgaggtt 360
atgaagcccc cagcagaagt ggtgcctggg cacctcatca cacgactact ggacacgaga 420
ctggtccacc acaatgtgac acggtgggaa acttttgatg tgagccctgc ggtccttcgc 480
tggacccggg agaagcagcc aaactatggg ctagccattg aggtgactca cctccatcag 540
actcggaccc accagggcca gcatgtcagg attagccgat cgttacctca agggagtggg 600
aattgggccc agctccggcc cctcctggtc acctttggcc atgatggccg gggccatgcc 660
ttgacccgac gccggagggc caagcgtagc cctaagcatc actcacagcg ggccaggaag 720
aagaataaga actgccggcg ccactcgctc tatgtggact tcagcgatgt gggctggaat 780
gactggattg tggccccacc aggctaccag gccttctact gccatgggga ctgccccttt 840
ccactggctg accacctcaa ctcaaccaac catgccattg tgcagaccct ggtcaattct 900
gtcaattcca gtatccccaa agcctgttgt gtgcccactg aactgagtgc catctccatg 960
ctgtacctgg atgagtatga taaggtggta ctgaaaaatt atcaggagat ggtagtagag 1020
ggatgtgggt gccgctga 1038
<210> 10
<211> 1735
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA
<222> (1)..(1735)
<400> 10
ggaggggccg ccggggaaga ggaggaggaa ggaaagaaag aaagcgaggg agggaaagag 60
gaggaaggaa gaugcgagaa ggcagaggag gagggaggga gggaaggagc gcggagcccg 120
gcccggaagc uaggagccau uccguagugc caucccgagc aacgcacugc ugcagcuucc 180
cugagccuuu ccagcaaguu uguucaagau uggcugucaa gaaucaugga cuguuauuau 240
augccuuguu uucugucauc cugcuaggag gcgcgagcca ugcuaguuug auaccugaga 300
cggggaagaa aaaagucgcc gagauucagg gccacgcggg aggacgccgc ucagggcaga 360
gccaugagcu ccugcgggac uucgaggcga cacuucugca gauguuuggg cugcgccgcc 420
gcccgcagcc uagcaagagu gccgucauuc cggacuacau gcgggaucuu uaccggcuuc 480
agucugggga ggaggaggaa gagcagaucc acagcacugg ucuugaguau ccugagcgcc 540
cggccagccg ggccaacacc gugaggagcu uccaccacga agaacaucug gagaacaucc 600
cagggaccag ugaaaacucu gcuuuucguu uccucuuuaa ccucagcagc aucccugaga 660
acgaggugau cuccucugca gagcuucggc ucuuccggga gcagguggac cagggcccug 720
auugggaaag gggcuuccac cguauaaaca uuuaugaggu uaugaagccc ccagcagaag 780
uggugccugg gcaccucauc acacgacuac uggacacgag acugguccac cacaauguga 840
cacgguggga aacuuuugau gugagcccug cgguccuucg cuggacccgg gagaagcagc 900
caaacuaugg gcuagccauu gaggugacuc accuccauca gacucggacc caccagggcc 960
agcaugucag gauuagccga ucguuaccuc aagggagugg gaauugggcc cagcuccggc 1020
cccuccuggu caccuuuggc caugauggcc ggggccaugc cuugacccga cgccggaggg 1080
ccaagcguag cccuaagcau cacucacagc gggccaggaa gaagaauaag aacugccggc 1140
gccacucgcu cuauguggac uucagcgaug ugggcuggaa ugacuggauu guggccccac 1200
caggcuacca ggccuucuac ugccaugggg acugccccuu uccacuggcu gaccaccuca 1260
acucaaccaa ccaugccauu gugcagaccc uggucaauuc ugucaauucc aguaucccca 1320
aagccuguug ugugcccacu gaacugagug ccaucuccau gcuguaccug gaugaguaug 1380
auaagguggu acugaaaaau uaucaggaga ugguaguaga gggauguggg ugccgcugag 1440
aucaggcagu ccuugaggau agacagauau acacaccaca cacacacacc acauacacca 1500
cacacacacg uucccaucca cucacccaca cacuacacag acugcuuccu uauagcugga 1560
cuuuuauuua aaaaaaaaaa aaaaaaagga aaaaaucccu aaacauucac cuugaccuua 1620
uuuaugacuu uacgugcaaa uguuuugacc auauugauca uauauuuuga caaaauauau 1680
uuauaacuac guauuaaaag aaaaaaauaa aaugagucau uauuuuaaag guaaa 1735
<210> 11
<211> 2080
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA
<222> (1)..(2080)
<400> 11
gggcgcccgc ggccuccgca cccggaccug agguguuggu cgacuccggg cauccacggu 60
cgggagggag ggcugagcug uucgauccuu uacuuuucuu ccucaaaguc uaccugccaa 120
ugccccuaag aagaaaacca aguaugugcg uggagagugg ggcggcaggc aacccgaguu 180
cuugagcucc ggagcgaccc aaagcagcaa cugggaacag ccucaggaaa gggaggucgg 240
guggaguggg cuuuggggca ggagucaugg ggcccgggcc ccggggacga ccuggcgcuc 300
ccggcccugc ugaacgcuga guugcgccua gucggguuuu cgaagaggcc cuugcgcaga 360
gcgacccacg cgcgcggcag caucuucgau uagucaggac aucccaguaa cugcuugaac 420
uguaggagcc auuccguagu gccaucccga gcaacgcacu gcugcagcuu cccugagccu 480
uuccagcaag uuuguucaag auuggcuguc aagaaucaug gacuguuauu auaugccuug 540
uuuucuguca agacaccaug auuccuggua accgaaugcu gauggucguu uuauuaugcc 600
aaguccugcu aggaggcgcg agccaugcua guuugauacc ugagacgggg aagaaaaaag 660
ucgccgagau ucagggccac gcgggaggac gccgcucagg gcagagccau gagcuccugc 720
gggacuucga ggcgacacuu cugcagaugu uugggcugcg ccgccgcccg cagccuagca 780
agagugccgu cauuccggac uacaugcggg aucuuuaccg gcuucagucu ggggaggagg 840
aggaagagca gauccacagc acuggucuug aguauccuga gcgcccggcc agccgggcca 900
acaccgugag gagcuuccac cacgaagaac aucuggagaa caucccaggg accagugaaa 960
acucugcuuu ucguuuccuc uuuaaccuca gcagcauccc ugagaacgag gugaucuccu 1020
cugcagagcu ucggcucuuc cgggagcagg uggaccaggg cccugauugg gaaaggggcu 1080
uccaccguau aaacauuuau gagguuauga agcccccagc agaaguggug ccugggcacc 1140
ucaucacacg acuacuggac acgagacugg uccaccacaa ugugacacgg ugggaaacuu 1200
uugaugugag cccugcgguc cuucgcugga cccgggagaa gcagccaaac uaugggcuag 1260
ccauugaggu gacucaccuc caucagacuc ggacccacca gggccagcau gucaggauua 1320
gccgaucguu accucaaggg agugggaauu gggcccagcu ccggccccuc cuggucaccu 1380
uuggccauga uggccggggc caugccuuga cccgacgccg gagggccaag cguagcccua 1440
agcaucacuc acagcgggcc aggaagaaga auaagaacug ccggcgccac ucgcucuaug 1500
uggacuucag cgaugugggc uggaaugacu ggauuguggc cccaccaggc uaccaggccu 1560
ucuacugcca uggggacugc cccuuuccac uggcugacca ccucaacuca accaaccaug 1620
ccauugugca gacccugguc aauucuguca auuccaguau ccccaaagcc uguugugugc 1680
ccacugaacu gagugccauc uccaugcugu accuggauga guaugauaag gugguacuga 1740
aaaauuauca ggagauggua guagagggau gugggugccg cugagaucag gcaguccuug 1800
aggauagaca gauauacaca ccacacacac acaccacaua caccacacac acacguuccc 1860
auccacucac ccacacacua cacagacugc uuccuuauag cuggacuuuu auuuaaaaaa 1920
aaaaaaaaaa aaggaaaaaa ucccuaaaca uucaccuuga ccuuauuuau gacuuuacgu 1980
gcaaauguuu ugaccauauu gaucauauau uuugacaaaa uauauuuaua acuacguauu 2040
aaaagaaaaa aauaaaauga gucauuauuu uaaagguaaa 2080
<210> 12
<211> 1650
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA
<222> (1)..(1650)
<400> 12
auuccguagu gccaucccga gcaacgcacu gcugcagcuu cccugagccu uuccagcaag 60
uuuguucaag auuggcuguc aagaaucaug gacuguuauu auaugccuug uuuucuguca 120
agacaccaug auuccuggua accgaaugcu gauggucguu uuauuaugcc aaguccugcu 180
aggaggcgcg agccaugcua guuugauacc ugagacgggg aagaaaaaag ucgccgagau 240
ucagggccac gcgggaggac gccgcucagg gcagagccau gagcuccugc gggacuucga 300
ggcgacacuu cugcagaugu uugggcugcg ccgccgcccg cagccuagca agagugccgu 360
cauuccggac uacaugcggg aucuuuaccg gcuucagucu ggggaggagg aggaagagca 420
gauccacagc acuggucuug aguauccuga gcgcccggcc agccgggcca acaccgugag 480
gagcuuccac cacgaagaac aucuggagaa caucccaggg accagugaaa acucugcuuu 540
ucguuuccuc uuuaaccuca gcagcauccc ugagaacgag gugaucuccu cugcagagcu 600
ucggcucuuc cgggagcagg uggaccaggg cccugauugg gaaaggggcu uccaccguau 660
aaacauuuau gagguuauga agcccccagc agaaguggug ccugggcacc ucaucacacg 720
acuacuggac acgagacugg uccaccacaa ugugacacgg ugggaaacuu uugaugugag 780
cccugcgguc cuucgcugga cccgggagaa gcagccaaac uaugggcuag ccauugaggu 840
gacucaccuc caucagacuc ggacccacca gggccagcau gucaggauua gccgaucguu 900
accucaaggg agugggaauu gggcccagcu ccggccccuc cuggucaccu uuggccauga 960
uggccggggc caugccuuga cccgacgccg gagggccaag cguagcccua agcaucacuc 1020
acagcgggcc aggaagaaga auaagaacug ccggcgccac ucgcucuaug uggacuucag 1080
cgaugugggc uggaaugacu ggauuguggc cccaccaggc uaccaggccu ucuacugcca 1140
uggggacugc cccuuuccac uggcugacca ccucaacuca accaaccaug ccauugugca 1200
gacccugguc aauucuguca auuccaguau ccccaaagcc uguugugugc ccacugaacu 1260
gagugccauc uccaugcugu accuggauga guaugauaag gugguacuga aaaauuauca 1320
ggagauggua guagagggau gugggugccg cugagaucag gcaguccuug aggauagaca 1380
gauauacaca ccacacacac acaccacaua caccacacac acacguuccc auccacucac 1440
ccacacacua cacagacugc uuccuuauag cuggacuuuu auuuaaaaaa aaaaaaaaaa 1500
aaggaaaaaa ucccuaaaca uucaccuuga ccuuauuuau gacuuuacgu gcaaauguuu 1560
ugaccauauu gaucauauau uuugacaaaa uauauuuaua acuacguauu aaaagaaaaa 1620
aauaaaauga gucauuauuu uaaagguaaa 1650
<210> 13
<211> 1931
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA
<222> (1)..(1931)
<400> 13
ggaagaugcg agaaggcaga ggaggaggga gggagggaag gagcgcggag cccggcccgg 60
aagcuaggug aguguggcau ccgagcugag ggacgcgagc cugagacgcc gcugcugcuc 120
cggcugagua ucuagcuugu cuccccgaug ggauucccgu ccaagcuauc ucgagccugc 180
agcgccacag uccccggccc ucgcccaggu ucacugcaac cguucagagg uccccaggag 240
cugcugcugg cgagcccgcu acugcaggga ccuauggagc cauuccguag ugccaucccg 300
agcaacgcac ugcugcagcu ucccugagcc uuuccagcaa guuuguucaa gauuggcugu 360
caagaaucau ggacuguuau uauaugccuu guuuucuguc aagacaccau gauuccuggu 420
aaccgaaugc ugauggucgu uuuauuaugc caaguccugc uaggaggcgc gagccaugcu 480
aguuugauac cugagacggg gaagaaaaaa gucgccgaga uucagggcca cgcgggagga 540
cgccgcucag ggcagagcca ugagcuccug cgggacuucg aggcgacacu ucugcagaug 600
uuugggcugc gccgccgccc gcagccuagc aagagugccg ucauuccgga cuacaugcgg 660
gaucuuuacc ggcuucaguc uggggaggag gaggaagagc agauccacag cacuggucuu 720
gaguauccug agcgcccggc cagccgggcc aacaccguga ggagcuucca ccacgaagaa 780
caucuggaga acaucccagg gaccagugaa aacucugcuu uucguuuccu cuuuaaccuc 840
agcagcaucc cugagaacga ggugaucucc ucugcagagc uucggcucuu ccgggagcag 900
guggaccagg gcccugauug ggaaaggggc uuccaccgua uaaacauuua ugagguuaug 960
aagcccccag cagaaguggu gccugggcac cucaucacac gacuacugga cacgagacug 1020
guccaccaca augugacacg gugggaaacu uuugauguga gcccugcggu ccuucgcugg 1080
acccgggaga agcagccaaa cuaugggcua gccauugagg ugacucaccu ccaucagacu 1140
cggacccacc agggccagca ugucaggauu agccgaucgu uaccucaagg gagugggaau 1200
ugggcccagc uccggccccu ccuggucacc uuuggccaug auggccgggg ccaugccuug 1260
acccgacgcc ggagggccaa gcguagcccu aagcaucacu cacagcgggc caggaagaag 1320
aauaagaacu gccggcgcca cucgcucuau guggacuuca gcgauguggg cuggaaugac 1380
uggauugugg ccccaccagg cuaccaggcc uucuacugcc auggggacug ccccuuucca 1440
cuggcugacc accucaacuc aaccaaccau gccauugugc agacccuggu caauucuguc 1500
aauuccagua uccccaaagc cuguugugug cccacugaac ugagugccau cuccaugcug 1560
uaccuggaug aguaugauaa ggugguacug aaaaauuauc aggagauggu aguagaggga 1620
ugugggugcc gcugagauca ggcaguccuu gaggauagac agauauacac accacacaca 1680
cacaccacau acaccacaca cacacguucc cauccacuca cccacacacu acacagacug 1740
cuuccuuaua gcuggacuuu uauuuaaaaa aaaaaaaaaa aaaggaaaaa aucccuaaac 1800
auucaccuug accuuauuua ugacuuuacg ugcaaauguu uugaccauau ugaucauaua 1860
uuuugacaaa auauauuuau aacuacguau uaaaagaaaa aaauaaaaug agucauuauu 1920
uuaaagguaa a 1931
<210> 14
<211> 1788
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA
<222> (1)..(1788)
<400> 14
ggaggggccg ccggggaaga ggaggaggaa ggaaagaaag aaagcgaggg agggaaagag 60
gaggaaggaa gaugcgagaa ggcagaggag gagggaggga gggaaggagc gcggagcccg 120
gcccggaagc uaggagccau uccguagugc caucccgagc aacgcacugc ugcagcuucc 180
cugagccuuu ccagcaaguu uguucaagau uggcugucaa gaaucaugga cuguuauuau 240
augccuuguu uucugucaag acaccaugau uccugguaac cgaaugcuga uggucguuuu 300
auuaugccaa guccugcuag gaggcgcgag ccaugcuagu uugauaccug agacggggaa 360
gaaaaaaguc gccgagauuc agggccacgc gggaggacgc cgcucagggc agagccauga 420
gcuccugcgg gacuucgagg cgacacuucu gcagauguuu gggcugcgcc gccgcccgca 480
gccuagcaag agugccguca uuccggacua caugcgggau cuuuaccggc uucagucugg 540
ggaggaggag gaagagcaga uccacagcac uggucuugag uauccugagc gcccggccag 600
ccgggccaac accgugagga gcuuccacca cgaagaacau cuggagaaca ucccagggac 660
cagugaaaac ucugcuuuuc guuuccucuu uaaccucagc agcaucccug agaacgaggu 720
gaucuccucu gcagagcuuc ggcucuuccg ggagcaggug gaccagggcc cugauuggga 780
aaggggcuuc caccguauaa acauuuauga gguuaugaag cccccagcag aaguggugcc 840
ugggcaccuc aucacacgac uacuggacac gagacugguc caccacaaug ugacacggug 900
ggaaacuuuu gaugugagcc cugcgguccu ucgcuggacc cgggagaagc agccaaacua 960
ugggcuagcc auugagguga cucaccucca ucagacucgg acccaccagg gccagcaugu 1020
caggauuagc cgaucguuac cucaagggag ugggaauugg gcccagcucc ggccccuccu 1080
ggucaccuuu ggccaugaug gccggggcca ugccuugacc cgacgccgga gggccaagcg 1140
uagcccuaag caucacucac agcgggccag gaagaagaau aagaacugcc ggcgccacuc 1200
gcucuaugug gacuucagcg augugggcug gaaugacugg auuguggccc caccaggcua 1260
ccaggccuuc uacugccaug gggacugccc cuuuccacug gcugaccacc ucaacucaac 1320
caaccaugcc auugugcaga cccuggucaa uucugucaau uccaguaucc ccaaagccug 1380
uugugugccc acugaacuga gugccaucuc caugcuguac cuggaugagu augauaaggu 1440
gguacugaaa aauuaucagg agaugguagu agagggaugu gggugccgcu gagaucaggc 1500
aguccuugag gauagacaga uauacacacc acacacacac accacauaca ccacacacac 1560
acguucccau ccacucaccc acacacuaca cagacugcuu ccuuauagcu ggacuuuuau 1620
uuaaaaaaaa aaaaaaaaaa ggaaaaaauc ccuaaacauu caccuugacc uuauuuauga 1680
cuuuacgugc aaauguuuug accauauuga ucauauauuu ugacaaaaua uauuuauaac 1740
uacguauuaa aagaaaaaaa uaaaaugagu cauuauuuua aagguaaa 1788
<210> 15
<211> 1723
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA
<222> (1)..(1723)
<400> 15
agacgcagac gcagaggucg agcgcaggcc gaaagcuguu caccguuuuc ucgacuccgg 60
ggaacaugga gccauuccgu agugccaucc cgagcaacgc acugcugcag cuucccugag 120
ccuuuccagc aaguuuguuc aagauuggcu gucaagaauc auggacuguu auuauaugcc 180
uuguuuucug ucaagacacc augauuccug guaaccgaau gcugaugguc guuuuauuau 240
gccaaguccu gcuaggaggc gcgagccaug cuaguuugau accugagacg gggaagaaaa 300
aagucgccga gauucagggc cacgcgggag gacgccgcuc agggcagagc caugagcucc 360
ugcgggacuu cgaggcgaca cuucugcaga uguuugggcu gcgccgccgc ccgcagccua 420
gcaagagugc cgucauuccg gacuacaugc gggaucuuua ccggcuucag ucuggggagg 480
aggaggaaga gcagauccac agcacugguc uugaguaucc ugagcgcccg gccagccggg 540
ccaacaccgu gaggagcuuc caccacgaag aacaucugga gaacauccca gggaccagug 600
aaaacucugc uuuucguuuc cucuuuaacc ucagcagcau cccugagaac gaggugaucu 660
ccucugcaga gcuucggcuc uuccgggagc agguggacca gggcccugau ugggaaaggg 720
gcuuccaccg uauaaacauu uaugagguua ugaagccccc agcagaagug gugccugggc 780
accucaucac acgacuacug gacacgagac ugguccacca caaugugaca cggugggaaa 840
cuuuugaugu gagcccugcg guccuucgcu ggacccggga gaagcagcca aacuaugggc 900
uagccauuga ggugacucac cuccaucaga cucggaccca ccagggccag caugucagga 960
uuagccgauc guuaccucaa gggaguggga auugggccca gcuccggccc cuccugguca 1020
ccuuuggcca ugauggccgg ggccaugccu ugacccgacg ccggagggcc aagcguagcc 1080
cuaagcauca cucacagcgg gccaggaaga agaauaagaa cugccggcgc cacucgcucu 1140
auguggacuu cagcgaugug ggcuggaaug acuggauugu ggccccacca ggcuaccagg 1200
ccuucuacug ccauggggac ugccccuuuc cacuggcuga ccaccucaac ucaaccaacc 1260
augccauugu gcagacccug gucaauucug ucaauuccag uauccccaaa gccuguugug 1320
ugcccacuga acugagugcc aucuccaugc uguaccugga ugaguaugau aaggugguac 1380
ugaaaaauua ucaggagaug guaguagagg gaugugggug ccgcugagau caggcagucc 1440
uugaggauag acagauauac acaccacaca cacacaccac auacaccaca cacacacguu 1500
cccauccacu cacccacaca cuacacagac ugcuuccuua uagcuggacu uuuauuuaaa 1560
aaaaaaaaaa aaaaaggaaa aaaucccuaa acauucaccu ugaccuuauu uaugacuuua 1620
cgugcaaaug uuuugaccau auugaucaua uauuuugaca aaauauauuu auaacuacgu 1680
auuaaaagaa aaaaauaaaa ugagucauua uuuuaaaggu aaa 1723
<210> 16
<211> 2027
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA
<222> (1)..(2027)
<400> 16
gggcgcccgc ggccuccgca cccggaccug agguguuggu cgacuccggg cauccacggu 60
cgggagggag ggcugagcug uucgauccuu uacuuuucuu ccucaaaguc uaccugccaa 120
ugccccuaag aagaaaacca aguaugugcg uggagagugg ggcggcaggc aacccgaguu 180
cuugagcucc ggagcgaccc aaagcagcaa cugggaacag ccucaggaaa gggaggucgg 240
guggaguggg cuuuggggca ggagucaugg ggcccgggcc ccggggacga ccuggcgcuc 300
ccggcccugc ugaacgcuga guugcgccua gucggguuuu cgaagaggcc cuugcgcaga 360
gcgacccacg cgcgcggcag caucuucgau uagucaggac aucccaguaa cugcuugaac 420
uguaggagcc auuccguagu gccaucccga gcaacgcacu gcugcagcuu cccugagccu 480
uuccagcaag uuuguucaag auuggcuguc aagaaucaug gacuguuauu auaugccuug 540
uuuucuguca uccugcuagg aggcgcgagc caugcuaguu ugauaccuga gacggggaag 600
aaaaaagucg ccgagauuca gggccacgcg ggaggacgcc gcucagggca gagccaugag 660
cuccugcggg acuucgaggc gacacuucug cagauguuug ggcugcgccg ccgcccgcag 720
ccuagcaaga gugccgucau uccggacuac augcgggauc uuuaccggcu ucagucuggg 780
gaggaggagg aagagcagau ccacagcacu ggucuugagu auccugagcg cccggccagc 840
cgggccaaca ccgugaggag cuuccaccac gaagaacauc uggagaacau cccagggacc 900
agugaaaacu cugcuuuucg uuuccucuuu aaccucagca gcaucccuga gaacgaggug 960
aucuccucug cagagcuucg gcucuuccgg gagcaggugg accagggccc ugauugggaa 1020
aggggcuucc accguauaaa cauuuaugag guuaugaagc ccccagcaga aguggugccu 1080
gggcaccuca ucacacgacu acuggacacg agacuggucc accacaaugu gacacggugg 1140
gaaacuuuug augugagccc ugcgguccuu cgcuggaccc gggagaagca gccaaacuau 1200
gggcuagcca uugaggugac ucaccuccau cagacucgga cccaccaggg ccagcauguc 1260
aggauuagcc gaucguuacc ucaagggagu gggaauuggg cccagcuccg gccccuccug 1320
gucaccuuug gccaugaugg ccggggccau gccuugaccc gacgccggag ggccaagcgu 1380
agcccuaagc aucacucaca gcgggccagg aagaagaaua agaacugccg gcgccacucg 1440
cucuaugugg acuucagcga ugugggcugg aaugacugga uuguggcccc accaggcuac 1500
caggccuucu acugccaugg ggacugcccc uuuccacugg cugaccaccu caacucaacc 1560
aaccaugcca uugugcagac ccuggucaau ucugucaauu ccaguauccc caaagccugu 1620
ugugugccca cugaacugag ugccaucucc augcuguacc uggaugagua ugauaaggug 1680
guacugaaaa auuaucagga gaugguagua gagggaugug ggugccgcug agaucaggca 1740
guccuugagg auagacagau auacacacca cacacacaca ccacauacac cacacacaca 1800
cguucccauc cacucaccca cacacuacac agacugcuuc cuuauagcug gacuuuuauu 1860
uaaaaaaaaa aaaaaaaaag gaaaaaaucc cuaaacauuc accuugaccu uauuuaugac 1920
uuuacgugca aauguuuuga ccauauugau cauauauuuu gacaaaauau auuuauaacu 1980
acguauuaaa agaaaaaaau aaaaugaguc auuauuuuaa agguaaa 2027
<210> 17
<211> 1878
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA
<222> (1)..(1878)
<400> 17
ggaagaugcg agaaggcaga ggaggaggga gggagggaag gagcgcggag cccggcccgg 60
aagcuaggug aguguggcau ccgagcugag ggacgcgagc cugagacgcc gcugcugcuc 120
cggcugagua ucuagcuugu cuccccgaug ggauucccgu ccaagcuauc ucgagccugc 180
agcgccacag uccccggccc ucgcccaggu ucacugcaac cguucagagg uccccaggag 240
cugcugcugg cgagcccgcu acugcaggga ccuauggagc cauuccguag ugccaucccg 300
agcaacgcac ugcugcagcu ucccugagcc uuuccagcaa guuuguucaa gauuggcugu 360
caagaaucau ggacuguuau uauaugccuu guuuucuguc auccugcuag gaggcgcgag 420
ccaugcuagu uugauaccug agacggggaa gaaaaaaguc gccgagauuc agggccacgc 480
gggaggacgc cgcucagggc agagccauga gcuccugcgg gacuucgagg cgacacuucu 540
gcagauguuu gggcugcgcc gccgcccgca gccuagcaag agugccguca uuccggacua 600
caugcgggau cuuuaccggc uucagucugg ggaggaggag gaagagcaga uccacagcac 660
uggucuugag uauccugagc gcccggccag ccgggccaac accgugagga gcuuccacca 720
cgaagaacau cuggagaaca ucccagggac cagugaaaac ucugcuuuuc guuuccucuu 780
uaaccucagc agcaucccug agaacgaggu gaucuccucu gcagagcuuc ggcucuuccg 840
ggagcaggug gaccagggcc cugauuggga aaggggcuuc caccguauaa acauuuauga 900
gguuaugaag cccccagcag aaguggugcc ugggcaccuc aucacacgac uacuggacac 960
gagacugguc caccacaaug ugacacggug ggaaacuuuu gaugugagcc cugcgguccu 1020
ucgcuggacc cgggagaagc agccaaacua ugggcuagcc auugagguga cucaccucca 1080
ucagacucgg acccaccagg gccagcaugu caggauuagc cgaucguuac cucaagggag 1140
ugggaauugg gcccagcucc ggccccuccu ggucaccuuu ggccaugaug gccggggcca 1200
ugccuugacc cgacgccgga gggccaagcg uagcccuaag caucacucac agcgggccag 1260
gaagaagaau aagaacugcc ggcgccacuc gcucuaugug gacuucagcg augugggcug 1320
gaaugacugg auuguggccc caccaggcua ccaggccuuc uacugccaug gggacugccc 1380
cuuuccacug gcugaccacc ucaacucaac caaccaugcc auugugcaga cccuggucaa 1440
uucugucaau uccaguaucc ccaaagccug uugugugccc acugaacuga gugccaucuc 1500
caugcuguac cuggaugagu augauaaggu gguacugaaa aauuaucagg agaugguagu 1560
agagggaugu gggugccgcu gagaucaggc aguccuugag gauagacaga uauacacacc 1620
acacacacac accacauaca ccacacacac acguucccau ccacucaccc acacacuaca 1680
cagacugcuu ccuuauagcu ggacuuuuau uuaaaaaaaa aaaaaaaaaa ggaaaaaauc 1740
ccuaaacauu caccuugacc uuauuuauga cuuuacgugc aaauguuuug accauauuga 1800
ucauauauuu ugacaaaaua uauuuauaac uacguauuaa aagaaaaaaa uaaaaugagu 1860
cauuauuuua aagguaaa 1878
<210> 18
<211> 1597
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA
<222> (1)..(1597)
<400> 18
auuccguagu gccaucccga gcaacgcacu gcugcagcuu cccugagccu uuccagcaag 60
uuuguucaag auuggcuguc aagaaucaug gacuguuauu auaugccuug uuuucuguca 120
uccugcuagg aggcgcgagc caugcuaguu ugauaccuga gacggggaag aaaaaagucg 180
ccgagauuca gggccacgcg ggaggacgcc gcucagggca gagccaugag cuccugcggg 240
acuucgaggc gacacuucug cagauguuug ggcugcgccg ccgcccgcag ccuagcaaga 300
gugccgucau uccggacuac augcgggauc uuuaccggcu ucagucuggg gaggaggagg 360
aagagcagau ccacagcacu ggucuugagu auccugagcg cccggccagc cgggccaaca 420
ccgugaggag cuuccaccac gaagaacauc uggagaacau cccagggacc agugaaaacu 480
cugcuuuucg uuuccucuuu aaccucagca gcaucccuga gaacgaggug aucuccucug 540
cagagcuucg gcucuuccgg gagcaggugg accagggccc ugauugggaa aggggcuucc 600
accguauaaa cauuuaugag guuaugaagc ccccagcaga aguggugccu gggcaccuca 660
ucacacgacu acuggacacg agacuggucc accacaaugu gacacggugg gaaacuuuug 720
augugagccc ugcgguccuu cgcuggaccc gggagaagca gccaaacuau gggcuagcca 780
uugaggugac ucaccuccau cagacucgga cccaccaggg ccagcauguc aggauuagcc 840
gaucguuacc ucaagggagu gggaauuggg cccagcuccg gccccuccug gucaccuuug 900
gccaugaugg ccggggccau gccuugaccc gacgccggag ggccaagcgu agcccuaagc 960
aucacucaca gcgggccagg aagaagaaua agaacugccg gcgccacucg cucuaugugg 1020
acuucagcga ugugggcugg aaugacugga uuguggcccc accaggcuac caggccuucu 1080
acugccaugg ggacugcccc uuuccacugg cugaccaccu caacucaacc aaccaugcca 1140
uugugcagac ccuggucaau ucugucaauu ccaguauccc caaagccugu ugugugccca 1200
cugaacugag ugccaucucc augcuguacc uggaugagua ugauaaggug guacugaaaa 1260
auuaucagga gaugguagua gagggaugug ggugccgcug agaucaggca guccuugagg 1320
auagacagau auacacacca cacacacaca ccacauacac cacacacaca cguucccauc 1380
cacucaccca cacacuacac agacugcuuc cuuauagcug gacuuuuauu uaaaaaaaaa 1440
aaaaaaaaag gaaaaaaucc cuaaacauuc accuugaccu uauuuaugac uuuacgugca 1500
aauguuuuga ccauauugau cauauauuuu gacaaaauau auuuauaacu acguauuaaa 1560
agaaaaaaau aaaaugaguc auuauuuuaa agguaaa 1597
<210> 19
<211> 1735
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA对应的DNA序列
<222> (1)..(1735)
<400> 19
ggaggggccg ccggggaaga ggaggaggaa ggaaagaaag aaagcgaggg agggaaagag 60
gaggaaggaa gatgcgagaa ggcagaggag gagggaggga gggaaggagc gcggagcccg 120
gcccggaagc taggagccat tccgtagtgc catcccgagc aacgcactgc tgcagcttcc 180
ctgagccttt ccagcaagtt tgttcaagat tggctgtcaa gaatcatgga ctgttattat 240
atgccttgtt ttctgtcatc ctgctaggag gcgcgagcca tgctagtttg atacctgaga 300
cggggaagaa aaaagtcgcc gagattcagg gccacgcggg aggacgccgc tcagggcaga 360
gccatgagct cctgcgggac ttcgaggcga cacttctgca gatgtttggg ctgcgccgcc 420
gcccgcagcc tagcaagagt gccgtcattc cggactacat gcgggatctt taccggcttc 480
agtctgggga ggaggaggaa gagcagatcc acagcactgg tcttgagtat cctgagcgcc 540
cggccagccg ggccaacacc gtgaggagct tccaccacga agaacatctg gagaacatcc 600
cagggaccag tgaaaactct gcttttcgtt tcctctttaa cctcagcagc atccctgaga 660
acgaggtgat ctcctctgca gagcttcggc tcttccggga gcaggtggac cagggccctg 720
attgggaaag gggcttccac cgtataaaca tttatgaggt tatgaagccc ccagcagaag 780
tggtgcctgg gcacctcatc acacgactac tggacacgag actggtccac cacaatgtga 840
cacggtggga aacttttgat gtgagccctg cggtccttcg ctggacccgg gagaagcagc 900
caaactatgg gctagccatt gaggtgactc acctccatca gactcggacc caccagggcc 960
agcatgtcag gattagccga tcgttacctc aagggagtgg gaattgggcc cagctccggc 1020
ccctcctggt cacctttggc catgatggcc ggggccatgc cttgacccga cgccggaggg 1080
ccaagcgtag ccctaagcat cactcacagc gggccaggaa gaagaataag aactgccggc 1140
gccactcgct ctatgtggac ttcagcgatg tgggctggaa tgactggatt gtggccccac 1200
caggctacca ggccttctac tgccatgggg actgcccctt tccactggct gaccacctca 1260
actcaaccaa ccatgccatt gtgcagaccc tggtcaattc tgtcaattcc agtatcccca 1320
aagcctgttg tgtgcccact gaactgagtg ccatctccat gctgtacctg gatgagtatg 1380
ataaggtggt actgaaaaat tatcaggaga tggtagtaga gggatgtggg tgccgctgag 1440
atcaggcagt ccttgaggat agacagatat acacaccaca cacacacacc acatacacca 1500
cacacacacg ttcccatcca ctcacccaca cactacacag actgcttcct tatagctgga 1560
cttttattta aaaaaaaaaa aaaaaaagga aaaaatccct aaacattcac cttgacctta 1620
tttatgactt tacgtgcaaa tgttttgacc atattgatca tatattttga caaaatatat 1680
ttataactac gtattaaaag aaaaaaataa aatgagtcat tattttaaag gtaaa 1735
<210> 20
<211> 2080
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA对应的DNA序列
<222> (1)..(2080)
<400> 20
gggcgcccgc ggcctccgca cccggacctg aggtgttggt cgactccggg catccacggt 60
cgggagggag ggctgagctg ttcgatcctt tacttttctt cctcaaagtc tacctgccaa 120
tgcccctaag aagaaaacca agtatgtgcg tggagagtgg ggcggcaggc aacccgagtt 180
cttgagctcc ggagcgaccc aaagcagcaa ctgggaacag cctcaggaaa gggaggtcgg 240
gtggagtggg ctttggggca ggagtcatgg ggcccgggcc ccggggacga cctggcgctc 300
ccggccctgc tgaacgctga gttgcgccta gtcgggtttt cgaagaggcc cttgcgcaga 360
gcgacccacg cgcgcggcag catcttcgat tagtcaggac atcccagtaa ctgcttgaac 420
tgtaggagcc attccgtagt gccatcccga gcaacgcact gctgcagctt ccctgagcct 480
ttccagcaag tttgttcaag attggctgtc aagaatcatg gactgttatt atatgccttg 540
ttttctgtca agacaccatg attcctggta accgaatgct gatggtcgtt ttattatgcc 600
aagtcctgct aggaggcgcg agccatgcta gtttgatacc tgagacgggg aagaaaaaag 660
tcgccgagat tcagggccac gcgggaggac gccgctcagg gcagagccat gagctcctgc 720
gggacttcga ggcgacactt ctgcagatgt ttgggctgcg ccgccgcccg cagcctagca 780
agagtgccgt cattccggac tacatgcggg atctttaccg gcttcagtct ggggaggagg 840
aggaagagca gatccacagc actggtcttg agtatcctga gcgcccggcc agccgggcca 900
acaccgtgag gagcttccac cacgaagaac atctggagaa catcccaggg accagtgaaa 960
actctgcttt tcgtttcctc tttaacctca gcagcatccc tgagaacgag gtgatctcct 1020
ctgcagagct tcggctcttc cgggagcagg tggaccaggg ccctgattgg gaaaggggct 1080
tccaccgtat aaacatttat gaggttatga agcccccagc agaagtggtg cctgggcacc 1140
tcatcacacg actactggac acgagactgg tccaccacaa tgtgacacgg tgggaaactt 1200
ttgatgtgag ccctgcggtc cttcgctgga cccgggagaa gcagccaaac tatgggctag 1260
ccattgaggt gactcacctc catcagactc ggacccacca gggccagcat gtcaggatta 1320
gccgatcgtt acctcaaggg agtgggaatt gggcccagct ccggcccctc ctggtcacct 1380
ttggccatga tggccggggc catgccttga cccgacgccg gagggccaag cgtagcccta 1440
agcatcactc acagcgggcc aggaagaaga ataagaactg ccggcgccac tcgctctatg 1500
tggacttcag cgatgtgggc tggaatgact ggattgtggc cccaccaggc taccaggcct 1560
tctactgcca tggggactgc ccctttccac tggctgacca cctcaactca accaaccatg 1620
ccattgtgca gaccctggtc aattctgtca attccagtat ccccaaagcc tgttgtgtgc 1680
ccactgaact gagtgccatc tccatgctgt acctggatga gtatgataag gtggtactga 1740
aaaattatca ggagatggta gtagagggat gtgggtgccg ctgagatcag gcagtccttg 1800
aggatagaca gatatacaca ccacacacac acaccacata caccacacac acacgttccc 1860
atccactcac ccacacacta cacagactgc ttccttatag ctggactttt atttaaaaaa 1920
aaaaaaaaaa aaggaaaaaa tccctaaaca ttcaccttga ccttatttat gactttacgt 1980
gcaaatgttt tgaccatatt gatcatatat tttgacaaaa tatatttata actacgtatt 2040
aaaagaaaaa aataaaatga gtcattattt taaaggtaaa 2080
<210> 21
<211> 1650
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA对应的DNA序列
<222> (1)..(1650)
<400> 21
attccgtagt gccatcccga gcaacgcact gctgcagctt ccctgagcct ttccagcaag 60
tttgttcaag attggctgtc aagaatcatg gactgttatt atatgccttg ttttctgtca 120
agacaccatg attcctggta accgaatgct gatggtcgtt ttattatgcc aagtcctgct 180
aggaggcgcg agccatgcta gtttgatacc tgagacgggg aagaaaaaag tcgccgagat 240
tcagggccac gcgggaggac gccgctcagg gcagagccat gagctcctgc gggacttcga 300
ggcgacactt ctgcagatgt ttgggctgcg ccgccgcccg cagcctagca agagtgccgt 360
cattccggac tacatgcggg atctttaccg gcttcagtct ggggaggagg aggaagagca 420
gatccacagc actggtcttg agtatcctga gcgcccggcc agccgggcca acaccgtgag 480
gagcttccac cacgaagaac atctggagaa catcccaggg accagtgaaa actctgcttt 540
tcgtttcctc tttaacctca gcagcatccc tgagaacgag gtgatctcct ctgcagagct 600
tcggctcttc cgggagcagg tggaccaggg ccctgattgg gaaaggggct tccaccgtat 660
aaacatttat gaggttatga agcccccagc agaagtggtg cctgggcacc tcatcacacg 720
actactggac acgagactgg tccaccacaa tgtgacacgg tgggaaactt ttgatgtgag 780
ccctgcggtc cttcgctgga cccgggagaa gcagccaaac tatgggctag ccattgaggt 840
gactcacctc catcagactc ggacccacca gggccagcat gtcaggatta gccgatcgtt 900
acctcaaggg agtgggaatt gggcccagct ccggcccctc ctggtcacct ttggccatga 960
tggccggggc catgccttga cccgacgccg gagggccaag cgtagcccta agcatcactc 1020
acagcgggcc aggaagaaga ataagaactg ccggcgccac tcgctctatg tggacttcag 1080
cgatgtgggc tggaatgact ggattgtggc cccaccaggc taccaggcct tctactgcca 1140
tggggactgc ccctttccac tggctgacca cctcaactca accaaccatg ccattgtgca 1200
gaccctggtc aattctgtca attccagtat ccccaaagcc tgttgtgtgc ccactgaact 1260
gagtgccatc tccatgctgt acctggatga gtatgataag gtggtactga aaaattatca 1320
ggagatggta gtagagggat gtgggtgccg ctgagatcag gcagtccttg aggatagaca 1380
gatatacaca ccacacacac acaccacata caccacacac acacgttccc atccactcac 1440
ccacacacta cacagactgc ttccttatag ctggactttt atttaaaaaa aaaaaaaaaa 1500
aaggaaaaaa tccctaaaca ttcaccttga ccttatttat gactttacgt gcaaatgttt 1560
tgaccatatt gatcatatat tttgacaaaa tatatttata actacgtatt aaaagaaaaa 1620
aataaaatga gtcattattt taaaggtaaa 1650
<210> 22
<211> 1931
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA对应的DNA序列
<222> (1)..(1931)
<400> 22
ggaagatgcg agaaggcaga ggaggaggga gggagggaag gagcgcggag cccggcccgg 60
aagctaggtg agtgtggcat ccgagctgag ggacgcgagc ctgagacgcc gctgctgctc 120
cggctgagta tctagcttgt ctccccgatg ggattcccgt ccaagctatc tcgagcctgc 180
agcgccacag tccccggccc tcgcccaggt tcactgcaac cgttcagagg tccccaggag 240
ctgctgctgg cgagcccgct actgcaggga cctatggagc cattccgtag tgccatcccg 300
agcaacgcac tgctgcagct tccctgagcc tttccagcaa gtttgttcaa gattggctgt 360
caagaatcat ggactgttat tatatgcctt gttttctgtc aagacaccat gattcctggt 420
aaccgaatgc tgatggtcgt tttattatgc caagtcctgc taggaggcgc gagccatgct 480
agtttgatac ctgagacggg gaagaaaaaa gtcgccgaga ttcagggcca cgcgggagga 540
cgccgctcag ggcagagcca tgagctcctg cgggacttcg aggcgacact tctgcagatg 600
tttgggctgc gccgccgccc gcagcctagc aagagtgccg tcattccgga ctacatgcgg 660
gatctttacc ggcttcagtc tggggaggag gaggaagagc agatccacag cactggtctt 720
gagtatcctg agcgcccggc cagccgggcc aacaccgtga ggagcttcca ccacgaagaa 780
catctggaga acatcccagg gaccagtgaa aactctgctt ttcgtttcct ctttaacctc 840
agcagcatcc ctgagaacga ggtgatctcc tctgcagagc ttcggctctt ccgggagcag 900
gtggaccagg gccctgattg ggaaaggggc ttccaccgta taaacattta tgaggttatg 960
aagcccccag cagaagtggt gcctgggcac ctcatcacac gactactgga cacgagactg 1020
gtccaccaca atgtgacacg gtgggaaact tttgatgtga gccctgcggt ccttcgctgg 1080
acccgggaga agcagccaaa ctatgggcta gccattgagg tgactcacct ccatcagact 1140
cggacccacc agggccagca tgtcaggatt agccgatcgt tacctcaagg gagtgggaat 1200
tgggcccagc tccggcccct cctggtcacc tttggccatg atggccgggg ccatgccttg 1260
acccgacgcc ggagggccaa gcgtagccct aagcatcact cacagcgggc caggaagaag 1320
aataagaact gccggcgcca ctcgctctat gtggacttca gcgatgtggg ctggaatgac 1380
tggattgtgg ccccaccagg ctaccaggcc ttctactgcc atggggactg cccctttcca 1440
ctggctgacc acctcaactc aaccaaccat gccattgtgc agaccctggt caattctgtc 1500
aattccagta tccccaaagc ctgttgtgtg cccactgaac tgagtgccat ctccatgctg 1560
tacctggatg agtatgataa ggtggtactg aaaaattatc aggagatggt agtagaggga 1620
tgtgggtgcc gctgagatca ggcagtcctt gaggatagac agatatacac accacacaca 1680
cacaccacat acaccacaca cacacgttcc catccactca cccacacact acacagactg 1740
cttccttata gctggacttt tatttaaaaa aaaaaaaaaa aaaggaaaaa atccctaaac 1800
attcaccttg accttattta tgactttacg tgcaaatgtt ttgaccatat tgatcatata 1860
ttttgacaaa atatatttat aactacgtat taaaagaaaa aaataaaatg agtcattatt 1920
ttaaaggtaa a 1931
<210> 23
<211> 1788
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA对应的DNA序列
<222> (1)..(1788)
<400> 23
ggaggggccg ccggggaaga ggaggaggaa ggaaagaaag aaagcgaggg agggaaagag 60
gaggaaggaa gatgcgagaa ggcagaggag gagggaggga gggaaggagc gcggagcccg 120
gcccggaagc taggagccat tccgtagtgc catcccgagc aacgcactgc tgcagcttcc 180
ctgagccttt ccagcaagtt tgttcaagat tggctgtcaa gaatcatgga ctgttattat 240
atgccttgtt ttctgtcaag acaccatgat tcctggtaac cgaatgctga tggtcgtttt 300
attatgccaa gtcctgctag gaggcgcgag ccatgctagt ttgatacctg agacggggaa 360
gaaaaaagtc gccgagattc agggccacgc gggaggacgc cgctcagggc agagccatga 420
gctcctgcgg gacttcgagg cgacacttct gcagatgttt gggctgcgcc gccgcccgca 480
gcctagcaag agtgccgtca ttccggacta catgcgggat ctttaccggc ttcagtctgg 540
ggaggaggag gaagagcaga tccacagcac tggtcttgag tatcctgagc gcccggccag 600
ccgggccaac accgtgagga gcttccacca cgaagaacat ctggagaaca tcccagggac 660
cagtgaaaac tctgcttttc gtttcctctt taacctcagc agcatccctg agaacgaggt 720
gatctcctct gcagagcttc ggctcttccg ggagcaggtg gaccagggcc ctgattggga 780
aaggggcttc caccgtataa acatttatga ggttatgaag cccccagcag aagtggtgcc 840
tgggcacctc atcacacgac tactggacac gagactggtc caccacaatg tgacacggtg 900
ggaaactttt gatgtgagcc ctgcggtcct tcgctggacc cgggagaagc agccaaacta 960
tgggctagcc attgaggtga ctcacctcca tcagactcgg acccaccagg gccagcatgt 1020
caggattagc cgatcgttac ctcaagggag tgggaattgg gcccagctcc ggcccctcct 1080
ggtcaccttt ggccatgatg gccggggcca tgccttgacc cgacgccgga gggccaagcg 1140
tagccctaag catcactcac agcgggccag gaagaagaat aagaactgcc ggcgccactc 1200
gctctatgtg gacttcagcg atgtgggctg gaatgactgg attgtggccc caccaggcta 1260
ccaggccttc tactgccatg gggactgccc ctttccactg gctgaccacc tcaactcaac 1320
caaccatgcc attgtgcaga ccctggtcaa ttctgtcaat tccagtatcc ccaaagcctg 1380
ttgtgtgccc actgaactga gtgccatctc catgctgtac ctggatgagt atgataaggt 1440
ggtactgaaa aattatcagg agatggtagt agagggatgt gggtgccgct gagatcaggc 1500
agtccttgag gatagacaga tatacacacc acacacacac accacataca ccacacacac 1560
acgttcccat ccactcaccc acacactaca cagactgctt ccttatagct ggacttttat 1620
ttaaaaaaaa aaaaaaaaaa ggaaaaaatc cctaaacatt caccttgacc ttatttatga 1680
ctttacgtgc aaatgttttg accatattga tcatatattt tgacaaaata tatttataac 1740
tacgtattaa aagaaaaaaa taaaatgagt cattatttta aaggtaaa 1788
<210> 24
<211> 1723
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA对应的DNA序列
<222> (1)..(1723)
<400> 24
agacgcagac gcagaggtcg agcgcaggcc gaaagctgtt caccgttttc tcgactccgg 60
ggaacatgga gccattccgt agtgccatcc cgagcaacgc actgctgcag cttccctgag 120
cctttccagc aagtttgttc aagattggct gtcaagaatc atggactgtt attatatgcc 180
ttgttttctg tcaagacacc atgattcctg gtaaccgaat gctgatggtc gttttattat 240
gccaagtcct gctaggaggc gcgagccatg ctagtttgat acctgagacg gggaagaaaa 300
aagtcgccga gattcagggc cacgcgggag gacgccgctc agggcagagc catgagctcc 360
tgcgggactt cgaggcgaca cttctgcaga tgtttgggct gcgccgccgc ccgcagccta 420
gcaagagtgc cgtcattccg gactacatgc gggatcttta ccggcttcag tctggggagg 480
aggaggaaga gcagatccac agcactggtc ttgagtatcc tgagcgcccg gccagccggg 540
ccaacaccgt gaggagcttc caccacgaag aacatctgga gaacatccca gggaccagtg 600
aaaactctgc ttttcgtttc ctctttaacc tcagcagcat ccctgagaac gaggtgatct 660
cctctgcaga gcttcggctc ttccgggagc aggtggacca gggccctgat tgggaaaggg 720
gcttccaccg tataaacatt tatgaggtta tgaagccccc agcagaagtg gtgcctgggc 780
acctcatcac acgactactg gacacgagac tggtccacca caatgtgaca cggtgggaaa 840
cttttgatgt gagccctgcg gtccttcgct ggacccggga gaagcagcca aactatgggc 900
tagccattga ggtgactcac ctccatcaga ctcggaccca ccagggccag catgtcagga 960
ttagccgatc gttacctcaa gggagtggga attgggccca gctccggccc ctcctggtca 1020
cctttggcca tgatggccgg ggccatgcct tgacccgacg ccggagggcc aagcgtagcc 1080
ctaagcatca ctcacagcgg gccaggaaga agaataagaa ctgccggcgc cactcgctct 1140
atgtggactt cagcgatgtg ggctggaatg actggattgt ggccccacca ggctaccagg 1200
ccttctactg ccatggggac tgcccctttc cactggctga ccacctcaac tcaaccaacc 1260
atgccattgt gcagaccctg gtcaattctg tcaattccag tatccccaaa gcctgttgtg 1320
tgcccactga actgagtgcc atctccatgc tgtacctgga tgagtatgat aaggtggtac 1380
tgaaaaatta tcaggagatg gtagtagagg gatgtgggtg ccgctgagat caggcagtcc 1440
ttgaggatag acagatatac acaccacaca cacacaccac atacaccaca cacacacgtt 1500
cccatccact cacccacaca ctacacagac tgcttcctta tagctggact tttatttaaa 1560
aaaaaaaaaa aaaaaggaaa aaatccctaa acattcacct tgaccttatt tatgacttta 1620
cgtgcaaatg ttttgaccat attgatcata tattttgaca aaatatattt ataactacgt 1680
attaaaagaa aaaaataaaa tgagtcatta ttttaaaggt aaa 1723
<210> 25
<211> 2027
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA对应的DNA序列
<222> (1)..(2027)
<400> 25
gggcgcccgc ggcctccgca cccggacctg aggtgttggt cgactccggg catccacggt 60
cgggagggag ggctgagctg ttcgatcctt tacttttctt cctcaaagtc tacctgccaa 120
tgcccctaag aagaaaacca agtatgtgcg tggagagtgg ggcggcaggc aacccgagtt 180
cttgagctcc ggagcgaccc aaagcagcaa ctgggaacag cctcaggaaa gggaggtcgg 240
gtggagtggg ctttggggca ggagtcatgg ggcccgggcc ccggggacga cctggcgctc 300
ccggccctgc tgaacgctga gttgcgccta gtcgggtttt cgaagaggcc cttgcgcaga 360
gcgacccacg cgcgcggcag catcttcgat tagtcaggac atcccagtaa ctgcttgaac 420
tgtaggagcc attccgtagt gccatcccga gcaacgcact gctgcagctt ccctgagcct 480
ttccagcaag tttgttcaag attggctgtc aagaatcatg gactgttatt atatgccttg 540
ttttctgtca tcctgctagg aggcgcgagc catgctagtt tgatacctga gacggggaag 600
aaaaaagtcg ccgagattca gggccacgcg ggaggacgcc gctcagggca gagccatgag 660
ctcctgcggg acttcgaggc gacacttctg cagatgtttg ggctgcgccg ccgcccgcag 720
cctagcaaga gtgccgtcat tccggactac atgcgggatc tttaccggct tcagtctggg 780
gaggaggagg aagagcagat ccacagcact ggtcttgagt atcctgagcg cccggccagc 840
cgggccaaca ccgtgaggag cttccaccac gaagaacatc tggagaacat cccagggacc 900
agtgaaaact ctgcttttcg tttcctcttt aacctcagca gcatccctga gaacgaggtg 960
atctcctctg cagagcttcg gctcttccgg gagcaggtgg accagggccc tgattgggaa 1020
aggggcttcc accgtataaa catttatgag gttatgaagc ccccagcaga agtggtgcct 1080
gggcacctca tcacacgact actggacacg agactggtcc accacaatgt gacacggtgg 1140
gaaacttttg atgtgagccc tgcggtcctt cgctggaccc gggagaagca gccaaactat 1200
gggctagcca ttgaggtgac tcacctccat cagactcgga cccaccaggg ccagcatgtc 1260
aggattagcc gatcgttacc tcaagggagt gggaattggg cccagctccg gcccctcctg 1320
gtcacctttg gccatgatgg ccggggccat gccttgaccc gacgccggag ggccaagcgt 1380
agccctaagc atcactcaca gcgggccagg aagaagaata agaactgccg gcgccactcg 1440
ctctatgtgg acttcagcga tgtgggctgg aatgactgga ttgtggcccc accaggctac 1500
caggccttct actgccatgg ggactgcccc tttccactgg ctgaccacct caactcaacc 1560
aaccatgcca ttgtgcagac cctggtcaat tctgtcaatt ccagtatccc caaagcctgt 1620
tgtgtgccca ctgaactgag tgccatctcc atgctgtacc tggatgagta tgataaggtg 1680
gtactgaaaa attatcagga gatggtagta gagggatgtg ggtgccgctg agatcaggca 1740
gtccttgagg atagacagat atacacacca cacacacaca ccacatacac cacacacaca 1800
cgttcccatc cactcaccca cacactacac agactgcttc cttatagctg gacttttatt 1860
taaaaaaaaa aaaaaaaaag gaaaaaatcc ctaaacattc accttgacct tatttatgac 1920
tttacgtgca aatgttttga ccatattgat catatatttt gacaaaatat atttataact 1980
acgtattaaa agaaaaaaat aaaatgagtc attattttaa aggtaaa 2027
<210> 26
<211> 1878
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA对应的DNA序列
<222> (1)..(1878)
<400> 26
ggaagatgcg agaaggcaga ggaggaggga gggagggaag gagcgcggag cccggcccgg 60
aagctaggtg agtgtggcat ccgagctgag ggacgcgagc ctgagacgcc gctgctgctc 120
cggctgagta tctagcttgt ctccccgatg ggattcccgt ccaagctatc tcgagcctgc 180
agcgccacag tccccggccc tcgcccaggt tcactgcaac cgttcagagg tccccaggag 240
ctgctgctgg cgagcccgct actgcaggga cctatggagc cattccgtag tgccatcccg 300
agcaacgcac tgctgcagct tccctgagcc tttccagcaa gtttgttcaa gattggctgt 360
caagaatcat ggactgttat tatatgcctt gttttctgtc atcctgctag gaggcgcgag 420
ccatgctagt ttgatacctg agacggggaa gaaaaaagtc gccgagattc agggccacgc 480
gggaggacgc cgctcagggc agagccatga gctcctgcgg gacttcgagg cgacacttct 540
gcagatgttt gggctgcgcc gccgcccgca gcctagcaag agtgccgtca ttccggacta 600
catgcgggat ctttaccggc ttcagtctgg ggaggaggag gaagagcaga tccacagcac 660
tggtcttgag tatcctgagc gcccggccag ccgggccaac accgtgagga gcttccacca 720
cgaagaacat ctggagaaca tcccagggac cagtgaaaac tctgcttttc gtttcctctt 780
taacctcagc agcatccctg agaacgaggt gatctcctct gcagagcttc ggctcttccg 840
ggagcaggtg gaccagggcc ctgattggga aaggggcttc caccgtataa acatttatga 900
ggttatgaag cccccagcag aagtggtgcc tgggcacctc atcacacgac tactggacac 960
gagactggtc caccacaatg tgacacggtg ggaaactttt gatgtgagcc ctgcggtcct 1020
tcgctggacc cgggagaagc agccaaacta tgggctagcc attgaggtga ctcacctcca 1080
tcagactcgg acccaccagg gccagcatgt caggattagc cgatcgttac ctcaagggag 1140
tgggaattgg gcccagctcc ggcccctcct ggtcaccttt ggccatgatg gccggggcca 1200
tgccttgacc cgacgccgga gggccaagcg tagccctaag catcactcac agcgggccag 1260
gaagaagaat aagaactgcc ggcgccactc gctctatgtg gacttcagcg atgtgggctg 1320
gaatgactgg attgtggccc caccaggcta ccaggccttc tactgccatg gggactgccc 1380
ctttccactg gctgaccacc tcaactcaac caaccatgcc attgtgcaga ccctggtcaa 1440
ttctgtcaat tccagtatcc ccaaagcctg ttgtgtgccc actgaactga gtgccatctc 1500
catgctgtac ctggatgagt atgataaggt ggtactgaaa aattatcagg agatggtagt 1560
agagggatgt gggtgccgct gagatcaggc agtccttgag gatagacaga tatacacacc 1620
acacacacac accacataca ccacacacac acgttcccat ccactcaccc acacactaca 1680
cagactgctt ccttatagct ggacttttat ttaaaaaaaa aaaaaaaaaa ggaaaaaatc 1740
cctaaacatt caccttgacc ttatttatga ctttacgtgc aaatgttttg accatattga 1800
tcatatattt tgacaaaata tatttataac tacgtattaa aagaaaaaaa taaaatgagt 1860
cattatttta aaggtaaa 1878
<210> 27
<211> 1597
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的mRNA对应的DNA序列
<222> (1)..(1597)
<400> 27
attccgtagt gccatcccga gcaacgcact gctgcagctt ccctgagcct ttccagcaag 60
tttgttcaag attggctgtc aagaatcatg gactgttatt atatgccttg ttttctgtca 120
tcctgctagg aggcgcgagc catgctagtt tgatacctga gacggggaag aaaaaagtcg 180
ccgagattca gggccacgcg ggaggacgcc gctcagggca gagccatgag ctcctgcggg 240
acttcgaggc gacacttctg cagatgtttg ggctgcgccg ccgcccgcag cctagcaaga 300
gtgccgtcat tccggactac atgcgggatc tttaccggct tcagtctggg gaggaggagg 360
aagagcagat ccacagcact ggtcttgagt atcctgagcg cccggccagc cgggccaaca 420
ccgtgaggag cttccaccac gaagaacatc tggagaacat cccagggacc agtgaaaact 480
ctgcttttcg tttcctcttt aacctcagca gcatccctga gaacgaggtg atctcctctg 540
cagagcttcg gctcttccgg gagcaggtgg accagggccc tgattgggaa aggggcttcc 600
accgtataaa catttatgag gttatgaagc ccccagcaga agtggtgcct gggcacctca 660
tcacacgact actggacacg agactggtcc accacaatgt gacacggtgg gaaacttttg 720
atgtgagccc tgcggtcctt cgctggaccc gggagaagca gccaaactat gggctagcca 780
ttgaggtgac tcacctccat cagactcgga cccaccaggg ccagcatgtc aggattagcc 840
gatcgttacc tcaagggagt gggaattggg cccagctccg gcccctcctg gtcacctttg 900
gccatgatgg ccggggccat gccttgaccc gacgccggag ggccaagcgt agccctaagc 960
atcactcaca gcgggccagg aagaagaata agaactgccg gcgccactcg ctctatgtgg 1020
acttcagcga tgtgggctgg aatgactgga ttgtggcccc accaggctac caggccttct 1080
actgccatgg ggactgcccc tttccactgg ctgaccacct caactcaacc aaccatgcca 1140
ttgtgcagac cctggtcaat tctgtcaatt ccagtatccc caaagcctgt tgtgtgccca 1200
ctgaactgag tgccatctcc atgctgtacc tggatgagta tgataaggtg gtactgaaaa 1260
attatcagga gatggtagta gagggatgtg ggtgccgctg agatcaggca gtccttgagg 1320
atagacagat atacacacca cacacacaca ccacatacac cacacacaca cgttcccatc 1380
cactcaccca cacactacac agactgcttc cttatagctg gacttttatt taaaaaaaaa 1440
aaaaaaaaag gaaaaaatcc ctaaacattc accttgacct tatttatgac tttacgtgca 1500
aatgttttga ccatattgat catatatttt gacaaaatat atttataact acgtattaaa 1560
agaaaaaaat aaaatgagtc attattttaa aggtaaa 1597
<210> 28
<211> 7156
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的基因组序列
<222> (1)..(7156)
<400> 28
ggaggggccg ccggggaaga ggaggaggaa ggaaagaaag aaagcgaggg agggaaagag 60
gaggaaggaa gatgcgagaa ggcagaggag gagggaggga gggaaggagc gcggagcccg 120
gcccggaagc taggtgagtg tggcatccga gctgagggac gcgagcctga gacgccgctg 180
ctgctccggc tgagtatcta gcttgtctcc ccgatgggat tcccgtccaa gctatctcga 240
gcctgcagcg ccacagtccc cggccctcgc ccaggttcac tgcaaccgtt cagaggtccc 300
caggagctgc tgctggcgag cccgctactg cagggaccta tggtgagcaa ggctacctgg 360
tgaggggaga caggcagagg gggtctagga gcctccttgg ggggaagaag ctggtcacag 420
gctgtgaccg aggcaaaagg tggcctaatt attttccaat agtggtgctg gaggtgggga 480
tgctggcgct gaaagacctt taaatatcgg ctactgcccc tgcccaggcc ttctctgtcc 540
agcagtccct gggagattct cacctttggg aagtgcgggg caggagagca gaaacaagag 600
aagcccttgg taggggggtc gttgggaaaa actgtggggt cttgggctga acgcgttgcc 660
cacgggctgg aggttgcgat ccccggacgg aaagcgcggg aggaggaagg agagaaccgg 720
ctctgaggtc cagagagagt gagggggcag agcgacggcg agatggggag agaacaccta 780
gctggagcag gttctgcggt agagagcgca gtcctgctgg cctctggaga gtgcgcgccg 840
ctccggaggc tgcgtcgagg ggagtgtcac ccaatctggc ccccagctgg cggggcgccc 900
tgagagcttg cgaactgcag ttgcaggacg cgccttctcc acgagctatt ttcgtcgact 960
tgcggaaccc aaggaacctc gcctctatca tttcacggtg tagggtccct agagacgaca 1020
gccaagatcc caggggctcc caggacgctt gttcctgcgg tgtcgtgtcc tatggggagt 1080
tcctggcggg acgaaaggcg gacgcgcggc tcttcctggc cctccaggcc cggaaccgac 1140
gggaaaggtt cccgtgattc ccgagtccct gcaggcttct tccagcggga gttggtccgg 1200
gggccttaga ggcctccaag cactgctttg gaggatggtt tccaaggatc gcggtttgtg 1260
agttgaaggc tttgtgagag gttaaacccc caaaagatac atacttggta aactgaggct 1320
acctgtaaac acatttcggc attaggagaa gattcgagta gggaagtgaa ggacaaccac 1380
cccgagttac attcctttcc cccaataaaa agctctgggg atgaaagttc ttttggcttt 1440
tatcttttcg atttaaaaat ttgagaagaa aaatgtgact agagatgaat cctggtgaat 1500
ccgaaattga aacacaactc ccccttcccc ttcctatcct ctcggtttta gaaccgcgct 1560
ctcccgcccc aggagattcc ttggggccga gggttttccg gggaacccgg gcgcccgccc 1620
cttctactgt ccctttgccc cgcgggcaca gcttgcctcc gtctgctttc tctacttctg 1680
gacctctcct cgccgggctt tttaaagggc ttctgcgtct caaaacaaaa caaaaaaacc 1740
ctttgctctt cccaaccctt tcgcagcccg ccccagcggt ggcgcgggac cagcaaaggc 1800
gaaagccgcg cggctcttgc cgggcgcgga cggtcgcgca ggggcgcccg cggcctccgc 1860
acccggacct gaggtgttgg tcgactccgg gcatccacgg tcgggaggga gggctgagct 1920
gttcgatcct ttacttttct tcctcaaagt ctacctgcca atgcccctaa gaagaaaacc 1980
aagtatgtgc gtggagagtg gggcggcagg caacccgagt tcttgagctc cggagcgacc 2040
caaagcagca actgggaaca gcctcaggaa agggaggtcg ggtggagtgg gctttggggc 2100
aggagtcatg gggcccgggc cccggggacg acctggcgct cccggccctg ctgaacgctg 2160
agttgcgcct agtcgggttt tcgaagaggc ccttgcgcag agcgacccac gcgcgcggca 2220
gcatcttcga ttagtcagga catcccagta actgcttgaa ctgtaggtag gtaaaattct 2280
tgaaggagta tttgctgcgt gcgactctgc tgctggtgca acggaggaag ggggtggggg 2340
aaggaagtgg cgggggaagg agtgtggtgg tggtttaaaa aataagggaa gccgaggcga 2400
gagagacgca gacgcagagg tcgagcgcag gccgaaagct gttcaccgtt ttctcgactc 2460
cggggaacat ggtgggattt cctttctgcg ccgggtcggg agttgtaaaa cctcggccac 2520
attaagatct gaaaactgtg atgcgtcctt tctgcagcga cgcctctttc tgaatctgcc 2580
cggagcttcg agccccggcg tctgtccctc agcctggcat ggcttcttcg ggggtctgct 2640
ttgcatgggg agaggggcca cgcagcggcg gactaggttt ggggattctc ggtaatggac 2700
ccggagcaat gactaacagc cgctccctct cactttccca cagcgatcac cctctaacac 2760
cctccctccc attcccggcc ccgcgcgtga caaggtcggc tgctttcagc cgggagctag 2820
atcggtggcc cggctcttcg gagccttagc aggcgttcgc caaggggtga ctggctgtca 2880
ttgggagcaa tatttggcct tgaggagacc ctggggagga agtggcgggg agctcgtgtt 2940
tgcttgtgtg tgtgtggggg ggtgtgtgtg tacacgcgcg tgggcagggt ccctctgcgc 3000
tttccttttt aagtgcctct cggtggtgag gctttgggcg ggtgagactt tcccgacctc 3060
gctcccggcc ccacttaagc cgggttcgag ctgggagacg cagtcccttc agtgcgcccc 3120
aaatcctctg gcttcaggtg gcccggcgcg ggggcccagc acgacgcacc gcgccgagaa 3180
ccgggttctc cgtgcgctgc gccagtagcc ctgggagcgc ggcggccgcg gggcaccggc 3240
cgagggctct gccgagcgcc gccgggagct cctcccggac cgctgaggct cgggcggcgg 3300
gcgcggaggt tggcctcgcc tggaggggcg ggcccgcgag gggcgggggg ctgtggagga 3360
ggggagggcg cgcaagccct ttcgccgcct gccgcgggag gggcctcggc gctcacgtga 3420
ctccgagggg ctggaagaaa aacagagcct gtctgcggtg gagtctcatt atattcaaat 3480
attcctttta ggagccattc cgtagtgcca tcccgagcaa cgcactgctg cagcttccct 3540
gagcctttcc agcaagtttg ttcaagattg gctgtcaaga atcatggact gttattatat 3600
gccttgtttt ctgtcagtga gtagacacct cttccttccc cctccccgga attcactctg 3660
ccctcaccac ccctgctcgc cggctgtccc ttccgtcgga cctcctttac aatatccaca 3720
ctctgctccc tggcagcact gtcgctccct tcttggcccg gcagccgggg cgctggaagc 3780
gtacgggttc cttttaaagt gctgctagcg cgcactcgcc ctctcagcgt tgcaagaaag 3840
gggagcgcga gggagctaaa gagatgaaag cccggggttg taccttgagg gctaaccact 3900
cccttcccct atccaacttg tctgggagag cccccagtgt ctccgtggcg cgttcccact 3960
ctcttgtcaa aactcacaga ggtctctccg gaatcgtctc tcaccccttc cctggggatg 4020
agcgggcacg atcaggcact tttggctgaa tatttcaaac tcatcggcca caataaaata 4080
agccctcaag ccacccggtt agctcccaga ccaccttctc ggcttctgga ccctgtcgcc 4140
ctctgtcttc gcccagcccc tgcctctcac tttccctccc tctggctctg aaccaactgg 4200
aagttgtgaa agttgggctc tgagggtgga ggaaaaggga gagaagctga aggtctaaag 4260
tggagagcaa tgccatttta attctccctc ccccacccct tttcaccccc tcaatgttaa 4320
ctgtttatcc ttcaagaagc cacgctgaga tcatggccca gatagcagtt aggacaaaaa 4380
aagattaaca ggatggaggc tatctgattt ggggttattt gactgtaaac aagttagacc 4440
aagtaattac agggcaattc ttactttcag gccgtgcatg gctgcagctg gtgggtgggc 4500
gggtggtgtg agggagaaga cacaaacttg atctttctga cctgctttcc atcttgcccc 4560
tccatttcta gccctaaatg catatgcaga cacatctcta tttctcccta tttattggtg 4620
tttatttatt ctttaacctt ccactcccct ccccctcccc agagacacca tgattcctgg 4680
taaccgaatg ctgatggtcg ttttattatg ccaagtcctg ctaggaggcg cgagccatgc 4740
tagtttgata cctgagacgg ggaagaaaaa agtcgccgag attcagggcc acgcgggagg 4800
acgccgctca gggcagagcc atgagctcct gcgggacttc gaggcgacac ttctgcagat 4860
gtttgggctg cgccgccgcc cgcagcctag caagagtgcc gtcattccgg actacatgcg 4920
ggatctttac cggcttcagt ctggggagga ggaggaagag cagatccaca gcactggtct 4980
tgagtatcct gagcgcccgg ccagccgggc caacaccgtg aggagcttcc accacgaagg 5040
tcagtctctt cccccagtct gcgtggggga gggctggtgg gactggctag aggggcagtg 5100
aaagccctgg ggaagaagag ttcgggttac atcaaagccc cagtccagga ggctgaggaa 5160
cagagctgct tacctccaag aatttgcaga gctgccgccg aacttatttt ttggagacag 5220
agggggaggt gttcagggga aggggaatga cagcactcag acgtgggcta gccccagcgg 5280
tgtgtttttg ctatatcaaa gccttttctg ctaggttttc tgcccgtttt tttcaaagca 5340
cctactgaat ttaatattac agctgtgtgt ttgtcgggtt tattcaatag gggccttgta 5400
atccgatctg aatgtttcct agcggatgtt tcttttccaa agtaaatctg agttattaat 5460
ccaccagcat cattactgtg ttggaattta ttttcccctc tgtaacatga tcaacaaggc 5520
atgctctgtg tttccaagat cgctggggaa atgtttagta acatactcaa tagtggaaga 5580
gggagagggt ggttgtctgc atgtttcctc ctgcctgtgc tctgttggcc cctctttttc 5640
tttacaacca cttgtaaaga aaactgtgga cacaaagcca aggtgggggg tttaaaagag 5700
gagtctgatt gtggtgccat agaggagttg acacatagaa attattagac atatcaagga 5760
ggctggatat agtttctgtc tttggtgctt gagaaatgct agctacattt tgctggtttg 5820
ttagctgccc cacttatctg ctccttcaaa ttaaggggta tgcttatttt cccccagtag 5880
gtttcccctg cataagcaga attcaccatt cattgcccaa ccctgagcta tctcttgact 5940
cttccatctt tgaaaaaagt tcatatgctt tttcttttcc ccttccttcc taactgtgcc 6000
tagaacatct ggagaacatc ccagggacca gtgaaaactc tgcttttcgt ttcctcttta 6060
acctcagcag catccctgag aacgaggtga tctcctctgc agagcttcgg ctcttccggg 6120
agcaggtgga ccagggccct gattgggaaa ggggcttcca ccgtataaac atttatgagg 6180
ttatgaagcc cccagcagaa gtggtgcctg ggcacctcat cacacgacta ctggacacga 6240
gactggtcca ccacaatgtg acacggtggg aaacttttga tgtgagccct gcggtccttc 6300
gctggacccg ggagaagcag ccaaactatg ggctagccat tgaggtgact cacctccatc 6360
agactcggac ccaccagggc cagcatgtca ggattagccg atcgttacct caagggagtg 6420
ggaattgggc ccagctccgg cccctcctgg tcacctttgg ccatgatggc cggggccatg 6480
ccttgacccg acgccggagg gccaagcgta gccctaagca tcactcacag cgggccagga 6540
agaagaataa gaactgccgg cgccactcgc tctatgtgga cttcagcgat gtgggctgga 6600
atgactggat tgtggcccca ccaggctacc aggccttcta ctgccatggg gactgcccct 6660
ttccactggc tgaccacctc aactcaacca accatgccat tgtgcagacc ctggtcaatt 6720
ctgtcaattc cagtatcccc aaagcctgtt gtgtgcccac tgaactgagt gccatctcca 6780
tgctgtacct ggatgagtat gataaggtgg tactgaaaaa ttatcaggag atggtagtag 6840
agggatgtgg gtgccgctga gatcaggcag tccttgagga tagacagata tacacaccac 6900
acacacacac cacatacacc acacacacac gttcccatcc actcacccac acactacaca 6960
gactgcttcc ttatagctgg acttttattt aaaaaaaaaa aaaaaaaagg aaaaaatccc 7020
taaacattca ccttgacctt atttatgact ttacgtgcaa atgttttgac catattgatc 7080
atatattttg acaaaatata tttataacta cgtattaaaa gaaaaaaata aaatgagtca 7140
ttattttaaa ggtaaa 7156
<210> 29
<211> 7156
<212> RNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> BMP4基因的基因组对应的RNA序列
<222> (1)..(7156)
<400> 29
ggaggggccg ccggggaaga ggaggaggaa ggaaagaaag aaagcgaggg agggaaagag 60
gaggaaggaa gaugcgagaa ggcagaggag gagggaggga gggaaggagc gcggagcccg 120
gcccggaagc uaggugagug uggcauccga gcugagggac gcgagccuga gacgccgcug 180
cugcuccggc ugaguaucua gcuugucucc ccgaugggau ucccguccaa gcuaucucga 240
gccugcagcg ccacaguccc cggcccucgc ccagguucac ugcaaccguu cagagguccc 300
caggagcugc ugcuggcgag cccgcuacug cagggaccua uggugagcaa ggcuaccugg 360
ugaggggaga caggcagagg gggucuagga gccuccuugg ggggaagaag cuggucacag 420
gcugugaccg aggcaaaagg uggccuaauu auuuuccaau aguggugcug gaggugggga 480
ugcuggcgcu gaaagaccuu uaaauaucgg cuacugcccc ugcccaggcc uucucugucc 540
agcagucccu gggagauucu caccuuuggg aagugcgggg caggagagca gaaacaagag 600
aagcccuugg uagggggguc guugggaaaa acuguggggu cuugggcuga acgcguugcc 660
cacgggcugg agguugcgau ccccggacgg aaagcgcggg aggaggaagg agagaaccgg 720
cucugagguc cagagagagu gagggggcag agcgacggcg agauggggag agaacaccua 780
gcuggagcag guucugcggu agagagcgca guccugcugg ccucuggaga gugcgcgccg 840
cuccggaggc ugcgucgagg ggagugucac ccaaucuggc ccccagcugg cggggcgccc 900
ugagagcuug cgaacugcag uugcaggacg cgccuucucc acgagcuauu uucgucgacu 960
ugcggaaccc aaggaaccuc gccucuauca uuucacggug uagggucccu agagacgaca 1020
gccaagaucc caggggcucc caggacgcuu guuccugcgg ugucgugucc uauggggagu 1080
uccuggcggg acgaaaggcg gacgcgcggc ucuuccuggc ccuccaggcc cggaaccgac 1140
gggaaagguu cccgugauuc ccgagucccu gcaggcuucu uccagcggga guugguccgg 1200
gggccuuaga ggccuccaag cacugcuuug gaggaugguu uccaaggauc gcgguuugug 1260
aguugaaggc uuugugagag guuaaacccc caaaagauac auacuuggua aacugaggcu 1320
accuguaaac acauuucggc auuaggagaa gauucgagua gggaagugaa ggacaaccac 1380
cccgaguuac auuccuuucc cccaauaaaa agcucugggg augaaaguuc uuuuggcuuu 1440
uaucuuuucg auuuaaaaau uugagaagaa aaaugugacu agagaugaau ccuggugaau 1500
ccgaaauuga aacacaacuc ccccuucccc uuccuauccu cucgguuuua gaaccgcgcu 1560
cucccgcccc aggagauucc uuggggccga ggguuuuccg gggaacccgg gcgcccgccc 1620
cuucuacugu cccuuugccc cgcgggcaca gcuugccucc gucugcuuuc ucuacuucug 1680
gaccucuccu cgccgggcuu uuuaaagggc uucugcgucu caaaacaaaa caaaaaaacc 1740
cuuugcucuu cccaacccuu ucgcagcccg ccccagcggu ggcgcgggac cagcaaaggc 1800
gaaagccgcg cggcucuugc cgggcgcgga cggucgcgca ggggcgcccg cggccuccgc 1860
acccggaccu gagguguugg ucgacuccgg gcauccacgg ucgggaggga gggcugagcu 1920
guucgauccu uuacuuuucu uccucaaagu cuaccugcca augccccuaa gaagaaaacc 1980
aaguaugugc guggagagug gggcggcagg caacccgagu ucuugagcuc cggagcgacc 2040
caaagcagca acugggaaca gccucaggaa agggaggucg gguggagugg gcuuuggggc 2100
aggagucaug gggcccgggc cccggggacg accuggcgcu cccggcccug cugaacgcug 2160
aguugcgccu agucggguuu ucgaagaggc ccuugcgcag agcgacccac gcgcgcggca 2220
gcaucuucga uuagucagga caucccagua acugcuugaa cuguagguag guaaaauucu 2280
ugaaggagua uuugcugcgu gcgacucugc ugcuggugca acggaggaag gggguggggg 2340
aaggaagugg cgggggaagg aguguggugg ugguuuaaaa aauaagggaa gccgaggcga 2400
gagagacgca gacgcagagg ucgagcgcag gccgaaagcu guucaccguu uucucgacuc 2460
cggggaacau ggugggauuu ccuuucugcg ccgggucggg aguuguaaaa ccucggccac 2520
auuaagaucu gaaaacugug augcguccuu ucugcagcga cgccucuuuc ugaaucugcc 2580
cggagcuucg agccccggcg ucugucccuc agccuggcau ggcuucuucg ggggucugcu 2640
uugcaugggg agaggggcca cgcagcggcg gacuagguuu ggggauucuc gguaauggac 2700
ccggagcaau gacuaacagc cgcucccucu cacuuuccca cagcgaucac ccucuaacac 2760
ccucccuccc auucccggcc ccgcgcguga caaggucggc ugcuuucagc cgggagcuag 2820
aucgguggcc cggcucuucg gagccuuagc aggcguucgc caagggguga cuggcuguca 2880
uugggagcaa uauuuggccu ugaggagacc cuggggagga aguggcgggg agcucguguu 2940
ugcuugugug uguguggggg ggugugugug uacacgcgcg ugggcagggu cccucugcgc 3000
uuuccuuuuu aagugccucu cgguggugag gcuuugggcg ggugagacuu ucccgaccuc 3060
gcucccggcc ccacuuaagc cggguucgag cugggagacg cagucccuuc agugcgcccc 3120
aaauccucug gcuucaggug gcccggcgcg ggggcccagc acgacgcacc gcgccgagaa 3180
ccggguucuc cgugcgcugc gccaguagcc cugggagcgc ggcggccgcg gggcaccggc 3240
cgagggcucu gccgagcgcc gccgggagcu ccucccggac cgcugaggcu cgggcggcgg 3300
gcgcggaggu uggccucgcc uggaggggcg ggcccgcgag gggcgggggg cuguggagga 3360
ggggagggcg cgcaagcccu uucgccgccu gccgcgggag gggccucggc gcucacguga 3420
cuccgagggg cuggaagaaa aacagagccu gucugcggug gagucucauu auauucaaau 3480
auuccuuuua ggagccauuc cguagugcca ucccgagcaa cgcacugcug cagcuucccu 3540
gagccuuucc agcaaguuug uucaagauug gcugucaaga aucauggacu guuauuauau 3600
gccuuguuuu cugucaguga guagacaccu cuuccuuccc ccuccccgga auucacucug 3660
cccucaccac cccugcucgc cggcuguccc uuccgucgga ccuccuuuac aauauccaca 3720
cucugcuccc uggcagcacu gucgcucccu ucuuggcccg gcagccgggg cgcuggaagc 3780
guacggguuc cuuuuaaagu gcugcuagcg cgcacucgcc cucucagcgu ugcaagaaag 3840
gggagcgcga gggagcuaaa gagaugaaag cccgggguug uaccuugagg gcuaaccacu 3900
cccuuccccu auccaacuug ucugggagag cccccagugu cuccguggcg cguucccacu 3960
cucuugucaa aacucacaga ggucucuccg gaaucgucuc ucaccccuuc ccuggggaug 4020
agcgggcacg aucaggcacu uuuggcugaa uauuucaaac ucaucggcca caauaaaaua 4080
agcccucaag ccacccgguu agcucccaga ccaccuucuc ggcuucugga cccugucgcc 4140
cucugucuuc gcccagcccc ugccucucac uuucccuccc ucuggcucug aaccaacugg 4200
aaguugugaa aguugggcuc ugagggugga ggaaaaggga gagaagcuga aggucuaaag 4260
uggagagcaa ugccauuuua auucucccuc ccccaccccu uuucaccccc ucaauguuaa 4320
cuguuuaucc uucaagaagc cacgcugaga ucauggccca gauagcaguu aggacaaaaa 4380
aagauuaaca ggauggaggc uaucugauuu gggguuauuu gacuguaaac aaguuagacc 4440
aaguaauuac agggcaauuc uuacuuucag gccgugcaug gcugcagcug gugggugggc 4500
ggguggugug agggagaaga cacaaacuug aucuuucuga ccugcuuucc aucuugcccc 4560
uccauuucua gcccuaaaug cauaugcaga cacaucucua uuucucccua uuuauuggug 4620
uuuauuuauu cuuuaaccuu ccacuccccu cccccucccc agagacacca ugauuccugg 4680
uaaccgaaug cugauggucg uuuuauuaug ccaaguccug cuaggaggcg cgagccaugc 4740
uaguuugaua ccugagacgg ggaagaaaaa agucgccgag auucagggcc acgcgggagg 4800
acgccgcuca gggcagagcc augagcuccu gcgggacuuc gaggcgacac uucugcagau 4860
guuugggcug cgccgccgcc cgcagccuag caagagugcc gucauuccgg acuacaugcg 4920
ggaucuuuac cggcuucagu cuggggagga ggaggaagag cagauccaca gcacuggucu 4980
ugaguauccu gagcgcccgg ccagccgggc caacaccgug aggagcuucc accacgaagg 5040
ucagucucuu cccccagucu gcguggggga gggcuggugg gacuggcuag aggggcagug 5100
aaagcccugg ggaagaagag uucggguuac aucaaagccc caguccagga ggcugaggaa 5160
cagagcugcu uaccuccaag aauuugcaga gcugccgccg aacuuauuuu uuggagacag 5220
agggggaggu guucagggga aggggaauga cagcacucag acgugggcua gccccagcgg 5280
uguguuuuug cuauaucaaa gccuuuucug cuagguuuuc ugcccguuuu uuucaaagca 5340
ccuacugaau uuaauauuac agcugugugu uugucggguu uauucaauag gggccuugua 5400
auccgaucug aauguuuccu agcggauguu ucuuuuccaa aguaaaucug aguuauuaau 5460
ccaccagcau cauuacugug uuggaauuua uuuuccccuc uguaacauga ucaacaaggc 5520
augcucugug uuuccaagau cgcuggggaa auguuuagua acauacucaa uaguggaaga 5580
gggagagggu gguugucugc auguuuccuc cugccugugc ucuguuggcc ccucuuuuuc 5640
uuuacaacca cuuguaaaga aaacugugga cacaaagcca aggugggggg uuuaaaagag 5700
gagucugauu guggugccau agaggaguug acacauagaa auuauuagac auaucaagga 5760
ggcuggauau aguuucuguc uuuggugcuu gagaaaugcu agcuacauuu ugcugguuug 5820
uuagcugccc cacuuaucug cuccuucaaa uuaaggggua ugcuuauuuu cccccaguag 5880
guuuccccug cauaagcaga auucaccauu cauugcccaa cccugagcua ucucuugacu 5940
cuuccaucuu ugaaaaaagu ucauaugcuu uuucuuuucc ccuuccuucc uaacugugcc 6000
uagaacaucu ggagaacauc ccagggacca gugaaaacuc ugcuuuucgu uuccucuuua 6060
accucagcag caucccugag aacgagguga ucuccucugc agagcuucgg cucuuccggg 6120
agcaggugga ccagggcccu gauugggaaa ggggcuucca ccguauaaac auuuaugagg 6180
uuaugaagcc cccagcagaa guggugccug ggcaccucau cacacgacua cuggacacga 6240
gacuggucca ccacaaugug acacgguggg aaacuuuuga ugugagcccu gcgguccuuc 6300
gcuggacccg ggagaagcag ccaaacuaug ggcuagccau ugaggugacu caccuccauc 6360
agacucggac ccaccagggc cagcauguca ggauuagccg aucguuaccu caagggagug 6420
ggaauugggc ccagcuccgg ccccuccugg ucaccuuugg ccaugauggc cggggccaug 6480
ccuugacccg acgccggagg gccaagcgua gcccuaagca ucacucacag cgggccagga 6540
agaagaauaa gaacugccgg cgccacucgc ucuaugugga cuucagcgau gugggcugga 6600
augacuggau uguggcccca ccaggcuacc aggccuucua cugccauggg gacugccccu 6660
uuccacuggc ugaccaccuc aacucaacca accaugccau ugugcagacc cuggucaauu 6720
cugucaauuc caguaucccc aaagccuguu gugugcccac ugaacugagu gccaucucca 6780
ugcuguaccu ggaugaguau gauaaggugg uacugaaaaa uuaucaggag augguaguag 6840
agggaugugg gugccgcuga gaucaggcag uccuugagga uagacagaua uacacaccac 6900
acacacacac cacauacacc acacacacac guucccaucc acucacccac acacuacaca 6960
gacugcuucc uuauagcugg acuuuuauuu aaaaaaaaaa aaaaaaaagg aaaaaauccc 7020
uaaacauuca ccuugaccuu auuuaugacu uuacgugcaa auguuuugac cauauugauc 7080
auauauuuug acaaaauaua uuuauaacua cguauuaaaa gaaaaaaaua aaaugaguca 7140
uuauuuuaaa gguaaa 7156
<210> 30
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 扩增小鼠BMP4突变基因的上游引物（5‘-3’）
<400> 30
actggctgct attgggcgaa gtg 23
<210> 31
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 扩增小鼠BMP4突变基因的下游引物（5'-3'）
<400> 31
gtaaagcacg aggaagcggt cag 23
<210> 32
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 扩增小鼠BMP4野生基因的上游引物（5'-3'）
<400> 32
cccagagaca ccatgattcc 20
<210> 33
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 扩增小鼠BMP4野生基因的下游引物（5'-3'）
<400> 33
agccggtaaa gatccctcat 20
<210> 34
<211> 1227
<212> DNA
<213> Mus musculus
<220>
<221> 小鼠BMP4基因的CDS
<222> (1)..(1227)
<400> 34
atgattcctg gtaaccgaat gctgatggtc gttttattat gccaagtcct gctaggaggc 60
gcgagccatg ctagtttgat acctgagacc gggaagaaaa aagtcgccga gattcagggc 120
cacgcgggag gacgccgctc agggcagagc catgagctcc tgcgggactt cgaggcgaca 180
cttctacaga tgtttgggct gcgccgccgt ccgcagccta gcaagagcgc cgtcattccg 240
gattacatga gggatcttta ccggctccag tctggggagg aggaggagga agagcagagc 300
cagggaaccg ggcttgagta cccggagcgt cccgccagcc gagccaacac tgtgaggagt 360
ttccatcacg aagaacatct ggagaacatc ccagggacca gtgagagctc tgcttttcgt 420
ttcctcttca acctcagcag catcccagag aatgaggtga tctcctcggc agagctccgg 480
ctctttcggg agcaggtgga ccagggccct gactgggaac agggcttcca ccgtataaac 540
atttatgagg ttatgaagcc cccagcagaa atggttcctg gacacctcat cacacgacta 600
ctggacacca gactagtcca tcacaatgtg acacggtggg aaactttcga tgtgagccct 660
gcagtccttc gctggacccg ggaaaagcaa cccaattatg ggctggccat tgaggtgact 720
cacctccacc agacacggac ccaccagggc cagcacgtca gaatcagccg atcgttacct 780
caagggagtg gagattgggc ccaactccgg cccctcctgg tcacttttgg ccatgatggc 840
cggggccata ccttgacccg cagaagggcc aaacgtagtc ccaagcatca cccacagcgg 900
tccaggaaga agaataagaa ctgccgtcgc cattcactat acgtggactt cagtgacgtg 960
ggctggaatg attggattgt ggccccaccc ggctaccagg ccttctactg ccacggggac 1020
tgtccctttc cactggctga tcacctcaac tcaaccaacc atgccattgt gcagacccta 1080
gtcaactctg ttaattctag tatccctaag gcctgttgtg tccccactga actgagtgcc 1140
atttccatgt tgtacctgga tgagtatgac aaggtggtgt tgaaaaatta tcaggagatg 1200
gtggtagagg ggtgtggatg ccgctga 1227

Claims (19)

1.BMP4蛋白在制备用于治疗或预防对象的纤维增生性疾病的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其中所述BMP4蛋白是游离的BMP4蛋白或表达BMP4蛋白的重组载体。
3.根据权利要求2所述的应用，其中表达BMP4蛋白的重组载体包含载体，所述载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。
4.根据权利要求1至3任一项所述的应用，其中所述BMP4蛋白的氨基酸序列包含如SEQID NO: 1至SEQ ID NO: 3所示序列中的任何一个序列或其变体。
5.根据权利要求3所述的应用，其中所述多核苷酸是编码BMP4蛋白的DNA、RNA、或DNA-RNA杂交体。
6.根据权利要求1或5所述的应用，其中编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ IDNO: 4至SEQ ID NO: 9所示序列中的任何一个序列或其变体。
7.根据权利要求1或5所述的应用，其中编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ IDNO: 10至SEQ ID NO: 27所示序列中的任何一个序列或其变体。
8.根据权利要求1或5所述的应用，其中编码BMP4蛋白的多核苷酸的序列包含如SEQ IDNO: 28或SEQ ID NO: 29所示的序列或其变体。
9.根据权利要求3所述的应用，其中所述载体是病毒载体或非病毒载体。
10.根据权利要求9所述的应用，其中所述非病毒载体选自：质粒、脂质体、逆转录元件、转座子、附加型载体、阳离子多聚物、壳聚糖聚合物、无机纳米粒子和外泌体。
11.根据权利要求9所述的应用，其中所述病毒载体选自：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯性疱疹病毒、牛痘病毒、杆状病毒和慢病毒。
12.根据权利要求11所述的应用，其中所述病毒载体是腺相关病毒。
13.根据权利要求1所述的应用，其中所述对象是人。
14.根据权利要求1所述的应用，其中所述纤维增生性疾病选自：肺、心血管系统、肝、肾、眼、神经系统、骨髓和皮肤的纤维增生性疾病。
15.根据权利要求14所述的应用，其中所述纤维增生性疾病选自：矽肺、石棉肺、煤肺、农民肺、特发性间质性肺炎、闭塞性细支气管炎伴机化性肺炎、特发性肺纤维化、进行性系统硬化症、淋巴细胞间质性肺炎、家族性肺纤维化、心肌梗死后的替代性和间质性纤维化、乙、丙和丁型肝炎病毒性肝炎、营养不良性肝硬化、慢性肾小球肾炎、慢性肾盂肾炎、阻塞性肾病、系统性红斑狼疮性肾病、眼睛外伤和手术后眼睛纤维增生性疾病、脊髓外伤后纤维增生性疾病、特发性和药物引起的骨髓纤维化、口腔粘膜纤维化。
16.根据权利要求14所述的应用，其中所述纤维增生性疾病是肺纤维增生性疾病。
17.根据权利要求16所述的应用，其中所述肺纤维增生性疾病是特发性肺纤维化。
18.一种表达BMP4蛋白的重组载体，其包含载体，所述载体包含或携带编码BMP4蛋白的多核苷酸。
19.一种药物组合物，其包含权利要求18所述的重组载体和药学上可接受的赋形剂。
CN202011555147.9A 2020-12-24 2020-12-24 用于治疗或预防纤维增生性疾病的药物 Pending CN112826922A (zh)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011555147.9A CN112826922A (zh) 2020-12-24 2020-12-24 用于治疗或预防纤维增生性疾病的药物
CN202311172950.8A CN117045776A (zh) 2020-12-24 2020-12-24 Bmp4蛋白在制备用于治疗或预防肺纤维化药物中的应用
PCT/CN2021/140837 WO2022135523A1 (zh) 2020-12-24 2021-12-23 用于治疗或预防纤维增生性疾病的药物

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011555147.9A CN112826922A (zh) 2020-12-24 2020-12-24 用于治疗或预防纤维增生性疾病的药物

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202311172950.8A Division CN117045776A (zh) 2020-12-24 2020-12-24 Bmp4蛋白在制备用于治疗或预防肺纤维化药物中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112826922A true CN112826922A (zh) 2021-05-25

Family

ID=75924619

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011555147.9A Pending CN112826922A (zh) 2020-12-24 2020-12-24 用于治疗或预防纤维增生性疾病的药物
CN202311172950.8A Pending CN117045776A (zh) 2020-12-24 2020-12-24 Bmp4蛋白在制备用于治疗或预防肺纤维化药物中的应用

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202311172950.8A Pending CN117045776A (zh) 2020-12-24 2020-12-24 Bmp4蛋白在制备用于治疗或预防肺纤维化药物中的应用

Country Status (2)

Country Link
CN (2) CN112826922A (zh)
WO (1) WO2022135523A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022135523A1 (zh) * 2020-12-24 2022-06-30 广州医科大学附属第一医院（广州呼吸中心） 用于治疗或预防纤维增生性疾病的药物
CN116535490A (zh) * 2023-06-16 2023-08-04 南京市妇幼保健院 一种降低瘢痕真皮成纤维细胞胶原含量的多肽adscp8及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103463619A (zh) * 2012-06-08 2013-12-25 上海市肿瘤研究所 骨形成蛋白4在抑制癌症中的应用
CN110237237A (zh) * 2019-06-10 2019-09-17 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心 Bmp4蛋白作为制备治疗自身免疫性疾病药物的应用
KR102183101B1 (ko) * 2019-09-03 2020-11-25 강원대학교산학협력단 폐상피세포 및 대식세포를 포함하는 폐포 오가노이드 제조 방법 및 이의 용도

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10973931B2 (en) * 2014-09-16 2021-04-13 Universitat Autònoma De Barcelona Adeno-associated viral vectors for the gene therapy of metabolic diseases
CN112826922A (zh) * 2020-12-24 2021-05-25 广州医科大学附属第一医院（广州呼吸中心） 用于治疗或预防纤维增生性疾病的药物

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103463619A (zh) * 2012-06-08 2013-12-25 上海市肿瘤研究所 骨形成蛋白4在抑制癌症中的应用
CN110237237A (zh) * 2019-06-10 2019-09-17 上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心 Bmp4蛋白作为制备治疗自身免疫性疾病药物的应用
KR102183101B1 (ko) * 2019-09-03 2020-11-25 강원대학교산학협력단 폐상피세포 및 대식세포를 포함하는 폐포 오가노이드 제조 방법 및 이의 용도

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DE LANGHE ET AL.: "Enhanced endogenous bone morphogenetic protein signaling protects against bleomycin induced pulmonary fibrosis", 《RESPIRATORY RESEARCH》 *
MONICA CASSANDRAS等: "Gli1+ mesenchymal stromal cells form a pathological niche to promote airway progenitor metaplasia in the fibrotic lung", 《NATURE CELL BIOLOGY》 *
张心月 等: "丹参、人参、连翘、麦冬对肺纤维化模型大鼠肺组织中BMP-4 表达的影响", 《山东中医杂志》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022135523A1 (zh) * 2020-12-24 2022-06-30 广州医科大学附属第一医院（广州呼吸中心） 用于治疗或预防纤维增生性疾病的药物
CN116535490A (zh) * 2023-06-16 2023-08-04 南京市妇幼保健院 一种降低瘢痕真皮成纤维细胞胶原含量的多肽adscp8及其应用
CN116535490B (zh) * 2023-06-16 2023-12-01 南京市妇幼保健院 一种降低瘢痕真皮成纤维细胞胶原含量的多肽adscp8及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
WO2022135523A1 (zh) 2022-06-30
CN117045776A (zh) 2023-11-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2764587C2 (ru) Способы и композиции для лечения хореи гентингтона
JP2024020346A (ja) 筋疾患の治療のための改変ａａｖカプシドポリペプチド
JP2020536510A (ja) 細胞の遺伝子修飾のための非組込みｄｎａベクター
WO2022135523A1 (zh) 用于治疗或预防纤维增生性疾病的药物
CN114174520A (zh) 用于选择性基因调节的组合物和方法
JP2022522196A (ja) ラミノパシーを処置するための組成物および方法
CN113966400A (zh) 用于使神经元细胞兴奋性正常化和治疗德拉韦综合征的中间神经元特异性治疗剂
CN114929872A (zh) 用nadh脱氢酶蛋白治疗莱伯遗传性视神经病变的组合物和方法
CN110876269B (zh) 治疗遗传性视神经病变的组合物和方法
KR100723009B1 (ko) 인간 ｐ３１ 유전자를 함유하는 악성 종양 치료용 약학적조성물
US20180099029A9 (en) Serca2 therapeutic compositions and methods of use
US20170065685A1 (en) Serca2 therapeutic compositions and methods of use
CN111041001B (zh) 治疗kras突变型肿瘤的安全型柯萨奇病毒及其药物组合物
KR20210143855A (ko) 세포-유형별 특이적 조절 요소들을 식별해내기 위한 조절 요소들의 멀티플렉싱
JP2023552535A (ja) 異種導入遺伝子の発現を制御するためのオーファンモチーフ（ｏｒｐｈａｎ ｍｏｔｉｆ）とＣｐＧ密度との組み合わせの使用
US20080312177A1 (en) Serca2 therapeutic compositions and methods of use
WO2020176732A1 (en) TREATMENT OF PULMONARY FIBROSIS WITH SERCA2a GENE THERAPY
JP2004519222A (ja) Ｃａｒｐ遺伝子の上流配列、それらを含むベクターとその使用
JPWO2019146745A1 (ja) テイ−サックス病及びザンドホッフ病治療用の新規アデノ随伴ウイルスビリオン
CN112041437A (zh) 用于恢复f8基因功能的腺相关病毒组合物和其使用方法
CN105358690B (zh) 启动子组合物
CN114480309B (zh) 抑制ALKBH1表达的shRNA慢病毒及其制备和应用
US20110092435A1 (en) Treatment of parkinson&#39;s disease
CA3157520A1 (en) Regenerating functional neurons for treatment of hemorrhagic stroke
CN117836420A (zh) 重组tert编码病毒基因组和运载体

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination