CN112825819A - 一种源自昆虫幼虫的天然抗菌剂及提取方法和应用以及诱导昆虫幼虫产生抗菌剂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种源自昆虫幼虫的天然抗菌剂，该天然抗菌剂是从真菌诱导后的昆虫幼虫虫体中提取的油脂。本发明还公开了源自昆虫幼虫的天然抗菌剂的应用及提取方法以及通过诱导昆虫幼虫产生抗菌剂的方法。本发明所述的源自昆虫幼虫的天然抗菌剂，来源于经过诱导的昆虫幼虫，是一种天然的广谱抗菌剂，可以广泛应用于多个领域。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种源自昆虫幼虫的天然抗菌剂及提取方法和应用以及诱导昆虫幼虫产生抗菌剂的方法。
背景技术
昆虫是地球上最昌盛的群体，已知的种类超过了100万种，昆虫纲按照有无翅膀的特点分为无翅亚纲和有翅亚纲两大类。其中无翅亚纲体型较小，外观原始，没有翅膀，不具备变态的能力。有翅亚纲体型偏大，基本都长有翅膀(个别种类已经退化)，存在变态的成长过程。
目前已有从昆虫中提取抗菌肽或抗菌蛋白的相关文献和专利申请，例如中国专利申请CN110272474A公开了一种大麦虫天然抗菌蛋白的及其制备方法与应用，其中以大肠杆菌和/或金黄色葡萄球菌的菌液接种幼虫对幼虫进行诱导，对诱导后的提取其中的蛋白质得到抗菌蛋白。这种方法能诱导大麦虫幼虫产生抗菌蛋白，但是由于细菌的在幼虫体内的快速繁殖，不利于幼虫的生长甚至会导致幼虫的大量死亡，抗菌蛋白的得率也比较低。抗菌蛋白是一类蛋白质，与油脂是不同类型的物质，且两者的抗菌作用机制也不相同。昆虫幼虫中，油脂的含量很高，但是，目前对于幼虫的油脂是否具有抗菌效果并没有相关的报道。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种源自昆虫幼虫的天然抗菌剂，来源于昆虫幼虫，是一种天然的广谱抗菌剂，可以广泛应用于多个领域。
为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：
一种源自昆虫幼虫的天然抗菌剂，该天然抗菌剂是从真菌诱导后的昆虫幼虫虫体中提取的油脂。
作为进步优选的方案，本发明所述的真菌诱导包括
露水草诱导步骤：将昆虫幼虫置于养殖盘中，用添加露水草的饲料喂养昆虫幼虫；
高温诱导步骤：将上述过露水草诱导后的昆虫幼虫在高温下用常规饲养；
真菌诱导步骤：筛去常规饲料后的昆虫幼虫用添加真菌的饲料喂养进行真菌诱导。
作为进一步优选的方案，本发明所述的饲料中添加的露水草为干燥后粉碎得到的露水草粉末，露水草粉末的添加量占饲料重量的1％-3％。
作为进一步优选的方案，本发明所述的真菌在饲料中的添加量为103-105cfu/g。
作为进一步优选的方案，本发明所述的昆虫幼虫包括鞘翅目昆虫幼虫、双翅目昆虫幼虫以及鳞翅目昆虫。
一种源自昆虫幼虫的天然抗菌剂的提取方法，包括
匀浆步骤：将活体的昆虫幼虫虫体用高速组织匀浆机进行匀浆，离心分离后得到虫浆；
提取步骤：向上述虫浆中加入几丁质酶，充分搅拌后静置，然后加入复合有机溶剂提取，过滤后得到提取液；
蒸发浓缩步骤：将上述提取液浓缩至有机溶剂蒸发完后，得到抗菌剂。
作为进一步优选的方案，本发明所述的匀浆步骤昆虫幼虫与纯水的质量比为1:(3-10)，匀浆的时间为10-15min，离心时转速为3000-3500r/min，离心时间为10-15min。
作为进一步优选的方案，本发明所述的复合有机溶剂为甲醇、乙酸乙酯、乙酸按照体积比为1：(2～5)：1比例混合后的有机溶剂。
本发明还提供了一种诱导昆虫幼虫产生抗菌剂的方法，包括
露水草诱导步骤：将昆虫幼虫置于养殖盘中，用添加露水草的饲料喂养昆虫幼虫；
高温诱导步骤：将上述过露水草诱导后的昆虫幼虫在高温下用常规饲养；
真菌诱导步骤：筛去常规饲料后的昆虫幼虫用添加真菌的饲料喂养进行真菌诱导。
作为进一步优选的方案，本发明所述的方法具体包括
露水草诱导步骤：将露水草干燥后粉碎成粉末，在饲料中添加露水草粉末，露水草粉末的添加量占饲料重量的1％-3％，用添加露水草粉末的饲料喂养至幼虫蜕皮率达到80％-95％；
高温诱导步骤中：将上述经过露水草诱导后的昆虫幼虫采用常规饲料高温饲养，温度设置为27℃-32℃，饲养3-15小时后筛除常规饲料；
真菌诱导步骤：对高温诱导后的昆虫幼虫用含有真菌的饲料诱导2-8天。
本发明还提供了一种源自昆虫幼虫的天然抗菌剂，该源自昆虫幼虫的天然抗菌剂是通过诱导方法处理获得的昆虫幼虫经过干燥粉碎后得到的虫体干粉。
本发明还提供了一种源自昆虫幼虫的天然抗菌剂在制备动物饲料中的应用。该源自昆虫幼虫的天然抗菌剂作为添加剂与动物饲料中。
发明还提供了一种源自昆虫幼虫的天然抗菌剂在制备抗菌材料中的应用。该源自昆虫幼虫的天然抗菌剂作为抗菌材料的有效成分用于制备抗菌材料。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
1.本发明所述的源自昆虫幼虫的天然抗菌剂是来源于经过真菌昆虫幼虫的，是一种天然的抗菌剂，具有广谱的抗菌效果。
2.本发明所述的源自昆虫幼虫的天然抗菌剂来源于诱导的昆虫幼虫，本发明所采用的诱导方法是通过在饲料中添加真菌与露水草的组合，相对于现有技术中直接用细菌接种幼虫或者注射的方式来说是一种缓和的诱导方式，能保证幼虫的生长促进大量油脂的产生；避免了细菌大量繁殖造成的污染和致使幼虫大量死亡。
3.本发明所述的源自昆虫幼虫的天然抗菌剂采用复合有机溶剂进行提取，提高了油脂的得率，提取方法简单，容易操作。
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
具体实施方式
本发明所述的源自昆虫幼虫的天然抗菌剂，该源自昆虫幼虫的天然抗菌剂是从真菌诱导后的昆虫幼虫虫体中提取的油脂。
作为进步优选的方案，本发明所述的真菌诱导包括
露水草诱导步骤：将昆虫幼虫置于养殖盘中，用添加露水草的饲料喂养昆虫幼虫；
高温诱导步骤：将上述过露水草诱导后的昆虫幼虫在高温下用常规饲养；
真菌诱导步骤：筛去常规饲料后的昆虫幼虫用添加真菌的饲料喂养进行真菌诱导。
优选的，本发明所述的饲料中添加的露水草为干燥后粉碎得到的露水草粉末，露水草粉末的添加量占饲料重量的1％-3％。除了采用露水草粉末，还可以采用露水草的水提取物，可以将水提取物浓缩之后直接添加到饲料中。
作为进一步优选的方案，本发明所述的真菌在饲料中的添加量为103-105cfu/g。优选的，本发明所采用的真菌中种类可列举但不限于白僵菌或绿僵菌等。
作为进一步优选的方案，本发明昆虫幼虫包括鞘翅目昆虫幼虫、双翅目昆虫幼虫以及鳞翅目昆虫。
在本发明中，先后经过混有露水草粉末的饲料诱导、高温诱导以及添加了真菌的饲料对昆虫幼虫进行诱导，能有效提高油脂的得率，也能明显提高油脂的抗菌效果。
作为进一步优选的方案，本发明所述的昆虫幼虫包括鞘翅目昆虫幼虫、双翅目昆虫幼虫以及鳞翅目昆虫。具体可以列举的鞘翅目昆虫包括大麦虫、黄粉虫、萤火虫、蜣螂、斑蝥、双叉犀金龟、吉丁虫、芫菁、金龟子、锹形虫、叩头虫、龙虱中的一种；其中，大麦虫和黄粉虫幼虫的脂肪含量较，而且也是目前确认安全的可食用幼虫，因此，在本发明中优选的方案，所述天然抗菌及来源于大麦虫幼虫和和黄粉虫幼虫。具体可以列举的双翅目昆虫包括黑水虻，蝇蛆、寄生蝇、食虫虻等，优选的以黑水虻幼虫，蝇蛆幼虫作为原料。
本发明还提供了一种源自昆虫幼虫的天然抗菌剂的提取方法，该提取方法包括
匀浆步骤：将活体的昆虫幼虫虫体用高速组织匀浆机进行匀浆，离心分离后得到虫浆；
提取步骤：向上述虫浆中加入几丁质酶，充分搅拌后静置，然后加入复合有机溶剂提取，过滤后得到提取液；
蒸发浓缩步骤：将上述提取液浓缩至有机溶剂蒸发完后，得到抗菌剂。
作为进一步优选的方案，本发明匀浆步骤昆虫幼虫与纯水的质量比为1:(3-10)，匀浆的时间为10-15min，离心时转速为3000-3500r/min，离心时间为10-15min。
作为进一步优选的方案，本发明所述的复合有机溶剂为甲醇、乙酸乙酯、乙酸按照体积比为1：(2～5)：1比例混合后的有机溶剂。
本发明还提供了一种诱导昆虫幼虫产生抗菌剂的方法，包括
露水草诱导步骤：将昆虫幼虫置于养殖盘中，用添加露水草的饲料喂养昆虫幼虫；
高温诱导步骤：将上述过露水草诱导后的昆虫幼虫在高温下用常规饲养；
真菌诱导步骤：筛去常规饲料后的昆虫幼虫用添加真菌的饲料喂养进行真菌诱导。
进一步的，本发明所述的方法具体包括
露水草诱导步骤：将露水草干燥后粉碎成粉末，在饲料中添加露水草粉末，露水草粉末的添加量占饲料重量的1％-3％，用添加露水草粉末的饲料喂养至幼虫蜕皮率达到80％-95％；
高温诱导步骤中：将上述经过露水草诱导后的昆虫幼虫采用常规饲料高温饲养，温度设置为27℃-32℃，饲养3-15小时后筛除常规饲料；
真菌诱导步骤：对高温诱导后的昆虫幼虫用含有真菌的饲料诱导2-8天。在上述方法中，高温诱导步骤中，诱导的温度优选的设置有30℃，饲养的时间优选的为6-10小时。
本发明还提供了一种源自昆虫幼虫的天然抗菌剂，该源自昆虫幼虫的天然抗菌剂是通过诱导方法处理获得的昆虫幼虫经过干燥粉碎后得到的虫体干粉。
本发明还提供了一种源自昆虫幼虫的天然抗菌剂在制备动物饲料中的应用。该源自昆虫幼虫的天然抗菌剂作为添加剂与动物饲料中。
发明还提供了一种源自昆虫幼虫的天然抗菌剂在制备抗菌材料中的应用。该源自昆虫幼虫的天然抗菌剂作为抗菌材料的有效成分用于制备抗菌材料。
以下是本发明具体的实施例，下述实施例只是对本发明的进一步说明，不能看作是对本发明范围的限制。
在下述实施例中，昆虫幼虫蜕皮一次即为1龄。
实施例1
取8龄大麦虫幼虫和6龄黄粉虫幼虫，分别置于养殖盘中常规饲养，用露水草的饲料饲喂幼虫进行诱导，露水草的浓度为1％，饲喂3d，蜕皮率为85％，高温(30℃)饲养6h(小时)筛除原有的饲料，后用含白僵菌的饲料(真菌浓度：含菌量为3×103cfu/g)饲喂幼虫进行诱导3d，收集虫体，用高速组织匀浆机(型号：A-88)进行匀浆10min，获得虫浆，按浓度为200ppm/kg向虫浆中加入的几丁质酶，充分搅拌25min，静止6h，虫浆按体积比为1:1比例加入复合有机溶剂(其中复合有机溶剂由甲醇:乙酸乙酯:乙酸按体积比为1:2:1比例混合)提取3d，过滤虫渣，获得提取液，提取液经旋转蒸发仪(Buchl Rotavapor RIL型)对提取液进行浓缩，旋转温度设定为55℃，压力为0.09Mpa，转速为3档；直至有机溶剂蒸发完毕，获得大麦虫和黄粉虫脂类抗菌组合物；经检测分析，大麦虫和黄粉虫油脂得率分别为35.20％和28.04％，化合物数量分别为28个和22个。
实施例2
取9龄大麦虫幼虫和7龄黄粉虫幼虫，分别置于养殖盘中常规饲养，用露水草的饲料饲喂幼虫进行诱导，露水草的浓度为1.5％，饲喂3.5d，蜕皮率为88％，高温(30℃)饲养7h(小时)筛除原有的饲料，后用含白僵菌的饲料(真菌浓度：含菌量为5×103cfu/g)饲喂幼虫进行诱导3.5d，收集虫体，用高速组织匀浆机(型号：A-88)进行匀浆12min，获得虫浆，按浓度为220ppm/kg向虫浆中加入的几丁质酶，充分搅拌26min，静止7h，虫浆按比例1：3加入复合有机溶剂(甲醇:乙酸乙酯:乙酸为1:2:1)提取3.5d，过滤虫渣，获得提取液，提取液经旋转蒸发仪(Buchl Rotavapor RIL型)对提取液进行浓缩，旋转温度设定为55℃，压力为0.09Mpa，转速为3档；直至有机溶剂蒸发完毕，获得大麦虫和黄粉虫脂类抗菌组合物；经检测分析，大麦虫和黄粉虫油脂得率分别为59.75％和58.03％，化合物数量分别为42个和31个。
实例3：
取10龄大麦虫幼虫和8龄黄粉虫幼虫，分别置于养殖盘中常规饲养，用露水草的饲料饲喂幼虫进行诱导，露水草的浓度为2.0％，饲喂4d，蜕皮率为95％，高温(30℃)饲养8h(小时)筛除原有的饲料，后用含白僵菌的饲料(真菌浓度：含菌量为1×105cfu/g)饲喂幼虫进行诱导4d。收集虫体，用高速组织匀浆机(型号：A-88)进行匀浆13min，获得虫浆，按浓度为230ppm/kg向虫浆中加入的几丁质酶，充分搅拌28min，静止8h，虫浆按比例1：5加入复合有机溶剂(甲醇:乙酸乙酯:乙酸为1:2:1)提取4d，过滤虫渣，获得提取液，提取液经旋转蒸发仪(Buchl Rotavapor RIL型)对提取液进行浓缩，旋转温度设定为55℃，压力为0.09Mpa，转速为3档；直至有机溶剂蒸发完毕，获得大麦虫和黄粉虫脂类抗菌组合物；经检测分析，大麦虫和黄粉虫油脂得率分别为80.14％和78.24％，化合物数量分别为75个和42个。
实施例4
取11龄大麦虫幼虫和9龄黄粉虫幼虫，分别置于养殖盘中常规饲养，用露水草的饲料饲喂幼虫进行诱导，露水草的浓度为2.5％，饲喂4.5d，蜕皮率为90％，高温(30℃)饲养9h(小时)筛除原有的饲料，后用含真菌(白僵菌或绿僵菌)的饲料(真菌浓度：含菌量为3×105cfu/g)饲喂幼虫进行诱导4.5d。收集虫体，用高速组织匀浆机(型号：A-88)进行匀浆14min，获得虫浆，按浓度为240ppm/kg向虫浆中加入的几丁质酶，充分搅拌29min，静止9h，虫浆按比例1：7加入复合有机溶剂(甲醇:乙酸乙酯:乙酸为1:2:1)提取4.5d，过滤虫渣，获得提取液，提取液经旋转蒸发仪(Buchl Rotavapor RIL型)对提取液进行浓缩，旋转温度设定为55℃，压力为0.09Mpa，转速为3档；直至有机溶剂蒸发完毕，获得大麦虫和黄粉虫脂类抗菌组合物；经检测分析，大麦虫和黄粉虫油脂得率分别为65.55％和62.48％，化合物数量分别为64个和36个。
实施例5
取12龄大麦虫幼虫和10龄黄粉虫幼虫，分别置于养殖盘中常规饲养，用露水草的饲料饲喂幼虫进行诱导，露水草的浓度为3.0％，饲喂5d，蜕皮率为87％，高温(30℃)饲养10h(小时)筛除原有的饲料，后用含真菌(白僵菌或绿僵菌)的饲料(真菌浓度：含菌量为5×105cfu/g)饲喂幼虫进行诱导5d。收集虫体，用高速组织匀浆机(型号：A-88)进行匀浆15min，获得虫浆，按浓度为250ppm/kg向虫浆中加入的几丁质酶，充分搅拌30min，静止10h，虫浆按比例1：9加入复合有机溶剂(甲醇:乙酸乙酯:乙酸为1:2:1)提取5d，过滤虫渣，获得提取液，提取液经旋转蒸发仪(Buchl Rotavapor RIL型)对提取液进行浓缩，旋转温度设定为55℃，压力为0.09Mpa，转速为3档；直至有机溶剂蒸发完毕，获得大麦虫和黄粉虫脂类抗菌组合物；经检测分析，大麦虫和黄粉虫油脂得率分别为55.62％和52.37％，化合物数量分别为53个和30个。
对比实施例1
以幼虫有效油脂得率为评价指标，按照已公开的超临界流体萃取方法提取油脂，其他条件按照实施例1-5的方法进行，其中序号1-5分别对应实施例1-5，本发明采用的复合有机溶剂提取方法提取的油脂进行综合评估，结果如下表1和表2所示。
表1：本发明实施例1-5复合有机溶剂方法提取大麦虫和黄粉虫幼虫有效油脂
表2：超临界CO2流体萃取方法提取大麦虫幼虫有效油脂
根据上述表1和表2的结果可知，相对于目前通常使用的超临界CO2流体萃取方法，本发明所述的采用复合有机溶剂方法提取的有效油脂的得率明显要高。
对比实施例3
为了比较不同的诱导方法得到的脂类提取物的抑菌效果，进行以下实验
按照上述实施例3的方案，作为实施组。
分别设置一个空白组(按照常规的方法饲养，不进行诱导)和三个对比组。
对比组1：AMP组，取10龄大麦虫幼虫和8龄黄粉虫幼虫，分别置于养殖盘中常规饲养，在饲料中添加抗生素AMP(AMP浓度为1×105cfu/g)对幼虫进行诱导，诱导时间为8天，提取条件与实施例3相同。
对比组2：细菌诱导组，取10龄大麦虫幼虫和8龄黄粉虫幼虫，分别置于养殖盘中常规饲养，在饲料中添加细菌(细菌浓度为1×105cfu/g)对幼虫进行诱导，诱导时间为8天；提取条件与实施例3相同。
所述幼虫包括大麦虫幼虫、黄粉虫幼虫、黑水虻幼虫、蝇蛆幼虫、家蚕幼虫及柞蚕幼虫。其中所述脂类抗菌组合物经体外评估，试验数据均采用SPSS 13.0进行统计分析，采用One-Way ANOVA方差分析和Duncan's进行多重比较，数据结果以平均数±标准误(M±SE)。试验结果参见表3-8。抑菌效果的测定方法采用与上述对比实施例2相同的方法。
参考依据：《中华人民共和国兽药典》2015年版一部中生物活性测定法(附录208)和NCCLS药敏试验标准。质控菌株(大肠杆菌(ATCC 25922和金黄色葡萄球菌ATCC 25923)和氨苄青霉素(AMP)购于广东环凯微生物科技有限公司；目标菌株(短小芽孢杆菌(CMCC(B)63202)、大肠杆菌O78、肠炎型沙门氏菌分离株、致病性猪链球菌(2型)、产肠毒素型大肠杆菌K88、产肠毒素型大肠杆菌K99、鸡源产气夹膜梭菌分离株及猪源产气夹膜梭菌分离株)甘油保种的菌株均来源于广东省农业科学院农业基因研究中心。
抗菌效果测定的方法：采用管碟法进行细菌敏感性测定。吸取M-H固体培养基(含2％兔血清)20ml倒入培养皿(直径：9.0cm±0.1cm)，待凝固；滴加一定量(比例：3滴/100ml)质控菌株和目标菌株菌悬液(菌浓：OD600值2.0)，加到预热50-60℃的M-H培养基中充分摇匀后，吸取10ml倒入盛有已凝固培养基底层的平皿中，静置10-15min；然后用无菌镊子将标准牛津杯均匀放置制好的平板上。每个组设10个重复，每个重复1个平板，分别吸取空白组和诱导组的脂类提取物样品各240ul；设阳性对照：氨苄青霉素(AMP)，浓度为100ug/mL。将平板置于(36.9±0.1)℃培养箱中培养18-24h观察结果，用游标卡尺测量抑菌圈直径大小(mm)。结果见表3。
表3：大麦虫幼虫脂类提取物对几种细菌抑菌直径测定(单位：mm)
注：同行数据肩标相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。
表4：黄粉虫幼虫脂类提取物对几种细菌抑菌直径测定(单位：mm)
注：同行数据肩标相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。
表5：黑水虻幼虫脂类提取物对几种细菌抑菌直径测定(单位：mm)
注：同行数据肩标相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。
表6：蝇蛆脂类提取物对几种细菌抑菌直径测定(单位：mm)
注：同行数据肩标相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。
表7：家蚕幼虫脂类提取物对几种细菌抑菌直径测定(单位：mm)
注：同行数据肩标相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。
表8：柞蚕幼虫脂类提取物对几种细菌抑菌直径测定(单位：mm)
注：同行数据肩标相同或无字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，不同大写字母表示差异极显著(P<0.01)。
由表3至表8可知，大麦虫幼虫、黄粉虫幼虫、黑水虻幼虫、蝇蛆幼虫、家蚕幼虫及柞蚕幼虫脂类提取物经诱导后均有效抑制短小芽孢杆菌(CMCC(B)63202)、大肠杆菌O78、肠炎型沙门氏菌分离株、致病性猪链球菌(2型)、产肠毒素型大肠杆菌K88、产肠毒素型大肠杆菌K99、鸡源产气夹膜梭菌分离株及猪源产气夹膜梭菌分离株(P<0.05或P<0.01)，且细菌脂多糖诱导后的抑菌效果优于空白组和抗生素组(AMP)(P<0.05或P<0.01)，同时也优于细菌诱导后的效果。
对比例3
为了进一步探讨露水草添加量对油脂得率的影响，在该对比例中，按照上述实施例3的步骤，分别考察了露水草添加量为0.5％、1.0％、1.5％、2.0％2.5％、3％、3.5％、4％、5％的条件下提取大麦虫和黄粉虫幼虫有效油脂。结果参见表9。
表9：露水草添加量对油脂得率的影响
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
Claims (13)
1.一种源自昆虫幼虫的天然抗菌剂，其特征在于，该天然抗菌剂是从真菌诱导后的昆虫幼虫虫体中提取的油脂。
2.根据权利要求1所述的源自昆虫幼虫的天然抗菌剂，其特征在于，所述真菌诱导包括
露水草诱导步骤：将昆虫幼虫置于养殖盘中，用添加露水草的饲料喂养昆虫幼虫；
高温诱导步骤：将上述过露水草诱导后的昆虫幼虫在高温下用常规饲养；
真菌诱导步骤：筛去常规饲料后的昆虫幼虫用添加真菌的饲料喂养进行真菌诱导。
3.根据权利要求2所述的源自昆虫幼虫的天然抗菌剂，其特征在于，所述饲料中添加的露水草为干燥后粉碎得到的露水草粉末，露水草粉末的添加量占饲料重量的1％-3％。
4.根据权利要求2所述的源自昆虫幼虫的天然抗菌剂，其特征在于，所述真菌在饲料中的添加量为103-105cfu/g。
5.根据权利要求1-4任一项所述的源自昆虫幼虫的天然抗菌剂，其特征在于，所述昆虫幼虫包括鞘翅目昆虫幼虫、双翅目昆虫幼虫以及鳞翅目昆虫。
6.一种如权利要求1-5任一项所述源自昆虫幼虫的天然抗菌剂的提取方法，其特征在于，包括
匀浆步骤：将活体的昆虫幼虫虫体用高速组织匀浆机进行匀浆，离心分离后得到虫浆；
提取步骤：向上述虫浆中加入几丁质酶，充分搅拌后静置，然后加入复合有机溶剂提取，过滤后得到提取液；
蒸发浓缩步骤：将上述提取液浓缩至有机溶剂蒸发完后，得到抗菌剂。
7.根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于，所述匀浆步骤昆虫幼虫与纯水的质量比为1:(3-10)，匀浆的时间为10-15min，离心时转速为3000-3500r/min，离心时间为10-15min。
8.根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于，所述复合有机溶剂为甲醇、乙酸乙酯、乙酸按照体积比为1：(2～5)：1比例混合后的有机溶剂。
9.一种诱导昆虫幼虫产生抗菌剂的方法，其特征在于，包括
露水草诱导步骤：将昆虫幼虫置于养殖盘中，用添加露水草的饲料喂养昆虫幼虫；
高温诱导步骤：将上述过露水草诱导后的昆虫幼虫在高温下用常规饲养；
真菌诱导步骤：筛去常规饲料后的昆虫幼虫用添加真菌的饲料喂养进行真菌诱导。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，具体包括
露水草诱导步骤：将露水草干燥后粉碎成粉末，在饲料中添加露水草粉末，露水草粉末的添加量占饲料重量的1％-3％，用添加露水草粉末的饲料喂养至幼虫蜕皮率达到80％-95％；
高温诱导步骤中：将上述经过露水草诱导后的昆虫幼虫采用常规饲料高温饲养，温度设置为27℃-32℃，饲养3-15小时后筛除常规饲料；
真菌诱导步骤：对高温诱导后的昆虫幼虫用含有真菌的饲料诱导2-8天。
11.一种源自昆虫幼虫的天然抗菌剂，其特征在于，其是将权利要求9或10的方法获得的昆虫幼虫经过干燥粉碎后得到的虫体干粉。
12.一种如权利要求1-5任一项所述的源自昆虫幼虫的天然抗菌剂在制备动物饲料中的应用。
13.一种如权利要求1-5任一项所述的源自昆虫幼虫的天然抗菌剂在制备抗菌材料中的应用。
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| GR01 | Patent grant | ||
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